Nama Kelompok :

Septa Austorina

(3K140752)

Silvi Prastisa Sari

(3K140753)

1. Mac Conkey Agar (MCA)

Persenyawaan utama dalam media ini adalah laktosa, garam empedu dan nerah netral. Media ini
menghambat pertumbuhan bakteri garam poditif yang di sebabkan oleh garam empedu
dan kristal violet, bakteri gram negatif yang tumbuh di bedakan dalam kemampuannya
memfermentasekan aktosa.
Koloni dari bakteri yang memfermentasekan laktosa berwarna merah bata dan di kelilingi oleh
endapan garam empedu. Endapan ini di sebabkan oleh enguraian laktosa menjadi asam yamg
bereaksi dengan garam empedu.
Bakteri yang tidak memfermentasekan laktosa biasanya bersifat pathogen. Golongan bakteri ini
tidakmemperlihatkan perubahan pada media. Warna koloni di lihat pada bagian koloni terpisah.

2. Endo Agar
Persenyawaan utama dalam media ini adalah laktosa, Na-s\ulfat dan fiksin-busa. Sifat
pertumbuhan koloni pada EA adalah :
a. Bakteri yang tidak memfregmentasikan laktosa
Terlihat sebagai koloni yang terang tembus, tidak berwarna dan di kelilingi oleh media yang
berwarna merah muda. Kelompok media ini menyebabkan indicator fuksin-fuksin yang
berwarna.
b. Bakteri yang memfregmentasikan laktosa
Terlihat sebagai koloni yang berwarna merah metalik dan di kelilingi oleh media yang
berwarna kemerahan. Perubahan warna media di sekeliling koloni bakteri bukan di
sebabkan oleh pengiraian asam, tetapi oleh reaksi penengahnya yaitu asetaldehida dengan

Na-dulfiat, bakteri gra positif di hambat pertumbuhannya oleh sulfiat dan fuksin. Beberapa
pertumbuhan koloni pada agar ini.

http://yazhid28bashar.blogspot.co.id/2013/05/makalah-pembuatan-media-ba-ca-na-ssa.html
Morfologi
1.

Bentuk batang, Gram negatif

2.

Ukuran 0,5 1,5 x 1 2

3.

Mempunyai selubung yang lebarnya 2 3 x ukuran kuman

4.

Tidak berspora, tidak berflagela

5.

Menguraikan laktosa

6.

Membentuk kapsul baik invivo atau invitro, sehingga koloni berlendir (mukoid)

7.

Kapsul terdiri dari antigen K dan antigen M dapat menutupi antigen O, berdasarkan antigen

ini ditemukan 70 tipe .

http://teenozhealthanalyst.blogspot.co.id/2012/03/identifikasi-klebsiella.html

Uji Biokimia
Berikut beberapa uji biokimia yang digunakan untuk identifikasi bakteri, antara lain:
1.

Reaksi Fermentasi Karbohidrat (Gula-gula)

Fermentasi merupakan salah satu aktivitas biokimia yang dilakukan oleh mikroba. Fermentasi
adalah proses pengunahan senyawa makromolekul organik menjadi senyawa yang lebih

