UJI KATALASE, KOAGULASE, DNASE,

HEMOLISA PADA IDENTIFIKASI BAKTERI

Nama kelompok :
Dwyta muhartanti
Eka nur shalisya
Mufid adjie pangestu
Sofi Hafidzah

D-IV ANALIS KESEHATAN

Katalase adalah enzim yang mengkatalisis penguraian hydrogen
peroksida menjadi H2O dan O2 . hydrogen peroksida bersifat toksis
pada sel Karena bahan ini dapat menginaktifkan beberapa jenis enzim
dalam sel. Hidrogen peroksida terbentuk saat metabolism aerob,
sehingga mikroba yang tumbuh dalam lingkungan aerob harus
menguraikan bahan toksik tersebut.

Pada penguraian hydrogen peroksida oleh peroksidase, tidak

dihasilkan gas atau gelembung oksigen. Penentuan adanya katalase
diuji dengan larutan 3% H2O2
pada koloni terpisah.

UJI KATALASE
UJI INI DILAKUKAN DENGAN LANGKAH:

 Mengambil kultur sampel dengan ose secara aseptis dari agar miring
dengan meijarkan ose dan mendinginkannya.
 Biakan digoreskan pada petridish agar sel rata dan tidak bertumpuk
 Kultur mikroba kemudian ditetesi 1-2 tetes H2O2 3% agar aktivitas
katalase pada mikroba dapat diketahui.
 Petridish ditutup kembali agar tidak ada kontaminasi dan
memaksimalkan mikroba untuk merombak H2O2
 Amati ada tidaknya gelembung-gelembung kecil. Jika terdapat
gelembung maka dalam petridish tersebut merupakan bakteri katalase
positif, sebaliknya jika tidak ada gelembung termasuk bakteri katalase
negatif.
Bakteri katalase positif seperti S. Aureus bisa menghasilkan gelembung-
gelembung oksigen karena adanya pemecahan H2O2 (hidrogen peroksida)
oleh enzim katalase yang dihasilkan oleh bakteri itu sendiri. Komponen
H2O2 ini merupakan salah satu hasil respirasi aerobik bakteri, misalnya S.
aureus, dimana hasil respirasi tersebut justru dapat menghambat
pertumbuhan bakteri karena bersifat toksik bagi bakteri itu sendiri. Oleh
karena itu, komponen ini harus dipecah agar tidak bersifat toksik lagi.

Bakteri katalase negatif tidak menghasilkan gelembung-gelembung. Hal ini

berarti H2O2 yang diberikan tidak dipecah oleh bakteri katalase negatif,
misalnya, L.casei sehingga tidak menghasilkan oksigen. Bakteri katalase
negatif tidak memiliki enzim katalase yang menguraikan H2O2.
UJI KOAGULASE

Koagulase merupakan protein ekstraseluler yang mengikat prothrombin

hospes dan membentuk komplek yang disebut staphylothrombin.
Enzim koagulase merupakan salah satu enzim ekstraseluler yang dihasilkan
oleh mikroorganisme yang berperan dalam patogenitas.
Dalam penelitian, uji koagulase menunjukkan hasil yang positif apabila
terjadi penggumpalan plasma darah ketika ditambahkan isolat (hasil
isolasi) bakteri di dalam tabung setelah diinkubasi dalam suhu 37oC selama
24 jam. . Sedangkan uji koagulase menunjukkan hasil yang negatif apabila
plasma darah tetap cair sesudah ditambahkan isolat bakteri.
UJI INI DILAKUKAN DENGAN LANGKAH:

 Sebanyak 1-2 ose plasma diletakkan di atas kaca objek.

