Transforming growth factor- signaling: emerging stem cell target

in metastatic breast cancer?

TGF dalam kesehatan dan penyakit
Fungsi Fisiologis TGF
Keluarga TGF dari polipeptida terdiri dari sekelompok protein dimer sangat diawetkan dengan
berat molekul sekitar 25 kDa [1]. Mereka ubiquitously disajikan dalam eukariota
dan biasanya disekresikan ke lingkungan ekstraselular dalam bentuk yang tidak aktif, di mana mereka
menjadi
diaktifkan secara lokal dalam menanggapi rangsangan yang tepat [2-4]. Seperti ditunjukkan dalam
Gambar. 1A, yang TGF
jalur sinyal sangat dilestarikan dari organisme yang lebih rendah, seperti D. melanogaster, kepada
manusia.
TGF mengikat ke reseptor tipe II TGF (TR-II) kinase. Jenis aku reseptor (TR-I) kemudian
direkrut ke dalam ligan / kompleks TR-II dan terfosforilasi dan diaktifkan oleh TR-II
kinase. The TR-diaktifkan Aku kemudian phosphorylates Smad2 reseptor-reseptor yang terkait dan
Smad3, yang, pada gilirannya, membentuk kompleks dengan Smad umum, Smad4, dan menumpuk di
inti. Dalam inti atom, diaktifkan Smad kompleks, bersama dengan rekan-aktivator dan cellspecific
DNA faktor mengikat, mengatur ekspresi gen dan akhirnya siklus sel dan jaringan
memperbaiki [5]. Adalah penting untuk menyadari bahwa, selain jalur ini klasik, reseptor TR-II
mampu bermitra dengan anggota lain dari Tipe I keluarga reseptor (Gambar 1B), termasuk
Alk-1, Alk-2 dan-3 [09/06 Alk]. Dalam kasus ini, sinyal TGF juga dapat mengaktifkan Smads BMP
1, 5 dan 8. Jalur-jalur alternatif biasanya muncul harus dibatasi untuk tertentu-atau jaringan sel
jenis, seperti, misalnya, endotel, sel saraf dan epidermis, di mana mereka mengaktifkan berbeda
program genetik [6-9]. Namun, dalam konteks kanker, jalur kedua ini dapat menjadi
konstitutif diaktifkan dan drive transisi epitelial-ke-mesenchymal (EMT), motilitas sel
dan [invasiveness 6].
Dalam epitel memperbarui diri, yang merupakan situs paling umum asal kanker, TGF muncul
mengerahkan dua fungsi utama, homeostasis jaringan dan respon terhadap cedera jaringan:
Pertumbuhan kontrol dan jaringan homeostasis-Dalam jaringan memperbarui diri secara umum, dan
epitel khususnya, TGF memainkan peran penting dalam menjaga keseimbangan antara pembaruan diri
dan diferensiasi sel dan [rugi 10]. Proses ini mungkin melibatkan tingkat basal
"Endogen" TGF sinyal, yang melindungi terhadap pengembangan awal neoplastik
lesi. Misalnya, dengan menggunakan mouse model transgenik, Cui et al. [11] menunjukkan bahwa
konstitutif
ekspresi TGF1 di keratinosit suprabasal melindungi terhadap 12-tetradecanoylphorbol-
13-asetat (TPA)-induksi hiperplasia dan pengembangan kanker berikutnya.
Selain itu, TGF melindungi keratinosit dari kerusakan DNA [12,13] Dengan demikian, sinyal TGF1
memainkan peran penting dalam regulasi mesin endogen homeostatik di mouse
epidermis. Konsisten dengan ini, sel-sel epitel non-neoplastik dalam budaya sering mengungkapkan
rendah
tingkat Smad2 terfosforilasi endogen (pSmad2). Selanjutnya, pada saat sel-sel ini
diperlakukan dengan bahan kimia-TR aku inhibitor kinase, pSmad2 menjadi dephosphorylated dan sel
pertumbuhan dirangsang [14]. Demikian pula, pSmad2 terdeteksi di lapisan normal dan epitel duktal,
termasuk kelenjar susu, dalam manusia serta jaringan mouse [15-17]. Bahkan meskipun sebagian besar
dari TGF disekresi ke dalam matriks ekstraseluler tetap laten, pengamatan ini menunjukkan
bahwa sejumlah kecil menjadi aktif pada permukaan sel dari lapisan dan sel epitel duktal,
kemungkinan untuk mengontrol proliferasi dan diferensiasi sel normal secara autokrin.
Akhirnya, kemungkinan melalui fungsi homeostatik bahwa TGF menekan perkembangan tumor,
dan bahwa hilangnya kontrol pertumbuhan sel homeostatik merupakan sebuah acara awal
karsinogenesis epitel.
Ini jelas digambarkan oleh tikus yang homozigot untuk alel hypomorphic dari laten
TGF mengikat protein, LTBP-4. Hewan ini gagal untuk mengekspresikan pSmad2 tepatnya di mereka
epitel yang biasanya mengekspresikan ini isoform LTBP tertentu, seperti usus dan [paru-paru 18].
Selain itu, tikus ini cenderung untuk mengembangkan kanker usus besar, mendukung gagasan tentang
kegagalan
TGF's homeostatik fungsi. Akhirnya, in vivo, kebanyakan manusia-payudara, usus besar-dan kepala-dan-
leher
kanker terus mengekspresikan pSmad2 [15-17]. Seperti tumor ini tumbuh secara aktif, mereka memiliki
mungkin lolos dari kontrol pertumbuhan TGF-dimediasi homeostatik.
Selain perannya dalam kontrol siklus sel, TGF juga mempertahankan homeostasis jaringan dengan
mengatur
apoptosis dan mungkin bentuk lain dari kematian sel. Sebagai contoh, TGF3 memainkan peran penting
dalam
menengahi besar apoptosis epitel kelenjar susu selama postlactational
involusi, efek yang tampaknya dimediasi oleh [Smad3 19-21]. Selain itu, genotoksik
stres dan kerusakan DNA yang diinduksi oleh radiasi pengion atau kemoterapi sitotoksik yaitu
terkait dengan aktivasi dramatis TGF [22,23]. Radiasi pengion kerusakan DNA yang diinduksi
memunculkan program pengendalian kerusakan selular dikoordinasikan oleh aktivitas kinase dari ATM
TGF protein yang diperlukan [24]. Baru-baru ini, Kirshner et al. [22] melaporkan bahwa menghambat
TGF sinyal pada sel epitel susu menggunakan TR-kimia aku reseptor kinase inhibitor
ATM dilemahkan autophosphorylation dan secara signifikan mengurangi nya aktivitas kinase, sementara
menambahkan kembali dipulihkan ATM TGF1 fungsional dan tanggapan DNA hilir kerusakan. Ini
studi telah menemukan link aktivasi kritis antara TGF1 di mikro yang
dan ATM, yang mengarahkan respon sel epitel genotoksik stres dan, secara tidak langsung, jaringan
integritas. Dengan demikian, selain perannya dalam kontrol homeostatik siklus sel dan kelangsungan
hidup,
TGF1 memainkan peran yang kompleks dalam mengatur respon terhadap stres genotoksik, kegagalan
yang
dapat memberikan kontribusi kepada perkembangan kanker. Sebaliknya, TGF menghambat dapat
digunakan untuk
kami keuntungan dalam terapi kanker, sebagai agen ini mungkin peka tumor dengan kerusakan DNA dan
mempromosikan kematian sel [25].