sederhana oleh aktivitas mikroba pada kondisi anaerob. Fermentasi dapat menghasilkan berbagai
senyawa akhir, contohnya fermentasi karbohidrat yang dapat menghasilkan berbagai senyawa
asam seperti asam laktat dan propionet, ester-ester, keton dan gas (Pelczar, 2008).
Sebagian besar mikroorganisme memperoleh energi dari substrat berupa karbohidrat yang
selanjutnya di fermentasi menghasilkan asam-asam organik (seperti asam laktat, format, asetat),
dengan disertai atau tidak disertai pembentukan gas. Organisme-organisme yang berbeda akan
menggunakan karbohidrat/gula-gula yang berbeda tergantung dari komponen enzim yang
dimilikinya. Perbenihan gula-gula digunakan untuk melihat adanya pembentukan asam yaitu
dengan adanya perubahan warna indikator (merah fenol atau biru bromtimol) yang terdapat
dalam perbenihan menjadi kuning yang sebelum ditanami berwarna merah (indikator merah
fenol) atau berwarna biru (indikator biru bromtimol) serta untuk pembentukan gas, yaitu dengan
terlihatnyaudara di dalam tabung peragian/fermentasi (tabung durham). Jenis karbohidrat yang
digunakan pada uji fermentasi karbohidrat antara lain: Sukrosa, Laktosa, Maltosa, Manitol.
Glukosa dapat langsung masuk dalam jalur fermentasi tahap pertama. Sedangkan, sukrosa,
laktosa mantol, dan maltosa akan di hidrolisis terlebih dahulu menjadi monosakarida
penyusunnya. Laktosa dihidrolisis menjadi galaktosa dan glukosa. Monosakarida jenis manosa
dan galaktosa terlebih dahulu akan diubah menjadi glukosa melalui reaksi epimerisasi.
Sedangkan fruktosa akan diubah terlebih dahulu menjadi fruktosa 6-fosfat dan kemudian
fruktosa 6-fosfat diubah menjadi glukosa 6-fosfat. Glukosa 6-fosfat dan glukosa hasil epimerisasi
galaktosa dan manosa akan masuk dalam tahap awal proses fermentasi untuk menghasilkan asam
piruvat, asam asetat dan CO2 dan kemudian pada tahap kedua fermentasi asam piruvat dan asam
asetat di reduksi kembali oleh atom hidrogen yang dilepaskan dalam tahap pertama, membentuk
asam laktat dan etanol (Volk dan Wheeler, 1993).
2.

Uji Imvic (Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer, Simmons Citrate)

Identifikasi basil enterik sangat penting dalam mengendalikan infeksi usus dengan mencegah
kontaminasi pasokan makanan dan air. Kelompok bakteri yang dapat ditemukan di saluran usus
manusia

dan

mamalia

yang

lebih

rendah

diklasifikasikan

family Enterobacteriaeae. Yang termasuk dalam keluarga ini adalah:

1)

Pathogen seperti anggota genera Salmonella dan Shigella

sebagai

anggota

2)

Sesekali pathogen seperti anggota genera Proteus dan Klabsiella

3)

Yang normal flora usus seperti Escherichia anggota marga dan Enterobacter, yang

merupakan penduduk saprophytic dari saluran usus.

Diferensiasi kelompok utama Enterobacteriaceae dapat dicapai atas dasar sifat biokimia dan
reaksi enzimatik di hadapan substrat tertentu. Seri tes IMViC, indol, metil-merah, VogesPreskauer, dan pemanfaatan sitrat dapat digunakan untuk identifikasi ini.
1)

Indol

Tryptophan merupakan asam amino esensial yang dapat mengalami oksidasi dengan cara
kegiatan enzimatik beberapa bakteri. Konversi triptofan menjadi produk metabolik di mediasi
oleh enzim Tryptophanase. Media ini biasanya digunakan dalam indetifikasi yang cepat.
Perbenihan indol digunakan untuk melihat kemampuan bakteri mendegradasi asam amino
triptofan secara enzimatik. Hasil uji indol yang diperoleh negatif karena tidak terbentuk lapisan
(cincin) berwarna merah muda pada permukaan biakan, artinya bakteri ini tidak membentuk
indol dari tryptopan sebagai sumber karbon, yang dapat diketahui dengan menambahkan larutan
kovaks. Asam amino triptofan merupakan komponen asam amino yang lazim terdapat pada
protein, sehingga asam amino ini dengan mudah dapat digunakan oleh mikroorganisme akibat
penguraian protein (Volk dan Wheeler, 1993).
2)

MR-VP

Uji MR Perbenihan ini digunakan untuk mendeteksi bakteri yang memiliki kemampuan untuk
mengoksidasi glukosa menghasilkan produk asam berkonsentrasi tinggi yang stabil sehingga
menyebabkan pH media turun hingga dibawah 4,4 yang ditandai dengan hasil positif, terjadi
perubahan warna menjadi merah setelah ditambahkan Methyl Red. Artinya, bakteri ini
mengahasilkan asam campuran (metilen glikon) dari proses fermentasi glukosa yang terkandung
dalam medium MR-VP (Lehninger, 1995).
3)

Uji VP

Dengan hasil negatif, karena tidak terbentuk warna merah pada medium setelah ditambahkan napthol dan KOH, artinya hasil akhir fermentasi bakteri inibukan asetil metil karbinol (asetolin)
(Volk dan Wheeler, 1993).
4)

