WINDY YULIANA BUDIANTO

176070100111002
LATAR BELAKANG
• Mitragynine merupakan alkaloid aktif (C23H30N2O4, dengan berat molekul398.50 g/mol) yang
banyak terdapat pada Mitagrynine speciosa.
• Mitragynine secara luas digunakan untuk menghilangkan rasa sakit, anti diare, dan meningkatkan
daya tahan tubuh.
• Mitagrynine merupakan opioid yang memiliki efek antinociceptive yang menonjol dengan
bertindak pada reseptor opiod di bagian supraspinal dari Central Nervous System.
• Mitragynine memiliki potensi untuk dikembangkan menjadi obat yang dapat digunakan sebagai
terapi penarikan opioid dengan mengurangi penarikan opioid yang diinduksi peningkatan kortisol.
LATAR BELAKANG
• Kajian farmakokinetik /farmakodinamik dan uji toksisitas: mitragynine memiliki keuntungan
seperti efek samping yang lebih ringan, potensi rendah dan memiliki waktu paruh eliminasi yang
sangat lama (23jam) jika dibandingkan dengan morfin dan obat opioid (metadon dan
buprenorphine).
• Dosis yang digunakan di masyarakat lebih rendah (0,3-5,1mg/Kg) jika dibandingkan dengan dosis
terapiyang dilaporkan (3-100mg/kp <i.p>) untuk menimbulkan efek antinociceptive pada tikus.
• HPLC dan UFLC-MS (Ultra Fast Liquid Chromatography-Microdialysis): Metode yang dapat
digunakan untuk menilai hubungan antara farmakokinetik dan farmakodinamik, karena memiliki
sensitifitas yang jauh lebih tinggi.
TUJUAN

“Menentukan konsentrasi mitragynine pada otak

dan plasma untuk mengevaluasi Farmakokinetik
dan permeabilitas barrier darah otak secara in vivo
dengan menggunakan metode UFLC-MS”
MATERIAL DAN METODE
MATERIAL DAN BAHAN KIMIA
• Mytraginine: Chromadex (Irvin, USA)
• Semua bahan kimia seperti HPLC grade
acetonitrile (CAN), metanol, asam formik,
tween 20 dan normal saline (NaCl 90%):
Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA)
• Probe mikrodialisis: CMA microdialysis
(Kista, Swedia)
• Ringer’s Solution: disiapkan peneliti
ANIMAL
• Tikus betina Sprague-Dawley (SD) berusia
8 mgg, dengan berat 250-300g: Unit
percobaan hewan Fakultas Kedokteran
Universitas Malaya
• Aklimasi hewan coba: 12 jam sterang/gelap
selama 7 hari
• Etik: Animal Ethics Committee (ethic code:
2014-03-05/PHAR/R/KWM)
MATERIAL DAN METODE
INSTRUMENT DAN PENGEMBANGAN METODE UFLC-MS
• UFLC-MS terdiri dari Ultra-Fast Liquid
Chromatography (UFLC) yang dilengkapi
dengan Spketrofotometer massa (LC-MS-
2020, Shimadzu, Jepang)
• Pemisahan kromatografi UFLC dilakukan
pada kolom Agilent Zorbax Eclipse C18
(4.6 x 150 mm id, partikel 5M, Agilent,
USA) pada suhu kolom konstan 40 oC
• Analisis MS dioperasikan dalam mode elektrospray
dan ion prekusor mitragynine terpilih dipantau pada
m/z399
• Akuisisi data dan pemrosesan kuantitatif: Lab
Solutions (versi 5.55, Shimadzu, Jepang)
• Validasi metode UFLC-MS seperti linieritas, lower
limit of quantification (LLOQ), presisi inter dan
intra –day, stabilitas, efek matriks, selektivitas dan
recovery ekstraksi dari mitragynine telah ditetapkan.
MATERIAL DAN METODE
IN VITRO RECOVERY IMPLANTASI PROBE DAN PEMULIHAN PROBE IN VIVO

• In vitro recovery mytragynine: metode • In vivo probe recovery dilakukan pada

“Gain” untuk memvalidasu sistem tikus: metode retro dialisis (n=4)
mikrodialisis sebelum studi in vivo.
• Analisis proses: UFLC-MS
MATERIAL DAN METODE
STUDI FARMAKOKINETIK
 Sampel: 6 tikus SD yang telah dilakukan implantasi probe (tikus diisolasi 1 malam dengan akses
air dan makanan yang tersedia)
 Tikus: injeksi intravena mytagrynine (10mg/kg) dalam 10% larutan tween 20.
 CMA/20 dan CMA/12 terhubung ke pompa syringe CMA/402 dengan metode berputar untuk
mencegah crossing-over.
 Sampel mikrodialisate darah dan otak dikumpulkan pada interval 30 +- 2 menit hingga 7,5 jam.
 Sampel diekstraksi dan dianalisis dgn UFLC-MS dalam periode 24 jam
 Konsentrasi mytragynine dalam darah dan otak: diukur dari pemulihan pada proses in vivo
 Analisis prameter farmakokinetik: metoe 2 kompartemen dengan software Phoenix WinNonlin
6.1 (Pharsight, Mountain view, CA)
MATERIAL DAN METODE
 Rasio konsentrasi mitragynine yang tidak terikat dalam otak dan plasma
(AUCbrain/AUCplasma): dihitung menggunakan area bawah kurva (AUC) konsentrasi
profile mitragynine dari waktu 0 hingga waktu akhir perhitungan di otak (AUCbrain) dan
plasma (AUCplasma).
HASIL
Metode Validasi UFLC-MS
HASIL
HASIL
Metode Validasi UFLC-MS
HASIL
• In vitro dan in vivoprobe recovery
HASIL
(FARMAKOKINETIK DARI MITRAGYNINE)