Selain homeostatik peran dalam diri memperbarui jaringan epitel, TGF juga memainkan peran penting
dalam
homeostasis kekebalan [26-28]. Dengan mengatur proliferasi limfosit, diferensiasi, dan
kelangsungan hidup, TGF menjaga keseimbangan antara pertahanan kekebalan terhadap asing
patogen dan penindasan dari sistem kekebalan tubuh untuk mempertahankan diri dan mencegah
toleransi
pelarian penyakit autoimun. Selain itu, TGF mengontrol inisiasi dan resolusi
respons inflamasi melalui peraturan chemotaxis dan aktivasi leukosit di
pinggiran, termasuk limfosit, sel-sel pembunuh alami, sel dendritik, makrofag, tiang
sel, dan granulosit. Melalui efek ganda pada sel kekebalan tubuh, mencegah TGF
perkembangan penyakit autoimun di satu sisi, tanpa mengurangi kekebalan
tanggapan terhadap patogen di sisi lain. Sebaliknya, immunopathology terkait dengan
hyperactivation dari jalur TGF dalam konteks kanker mempromosikan perkembangan tumor,
yang merupakan salah satu alasan utama jalur ini telah menarik perhatian sebagai sebuah novel
terapeutik
target [26,28-31].
Akhirnya, TGF isyarat memainkan peran utama dalam mempertahankan integritas vaskular [32-36]. Ini
mungkin paling digambarkan oleh sindrom genetik di mana mutasi germline di TGF
superfamili reseptor menimbulkan berbagai kerusakan pembuluh darah, termasuk keturunan
teleangiectasias hemoragik dan sindrom aneurisma aorta. Menariknya, perkembangan
cacat di kapal besar terlihat pada Marfan dan sindrom lain aneurisma aorta berhubungan
dengan tingkat peningkatan yang tampaknya paradoks TGF / Smad signaling [35].
Singkatnya, TGF memainkan peran utama dalam mempertahankan homeostasis dalam jaringan yang
berbeda, dan
hilangnya fungsi kontrol penting selular adalah dasar biologis untuk beberapa fundamental
fitur dari fenotipe neoplastik [37].
Respon untuk cedera jaringan, perbaikan jaringan-Fungsi utama kedua TGF adalah
mengatur dan memediasi respon lokal untuk cedera jaringan. Melukai hasil dalam meramaikan lokal
aktivasi TGF, yang mendorong sel-sel epitel untuk melepaskan dari satu sama lain, mengasumsikan
fibroblastoid dan motil fenotipe (transisi epitelial-ke-mesenchymal, EMT), dan
menghasilkan matriks ekstraselular (ECM) komponen dari apa yang kemudian menjadi bekas luka [38].
Biasanya,
proses ini adalah diri-terbatas dalam ruang dan waktu, sehingga sel epitel dapat kembali ke mereka
fenotipe epithelioid kohesif [39]. Namun, dalam kondisi peradangan kronis, persisten
TGF menyebabkan aktivasi sel-sel epitel yang akan secara permanen dikonversi menjadi myofibroblasts,

yang mengakibatkan hilangnya struktur epitel dan fibrosis jaringan [40,41]. Demikian pula, seperti yang
akan kita
review di bawah ini, aktivasi terus-menerus dari TGF signaling dalam konteks kanker muncul untuk
menggerakkan
invasi dan [metastasis 42].
TGF pada model tikus genetik pembangunan payudara dan kanker
Model tikus rekayasa genetik telah sangat informatif untuk memahami
peran yang berbeda dalam pembangunan TGF kelenjar susu dan kanker payudara. Studi-studi ini
telah meneliti efek dari pelemahan baik basal (endogen) atau isyarat TGF
peningkatan / mengaktifkan TGF pensinyalan.
Untuk mengevaluasi dampak dari penipisan TGF endogen sinyal terhadap pertumbuhan dan
diferensiasi kelenjar susu in vivo, Tang et al. [43] yang dihasilkan tikus dengan
heterozigot penghapusan gen TGF1. TGF1 ini + / - tikus mengungkapkan hanya 10-30% dari
wild type TGF1 tingkat protein, dan ditampilkan dengan percepatan pembangunan di payudara
duktal pohon selama masa pubertas dan peningkatan proliferasi epitel susu di
respons terhadap stimulasi hormon. Temuan ini menggambarkan peranan penting endogen
TGF1 bermain dalam membatasi proliferasi epitel duktal sebagai respons terhadap hormon ovarium
[44]. Namun, meskipun fenotipe proliferasi kelenjar susu, tikus ini tidak
cenderung untuk pembentukan tumor spontan. Dalam penelitian berikutnya, Yang et al. [45]
dikembangkan
tikus transgenik yang mengekspresikan reseptor tipe II larut TGF: Fc fusion protein (Fc: TRII)
di bawah kendali kelenjar-selektif virus susu mouse tumor mammae (MMTV)
promotor / enhancer. Biologis tingkat signifikan antagonis yang terdeteksi dalam serum
dan jaringan sebagian besar garis ini mouse. Namun, mirip dengan TGF1 + / - mencit heterozigot,
tikus ini tidak mengembangkan tumor mammae spontan selama hidup mereka.
Dalam rangka selektif menipis TGF signal pada epitel kelenjar susu, Gorska et
al. [Ekspresi 46] target sebuah, dipotong kinase-cacat dominan tipe II negatif TGF
reseptor (DNTRII) ke sel epitel susu menggunakan promotor MMTV / enhancer. Perawan
tikus betina transgenik ditampilkan hiperplasia epitel susu. Selain itu,
kelenjar susu dipamerkan terjadwal pembangunan alveolar dan ekspresi dari susu
protein, -kasein, tanpa adanya kehamilan. Sebuah fenotipe dasarnya sama terlihat di
transgenik tikus yang menyatakan panjang penuh TR-II antisense RNA di bawah kendali MMTV
promotor [47]. Jadi tanggapan, gangguan epitel kelenjar susu untuk endogen
TGFs hasil dalam pembangunan alveolar tidak pantas dan diferensiasi, konsisten dengan
gagasan bahwa TGF endogen biasanya berfungsi untuk mempertahankan homeostasis dalam kelenjar
susu
hewan perawan. Dalam sebuah studi berikutnya, Gorska et al. [48] menunjukkan bahwa tikus MMTV-
DNbRII
dapat mengembangkan tumor mammae spontan, tetapi sebagian besar karsinoma in situ dan muncul
setelah latensi berkepanjangan.