Simmons Citrate

Perbenihan ini digunakan untuk melihat kemampuan organisme enterik berdasarkan kemampuan
memfermentasi sitrat sebagai sumber karbon. Perbenihan Simmons Citrate ini mengandung
indikator biru bromtimol yang akan berubah menjadi biru pada reaksi positif dan tetap hijau jika
reaksi negatif (Volk dan Wheeler, 1993).
https://hidesideofme.wordpress.com/laporan-praktikum-agent-penyakit/laporan-praktikum-ujibiokimia/
Uji Biokimia

Uji biokimia yang paling sering digunakan antara lain :

1. Uji Indol
Media yang dipakai adalah pepton 1%. Uji indol digunakan untuk mengetahui apakah kuman
mempunyai enzim triptophanase sehingga kuman tersebut mampu mengoksidasi asam amino
triptophan membentuk indol. Adanya indol dapat diketahui dengan penambahan reagen
Ehrlich/Kovacs yang berisi paradimetil amino bensaldehid.
Interpretasi Hasil :
Negatif (-) : Tidak terbentuk lapisan cincin berwarna merah pada permukaan biakan,
artinya bakteri ini tidak membentuk indol dari triptophan sebagai sumber karbon.
Positif (+) : Terbentuk lapisan cincin berwarna merah pada permukaan biakan, artinya

bakteri ini membentuk indol dari triptophan sebagai sumber karbon.

Asam amino triptophan merupakan komponen asam amino yang lazim terdapat pada protein,
sehingga asam amino ini dengan mudah dapat digunakan oleh mikroorganisme.

2. Uji MR
Media yang digunakan adalah pepton glukosa phosphat. Uji ini digunakan untuk mengetahui
adanya fermentasi asam campuran (metilen glikon).
Interpretasi Hasil :
Negatif (-) : Tidak terjadi perubahan warna media menjadi merah setelah ditambah
methyl red 1%
Positif (+) : Terjadi perubahan warna media menjadi merah setelah ditambahkan methyl
red 1%. Artinya bakteri menghasilkan asam campuran (metilen glikon) dari
proses fermentasi glukosa yang terkandung dalam media MR.

3. Uji VP
Media yang dipakai adalah pepton glukosa phosphat. Uji ini digunakan untuk mengetahui
pembentukan asetil metil karbinol (asetoin) dari hasil fermentasi glukosa.
Interpretasi Hasil :
Negatif (-) : Tidak terjadi perubahan warna media menjadi merah setelah ditambahkan naphtol
5% dan KOH 40%.
Positif (+) : Terjadi perubahan warna media menjadi merah setelah ditambahkan naphtol
5% dan KOH 40%, artinya hasil akhir fermentasi bakteri adalah asetil metil
karbinol (asetoin).

4.Uji Citrat
Media yang dipakai adalah Simons citrat. Tujuan dari uji ini adalah untuk mengetahui apakah
kuman menggunakan sitrat sebagai sumber karbon. Pada media Simons citrat berisi indikator
BTB (Brom Tymol Blue). Apabila bakteri menggunakan sitrat sebagai sumber karbon maka
media berubah menjadi basa dan berubah warna menjadi biru.

Interpretasi Hasil:
Negatif (-) : Tidak terjadinya perubahan warna media dari hijau menjadi biru. Artinya

bakteri ini tidak mempunyai enzim sitrat permease yaitu enzim spesifik yang
membawa sitrat ke dalam sel. Sehingga kuman tidak menggunakan citrat
sebagai salah satu/satu-satunya sumber karbon
Positif (+) : Terjadinya perubahan warna media dari hijau menjadi biru, artinya kuman
menggunakan citrat sebagai salah satu/satu-satunya sumber karbon.

5. Uji Motilitas

Media yang dipakai adalah media yang bersifat semi solid dengan kandungan agar-agar 0,20,4%. Tujuan dari uji ini adalah untuk mengetahui gerak kuman, bisa memakai media MO
(Motilitas Ornitin) atau SIM (Sulfida Indol Motility). Pada media SIM selain untuk melihat
motilitas bisa juga untuk test indol dan pembentukan H2S.
Interpretasi Hasil:
Negatif (-) : Terlihat adanya penyebaran yang berwarna putih seperti akar hanya pada bekas
tusukan inokulasi.
Positif (+) : Terlihat adanya penyebaran yang berwarna putih seperti akar disekitar
inokulasi. Hal ini menunjukan adanya pergerakan dari bakteri yang
diinokulasikan, yang berarti bahwa bakteri ini memiliki flagel.

