BAB II

METODE PERCOBAAN
II.1 Variabel Percobaan
1.
2.
3.
4.
5.

Waktu Pengamatan
Logam Zn
Logam Cu
Antiseptik:
Desinfektan : Kit

II.2 Bahan yang digunakan

1.
2.
3.
4.
5.

Alkohol 96 %
Larutan lugol
Larutan C.C.V (Carbon Crystal Violet)
Larutan safranin
Media
- Nutrien broth
: 0.8 gram
- Agar slant
: 3 gram
- Aquadest
: 100 ml
6. Kertas saring
7. Kertas cokelat
II.3 Alat yang digunakan
1. Panci
2. Petridish
3. Beaker glass
4. Autoclaft
5. Inkubator
6. Encast
7. Pipet tetes
8. Kaca objek
9. Bunsen
10. Jarum ose
II.4 Prosedur percobaan
II.4.1 Sterilisasi alat
1. Mencuci alat dengan sabun dan membilasnya dengan air.
2. Mencuci alat dengan alkohol 96% dan membersihkannya dengan tissue.
3. Membungkus alat dengan kertas cokelat dengan bagian kasar ada di luar.
4. Memasukkan dalam autoclaft hingga suhu 121oC selama 15 menit.
II.4.2 Pembuatan media
II.4.2.1 Pembuatan media padat

II-1

II-2

Bab II Metode Percobaan

1. Menimbang 0,8 gram nutrient broth, 3 gram agar slant dan menyiapkan aquadest 100
ml.
2. Melarutkan 0,8 gram nutrient broth ke dalam aquadest 100 ml kemudian
memanaskannya di dalam panci, setelah mendidih menambahkan 3 gram agar slant
kemudian mengaduknya hingga homogen.
3. Memasukkannya ke dalam encast. Setelah agak hangat kemudian menambahkan
suspensi bakteri sebanyak 3 ml. Mengaduknya hingga merata.
4. Membaginya ke dalam 5 buah petridish hingga merata.
II.4.3 Percobaan oligodinamik
1. Memotong logam Cu dan Zn dengan diameter 2 cm.
2. Mensterilkan Cu dan Zn dengan menyemprotkan alkohol 96%.
3. Meletakkan logam ke dalam petridish yang sudah diiisi suspensi bakteri.
4. Menginkubasi petridish yang berisi media agar dan logam selama 72 jam.
5. Mengamati pada variabel waktu untuk mengamati warna media, bentuk koloni, warna
zona bebas bakteri, dan zona bebas bakteri.
II.4.4 Percobaan antiseptik dan desinfektan
1. Memotong kertas saring dengan diameter 2 cm.
2. Mencelupkan ke dalam larutan desinfektan (Air KI) dan antiseptik (Cengkeh).
3. Menaruh dalam petridish yang berisi media padat yang telah diisi suspensi bakteri.
4. Memasukkan dalam inkubator.
5. Setelah dalam interval waktu tertentu (72 jam) kemudian mengukur zona bebas
bakteri dari masing-masing petridish.
II.4.5 Pengecatan bakteri menurut gram
1. Mengambil sebuah kaca objek, membersihkannya dengan alkohol 96% lalu
mengeringkannya.
2. Meneteskan aquadest pada kaca objek.
3. Membakar jarum ose hingga berpijar, lalu mengambil sedikit suspensi bakteri dan
meletakkan pada tetesan aquadest yang terletak pada kaca objek, lalu meratakannya.
4. Mengeringkan tetesan aquadest yang bercampur suspensi bakteri. Bisa dengan api
bunsen dengan jarak 20-30 cm di atasnya.
5. Meneteskan zat warna C.C.V (Carbon Crystal Violet) lalu mendiamkan selama 3
6.
7.
8.
9.

menit dan membuangnya (jangan dicuci).

Meneteskan larutan lugol, mendiamkan 1 menit dan membuangnya (jangan dicuci).
Mencuci dengan alkohol 96 %.
Meneteskan larutan safranin, lalu membilas dengan aquadest.
Mengamati dengan menggunakan mikroskop.

Laboraturium Teknologi Bahan Makanan dan Fermentasi

Program Studi D3 Teknik Kimia
FTI ITS