Di sisi lain, ketika MMTV-DNTRII adalah cross-lahir untuk MMTV-mengubah pertumbuhan
faktor- (TGF) mencit transgenik, tumor mammae dikembangkan dengan latency lebih pendek,
serupa dengan yang terlihat di MMTV-TGF tikus transgenik tunggal. Perbedaan utama dalam susu
tumor yang timbul dalam MMTV-TGF dibandingkan dengan MMTV-DNTRII/MMTV-TGF bi-genic adalah

ditandai penekanan invasi tumor dengan ekspresi DNTRII transgenik. Ini menunjukkan bahwa
TGF sinyal dalam sel-sel tumor diperlukan untuk susu EMT-sel kanker dimediasi
invasi. Meskipun inaktivasi lengkap TGF sinyal oleh penghapusan atau mutasi dari salah satu
kanonik TGF komponen jalur signaling (reseptor atau Smads) jarang terlihat pada manusia
kanker payudara (Gambar 3A), beberapa model tikus genetik telah dibangun untuk menentukan apa
konsekuensi untuk perkembangan kelenjar susu dan akan karsinogenesis. Forrester di
al. [49] kondisional dihapus tipe II gen reseptor TGF , TGFBR2, dalam susu yang
epitel. Tidak adanya TGFBR2 dalam epitel susu menghasilkan lobular-alveolar
hiperplasia pada kelenjar susu berkembang dan apoptosis meningkat, mirip dengan yang terlihat di
yang MMTV-DNT RII tikus, tetapi tidak ada pembentukan tumor spontan. Namun, ketika
TGFBR2null mencit dikawinkan dengan antigen T-polyomavirus MMTV tengah (PyVmT)
tikus model transgenik kanker payudara metastatik, perkembangan tumor sangat
dipercepat, terkait dengan peningkatan proporsional dalam jumlah metastasis paru.
Selain sel autokrin otonom efek pada sel tumor, TGF dipercaya untuk mempromosikan
pertumbuhan dan perkembangan tumor dengan mengerahkan parakrin efek pada tumor host
mikro, khususnya dengan mengaktifkan sel-sel stroma, anti-tumor menekan kekebalan
dan merangsang [Angio-genesis 31,50-52]. Bierie et al. [53] baru-baru ini ablated TGFBR2
ekspresi khusus dalam susu mouse nenek moyang sel alveolar dengan menggunakan sebuah whey
asam protein (WAP) promotor didorong CRE recombinase. Persilangan dengan MMTV / PyVmT
tikus transgenik yang digunakan untuk menghasilkan tumor mammae karena ketiadaan atau kehadiran
TGFBR2 di epitel payudara. Seperti yang diharapkan, tidak adanya sinyal signifikan TGF
tumor menurun latency. Selain itu, menghapus TGFBR2 gen dalam sel epitel mengakibatkan
dalam yang lebih besar dari peningkatan 5 kali lipat dalam jumlah metastasis paru. Selanjutnya,
TGFBR2null tumor lebih besar dan berhubungan dengan stroma fibrovascular melimpah
disertai dengan perekrutan peningkatan populasi + F4/80 makrofag. rekrutmen yang
dari F4/80 + sel berkorelasi dengan peningkatan ekspresi gen inflamasi dikenal termasuk
GRO1/CXCL1, CXCL5, dan PTGS2/COX-2, yang juga telah dikaitkan dengan paru-paru
metastasis kanker payudara manusia [54]. Selain itu, karsinoma mammae TGFBR2null adalah
disusupi oleh Gr-1 + CD11b + sel myeloid [55]. Ini perekrutan Gr-1 + CD11b + sel ke
TGFBR2null tumor itu ditengahi oleh SDF-1/CXCR4 dan kemokin CXCL5/CXCR2 /
kemokin reseptor sumbu. Selain itu, ini infiltrasi Gr-1 + CD11b + sel ke invasif
depan tumor dikaitkan dengan meningkatnya kelimpahan TGF 1 di TGFBR2null
tumor dan memfasilitasi invasi sel tumor dan metastasis melalui proses yang melibatkan matriks
metaloproteinase aktivasi. Akhirnya, TGFBR2null tumor primer dan yang terkait
metastasis paru diperkaya untuk mengungkapkan sel + KRT5 / dNp63 susu + batang
sel spidol, menunjukkan bahwa tidak adanya TGF signaling dalam subset sel karsinoma
mungkin memberikan kontribusi untuk metastasis. Bersama-sama, hasil ini menunjukkan bahwa tidak
lengkap
TGF signal pada nenek moyang epitel susu mempercepat inisiasi tumor, kemajuan,
dan metastasis melalui peraturan dari kedua sel intrinsik sinyal dan berdekatan stroma-epitel
interaksi in vivo, mungkin, sebagian, karena terkait peningkatan produksi lokal
TGF 1. Beberapa hal penting yang dapat dibuat di sini. Pertama pembatalan, lengkap dari TGF
hasil lintasan signal pada derepression sebagian gen biasanya ditindas oleh endogen
TGF sinyal. Banyak dari gen ini ternyata menyandikan sitokin dan kemokin yang kemudian
berbagai menarik host populasi sel kekebalan tubuh, termasuk makrofag + F4/80 dan
Gr-1 + CD11b + sel myeloid. Kedua, TGFBR2 ini + sel epitel mempertahankan mereka epithelioid
morfologi dan tidak mampu untuk menjalani EMT dalam menanggapi TGF . Selain itu, karsinoma
bahwa
muncul pada latar belakang PyVmT telah ditunjukkan untuk berbagi banyak fitur dari manusia lumen
kanker payudara jenis [56]. Sebuah fitur yang membedakan dari tumor ini adalah ekspresi tinggi
XBP1, yang merupakan gen tumor-mendefinisikan manusia lumen. Tumor ini juga menyatakan ketat
persimpangan gen komponen struktural, termasuk Occludin, Tight Junction Protein 2, dan 3 Ecadherin
(CDH1) dan keratins lumen, KRT8 dan -18. Selain itu, berdasarkan gen set
pengayaan analisis (GSEA), yang murin MMTV-PyVmT karsinoma muncul menyerupai
paling dekat kanker profil manusia lumen dan anti-berkorelasi dengan manusia basallike
subtipe. Menariknya, analisis histologi menunjukkan bahwa karsinoma menyerang tidak melalui transisi
ke fenotipe mesenchymal (EMT), namun tampilan kohesif invasi yang disebut
(Harold Musa, Commun pribadi.). Sebuah pertanyaan yang belum terpecahkan adalah apakah tingkat
tinggi
TGF1 terkait dengan tumor WAP/PyVmT/TGFBR2null kontribusi untuk mereka yang sangat
metastasis fenotipe, atau merupakan tumor kompensasi sel penekan respon host. Dari
sudut pandang pembangunan jalur klinis antagonis TGF, ini adalah penting
pertanyaan ke alamat, untuk menentukan apakah atau tidak kanker payudara yang TGFBR2 rendah
(Yaitu subtipe lumen) akan mendapat manfaat dari jenis strategi pengobatan.
