Larut dalam lemak penyerapan vitamin usus: situs Penyerapan di usus dan interaksi

untuk penyerapan

abstract

Interaksi yang terjadi di tingkat usus antara yang larut dalam lemak vitamin A, D, E,
dan K (FSVs) tidak didokumentasikan secara baik. Kami pertama kali ditentukan
setiap profil penyerapan FSV sepanjang sumbu duodenum-kolon usus mouse untuk
memperjelas situs penyerapan masing-masing. Kami kemudian menyelidiki
interaksi antara FSVs selama serapan mereka dengan Caco-2 sel. Data kami
menunjukkan bahwa vitamin A sebagian besar diserap dalam mouse proksimal
usus, sedangkan vitamin D diserap di usus median, dan vitamin E dan K dalam usus
distal. Interaksi kompetitif yang signifikan untuk penyerapan kemudian dijelaskan
antara vitamin D, E, dan K, yang mendukung hipotesis jalur penyerapan umum.
Vitamin A juga secara signifikan menurunkan serapan dari FSVs lain tetapi,
sebaliknya, penyerapan yang tidak terganggu oleh vitamin D dan K dan bahkan
dipromosikan oleh vitamin E. Hasil ini harus diperhitungkan, terutama untuk
formulasi suplemen, untuk mengoptimalkan penyerapan FSV.

Pendahuluan
Vitamin adalah nutrisi penting yang menjamin pertumbuhan optimal, reproduksi
dan fungsi. Mereka telah dikategorikan berdasarkan kelarutan sebagai air-(B dan C)
dan larut dalam lemak (FSVs), yang, pada gilirannya, digolongkan sebagai empat
kelompok senyawa, khususnya A, D, E, dan K (Tabel 1). Karena tubuh tidak dapat
mensintesis vitamin, atau setidaknya cukup vitamin D, jumlah yang cukup harus
disediakan oleh diet. Namun, mekanisme dasar yang terlibat dalam penyerapan
FSVs masih belum jelas. Awalnya, Hollander et al.
(Hollander, 1981) menyediakan sebagian besar bukti mengenai penyerapan FSV.
Mereka menyarankan bahwa vitamin E dan D yang diserap oleh difusi pasif
(Hollander, Rim, & Muralidhara, 1975; Hollander & Truscott, 1976) sedangkan
vitamin A dan K yang diserap melalui protein tergantung operator (Hollander, 1973;
Hollander & Muralidhara, 1977) . Namun, studi terbaru telah mempertimbangkan
kembali asumsi-asumsi ini, dan telah menunjukkan bahwa mekanisme penyerapan
yang lebih kompleks dari yang dijelaskan sebelumnya: difusi pasif terjadi pada
konsentrasi tinggi dari senyawa ini, sementara protein-dimediasi transportasi terjadi
pada dosis diet (Reboul & Borel, 2011)
Karya terbaru kami menunjukkan bahwa serapan vitamin D usus tidak hanya pasif,
tetapi juga melibatkan transporter kolesterol, seperti SR-BI (Scavenger Receptor
kelas tipe B I), CD36 (Cluster Determinan 36) dan NPC1-L1 (Niemann-Pick C1-

seperti 1) (Reboul et al., 2011). Dengan cara yang sama, SR-BI ditunjukkan untuk
menengahi serapan tokoferol di kedua Caco-2 dan mouse model (Reboul et al.,
2006), serta NPC1-L1 (Narushima, Takada, Yamanashi, & Suzuki, 2008). Protein yang
terlibat dalam vitamin A dan K transportasi membran ke enterocyte tetap tidak
teridentifikasi.

Menariknya, beberapa interaksi komponen-vitamin makanan telah dilaporkan

sebelumnya. Kami pertama kali menunjukkan bahwa pitosterol menghambat D
penggabungan vitamin ke dalam misel (Goncalves dkk., 2011). Penghambatan daritokoferol serapan juga diamati pada Caco-2 sel dengan adanya senyawa yang
berbeda, seperti fenolik naringenin, karotenoid dan c-tokoferol (Reboul et al., 2007),
dan vitamin D serapan telah rusak oleh a- tokoferol (Reboul et al., 2011) dan
pitosterol (Goncalves dkk., 2011).

Studi lain menunjukkan bahwa FSVs bisa memiliki interaksi antagonis yang
mempengaruhi penyerapan usus mereka in vivo. Memang, pada anak ayam diberi
makan dengan tingkat diet tinggi vitamin A (retinyl palmitate) selama 24 hari,
plasma a-tokoferol tingkat secara signifikan tertekan dibandingkan dengan anak
ayam makan control vitamin A (Sklan & Donoghue, 1982).
Setelah menyelidiki penyerapan FSV dalam usus tikus, tujuan kami adalah untuk
mengidentifikasi interaksi kompetitif atau sinergis antara vitamin A, D, E dan K pada
langkah kunci penyerapan usus, yaitu selama serapan mereka dengan enterocyte.

