UJI MOST PROBABLE NUMBER

BERDASARKAN STANDAR APHA EDISI 23

Oleh:
Dr. Dewi Peti Virgianti, M. Si
 Definisi
■ Teknik fermentasi dapat digunakan untuk mendeteksi koliform dalam air minum atau
menghitung jumlah koliform dalam air minum dan bukan air minum.
■ Ketika beberapa tabung digunakan, kepadatan koliform diperkirakan melalui tabel angka
yang paling mungkin (MPN).
■ MPN: Teknik Fermentasi tabung-tabung untuk menentukan kepadatan koliform dalam suatu
sampel.
■ Angka ini, dihasilkan menggunakan rumus probabilitas tertentu, yang merupakan perkiraan
kepadatan rata-rata koliform dalam sampel.
■ Hasil pengujian koliform, bersama dengan informasi lain yang diperoleh dari survei teknik
atau sanitasi, memberikan penilaian terbaik mengenai efektivitas pengolahan air dan
kualitas sanitasi sumber air.
■ Ketepatan uji fermentasi dalam memperkirakan kepadatan koliform tergantung pada jumlah
tabung yang digunakan.
■ Informasi yang paling memuaskan adalah bila diperoleh hasil sampel inokulum terbesar
menunjukkan asam dan/atau gas di beberapa atau semua tabung dan inokulum sampel terkecil
tidak menunjukkan asam atau gas dalam sebagian besar tabung.
■ Kepadatan bakteri dapat diperkirakan dengan rumus yang diberikan atau dari tabel menggunakan
jumlah positif tabung dalam beberapa pengenceran (9221C.2).
■ Tabel MPN didasarkan pada asumsi distribusi Poisson (dispersi acak).
■ Namun, jika sampel tidak cukup dikocok sebelum alikuot diambil atau jika bakteri sel
bertumpuk, nilai MPN akan menjadi perkiraan yang terlalu rendah dari kepadatan bakteri yang
sebenarnya.
Menguji Kualitas Air Minum berdasarkan standar
US.EPA (Environmenttal Protection Agency)

■ Uji ini dilakukan untuk pemeriksaan rutin pasokan air untuk publik.
■ Tujuannya dari uji total coliform adalah untuk mengetahui efisiensi pengolahan dan integritas
sistem distribusi.
■ Tes ini juga digunakan untuk menyaring adanya kontaminasi tinja.
■ Keberadaan coliform dapat dideteksi pada:
– Sumber air (ada kemungkinan disebabkan dari kegagalan treatment pada sumber air)
– Sistem distribusi (ada kemungkinan disebabkan terbentuknya biofilm dan sedimen
misalkan pada pipa distribusi)
– Luar sistem distribusi
■ 100-mL sampel harus dianalisis; menggunakan teknik fermentasi dengan 10 tabung ulangan
masing-masing berisi 10 mL, masing-masing 5 tabung ulangan berisi 20 mL, atau satu botol
berisi sampel 100 mL bagian.
■ Saat memeriksa air minum melalui teknik fermentasi, proses semua tabung atau botol yang
menunjukkan pertumbuhan—dengan atau tanpa reaksi asam atau gas positif—melalui tahap
konfirmasi (9221B.4).
■ Sampel air minum yang positif total coliform juga harus diuji untuk koliform termotoleran
(feses) (9221E) atau Escherichia coli (9221F).
Menguji Kualitas Selain Air Minum berdasarkan
standar US.EPA (Environmenttal Protection Agency)

■ Saat menganalisis air yang tidak dapat diminum, inokulasikan serangkaian tabung dengan
pengenceran desimal yang sesuai (kelipatan 10 mL) berdasarkan kemungkinan kepadatan
coliform.
■ Gunakan tahap uji pendugaan sampai tahap konfirmasi pada uji MPN ini.
■ Gunakan tahap uji pelengkap/penyelesaian (completed) (9221B.5) .
■ Secara umum, tujuan menganalisis air yang tidak dapat diminum adalah untuk memperkirakan
kepadatan bakteri, menentukan sumber polusi, menegakkan standar kualitas air, atau melacak
ketahanan hidup mikroorganisme.
■ Periksa volume air yang cukup untuk memberikan hasil yang representatif untuk setiap stasiun
pengambilan sampel.
 Menguji Kualitas Sampel lain berdasarkan standar
US.EPA (Environmenttal Protection Agency)

