KROM A T O GR A F I

PERDINA NURSIDIKA, M.SI

 Pemisahan pigmen oleh Michael Tswett ahli
botani Rusia pada tahun 1903.

KROMOS: warna

KROMATO
GRAFI GRAPHOS: menulis

Kromatografi merupakan suatu cara, metode,

atau teknik pemisahan berdasar partisi atau
absorpsi diantara fase diam dan fase gerak
 FASE DIAM
Atau fase stationer yang menahan atau
menghambat komponen sampel

FASE DALAM FASE GERAK

KROMATOGRAFI Atau fase mobil yang membawa komponen
sampel

PEMISAHAN TERJADI KARENA KOMPONEN SAMPEL

YANG TIDAK TERTAHAN AKAN BERGERAK LEBIH
CEPAT DAN KOMPONEN YANG TERTAHAN AKAN
BERGERAK SECARA LAMBAT
KROMATOGRAFI KERTAS
Merupakan teknik
Pertamakali Bahan pembuat adalah
pemisahan yang paling
diperkenalkan oleh selulosa sebagai bahan
sederhana, murah,
CONSDEN, GORDON dan pengemas berupa zat
pemisahan sempurna
MARTIN pada 1944, padat
dan fleksibel.

Identifikasi dilakukan Faktor retensi diperoleh

Fase gerak adalah pelarut dengan membandingkan dengan membagi jarak
dan fase diam adalah air faktor retensi komponen yang ditempuh komponen
yang terikat pada kertas yang dianalisis dengan dengan jarak yang
standar ditempuh pelarut
Nilai RF (faktor retensi) sangat sensitif
terhadap suhu, jenis kertas dan pelarut.

Pemeriksaan harus dilakukan bersamaan

dengan standar atau komponen yang
diketahui.

Jika komponen yang dianalisa tidak terlihat

dapat dibantu dengan penampak noda
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
Mulai dikenal pada tahun
1960 menggantikan KK

Fungsi kertas digantikan lempengan tipis

(kaca) yang dilapisi dengan bahan
penyerap

Bahan penyerap yang biasadigunakan adalah

Silika gel
Alumina
Kselguhr
selulosa
 • sama dengan pada KK

Prinsip

Lapis
• Plat kaca digantikan dengan
lempeng aluminium dan
tersedia jadi dipasaran
tipis
 Dengan senyawa pengikat

1. Kalsium sulfat 5-15 % (SILIKA GEL G

2.Pati (SILIKA GEL S)

Dengan senyawa pengikat

dan indikator fluorescence (SILIKA GEL GF atau GF254)

FASE DIAM Tanpa senyawa pengikat (lebih stabil dari G)

•SILIKA GEL H
•SILIKA GEL N

Tanpa Senyawa Pengikat

• Tanpa senyawa pengikat tapi dengan indikator fluorescence (SILIKA GEL F254)

Tanpa senyawa pengikat tapi dengan indikator fluorescence

(SILIKA GEL F254)
1. Untuk keperluan pemisahan preparatif (SILIKA GEL PF254+365)
2. ALUMINA
1. BAHAN PENGEMAS DENGAN AKTIFITAS
TINGGI
2. BANYAK DIGUNAKAN UNTUK PEMISAHAN
SENYAWA YANG KURANG POLAR
3. KIESELGUHR
3. MERUPAKAN BAHAN PENGEMAS DENGAN
AKTIVITAS RENDAH
4. PENGGUNAAN UTAMA ADALAH SEBAGAI
PADATAN PENDUKUNG UNTUK FASE DIAM
4. SELULOSA
5. DIGUNAKAN UNTUK PEMISAHAN
SENYAWA HIDROFIL
FASE GERAK

FASE MOBIL - ELUEN PEMISAHAN HIDROFIL PEMISAHAN LIPOFIL

Air, metanol, asam asetat, Etil asetat, eter, kloroform,
etanol, isopropanol, benzena, toluena,
aseton, n-propanol, tert- sikloheksana dan
butanl, fenol dan n-butanol petroleum eter
• KADANG DIGUNAKAN SISTEM ELUEN
CAMPURAN DENGAN PERBANDINGAN
TERTENTU AGAR DIPEROLEH PEMISAHAN
YANG PALING BAIK ELUEN
• ASETON-PETROLEUM ETER (1:9)
• ETANOL-AIR-AMONIA (8:1:1)
• BUTANOL-ASAM ASETAT AIR (12:3:5)
 TEKNIK ANALISIS

Pembuatan lapisan tipis Pengembangan Identifikasi

Bikin sendiri Gunakan bejana kromatografi Dengan lampu UV
Tersedia dipasaran Bejana harus jenuh dengan uap Penampak noda
Aktifkan lempeng dengan pelarut Bandingkan RF
pemanasan pada oven 110 oC
PROSE S K ROMA TOGRAF I
 KROMATOGRAFI
LAPIS TIPIS (KLT)
• PRINSIP: PEMISAHAN BERDASAR ABSORBS
DAN PARTISI. BAHASA GAMPANGNYA ==>
PEMISAHAN BERDASAR KESUKAAN KE FASE
DIAM, ATAU KE FASE GERAK. KALAU DIA LEBIH
SUKA FASE GERAK, PASTI AKAN IKUT NAIK
(NODA AKAN DI ATAS). KALAU SUKA FASE DIAM,
DIA PASTI DIEM DI TEMPAT (NODA AKAN DI
BAWAH).

• LIHAT GAMBAR! DI SAMPEL 1 ADA 2 KOMPONEN.