6. Uji Urease

Tujuan dari uji ini adalah untuk mengetahui apakah kuman mempunyai enzim urease yang dapat
menguraikan urea membentuk amoniak. Media urea berisi indikator phenol red.
Interpretasi Hasil :
Negatif (-) : Tidak terjadi perubahan warna media menjadi pink/merah jambu, artinya
kuman

tidak

memecah

urea

membentuk

amoniak.

Positif (+) : Tidak terjadi perubahan warna media menjadi pink/merah jambu, artinya kuman
memecah urea membentuk amoniak.

7.Tes TSIA (Triple Sugar Iron Agar)

Tujuan dari tes ini adalah untuk mengetahui kemampuan kuman untuk memfermentasikan
karbohidrat. Pada media TSIA berisi 3 macam karbohidrat yaitu glukosa, laktosa dan sukrosa.
Indikatornya adalah phenol red yang menyebabkan perubahan warna dari merah orange menjadi
kuning dalam suasana asam.
Glukosa berada di dasar media sedangkan laktosa dan sukrosa berada di bagian lereng. Selain
menggunakan media TSIA dapat pula digunakan media KIA (Kligers Iron Agar), bedanya adalah
pada media KIA hanya berisi 2 macam karbohidrat yaitu glukosa dan laktosa.
Interpretasi Hasil :
a. Hanya memfermentasi glukosa : Bila pada dasar (butt) media berwarna kuning (bersifat asam)
dan lereng (slant) berwarna merah (bersifat basa) Al/Ac atau K/A
b. Memfermentasi semua karbohidrat : Bila pada dasar (butt) media berwarna kuning (bersifat
asam) dan lereng (slant) berwarna kuning (bersifat asam) Ac/Ac atau A/A
c. Tidak memfermentasi semua karbohidrat : Bila pada dasar (butt) media berwarna merah
(bersifat basa) dan lereng (slant) berwarna merah (bersifat basa) Al/Al atau K/K Fermentasi

pada TSIA juga disertai dengan pembentukan gas CO2 yang dapat dilihat dari pecahnya dan
terangkatnya agar.

Media TSIA juga dapat digunakan untuk mengetahui pembentukan H2S yaitu melihat apakah
kuman memfermentasi metionin dan sistein (Asam amino yang mempunyai gugus S). Pada
media TSIA terdapat asam amino metionin dan sistein, jika kuman memfermentasi kedua asam
amino ini maka gugus S akan keluar dan gugus S akan bergabung dengan H2O membentuk H2S.
Selanjutnya H2S bergabung dengan Fe2+ membentuk FeS berwarna hitam dan mengendap.

8. Uji Gula-Gula (Glukosa, Laktosa, Maltosa, Manitol, Sukrosa)

Uji ini digunakan untuk mengetahui apakah kuman memfermentasi masing-masing gula diatas
membentuk asam. Media gula-gula ini terpisah dalam 5 tabung yang berbeda dan media yang
digunakan adalah masing-masing gula dengan konsentrasi 1% dalam pepton. Masing-masing
gula ditandai dengan tinta pada tutup kapas yang berbeda-beda. Untuk glukosa tidak berwarna,
laktosa berwarna ungu, maltosa berwarna merah, manitol berwarna hijau, dan sukrosa berwarna
biru. Didalam media gula-gula ditambahkan indikator phenol red.

Interpretasi Hasil :
Negatif (-) : Tidak terjadi perubahan warna media dari merah menjadi kuning. Artinya

kuman tidak memfermentasi gula

Positif (+) : Terjadi perubahan warna media dari merah menjadi kuning. Artinya kuman
memfermentasi gula membentuk asam
Positif + gas (+g) : Terjadi perubahan warna media dari merah menjadi kuning. Artinya
kuman memfermentasi gula membentuk asam dan gas. Gas yang
diperhitungan minimal 10% dari tinggi tabung durham

http://indahjayantikumalasari.blogspot.co.id/2014/07/uji-biokimia.html