■ Teknik fermentasi multi-tabung berlaku untuk: analisis air asin atau payau, serta lumpur,
sedimen, dan lumpur.
■ Kumpulkan sampel seperti yang diarahkan pada Bagian 9060A, menggunakan wadah sampel
yang ditentukan dalam Bagian 9030B.19.
■ Untuk menyiapkan sampel padat atau semipadat, timbang sampel dan tambahkan pengencer
untuk membuat pengenceran 10 pangkat -1. Misalnya, tempatkan 30 g sampel di tabung blender
steril, tambahkan 270 mL buffer fosfat steril atau 0,1% air pepton, dan blender selama 1 hingga 2
menit dengan kecepatan tinggi (8000rpm).
■ Siapkan pengenceran desimal yang sesuai dari sampel yang dihomogenisasi secepat mungkin
untuk meminimalkan pengendapan.
1. Presumptive Test (Uji pendugaan)
A. REAGEN dan MEDIA
KULTUR
■ Tambahkan serbuk media ke dalam air, aduk rata, dan panaskan hingga larut.
■ Sebelum sterilisasi, masukkan media ke dalam tabung fermentasi yang berisi tabung
Durham terbalik. Media harus cukup untuk menutupi tabung durham setidaknya
setengah sampai dua pertiga setelah sterilisasi.
■ Sebagai alternatif, dapat pula dimasukkan 0,01 g/L bromocresol purple pada media LTB
(indikator asam).
■ Tutup tabung dengan tutup logam atau plastik tahan panas.
■ Siapkan sesuai Tabel 9221:I, buat media LTB cukup pekat sehingga walaupun
ditambahkan 100-, 20-, atau 10-mL porsi sampel ke media tidak akan mengurangi
konsentrasi bahan di bawah media standar.
■ Autoklaf medium pada 121°C selama 12 hingga 15 menit. Pastikan bahwa tabung
durham terbalik, jika digunakan, bebas dari gelembung udara.
■ pH harus 6,8± 0,2 setelah sterilisasi.
 B. PROSEDUR

1. Atur tabung fermentasi dalam barisan masing-masing lima atau sepuluh tabung dalam rak tabung
reaksi.
 Jumlah baris dan volume sampel dipilih tergantung pada kualitas dan karakter air yang akan
diperiksa.

 Untuk air minum, 100 mL harus diuji.

 Gunakan lima porsi 20 mL, sepuluh porsi 10 mL, atau satu porsi 100 mL.

 Untuk air yang tidak dapat diminum, gunakan lima tabung per pengenceran (dari 10, 1, 0,1
mL, dll.).
 Kocok sampel dan pengenceran dengan kuat selama 5 detik (sekitar 25 kali).
 Inokulasikan 5 ulangan sampel setiap peningkatan pengenceran desimal.

 Campurkan sampel uji dalam medium dengan mengaduknya pelan-pelan.

2. Segera inkubasi tabung yang diinokulasi, kontrol, dan/atau blanko steril pada suhu
35± 0,5°C.
■ Setelah 24 ±2 jam, putar setiap tabung atau botol dengan pelan dan periksa apakah
ada pertumbuhan, gas, dan/atau reaksi asam (berwarna kuning) dan, jika tidak ada
gas atau reaksi asam terbukti, inkubasi ulang dan periksa kembali di akhir dari 48 3
jam.
■ Catat ada tidaknya pertumbuhan, gas, dan/atau produksi asam.
 B. INTERPRETASI

