ENZIM-ENZIM UNTUK

MEMANIPULASI DNA
• Kit dan teknik yang digunakan untuk
mempelajari molekul DNA dibuat selama
tahun 1970 dan 1980.
• Sebelumnya orang mempelajari DNA dengan
pendekatan genetika klasik.
• Pendekatan klasik bersifat terbatas karena
tidak melibatkan pengujian gen secara
langsung.
• Diakhir tahun 1960an metoda tidak langsung
menjadi tidak cukup memadai.
 Era Tahun 1970
• Terjadi perkembangan teknik-teknik baru di
bidang biologi molekuler yang dipicu oleh
kemajuan riset di bidang biokimia
• Dihasilkan enzim-enzim yang dapat
memanipulasi DNA di dalam test tube.
• Enzim-enzim tersebut diisolasi dari sel-sel
makhluk hidup terutama bakteri.
 Peranan ahli biologi molekuler
• Menggunakan enzim-enzim yang sudah
dimurnikan untuk memanipulasi DNA seperti
menggandakan DNA, memotong DNA,
menggabungkan dua potongan yang tidak
dijumpai secara alami.
• Manipulasi tersebut menjadi dasar dari teknik
DNA rekombinan.
Contoh-contoh manipulasi yang dapat dilakukan terhadap DNA
 Kloning DNA

Teknik DNA rekombinan memacu perkembangan kloning gen

PCR
Terjadi
perbanyakan
pada gen
tertentu.

Penemu:
Mullis, 1990
 Enzim untuk manipulasi DNA
• DNA polymerase yaitu enzim yang mensintesis polinukleotida
komplementer dari DNA atau RNA cetakan.
• Nuklease, yaitu enzim yang mendegradasi DNA dengan cara
memutuskan ikatan fosfodiester yang menghubungkan satu nukleotida
dengan nukleotida lainnya.
• Ligase, yaitu enzim yang menghubungkan dua untai DNA dengan cara
mensintesis ikatan fosfodiester pada ujung dua molekul DNA yang
disambungkan atau kedua ujung dari satu untai DNA yang
disambungkan.
• Enzim untuk memodifikasi ujung, yaitu enzim yang membuat perubahan
pada ujung-ujung DNA, menambahkan suatu dimensi penting pada
percobaan penyambungan yang dirancang, dan menyediakan satu satu
molekul DNA yang dilabel dengan radioaktif atau marker lainnya.
Aktivitas dari (A) DNA polimerase, (B) nuclease,
(C) ligase
Aktivitas dari DNA polimerase
Peranan PRIMER pada proses
sintesis DNA
Sintesis DNA
dan aktivitas
eksonuklease
dari DNA
polimerase
Aktivitas eksonuklease 5’ → 3’ dari DNA polimerase yang
dapat mendegradasi ujung 5’ dari polinukleotida yang baru
disintesis
Jenis potongan yang dihasilkan oleh enzim
restriksi endonklease