Bahkan, realitas bahkan mungkin lebih kompleks, dalam TGF signaling dapat dihidupkan dan dimatikan
dalam populasi sel yang berbeda pada waktu yang berbeda, bahkan di dalam tumor yang sama. Sebagai
contoh, langsung
visualisasi migrasi sel dalam tumor dengan dalam videomicroscopy vivo telah memungkinkan Sahai et al.

[57] untuk mendeteksi baik kohesif sel dan tunggal, amoeboid, migrasi dalam tumor yang sama.
Menariknya, migrasi, sel amoeboid tunggal adalah satu terutama terkait dengan
tingkat rendah proliferasi serta kemampuan untuk menyebarluaskan ke situs sekunder, di mana ini
sel-sel yang tampaknya kembali kembali ke fenotipe, kohesif epithelioid [57]. Yang paling menarik dari
perspektif kami adalah bahwa, dalam tumor yang berasal dari susu tikus adenokarsinoma metastatik
13762NF sel MTLn3, TGF aktif signaling, sebagaimana dibuktikan oleh fosforilasi Smad2 dan
lokalisasi nuklir, tampaknya hanya terbatas pada populasi sel yang menampilkan amoeboid
perilaku migrasi dan metastasis, sedangkan TGF sinyal dimatikan mayoritas
populasi kohesif, sel epithelioid. Selain itu, penghambatan TGF signaling pada tumor
sel dengan mengucapkan TGFBR2 dominan-negatif mencabut amoeboid sel tunggal
migrasi perilaku (Eric Sahai, Personal Commun.). Dengan demikian, studi-studi ini menunjukkan bahwa
kemampuan
suatu subpopulasi sel kanker MTLn3 untuk reversibel mengaktifkan TGF signaling, terkait
dengan EMT, detasemen dari massa sel kohesif, dan migrasi ke situs sekunder. Selain itu,
kondisi transien ini dikaitkan dengan tingkat rata-rata lebih lambat dari proliferasi. Konsisten dengan
temuan ini, Welch et al. [58] sebelumnya menunjukkan bahwa susu yang sama MTLn3rat
sel adenokarsinoma diperoleh fenotipe hypermetastatic in vivo jika mereka terkena
TGF in vitro sebelum tailvein injeksi. Dari catatan, sel MTLn3 dan tumor mengekspresikan basal
dan lumen cytokeratins, menunjukkan keberadaan kedua prekursor dan lebih berbeda
lumen populasi sel [59]. Hal ini menggoda untuk berspekulasi bahwa subpopulasi sel tumor yang sama
yang merespon TGF dengan mengakuisisi sebuah fenotipe invasif EMT-dimediasi juga memiliki batang
sifat sel, seperti yang baru-baru ini disarankan oleh Mani et al. [60] (lihat bagian "TGF memainkan
peran kunci
dalam mengatur diri-pembaharuan dan diferensiasi dalam jaringan normal dan ganas payudara ").
Untuk menentukan efek dari aktivasi konstitutif TGF signaling, beberapa kelompok
transgenik yang dihasilkan tikus yang menghasilkan bentuk konstitutif aktif TGF1. Pokok
ekspresi TGF1 bioaktif didorong oleh promotor MMTV dikaitkan dengan ditandai
penurunan volume total pohon duktal, pertama kali terlihat pada 7 minggu, segera setelah estrus
dimulai, dan
paling jelas di 13 minggu, pertumbuhan duktus pada kelenjar susu normal menurun [61].
Namun, selama kehamilan, outgrowths alveolar tidak mengembangkan dari pohon duktal hipoplasia
dan menyusui terjadi [61]. Selain itu, tikus ini resisten terhadap 7,12-dimetil-benz []
antrasena (DMBA)-induksi pembentukan susu tumor [62]. Selanjutnya dalam pengembangan silang
ini dengan mencit yang overexpress yang mitogen epitel, TGF, dan mengembangkan
susu tumor pada tingkat tinggi, ada penekanan ditandai pembentukan tumor payudara
[62]. Hasil yang sama diperoleh ketika Booth et al. [63] menyeberangi TGF tikus transgenik dengan
WAP promotor-driven TGF1 tikus transgenik. Dibandingkan dengan TGF transgenik tunggal
mengekspresikan tikus, tikus tersebut bi-transgenik resisten terhadap tumorigenesis susu.
Selanjutnya, penelitian menunjukkan bahwa jaringan transplantasi bi-transgenik susu sangat
resisten terhadap pembentukan tumor, bahkan setelah kehamilan multipel. Selain itu, tingkat apoptosis
selama involusi pasca-laktasi menurun di kedua TGF dan TGF bi-transgenik /
TGF1 tikus dibandingkan jenis liar dan transgenik WAP-TGF1. Secara keseluruhan, studi-studi
menunjukkan bahwa, ketika TGF1 dan TGF adalah co-disajikan, TGF1 menekan mitogenic dan
kelangsungan fungsi TGF dalam konteks pembangunan susu dan tumorigenesis. Paling penting,
berlebih dari TGF1 in vivo nyata dapat menekan de novo TGF-atau
susu karsinogen berbasis pengembangan tumor.
Dual penekan tumor dan prometastatic peran TGF lebih lanjut diilustrasikan oleh dua
independen studi di mana tikus transgenik yang mengekspresikan gen neu diaktifkan dalam
kelenjar susu disilangkan dengan jenis yang disajikan baik konstitutif aktif TGF1
atau jenis TGF diaktifkan Aku reseptor (TGFBR1, Alk5) gen [64,65]. Dalam kedua kasus, utama
perkembangan tumor itu tajam tertunda, dan pertumbuhan tumor lebih lambat daripada di neu tunggal
transgenik [64,65]. Namun, karsinoma yang tidak muncul dalam MMTVAlk bi-transgenik (
T204D) mencit neu lebih metastasis daripada yang terjadi di MMTV-neu tunggal
transgenik [66].