■ Terdeteksinya asam (warna kuning) dan/atau gas dalam tabung atau botol dalam waktu
48 ±3 jam merupakan hasil positif pada uji presumtif/pendugaan.
■ Tidak adanya reaksi asam dan/atau pembentukan gas dalam 48 ±3 jam waktu inkubasi
menunjukkan hasil negatif.
■ Apabila terdapat hasil uji presumtif positif, lanjutkan ke tahap konfirmasi.
■ Namun, bila pada sampel air minum menunjukkan pertumbuhan walau tanpa positif gas
atau asam, tetap dilanjutkan pada tahap konfirmasi (9221B.4).
Ilustrasi presumtive test
sampel air minum
Ilustrasi presumtive test
sampel bukanFlow
air minum
chart of Presumptive MPN
 2. Confirmed Test (Tahap konfirmasi)
A. REAGEN dan MEDIA
KULTUR

■ Gunakan tabung fermentasi kaldu BGLB untuk fase konfirmasi.

■ Tambahkan serbuk media ke dalam air, aduk rata, dan panaskan untuk larut.
■ Sebelum sterilisasi, masukkan media ke dalam tabung fermentasi dengan tabung durham
terbalik, pastikan volume yang cukup media untuk melebihi tabung durham setidaknya setengah
hingga dua pertiga setelah sterilisasi.
■ Tutup tabung dengan logam atau plastik tahan panas.
■ Autoklaf media pada 121°C selama 12 hingga 15 menit. Pastikan bahwa tabung durham bebas
dari gelembung udara. pH media seharusnya 7.2 ±0.2 setelah sterilisasi.
 B. PROSEDUR

■ Semua tabung yang menunjukkan pertumbuhan, gas, atau asam pada tahap pendugaan dalam
waktu 24 ±2 jam inkubasi segera diinokulasikan ke tahap konfirmasi.
■ Jika tabung yang diperpanjang masa inkubasinya menunjukkan fermentasi aktif atau reaksi asam
pada akhir masa inkubasi 48 ±3 jam, segera diinokulasi ke fase konfirmasi.
■ Untuk mengkonfirmasi, tumbuhkan koloni hasil pengujian tahap presumtive pada medium padat.
■ Konfirmasi hasil tahap presumptif dengan menumbuhkan koloni pada media padat
menggunakan: media fermentasi, lihat Bagian 9222B.4g (LES-ENDO agar/ MacConkey).
■ Kocok perlahan atau putar tabung atau botol tahap uji pendugaan yang menunjukkan
pertumbuhan gas atau asam untuk meresuspensi mikrorganisme.
■ Dengan ose steril berdiameter 3,0 hingga 3,5 mm, transfer satu atau lebih ose penuh kultur ke
tabung fermentasi BGLB.
■ Atau, masukkan setidaknya aplikator kayu steril 2,5 cm ke dalam kultur, segera angkat, dan
masukkan aplikator ke dasar tabung fermentasi yang berisi kaldu BGLB.
■ Lepaskan dan buang aplikator.
■ Ulangi untuk tabung uji pendugaan-positif lainnya.
■ Pengujian dapat dilakukan bersamaan antara:
 kaldu BGLB untuk total koliform
 kaldu EC untuk coliform termotoleran (tinja) (lihat 9221E)
 EC-MUG kaldu untuk Escherichia coli (lihat 9221F).
■ Namun, jika menggunakan loop yang sama atau tongkat aplikator kayu untuk memindahkan
kultur ke lebih dari satu jenis media, lakukan inokulasi terakhir pada kaldu BGLB.
■ Segera inkubasi tabung kaldu BGLB yang diinokulasi pada suhu 35 ± 0,5°C.
■ Setiap jumlah gas yang terbentuk dalam tabung durham dari Tabung fermentasi kaldu BGLB
dalam 48± 3 jam merupakan tahap terkonfirmasi positif.

B. INTERPRETASI

■ Untuk memperkirakan kepadatan koliform, hitung nilai MPN dari jumlah positif Tabung BGLB
seperti yang dijelaskan dalam 9221C.
AIR MINUM

LIHAT
TABEL
AIR MINUM
AIR MINUM
 Flow chart of Confirmed and Completed MPN
BUKAN AIR MINUM

LIHAT TABEL
BUKAN AIR MINUM
 B. ALTERNATIF

 Gunakan alternatif ini hanya untuk air yang tercemar atau air limbah yang
diketahui menghasilkan hasil positif secara konsisten.