 Lalu ambil 1 koloni bakteri yang tumbuh pada media, dan ditambahkan
ke dalam plasma sitrat kemudian dihomogenkan.
 Lalu amati dengan mikroskop.
Intrepretasi hasil :
 Hasil positif apabila terbentuk gumpalan
 Hasil negative apabila tidak terbentuk
gumpalan
UJI DNASE
DNase adalah endonuklease ekstraselular yang membelah DNA dan
melepaskan nukleotida bebas dan fosfat. Untuk mendeteksi enzim ini,
Dnase agar tidak menggunakan indikator atau berbagai indikator (toluidine
blue atau methyl green) digunakan untuk mendeteksi hidrolisis DNA.
Uji Dnase digunakan untuk membedakan Staphylococcus aureus dengan
bakteri yang lain. Ini dikarenakan Staphylococcus aureus menghasilkan
deoksiribonuklease (Dnase). Staphylococcus aureus memiliki enzim yang
stabil terhadap panas, termonuklease. Untuk mendeteksi enzim ini,
pertama organisme dihancurkan oleh panas dan kemudian DNase bebas
bereaksi dengan media. Tes ini juga diberikan positif oleh Vibrio,
Helicobacter, Moraxella, Serratia, dan Aeromonas.
KEGUNAAN
 Digunakan untuk mengetahui kemampuan suatu organisme untuk
menghidrolisis asam deoksiribonukleat.
 Digunakan untuk membedakan Staphylococcus aureus yang
menghasilkan enzim deoxyribonuclease dari Staphylococci lainnya yang
tidak menghasilkan Dnase.
 Terutama berguna jika plasma tidak tersedia untuk melakukan uji
koagulase atau bila hasil uji koagulase sulit untuk ditafsirkan.
PRINSIP
 Tes ini menentukan kemampuan suatu organisme yang menghasilkan DNase.
DNase adalah endonuklease ekstraselular yang membelah DNA dan melepaskan
nukleotida bebas dan fosfat. Untuk mendeteksi enzim ini, Dnase agar tidak
menggunakan indikator atau berbagai indikator (toluidine blue atau methyl
green) digunakan untuk mendeteksi hidrolisis DNA.
 Dalam DNase agar tanpa indikator, hidrolisis DNA diamati dengan kliring agar-
agar setelah penambahan HCL (oligonukleotida larut dalam asam tapi garam DNA
tidak larut). Asam mengendapkan DNA yang tidak berimetilasi membuat medium
buram. Oleh karena itu, DNase menghidrolisis DNA dan menghasilkan zona
bening di sekitar pertumbuhan.
 Dalam kasus DNase agar dengan metil hijau, DNA bergabung dengan metil hijau
(bertindak sebagai kation) untuk menghasilkan warna hijau mint. Ketika DNA
dihidrolisis, kompleks dilepaskan dan metil hijau bebas tidak berwarna pada pH
7.5. Daerah bening yang jelas muncul di sekitar area dimana organisme penghasil
DNase tumbuh.
 Bila toluidine blue O (TBO) ditambahkan ke DNase agar, kompleks dibentuk
dengan DNA, yang mengubah struktur saat DNA dihidrolisis, menghasilkan warna
pink cerah.
PROSEDUR
 Dengan menggunakan ose steril, beberapa koloni dari pertumbuhan 18-
24 jam diambil.
 Inokulasi organisme uji dan kontrol di setiap daerah uji.
 Inkubasi media pada suhu 35-37 ° C selama 24 jam.
 Setelah inkubasi amati perubahan warna pada DNase dengan metil hijau.
 Dalam DNase agar tanpa indikator:
 Tuangi permukaan agar dengan larutan HCL 1N. Hindari kelebihan asam.
 Biarkan reagen diserap ke dalam medis.
 Amati zona bening di sekitar koloni dalam waktu 5 menit.
Gambar: 2: Uji Dnase: M. catarrhalis (+ ve) dan N.gonorrhoeae (-ve). Ketika DNase
diproduksi oleh organisme, produk akhir asam terbentuk dan indikator pH berubah dari
merah (basa) menjadi kuning (asam).

Interpretasi Hasil :
Positif: Bila DNA dihidrolisis, metil hijau dilepaskan mengubah medium tidak berwarna di
sekitar organisme uji.
Negatif: Jika tidak ada degradasi DNA, medium tetap hijau.
UJI HEMOLISA

Hemolisis (atau haemolysis dalam bahasa Inggris) adalah kerusakan sel

darah merah. Dalam dunia mikrobiologi hemolisis digunakan untuk
mengklasifikasikan mikroorganisme tertentu, dengan cara mengamati
Kemampuan koloni bakteri untuk menginduksi hemolisis bila ditanam pada
agar darah (blod agar). Cara tersebut sangat berguna dalam
mengklasifikasikan spesies streptokokus. Sebuah zat yang menyebabkan
hemolisis adalah hemolisin.
Blood agar atau agar darah biasanya dibuat dari Tryptic Soy Agar atau
Columbia Agar base dengan darah domba 5%. atau bisajuga darah Kelinci
atau kuda dapat digunakan untuk pertumbuhan organisme yang
membutuhkan NAD, seperti spesies Haemophilus. Pengunaan darah
manusia tidak disarankan karena kemungkinan paparan patogen melalui
darah manusia seperti HIV atau hepatitis.
Ada 3 jenis hemolisis yaitu beta hemolisis (β),
alpha hemolisis (α), dan gamma hemolisis (γ)

Beta hemolisis (β) atau biasa disebut

hemolisis total, didefinisikan sebagai lisis
seluruh sel darah merah (lisis sempurna).
Sebuah zona yang jelas, mendekati warna dan
transparansi media dasar, mengelilingi koloni. 
 Alpha hemolisis (α) disebut juga hemolisis
sebagian, adalah penurunan hemoglobin sel
darah merah untuk methemoglobin dalam
medium sekitar koloni. Hal ini menyebabkan
perubahan warna hijau atau coklat dalam
medium. Warna dapat disamakan dengan
"memar" sel. Pemeriksaan mikroskopis sel
darah merah alpha-hemolyzed menunjukkan
bahwa membran sel yang utuh, sehingga tidak,
pada kenyataannya, lisis benar. 
 Gamma hemolisis (γ) disebut juga non hemolisis.
Gamma menunjukkan kurangnya hemolisis.
Seharusnya tidak ada reaksi dalam medium sekitarnya.
"Gamma Streptococcus" atau Enterococcus faecalis
(pada inkubasi 24 jam, non-hemolitik). "Gamma
streptococcus" biasanya non-hemolitik setelah 24 jam
inkubasi, namun banyak yang akhirnya menampilkan
hemolisis alpha lemah. Warnanya bening.
TERIMA KASIH