Secara keseluruhan, mouse model genetik telah memberikan dukungan yang kuat untuk peran-penekan
tumor
untuk TGF epitel tumorigenesis signal pada kelenjar susu. Selain itu, beberapa
penelitian menunjukkan bahwa TGF sinyal mungkin memainkan peran penting dalam EMT-mediated
spontan metastasis, terutama ke paru-paru. Selain itu, fenotipe yang diamati dalam
mouse strain transgenik umumnya konsisten dengan gagasan bahwa pelemahan TGF yang
sinyal jalur dalam kompartemen sel epitel tidak terkait dengan peningkatan
kecenderungan untuk membentuk tumor mammae spontan, tetapi tidak meningkatkan kejadian tumor
dan
lebih pendek latency dalam konteks peristiwa onkogenik independen yang kuat. Sebaliknya, sementara
aktivasi konstitutif dari jalur TGF masih dapat menekan tahap awal kanker payudara
pembentukan bahkan dalam konteks onkogen kuat, tampaknya untuk meningkatkan metastasis
potensi karsinoma yang berkembang setelah mereka menembus pertumbuhan
penghalang penekan disediakan oleh TGF sinyal. Titik kunci adalah membedakan antara
perubahan di tingkat ligan TGF dan komponen selular dari sinyal
secara terpisah. Kami baru-baru ini menunjukkan bahwa kedua variabel memiliki pengaruh sangat
berbeda di
profil transkripsional sel epitel [67]. Temuan kami menunjukkan bahwa kuantitatif
penurunan tingkat ekspresi reseptor atau kegiatan menghilangkan satu set gen dari
Transkripsional diatur TGF-program yang terutama terlibat dalam mempertahankan
homeostasis dan pembangunan. Bila, seperti yang sering terjadi pada kanker maju, tingkat
TGF aktif dalam tumor meningkat mikro, sebuah program genetik ketiga menjadi
diaktifkan yang terutama terlibat dalam respon terhadap rangsangan eksternal selular berbahaya,
termasuk stres, infeksi dan cedera. Gen ini mengatur mencakup sejumlah besar kemokin,
sitokin, regulator sitokin, metalloproteases matriks dan mediator inflamasi yang
memainkan peran kunci dalam invasi, tumor angiogenesis dan metastasis. Singkatnya, kami bekerja
model,
yang seluruhnya konsisten dengan studi mouse transgenik diringkas di atas, adalah bahwa dua
utama perubahan TGF pensinyalan terjadi selama perkembangan tumor: yang pertama adalah terkait
dengan
pengurangan global dalam reseptor sinyal dan mengakibatkan hilangnya kontrol homeostatik dan
tumor TGF's aktivitas penekan, sedangkan yang kedua adalah terkait dengan berlebihan
bioaktif TGF, mengakibatkan aktivasi pro-invasif,-angiogenic, dan-metastatik TGF-
ekspresi gen diatur program yang menyebabkan tumor mesenchymal dan sangat metastatik
fenotipe sel. Seperti yang akan kita bahas di bawah ini (bagian "perubahan dari TGF signal pada
payudara
kanker-hilangnya homeostasis dan aktivasi EMT "), skenario ini mungkin berlaku untuk luas
Mayoritas kanker payudara manusia, di mana TGFs sering terlalu diproduksi dan semua
TGF kanonik komponen jalur sinyal masih dinyatakan (meskipun sering lebih rendah dari
tingkat normal) (Gbr. 3A). Di sisi lain yang tidak aktif, lengkap dari lintasan signal
oleh penghapusan atau mutasi TGF-reseptor atau gen Smad jarang terlihat dalam kanker payudara
manusia
[42] dan implikasi klinis mouse model genetik di mana gen TGFBR2 memiliki
dihapus pada epitel susu tetap diperjelas.

Perubahan dari TGF signal pada kanker payudara-hilangnya homeostasis dan

aktivasi EMT
Escape dari kontrol homeostatik TGF-mediated
Sebagai diringkas di atas, TGF menekan perkembangan tumor dengan mempertahankan keseimbangan
antara pembaharuan sel dan diferensiasi sel dan rugi [10], dan hilangnya homeostasis ini
fungsi umumnya sebuah peristiwa awal karsinogenesis (lihat [50] untuk ditinjau ulang). Selain itu, tidak
hanya melakukan banyak kanker mempertahankan kemampuan untuk menjalankan respon jaringan
cedera TGF-tergantung,
tetapi, dalam beberapa, itu menjadi konstitutif diaktifkan [68]. Selain itu, ada mounting bukti
bahwa pengaktifan jalur signaling TGF dalam hasil fashion autokrin dalam keadaan
EMT konstitutif dan fenotipe yang sangat invasif dan metastasis [66,69-71]. Jadi, dalam hal ini
konteks, TGF sinyal memperoleh sifat-sifat onkogen. Pergeseran ini tampaknya
dibawa oleh reseptor sinyal atenuasi [67] mengakibatkan ekspansi klon dari
tumor sel yang telah melarikan diri dari hambatan pertumbuhan TGF-dimediasi di satu sisi, gabungan
dengan peningkatan produksi konstitutif dan pelepasan TGF oleh sel-sel tumor dan
aktivasi TGF laten dalam mikro, yang menghasilkan EMT konstitutif /
mesenchymal fenotipe (review di [50,51]).
Escape dari TGF-dimediasi baris hambatan-Mammae pertumbuhan sel epitel rentang
dari yang indah sensitif menjadi sepenuhnya refraktori untuk pertumbuhan TGF-mediated
inhibisi (review di [72]). Sebagai contoh, secara spontan diabadikan susu manusia
sel epitel (HMEC) yang ditemukan hampir sama sensitif terhadap TGF sebagai HMEC primer, bahkan
ketika secara stabil transfected dengan virus onkogen individu, seperti v-mos, v-Ha-ras, atau SV40
T antigen virus besar [73]. Namun, sepenuhnya berubah dan tumorigenic HMEC diperoleh
transfection dengan kombinasi-v-ras Ha dan SV40 antigen T besar tidak lagi pertumbuhan
dihambat oleh TGF [73]. Suatu hal yang penting adalah bahwa, meskipun perbedaan dalam TGF
sederhana
sensitivitas telah dilaporkan antara jalur sel kanker payudara (lihat di bawah), pada rata-rata,
IC50 TGF untuk sel neoplastik sangat tinggi dan maksimal dicapai
penghambatan pertumbuhan secara konsisten lebih rendah daripada HMEC primer (review di [72]).
Konsisten dengan al dalam studi in vitro, et Zugmaier. [74] melaporkan bahwa mengobati MDA-MB-231
tikus kanker payudara manusia-bantalan dengan TGF tidak menghasilkan apapun penindasan
pertumbuhan tumor
in vivo. Menariknya, sejauh mana sel-sel kanker payudara manusia masih dapat sebagian pertumbuhan
dihambat oleh TGF tampaknya tergantung, sampai batas tertentu, pada apakah sel-sel tumbuh di
monolayer
(2D) atau dalam lunak-agar (3D) budaya. Pada umumnya, TGF tampaknya merupakan inhibitor lebih
ampuh
pertumbuhan pelabuhan-independen dari pertumbuhan dalam budaya monolayer [75-77]. Hal ini
menunjukkan
bahwa, dalam kasus ini, TGF akan mempengaruhi pertumbuhan sel secara tidak langsung oleh
perubahan itu mendorong dalam
mikro, bukan oleh inhibisi langsung terhadap pengembangan siklus sel.