 Jika semua tabung pada uji pendugaan positif dalam dua atau lebih pengenceran
berturut-turut dalam waktu 24 jam, maka hanya inokulasikan hasil dari tabung
pengenceran tertinggi (inokulum sampel terkecil) pada tahap uji konfirmasi, hal
ini dilakukan apabila semua tabung pada pengenceran yang lebih tinggi hasilnya
positif juga.

 Inokulasikan semua tabung positif pada uji tahap konfirmasi apablia

pertumbuhan gas atau asam dihasilkan dalam 24 hingga 48 jam.
 3. Completed Test (Uji pelengkap)
■ Tes pelengkap seperti yang dijelaskan di sini tidak diperlukan untuk analisis sampel air minum.
■ Uji ini dilakukan sebagai pengujian tambahan untuk koliform termotoleran (tinja) dan/atau E. coliyang
diperlukan untuk tes coliform positif pada tahap uji konfirmasi (BGLB positif).
■ Pemindahan hasil uji yang positif pada media LTB dapat dilakukan bersamaan ke dalam kaldu BGLB untuk
konfirmasi total koliform dan kaldu EC untuk termotoleransi (tinja) coliforms (9221E) atau kaldu EC MUG
untuk Escherichia coli (9221F), pemindahan pada BGLB diinokulasi terakhir.
■ Hasil positif dari inkubasi dalam EC dan/atau EC-MUG pada suhu tinggi suhu (44,5 0,2°C) dapat dianggap
sebagai pengujian yang lengkap.
■ Kultur paralel BGLB positif dengan EC atau EC-MUG negatif menunjukkan adanya koli nonfekal.
■ Kultur paralel EC atau EC-MUG positif dan BGLB negatif menunjukkan adanya termotoleransi (fecal)
coliform atau E. coli.
 A. REAGEN dan MEDIA
KULTUR

1.

• Tambahkan serbuk media ke air, aduk rata, dan panaskan

sampai mendidih untuk larut.
• Sterilkan dengan autoklaf selama 15 menit pada 121°C.
• Tunggu agar-agar agak dingin setelah sterilisasi dan
tuangkan ke dalam cawan Petri.
• pH harus 7,1± 0,2 setelah sterilisasi
 ■ Tambahkan serbuk media ke dalam air, aduk rata, dan panaskan hingga larut.
■ Sebelum sterilisasi, masukkan ke dalam tabung bertutup ulir.
■ Autoklaf pada 121°C selama 15 menit.
■ pH sedang harus 6,8 ±0,2 setelah sterilisasi.
■ Setelah sterilisasi, segera masukkan tabung ke dalam posisi miring sehingga agar-agar akan memadat
dengan permukaan yang miring.
■ Kencangkan tutup sekrup setelah pendinginan dan simpan di tempat penyimpanan yang terlindungi dan
sejuk
4. Siapkan reagen untuk pewarnaan Gram: Kristal violet, Lugol, Alkohol, Safranin
 B. PROSEDUR

