PEMERIKSAAN MAKANAN / MINUMAN

Identifikasi bakteri Salmonella sp.

Hari, tanggal : Senin s/d Jumat, 20-24 Mei 2013
Tujuan : Untuk mengidentifikasi adannya bakteri Salmonella sp. pada
sampel makanan atau minuman.
Materi : - Pembuatan media pemupuk Selenite Broth
- Pembuatan media selektif SSA
- Pembuatan media TSIA
- Pembuatan media Biokimia ( Gula-gula, MR, VP, Pepton,
Simon citrate, Urea, dan Semi Solid)
- Identifikasi kuman Salmonella sp.

Sampel : Ice Cream Cup
Alat : Erlenmeyer, Petridish, batang pengaduk, pembakar spirtus, Kaki
tiga&kasa, Gelas ukur, maat pipet, pipet pasteur, ose lup, ose
jarum, dan inkubator.

Media : Selenite Broth, SSA, TSIA, Gula-gula, Air pepton, VP, MR,
Urea, simon citrate, dan Semi solid.

Reagensia : Reagen Kovach, KOH 40%, -naphtol 5%, HCL dan NaOH
(untuk menyesuaikan pH pada proses pembuatan media.

Langkah Kerja:
1. Menyiapkan semua alat dan sampel yang digunakan.
2. Membuat media yang digunakan pada proses identifikasi.
3. Menanam sampel pada pedia pemupuk Selenite Broth yang telah dibuat,
dengan komposisi: media 90 ml + 10 ml sampel.
4. Menginkubasi selama 24 jam dengan suhu 37
o
C pada inkubator.
5. Jika pada media pemupuk menunjukkan adanya kekeruhan, penanaman
kuman dilanjutkan pada media selektif SSA (Salmonella Shigella Agar).
Mengambil 1 mata ose lup suspensi kuman dari media pemupuk kemudian
melakukan strike pada media SSA. Menginkubasi selama 24 jam dengan
suhu 37
o
C pada inkubator. Mengamati adanya koloni yang tumbuh pada
media SSA.
6. Dari media SSA,penanaman dilanjutkanpada media TSIA.
Mengambil koloni yang sesuai menggunakan ose jarum, kemudian
menusukkan pada media TSIA (penusukan tidak sampai dasar) dan
membuat strike pada lereng TSIA tersebut. Inkubasi selam 24 jam suhu
37
o
C pada inkubator.
7. Mengamati hasil yang terbentuk pada media TSIA (lereng, dasar, gas,
H
2
S)
8. Dari koloni yang sama untuk media TSIA, penanaman dilanjutkan pada
media gula-gula dan biokimia.
Penanaman pada media cair :
Memfiksasi ose lup sampai membara, menunggu hingga
dingin.
Mengambil sebanyak 1 mata ose lop koloni kuman,
kemudian menanam pada media cair dengan cara mencelup
dan menggesek ose pada dinding tabung 3-4 kali.
Pengambilan koloni kuman hanya 1 kali untuk semua
media cair.
Mensteril ose

Penanaman pada media agar:
Memfiksasi ose lop, menunggu hingga dingin.
Mengambil sebanyak 1 mata ose lop koloni kuman,
kemudian melakukan strike pada media agar Urea dan
Simon citrate.
Mensteril ose.

Penanaman pada media Semi solid:
Memfiksasi ose jarum, menunggu hingga dingin.
Menngambil koloni dengan osejarum, menuskkan ose
jarum hingga batas media (tidak sampai dasar).
Mensterilisasi ose.

9. Menginkubasi semua media gula-gula dan biokimia pada suhu 37
o
C
selama 24 jam.
10. Mengamati hasil yang terjadi.
11. Pada media air pepton, menambahkan 3 tetes reagen kovach melalui
dinding tabung. Mengamati hasil yang terjadi.
12. Pada media MR, menambahkan reagen Methyl Red melalui dinding
tabung.
13. Pada media VP, menambahkan reagen KOH 40% dan -naphtol 5%
dengan perbandingan 1 tetes : 3 tetes melalui dinding tabung. Mengamati
hasil yang terjadi.
14. Melaporkan hasil keseluruhan hasil identifikasi bakteri Salmonella sp.
Pada sampel Ice Cream.

Hasil Praktikum:
Perhitungan Pembuatan Media:
Media Selenite Broth: 1 x 90 ml = 90 ml

x 19 gram = 1.71 gram

Media SSA : 1 x 15 ml = 15 ml

x 63 gram = 0.945 gram

Media TSIA: 1 x 3 ml =

x 65 gram = 0.195 gram

Media Vpdan MR: 2 x 3 ml x 1 tabung = 6 ml
- Pepton :

x 0.5 gram = 0.0375 gram

- K
2
HPO
4
:

x 0.5 gram = 0.0375 gram

- Glokosa :

x 0.5 gram = 0.0375 gram

Media Simon citrate Agar : 1 tabung x 3 ml = 3 ml

x 23 gram = 0. 069 gram

Media Urea Agar : 1 tabunng x 3 ml = 3 ml
Urea agar base :

x 23 gram = 0. 069 gram

Larutan Urea 20% (10 ml Urea pure 20% untuk setiap 100 ml
urea agar base):

x 10 ml = 0. 3 ml
Gram =

x 0.3 gram = 0. 06 gram

Media Semi Solid: 1 tabung x 4 ml = 4 ml
- Tryptose :

x 5 gram = 0. 02 gram
- NaCl :

x 5 gram = 0. 02 gram
- Bacteriological agar =

x 4 gram = 0. 016 gram

Media Air Pepton: 1 tabung x 4 ml = 4 ml
- Air Pepton:

x 10 gram = 0. 04 gram
- NaCl :

x 5 gram = 0. 02 gram

Media Gula-gula : (untuk setiap gula-gula)
- Air Pepton : 1 tabung x 4 ml= 4 ml
- Gula-gula :

x 1 gram = 0. 04 gram
- Indikator BTB :

x 1 ml = 0,04 ml

Hasil Identifikasi :
Sampel : Ice Cream cup

Media Pemupuk Selenite Broth:
Terjadi Kekeruhan
Media Selektif SSA :
Tidak ada satu pun koloni kuman yang tumbuh.

Dari hasil penanaman pada media selektif SSA yang
menunjukkan Negatif (tidak ada koloni yang tumbuh), Identifikasi
Salmonella sp. pada sampel Ice Cream tidak dilanjutkan.

Kesimpilan :
Pada Sampel Ice cream tidak mengandung Salmonella sp. atau Sampel tidak
terkontaminasi Salmonella sp.