Ekstensif lintas-talk antara estrogen-dan TGF sinyal jalur-A besar
tubuh menggarisbawahi data percobaan ekstensif lintas-talk antara estrogen dan
TGF jalur sinyal. Sejumlah penelitian memberi kesan bahwa estrogen reseptor (ER) -
garis payudara karsinoma negatif manusia relatif lebih sensitif terhadap hambatan pertumbuhan dengan
TGF dari garis ER-positif [75-77]. Selain itu, Arteaga et al. [75] melaporkan bahwa ER-negatif
jalur sel disajikan TGF reseptor, sementara ini tidak terdeteksi di baris ER-positif,
menemukan bahwa baru-baru ini dikonfirmasi di SD sel kanker payudara manusia [78]. Namun, lainnya
penyidik tidak dapat mengkonfirmasi pengamatan [15,79]. Satu mungkin pengganggu
faktor adalah bahwa TGF-sensitivitas terutama mungkin merupakan fungsi dari ketergantungan-
estrogen dari
sel kanker payudara, bukan ekspresi reseptor hormon. Sebagai contoh, estrogendependent
MCF-7 sel kanker payudara ternyata sangat sensitif terhadap TGF-mediated
pertumbuhan inhibisi, sedangkan estrogen-independen MCF-7 sublines adalah refraktori untuk TGF
Pertumbuhan positif ER-sel MCF-7 dirangsang oleh estradiol maupun oleh progestin, seperti
sebagai norethindrone, secara dosis-tergantung, dan efek ini dapat diblokir oleh perlakuan dengan
4-hydroxy-tamoxifen (4-OH-T) [80,81]. Selain itu, estradiol-atau norethindrone-induced
stimulasi pertumbuhan disertai oleh penurunan dramatis dalam TGF2 dan -3 tingkat mRNA,
sedangkan tingkat TGF1 mRNA tidak terpengaruh [79-81]. Dampak penghambatan estradiol
atau norethindrone pada TGF2 dan -3 mRNA dapat diblokir oleh pengobatan dengan 4-T OH-[80,
81]. Studi-studi ini menyarankan bahwa pengaturan diferensial dari ekspresi TGF oleh estradiol
atau norethindrone di satu sisi dan 4-OH-T di sisi lain mungkin, setidaknya di bagian, bertanggung jawab
untuk stimulasi pertumbuhan diinduksi oleh norethindrone dan penindasan pertumbuhan dengan 4-T
OH-[80,
81]. Bahkan, lebih dari dua dekade lalu, Knabbe et al. [76] mengusulkan hipotesis bahwa antitumor
efek dari tamoxifen dan lainnya anti-estrogen pada kanker payudara invasif dan metastasis mungkin
dimediasi oleh TGF. Hipotesa ini didasarkan pada pengamatan bahwa pengobatan manusia
ER-positif MCF-7 jalur sel kanker payudara dengan tamoxifen in vitro diinduksi produksi dan
TGFs sekresi oleh sel-sel tumor, yang pada gilirannya, mampu memperlambat proliferasi yang
co-dibudidayakan ER-negatif MDA-MB sel kanker payudara-231 [76]. Konsisten dengan gagasan ini,
Manni et al. [82] menunjukkan bahwa estradiol diperlukan untuk mendukung agar MCF-7 sel lunak
pembentukan koloni tanpa adanya serum, dan bahwa efek ini diperantarai oleh TGF dan
insulin-seperti pertumbuhan faktor-1 (IGF-1). Selain itu, walaupun pengobatan dengan TGF tidak
mempengaruhi pertumbuhan sel MCF-7 di 2D budaya, itu menghambat pembentukan koloni dalam agar
lunak dalam sebuah dosedependent
cara untuk gelar sebanding dengan yang diamati dengan 4-T-OH. Selain itu,
efek penghambatan pertumbuhan 4-T OH-benar-benar dibatalkan oleh antibodi anti-TGF. Ini
pengamatan menunjukkan bahwa, setidaknya dalam 3D budaya MCF7 sel, TGF mungkin bertindak pada
kecil
nenek moyang responsif TGF-sel penduduk. Pandangan ini sangat konsisten dengan baru-baru ini
Temuan yang dilaporkan oleh Shipitsin et al. [78]. Peneliti ini memeriksa dan ekspresi gen-
profil genetik sel diisolasi dari kanker payudara dan jaringan normal dengan menggunakan permukaan
sel
spidol, CD44 dan CD24. Kebanyakan sel tumor mengandung populasi yang baik
terutama ER-positif, CD44-, CD24 + atau ER-negatif, CD44 +, CD24lo. Selain itu,
gen TGFBR2 adalah selektif disajikan dalam + CD44 ER-negatif, CD24lo epitel susu
prekursor tapi epigenetically dibungkam dalam dibedakan, ER-positif-CD44, CD24 +
lumen sel. Dengan demikian, diferensiasi ke dalam sel lumen tampaknya terkait dengan
inaktivasi TGF signaling [78]. Lebih jauh lagi, sementara TGF mendorong jinak mammae
sel-sel epitel mengalami transisi epitelial-ke-mesenchymal (EMT) [83-85], pengobatan
ER-, CD44 +, CD24lo, TGFBR2 + sel kanker payudara dengan reseptor kinase inhibitor TGF
menyebabkan fenotipe mesenchymal mereka untuk kembali ke yang jauh lebih epithelioid. Dengan
demikian, sangat
mungkin bahwa (anti) estrogen secara langsung mengatur proliferasi sel ER-positif dibedakan
populasi, yang, pada gilirannya, menghasilkan faktor pertumbuhan dan TGF yang pada akhirnya
mengatur
proliferasi dari nenek moyang yang hidup bersama ER-negatif putatif kecil atau sel induk penduduk
(Gbr. 2).