1). Dengan teknik aseptik, gores media agar LES Endo (Bagian 9222B.2a) atau cawan agar
MacConkey dari masing-masing tabung dugaan positif kaldu BGLB sesegera mungkin setelah
gas diamati.
■ Pastikan ada koloni terpisah setidaknya berjarak 0,5 cm.
■ Untuk mendapatkan proporsi tinggi dari isolasi yang berhasil jika organisme coliform hadir,
gunakan pendekatan berikut:
– a) Gunakan ose steril 3-mm atau jarum inokulasi sedikit melengkung di ujungnya;
– b) ketuk dan miringkan tabung fermentasi untuk menghindari terambilnya selaput atau
buih pada ose;
– c) masukkan ujung ose atau jarum ke dalam cairan di tabung hingga kedalaman sekitar
0,5 cm;
– d) gores dengan hati-hati untuk menghindari robeknya media;
– e) bakar ose antara goresan kuadran kedua dan ketiga agar diperoleh koloni terpisah.
– f) Inkubasi cawan dengan posisi terbalik, pada 35± 0,5 ° C selama 24± 2 jam.
2) Koloni yang tumbuh pada agar LES Endo atau MacConkey diamati dengan ciri berikut:
Koloni pada agar LES-Endo didefinisikan sebagai: khas (merah muda hingga merah tua dengan
kemilau permukaan logam hijau) atau koloni atipikal (merah muda, merah, putih, atau tidak
berwarna tanpa kilau) setelahnya inkubasi 24 jam.
Koloni laktosa fermenter pada Agar MacConkey berwarna merah dan mungkin dikelilingi oleh zona
buram dari empedu yang diendapkan.
Dari setiap cawan, pilih satu atau lebih koloni tipikal yang terpisah, atau jika tidak ada koloni yang
khas, pilih dua atau lebih koloni yang dianggap paling mungkin sebagai koliform.
Pindahkan koloni ke tabung fermentasi LTB single broth dan ke agar nutrient miring.
Jika diperlukan, gunakan kaca pembesar agar koloni yang diambil dari cawan terlihat jelas.
Hindari kontaminasi.
Inkubasi LTB sekunder dengan tabung durham pada 35± 0,5°C selama 24± 2 jam; jika gas tidak
diproduksi dalam waktu 24± 2 jam, inkubasi kembali dan periksa lagi pada 48± 3 jam.
Periksa secara mikroskopis preparat pewarnaan Gram dari kultur agar nutrient miring berumur 24
jam yang sesuai dengan tabung LTB sekunder yang menunjukkan gas.
Bakteri coliform berbentuk batang. Gram negatif ditunjukkan dengan warna merah, sedangkan
Gram negatif berwarna ungu.
 B. INTERPRETASI

■ Pembentukan gas di tabung LTB sekunder dalam waktu 48± 3 jam dan diperolehnya
bakteri gram negatif yang tidak membentuk spora, berbentuk batang dari kultur agar
nutrient merupakan hasil positif untuk tahap uji pelengkap, hal tersebut menunjukkan
bahwa anggota kelompok coliform hadir.
 Flow chart of Confirmed and Completed MPN
BUKAN AIR MINUM
UJI COLIFORM THERMOTOLERAN (COLI FEKAL)

■ Coliform termotoleransi/ koliform tinja (yang memfermentasi laktosa untuk

menghasilkan gas pada 44.5 ° C) telah diperoleh di perairan yang kaya organik
atau iklim tropis tanpa adanya kontaminasi tinja.
■ Jadi ketika mencari bukti kontaminasi tinja, pengujian E. coli lebih disarankan.
■ Namun demikian, peraturan mungkin mensyaratkan identifikasi dan
perhitungan koliform termotoleran/koliform tinja.
■ Untuk menguji koliform termotoleransi, dapat digunakan medium EC broth
atau metode membran-filter.
■ Dalam teknik fermentasi tabung, koliform termotoleransi diidentifikasi oleh
kemampuan untuk memfermentasi laktosa untuk menghasilkan gas pada 44,5±
0,2°C dalam 24±2 jam.
■ Uji Coliform Termotoleran (Media EC)
Uji koliform termotoleran dengan media EC digunakan untuk pemeriksaan
air minum, pencemaran sungai, sumber air baku tanpa filter, sistem
pengolahan air limbah, mandi air, air laut, dan pemantauan kualitas air
umum.
Jangan gunakan media EC secara langsung untuk mengisolasi bentuk coli
termotoleransi dari air; lakukan pengkayaan sebelumnya dalam media LTB
pada tahap pendugaan, hal tersebut diperlukan untuk pemulihan optimal
koliform termotoleran.
 A. REAGEN dan MEDIA
KULTUR