2. Bahan dan metode

2.1. Zat Kimia
2.2. Persiapan kendaraan FSV-diperkaya untuk sel dan tikus percobaan
2.2.1. Emulsi Persiapan FSV-kaya
Untuk memberikan FSV ke tikus, emulsi disiapkan seperti yang dijelaskan
sebelumnya (Reboul et al., 2011). Tergantung pada percobaan, tikus menerima baik
retinyl palmitate (250 lg), cholecalciferol (100 lg), c-tokoferol (500 lg) atau
phylloquinone (170 lg).
2.2.2. Misel FSV-kaya
Untuk pengiriman vitamin untuk Caco-2 sel, misel campuran disiapkan seperti yang
dijelaskan sebelumnya (Reboul et al., 2011). FSVs ditambahkan pada konsentrasi

yang berbeda tergantung pada kondisi (lihat Tabel 2). Konsentrasi FSV di solusi
misel diperiksa sebelum setiap percobaan.
2.3. Karakterisasi vitamin D serapan dalam usus tikus
2.3.1. Hewan
Enam-minggu-tua tipe liar jantan C57BL / 6 Rj tikus yang dibeli dari Janvier (Janvier,
Le-Genest-St-Isle, Prancis). Tikus-tikus tersebut ditempatkan di sebuah dengan
temperatur, ruang humidity- dan cahaya dikendalikan. Mereka diberi standar diet
chow dan ad libitum air. Tikus
dipuasakan semalam sebelum setiap percobaan. Protokol ini disetujui oleh komite
etika Marseilles (Perjanjian # 4-5032010).

2.3.2. Serapan FSV pada tikus tipe liar dalam usus

Pada hari percobaan, tikus yang dipaksa makan dengan emulsi FSV-diperkaya.
Setelah 4,5 jam pencernaan, usus, usus buntu dan usus dari setiap binatang
dengan cepat dipanen setelah euthanasia secara dislokasi leher. Usus, usus buntu
dan usus hati-hati dibilas dengan PBS. Usus kecil dipotong menjadi 6 cm segmen
sepanjang panjang total 30 cm. Bagian dari usus besar yang diambil merupakan
pertama 6 cm. Semua sampel dihentikan pada 500 lL PBS, homogen dan cepat
disimpan di? 80? C sampai analisis.
2.4. Kultur sel
2.4.1. Budaya Caco-2 sel

Caco-2 clone TC-7 sel dikultur seperti yang dijelaskan sebelumnya (Reboul et al.,
2005, 2006). Untuk setiap percobaan, sel-sel yang diunggulkan dan ditanam di
transwells selama 21 hari seperti yang dijelaskan sebelumnya (Reboul et al., 2005,
2006) untuk mendapatkan konfluen dan monolayers sel yang sangat berbeda. Dua
belas jam sebelum setiap percobaan, media di ruang apikal dan basolateral
digantikan dengan media yang lengkap bebas serum.
2.4.2. Karakterisasi FSV transportasi apikal dan persaingan dalam sel
Serapan apikal FSV tergabung dalam misel campuran ditentukan setelah 1 jam
inkubasi seperti yang dijelaskan sebelumnya (Goncalves dkk, 2013;. Reboul et al,
2011.). Terserap FSV diperkirakan berdasarkan FSV hadir dalam sel dipanen.
Semua sampel (sel dipanen dan media kultur setelah inkubasi) disegel di bawah
nitrogen dan disimpan pada? 80? C sampai analisis FSV. Aliquots sampel sel yang

digunakan untuk menilai konsentrasi protein menggunakan asam kit bicinchoninic

(Pierce, Montluon, Prancis).
2.5. Vitamin ekstraksi
FSVs diekstraksi dari 500 sampel air lL menggunakan metode yang dijelaskan
sebelumnya (Reboul et al., 2011). Standar internal yang adalah echinenone, retinil
asetat, tokoferol asetat dan apo-80 carotenal untuk vitamin A, D, E, dan K, masingmasing. Setelah ekstraksi lipid dengan heksana, residu kering dilarutkan dalam 200
lL fase gerak (70% asetonitril - 20% diklorometana - 10% metanol, asetonitril 60% 38% metanol - 2% air, 100% metanol, metanol 80% - 19,45 % etanol - 0,55% air,
vitamin A, D, E, dan K, masing-masing). Sebuah volume 180 lL digunakan untuk
analisis HPLC.
2.6. Analisis HPLC
Sistem HPLC dan metode didirikan menurut studi sebelumnya: vitamin A dan E,
vitamin D, dan vitamin K (Oostende, Widhalm (Reboul et al, 2009). (Goncalves dkk,
2013 Reboul et al, 2011.). , & Basset, 2008). Semua vitamin diidentifikasi oleh
waktu retensi dibandingkan dengan standar murni. Retinil linoleat, retinil oleat, dan
retinil stearat diproduksi di usus tikus mukosa diidentifikasi oleh waktu retensi dan
analisis spektral, dan dihitung berdasarkan rasio koefisien kepunahan molekul
mereka dibandingkan dengan retinyl palmitate.
2.7. Analisis statistik
Hasil dinyatakan sebagai berarti SEM. Perbedaan antara dua kelompok data
berpasangan diuji menggunakan nonparametrik uji Mann-Whitney U. Nilai-nilai p
<0,05 dianggap signifikan. Semua analisa statistik dilakukan dengan menggunakan
software Statview, versi 5.0 (SAS Institute, Cary, NC, USA).