pengobatan Tamoxifen tidak hanya mendorong TGF2 ekspresi mRNA [86], tetapi juga menyebabkan
aktivasi laten TGF1 dalam budaya [medium 87]. Efek-efek dari tamoxifen sangat bergantung
terhadap ekspresi ER fungsional dalam sel-sel kanker payudara, sebagai induksi ekspresi TGF2
tidak terlihat dalam anti-estrogen tahan MCF7 atau varian sel T47D, maupun dalam sel ER-negatif
baris, seperti MDA-MB-231 [81,88]. Selain itu, selain tamoxifen, modulator ER lain
diinduksi TGF2 ekspresi di MCF7 sel juga. Secara umum, antagonis ER steroid, seperti
sebagai fulvestrant, adalah lebih kuat dari inducers TGF2 dari jenis inhibitor triphenylethylene,
seperti tamoxifen, 4-OH-T, droloxifen dan [toremifene 89,90]. Selain itu, ER modulator
induksi transkripsi mRNA TGFBR2 serta fosforilasi Smad2 untuk gelar
sebanding dengan efek penghambatan pertumbuhan mereka [86,91]. Selain itu, beberapa studi klinis
menunjukkan bahwa perlakuan tamoxifen pasien dengan kanker payudara dikaitkan dengan peningkatan

kadar plasma TGF, dan bahwa ini berhubungan dengan respon klinis untuk pengobatan tamoxifen
[92]. Selain itu, MacCallum et al. [93] menunjukkan bahwa respons klinis terhadap neo-adjuvant
tamoxifen dikaitkan dengan tingkat mRNA meningkat TGF2 dalam jaringan tumor. Demikian pula, orang
lain telah melaporkan induksi TGF1 protein dalam kanker payudara sel epitel atau stroma
berikut terapi tamoxifen [94,95].
Dengan demikian, secara keseluruhan, ada tubuh besar bukti eksperimental dan klinis untuk mendukung

gagasan bahwa efek sitostatik dari ER modulator dapat dijelaskan oleh autokrin atau
parakrin aktivasi TGFs, yang, pada gilirannya, menghambat pertumbuhan sel nenek moyang. Selain itu,
ada
beberapa bukti yang menunjukkan bahwa tamoksifen dapat bertindak secara independen ER-host
sel stroma. Jadi, Colletta et al. [96,97] melaporkan bahwa tamoxifen diinduksi produksi
TGF oleh fibroblast janin manusia. Demikian pula, van Roozendaal et al. [98] menunjukkan bahwa
perlakuan
dengan 4-OH-T meningkat laten TGF1 sekresi oleh fibroblast terkait kanker in vitro, namun
tidak oleh fibroblas dari jaringan payudara normal berdekatan. Konsisten dengan ini, Butta et al. [94]
menunjukkan bahwa perlakuan terhadap wanita dengan tamoxifen diinduksi TGF produksi oleh stroma
jaringan yang mengelilingi massa tumor, tetapi tidak di karsinoma payudara itu sendiri.
Titik kunci di sini adalah bahwa tamoxifen-responsif in vivo mungkin tidak hanya tergantung pada apakah

tidak sel kanker payudara ER mengungkapkan, tetapi pada apakah atau tidak populasi sel induk masih
sensitif untuk menangkap pertumbuhan TGF-dimediasi. Dengan demikian, dalam beberapa kasus, ER-
positif tumor mungkin
menjadi resisten terhadap anti-estrogen karena tumor sel-sel induk tidak lagi merespon TGF-
diperantarai sel siklus penangkapan. Dalam situasi ini aktivasi, konstitutif TGF sinyal bahkan mungkin
berkontribusi untuk perlawanan anti-estrogen. Sebagai contoh, kombinasi tingkat tinggi TGF1
mRNA dengan ekspresi ER rendah di tumor payudara telah dikaitkan dengan resistensi klinis
untuk terapi tamoxifen pra-operasi [99]. Selain itu, Arteaga et al. [100] menemukan bahwa TGF2
bisa menengahi perlawanan anti-estrogen dalam sel yang diturunkan dari MCF7 LCC2 kanker payudara
manusia.
Pertumbuhan sel-sel MCF7/LCC2 adalah paradoks distimulasi oleh tamoxifen in vitro, dan
ini tidak terpengaruh oleh antibodi penetralisir pan-TGF, 2G7. Namun, in vivo, tamoxifen
memacu pertumbuhan tumor MCF7/LCC2, dan pengobatan simultan dengan 2G7 dibatalkan
tamoxifen tergantung pada pertumbuhan. Ini pembalikan resistensi tamoxifen oleh 2G7 in vivo hanya
diamati pada tikus telanjang tapi tidak pada tikus yang kekurangan pembunuh alami (NK)-fungsi sel,
menunjukkan
bahwa mekanisme kekebalan terlibat dalam efek antitumor dari 2G7. Selain itu, antisense
TGF2 oligodeoxynucleotides meningkatkan sensitivitas sel NK MCF7/LCC2 di
kehadiran tamoxifen. Data ini menunjukkan bahwa fungsi NK host ditengahi, sebagian,
efek antitumor tamoxifen dan TGF2 yang dapat membatalkan mekanisme ini, sehingga
berkontribusi untuk tamoxifen [resistensi 100].
Singkatnya, ada jelas adalah sensitivitas diferensial untuk efek anti-proliferasi dari TGF
antara HMEC non-neo-plastik dan sel-sel kanker payudara secara in vitro maupun in vivo.
Mengekalkan HMEC primer per se tidak terkait dengan perolehan TGF-
perlawanan, namun perkembangan fenotipe sepenuhnya berubah adalah, menyatakan bahwa ada
keterkaitan antara kedua peristiwa. Selanjutnya, TGF dapat menengahi efek anti-tumor
tamoxifen, sedangkan perkembangan kanker payudara ganas tampaknya terkait dengan
peningkatan produksi dan sekresi autokrin TGF, yang akhirnya dapat memberikan kontribusi
tamoxifen perlawanan. Cara termudah untuk mendamaikan ini tampaknya bertentangan
pengamatan adalah dalil bahwa, pada tahap awal pengembangan kanker payudara, susu yang
batang populasi sel epitel masih sensitif terhadap hambatan pertumbuhan dengan TGF (dan, dengan
demikian,
peka terhadap tamoxifen selama ada merupakan subpopulasi ER-positif), tetapi melarikan diri dari
TGF-dimediasi pertumbuhan penangkapan dan tingkat produksi lebih tinggi terkait TGF oleh
sel tumor yang kemudian peristiwa dalam perkembangan kanker payudara, mungkin terkait dengan yang
lebih besar
invasif dan / atau metastasis potensi dan tamoxifen-perlawanan. Namun, orang harus hati-hati
tidak menyamakan melarikan diri dari kontrol siklus sel TGF-mediated (dan tumor supresi) dengan
metastasis, karena ada proses jelas terpisah. Dengan demikian, estrogen-tergantung kanker masih dapat
metastasis, dan metastasis yang menjadi nyata secara klinis setelah periode berkepanjangan
dormansi biasanya kurang responsif terhadap estrogen. Jika efek terapi estrogen
kekurangan adalah, pada kenyataannya, dimediasi oleh TGF, sebagai bukti yang diringkas di atas tampak
menunjukkan, pengobatan pasien dengan antagonis TGF kemungkinan akan merugikan. Pada
sisi lain, orang juga akan memprediksi bahwa ketika kanker ini menjadi refraktori untuk antiestrogens
(Estrogen-independen), ini mungkin karena melarikan diri dari pertumbuhan dimediasi TGF
inhibisi. Dalam konteks ini, jika kita dapat menunjukkan bahwa proses metastatik tergantung pada
TGF sinyal, mungkin rasional untuk campur tangan dengan antagonis TGF.