■ Pembuatan medium EC

 Tambahkan serbuk media ke dalam air, aduk rata, dan panaskan untuk larut.
 Sebelum sterilisasi, masukkan media yang cukup untuk menutupi tabung durham setidaknya
setengah sampai dua pertiga setelah sterilisasi.
 Tutup tabung dengan logam atau tutup plastik tahan panas.
 Autoklaf media pada suhu 121°C selama 12 hingga 15 menit.
 Pastikan tabung durham bebas dari udara gelembung.
 pH medium harus 6,9±0,2 setelah sterilisasi.
 B. PROSEDUR

1) Setelah inkubasi, kocok perlahan atau putar tabung fermentasi atau botol yang menunjukkan gas,
pertumbuhan, atau keasaman pada LTB untuk mensuspensi kembali organisme.
– Segera gunakan ose steril berdiameter 3 hingga 3,5 mm untuk mentransfer satu ose atau lebih
penuh kultur dari tabung yang menunjukkan pertumbuhan dengan produksi asam dan/atau gas
pada LTB ke tabung fermentasi yang mengandung kaldu EC.
– Atau, masukkan steril aplikator kayu setidaknya 2,5 cm ke dalam kultur, segera angkat, dan
masukkan aplikator ke dasar fermentasi tabung berisi kaldu EC.
– Angkat dan buang aplikator.
– Ulangi hal yang sama untuk semua tabung dugaan-positif lainnya dan inkubasi pada 44,5±
0,2°C.
– Inokulasi simultan ke dalam EC broth dan/atau EC-MUG broth bersama dengan kaldu BGLB
dapat dilakukan, jika media yang paling menghambat (BGLB broth) diinokulasi terakhir.
2) Tempatkan semua tabung EC ke dalam penangas air yang bersirkulasi (sebaiknya dengan penutup
runcing) dalam waktu 30 menit setelah inokulasi. Inkubasi tabung kaldu EC pada suhu 44,5± 0,2 °C
selama 24± 2 jam. Pertahankan kedalaman air yang cukup di inkubator penangas air untuk merendam
tabung media bagian atas.
 B. INTERPRETASI

■ Produksi gas dengan pertumbuhan dalam EC broth dalam waktu 24± 2 jam atau
kurang dianggap sebagai reaksi koliform thermotolerant positif.
■ Kegagalan untuk menghasilkan gas (dengan sedikit atau tidak ada pertumbuhan)
merupakan reaksi negatif.
■ Jika banyak tabung digunakan, hitung MPN koliform thermotolerant dari jumlah
tabung kaldu EC positif, seperti yang dijelaskan dalam 9221C.
■ Saat menggunakan hanya satu tabung untuk subkultur dari satu tabung tahap uji
pendugaan, laporkan sebagai ada atau tidak adanya koliform thermotolerant.
■ Jika terjadi pertumbuhan yang subur tanpa produksi gas, lakukan uji koliform
termotoleran atau E. coli menggunakan media yang berbeda.
UJI E. coli dengan SUBSTRAT FLUOROGENIC (E-MUG)
■ Escherichia coli adalah anggota dari flora tinja asli dari hewan berdarah panas.
■ Keberadaan E.coli dalam air adalah dianggap sebagai indikator spesifik kontaminasi tinja dan
kemungkinan adanya patogen enterik.
■ Uji keberadaan E. coli berlaku untuk analisis air minum, air permukaan, air tanah, dan air
limbah.
■ Pengujian E. coli dapat dilakukan dengan menggunakan metode MPN, metode membran
filter, dan metode substrat enzim kromogenik.
■ Prosedur E. coli lainnya dapat digunakan uji GAD (Glutamate Decarboxylase) dan Uji
indole.
■ Pada uji E.coli menggunakan media EC-MUG, E.coli didefinisikan spesies bakteri coliform
yang memiliki enzim -glucuronidase, yang dapat memecah substrat fluorogenik 4-
methylumbelliferyl-β -D-glucuronide (MUG), sehingga melepaskan fluorogen dalam 24± 2
jam atau kurang ketika ditanam di EC-MUG pada 44,5± 0,2°C.
■ Penggunaan media EC-MUG untuk mendeteksi E.coli digunakan untuk
pemeriksaan air minum, polusi sungai, sumber air tanpa penyaringan,
sistem pengolahan air limbah, air mandi, air laut, dan pemantauan
kualitas air secara umum.
■ Jangan gunakan EC-MUG untuk isolasi langsung E. coli; pengayaan
sebelumnya menggunakan medium pada tahap uji pendugaan diperlukan
untuk pemulihan yang optimal.
 A. REAGEN dan MEDIA
KULTUR