NODA 1 MENUNJUKKAN KOMPONEN YANG
SIFATNYA LEBIH MIRIP FASE DIAM, MAKANYA
NODANYA GA IKUT NAIK DENGAN FASE GERAK,
SEDANGKAN NODA 2, SIFAT LEBIH MIRIP FASE
GERAK, JADI DIA IKUT NAIK.

• SIFAT YANG DIMAKSUD DI SINI ADALAH SIFAT

KEPOLARAN
Chamber  tempat proses
kromatogRaFi  sebelum dipakai
masukan dulu eluen  harus ditutup
rapat  supaya jenuh = udara
chamber penuh sama udara eluen 
supaya pemisahan berlangsung
sempurna, noda tidak berekor
2. Fase diam (KLT-nya)  biasanya
silica gel F254, artinya: fluoresensi di
254 nm  jadi kalau ga keliatan UNTUK KLT
HARUS ADA
secara kasat mata bisa dibantu lihat
nodanya dengan lampu UV Panjang
gelombang 254.

KOMPONEN:
3. Fase gerak  eluen  harus
campuran  terdiri dari pelarut yang
sifatnya polar, semi polar, non polar

4. standar  sama dengan yang mau

diidentifikasi, missal yang
diidentifikasi baygon, maka standar
yang dipakai baygon. Yang
diidentifikasi rhodamine B, standar
yang dipakai rhodamine B.
 1. KLT DI BAGIAN GARIS BAWA (START) KEMUDIAN
DITOTOLKAN SAMPEL DAN STANDAR YANG PEKAT,
JANGAN TERLALU MELEBAR, DITOTOL BERULANG
MINIMAL 10 X.
2. KLT DIMASUKAN CHAMBER YANG SUDAH JENUH
 DITUNGGU SAMPAI ELUEN SAMPAI KE GARIS
ATAS (FINISH)
3. LIHAT NODA  KALAU GA KELIATAN DIBACA DI
LAMPU UV 254 NM, ATAU DISEMPROT DENGAN
PENNAMPAK NODA. PENAMPANG NODA BIASANYA
REAGEN.
4. UKUR RF (RETENTION FACTOR)  JARAK START
KE DIAMETER NODA/ JARAK START KE FINISH
5. INTEPRETASI HASIL  POSITIF APABILA RF NODA
SAMPEL SAMA DENGAN RF NODA STANDAR

• CONTOH SOAL:

• SEBELAH ADALAH GAMBAR KLT KERACUNAN PESTISIDA

BAYGON. SAMPEL 1 PASEN ATAS NAMA AA, SAMPEL 2 PASEN
ATAS NAMA UU. MANAKAH YANG KERACUNAN BAYGON?

• KITA HITUNG RF STANDAR, SAMPEL 1, DAN SAMPEL 2

• RF STANDAR = JARAK START KE NODA/JARAK START KE FINISH

= 3/10 = 0,3

• RF SAMPEL 1  ADA 2 NODA, JADI DIHITUNG 2-2NYA. RF NODA

1 = 1/10 = 0,1. RF NODA 2 = 8/10 =0,8

• RF SAMPEL 2  3,1/ 10 = 0,31

• KESIMPULAN YANG KERACUNAN BAYGON ADALAH UU. KENAPA?

KARENA RF SAMPEL UU, SAMA DENGAN RF STANDAR BAYGON.
KROMA T O GR A F I
KOLOM
IAM D IKE MA S D A LA M K OLOM
FASE D
FASE GERAK DIALIRKAN
 KROMATOGRAFI KOLOM

Definisi Jenis KOlom

Kromatografi yang Termasuk kromatografi bentuknya mirip buret,
menggunakan kolom cairan preparatif  dibuat dari bahan gelas,
sebagai alat untuk polymer, logam 
memisahkan komponen- Ukuran bervariasi diameter
komponen dalam campuran dan panjang. Minimal
panjang kolom 10 kali
diameternya. 
 Perbandingan berat
(fase diam : sampel =
Fase diam :  30 : 1 dapat ditingkatkan
50 : 1 untuk sampel yg
sukar dipisahkan) 

ukuran partikel 63-250

mm, yg <63mm fase Biasa digunakan : silika
gerak perlu ditekan atau gel, alumina 
dihisap 

Fase gerak : eluen /

solven 
• MENGEMAS KOLOM (PACKING ) - CARA BASAH - CARA KERING 
• PREPARASI SAMPEL (PENYIAPAN SAMPEL) -SAMPEL DILARUTKAN,KMD
DITUANG PD BAG ATAS KOLOM. -SAMPEL DILARUTKAN, KMD DIHOMOGENKAN
DG FASE DIAM (1:3) DIKERINGKAN. DIRATAKAN SELAPIS DIATAS FASE DIAM. 

• ELUSI : - ISOKRATIK - GRADIEN 

• MENDETEKSI ELUAT (EFLUEN) - DETEKTOR - KLT 
PRINSIP KERJA KROMATOGRAFI KOLOM 

Absorben bertindak sebagai fase

Didasarkan pada absorbsi
diam dan fase geraknya adalah
komponen2 campuran dengan
cairan yang mengalir membawa
afinitas berbeda terhadap
komponen campuran sepanjang
permukaan fase diam. 
kolom. 

Sampel yang mempunyai afinitas

besar terhadap absorben akan
secara selektif tertahan dan
afinitasnya paling kecil akan
mengikuti aliran pelarut. 
 • LEBA, M.A.U., 2017. BUKU AJAR:
EKSTRAKSI DAN REAL KROMATOGRAFI.
DEEPUBLISH.

DAFTAR • RUBIYANTO, D., 2017. METODE

KROMATOGRAFI: PRINSIP DASAR,
PUSTAKA PRAKTIKUM DAN PENDEKATAN
PEMBELAJARAN KROMATOGRAFI.
DEEPUBLISH.