■ Tambahkan serbuk media ke dalam air, aduk rata, dan panaskan untuk larut.
■ Sebelum sterilisasi, masukkan ke dalam tabung (gunakan tabung yang tidak berfluorensensi).
■ Tabung durham tidak diperlukan. Tutup tabung dengan logam atau tutup plastik tahan panas.
■ pH medium harus 6,9 0,2 setelah sterilisasi selama 15 menit pada 121°C.
 B. PROSEDUR

1) Setelah inkubasi, kocok perlahan atau putar tabung fermentasi atau botol yang menunjukkan gas,
pertumbuhan, atau keasaman pada LTB untuk mensuspensi kembali organisme.
– Segera gunakan ose steril berdiameter 3 hingga 3,5 mm untuk mentransfer satu ose atau lebih
penuh kultur dari tabung yang menunjukkan pertumbuhan dengan produksi asam dan/atau gas
pada LTB ke tabung media EC-MUG.
– Atau, masukkan steril aplikator kayu setidaknya 2,5 cm ke dalam kultur, segera angkat, dan
masukkan aplikator ke dasar fermentasi tabung berisi kaldu EC-MUG.
– Angkat dan buang aplikator.
– Ulangi hal yang sama untuk semua tabung dugaan-positif lainnya dan inkubasi pada 44,5±
0,2°C.
– Inokulasi simultan ke dalam EC broth dan/atau EC-MUG broth bersama dengan kaldu BGLB
dapat dilakukan, jika media yang paling menghambat (BGLB broth) diinokulasi terakhir.
2) Tempatkan semua tabung EC-MUG ke dalam penangas air yang bersirkulasi (sebaiknya dengan
penutup runcing) dalam waktu 30 menit setelah inokulasi. Inkubasi tabung kaldu EC-MUG dan kontrol
negatif pada suhu 44,5± 0,2 °C selama 24± 2 jam. Pertahankan kedalaman air yang cukup di inkubator
penangas air untuk merendam tabung media bagian atas.
 B. INTERPRETASI

■ Periksa semua tabung yang menunjukkan pertumbuhan apakah berfluoresensi menggunakan lampu
UV dengan panjang gelombang panjang 6W, 365–366 nm.
■ Kehadiran fluoresensi biru cerah dianggap sebagai hasil positif untuk E.coli.
■ Pertumbuhan tanpa adanya warna biru cerah fluoresensi dianggap sebagai hasil negatif.
■ Untuk membantu menafsirkan hasil dan menghindari kesalahan mengidentifikasi autofluoresensi
lemah dari media atau tabung kaca sebagai respon positif, harus digunakan beberapa kontrol, yaitu:
– kontrol positif [kultur E. coli (MUG-positif) yang diketahui],
– kontrol negatif [kultur Klebsiella pneumoniae (MUG-negatif) termotoleransi],
– dan media yang tidak diinokulasi kontrol.
■ Jarak antara lampu UV dan tabung harus sedemikian rupa sehingga kontrol positif E. coli
menunjukkan fluoresensi, sedangkan kontrol MUG-negatif dan tidak diinokulasi tidak menunjukkan
fluoresensi.
■ Jika menggunakan beberapa tabung, hitung MPN untuk E. coli dari jumlah tabung kaldu EC-MUG
positif menggunakan tabel.
■ Bila hanya menggunakan satu tabung, atau subkultur dari satu botol atau koloni presumtif, laporkan
sebagai ada atau tidak adanya E. coli.