Aktivasi konstitutif dari respon cedera jaringan dan induksi dari mesenchymal
fenotipe drive metastasis
model kerja kami [67], yang seluruhnya konsisten dengan hewan dan dalam model in vitro
diringkas di atas, adalah bahwa dua perubahan besar dalam TGF pensinyalan terjadi selama kanker
payudara
pembangunan: yang pertama adalah terkait dengan pengurangan global dalam reseptor (atau, mungkin,
Smad)
sinyal, yang mengakibatkan hilangnya kontrol homeostatik dan tumor TGF's penekan
kegiatan, sedangkan yang kedua adalah terkait dengan produksi berlebih dari TGF bioaktif, sehingga
aktivasi ekspresi, pro-invasif,-angiogenic gen dan metastasis TGF-diatur
program, yang menginduksi fenotipe sangat mesenchymal, motil, invasif dan metastasis.
TGF sinyal dapat drive metastasis kanker payudara-Welch et al. [58] adalah yang pertama
untuk menarik perhatian pada potensi peran TGF dalam metastasis tumor mammae: pra-pengobatan
MTLn3 sel adenokarsinoma mammae tikus dengan TGF1 in vitro menghasilkan dosis-tergantung
peningkatan metastasis paru berikut injeksi vena ekor tikus F344 ke syngeneic. Efek ini
berkorelasi dengan kecenderungan peningkatan sel untuk menginvasi basementmembrane dibentuk
kembali
in vitro tanpa mempengaruhi pertumbuhan sel, dan bisa diblokir menggunakan penetralisir
anti-TGF antibodi [58]. Sebaliknya, McEarchern et al. [101] melaporkan bahwa mengucapkan
dominan TGF dipotong negatif reseptor tipe II dalam susu murin sangat metastatik 4T1
sel kanker mengakibatkan TGF berkurang secara signifikan sinyal dan kemampuan terbatas
dari 4T1 sel untuk membentuk metastasis jauh. Sepanjang garis yang sama, Yin et al. [70] menunjukkan
bahwa
TGF juga mempromosikan metastasis kanker payudara dalam sel manusia secara otonom. Ekspresi
dari mutan dominan-negatif dari reseptor TR-II pada baris sel kanker payudara manusia,
MDA-MB-231, menghambat metastasis tulang tingkat eksperimental. Pembalikan
dominan-negatif sinyal blokade oleh overexpressing sebuah TR konstitutif aktif-aku reseptor
dalam sel-sel kanker payudara protein meningkatkan produksi hormon paratiroid terkait
(PTHrP) oleh sel-sel tumor dan meningkatkan metastasis tulang osteolytic mereka. Dalam penelitian
serupa,
Tang et al. [102] menunjukkan bahwa memperkenalkan gen dominan TR-II-negatif menjadi sangat
sel mammae karsinoma metastatik MCF10Ca1 menghasilkan pengurangan dalam percobaan
paru metastasis. Baru-baru ini, dengan menggunakan percobaan penipisan genetik, beberapa kelompok
telah menunjukkan bahwa Smad4 [103104] serta Smad2 dan 3 [105] memberikan kontribusi pada
pembentukan tulang metastasis osteolytic oleh MDA-MB-231 sel. Demikian pula, Tian et al. [106]
menggunakan model MCF10Ca untuk menunjukkan bahwa interferensi dengan Smad2 endogen / 3
isyarat
meningkatkan potensi tumor ganas premalignant dan baik yang membedakan xenografted
sel tapi sangat menekan metastasis eksperimental paru karsinoma sel yang lebih agresif
baris. Ekspresi dari Smad3 dalam sel yang sama memiliki efek sebaliknya. Jadi, Smad2 / 3 sebagai
serta Smad4 muncul untuk menengahi tumor TGF's sinyal prometastatic. Secara keseluruhan, ini
studi menunjukkan bahwa, meskipun manusia garis payudara karsinoma sel sel yang tahan panas untuk
penekanan pertumbuhan TGF-mediated, yang TGF sisa aktivitas sinyal mampu mendorong
pembentukan macrometastases di beberapa situs sekunder yang berbeda, termasuk tulang dan paru-
paru
[70102103]. Dengan demikian, efek otonom sel TGF tampaknya diperlukan untuk metastasis
sel-sel kanker payudara manusia, terlepas dari efek pada jaringan inang.
Set gen yang berbeda-beda target TGF terlibat dalam organ-khusus-By metastasis
membandingkan individu metastasis MDA-MB-231 sub-klon, Kang et al. [103.107.108]
mengidentifikasi set ~ 100 ekspresi gen yang tingkat bervariasi sebagai fungsi dari tulang-tropisme.
Sebagian besar gen dan protein encoded disekresikan sel permukaan. Fungsional studi validasi
menunjukkan bahwa keempat gen (IL-11, CTGF, CXCR4, MMP-1) bertindak secara kooperatif
menyebabkan
osteolytic metastasis. Yang penting, masing-masing empat gen target TGF [67]. Selain itu,
beberapa hewan dikembangkan metastasis tulang berikut berkepanjangan dormansi. Sel
baris berasal dari dormansi "-posting" metastasis tulang saldo tropisme-jelas kapan reinjected
menjadi hewan sekunder, tetapi ditampilkan profil ekspresi gen yang cukup berbeda
dari yang ditemukan dalam tulang "primer" metastasis [109]. Paling menonjol adalah fakta bahwa,
dalam
Berbeda dengan "primer" metastasis tulang, klon pasca-dormansi tidak mengungkapkan
TGF respon gen tanda tangan (Y. Kang, Komunikasi Pribadi). Temuan ini mengangkat
pertanyaan apakah metastasis tulang primer mungkin akan lebih tergantung pada aktivasi mereka
TGF sinyal oleh TGF dibebaskan dari tulang [110] dari metastasis pasca-dormansi. Namun,
kami baru-baru ini dalam percobaan pengobatan vivo menunjukkan bahwa hal ini tidak terjadi,
menunjukkan bahwa
TGF prometastatic yang berperan terutama dalam mikro host daripada melalui
sel otonom efek (Ge et al naskah dalam persiapan)..
Dalam penelitian serupa, van der Pluijm et al. [111] memeriksa ekspresi gen di MDA-MB-231
metastasis di lokasi yang berbeda, serta dalam jaringan mouse host sekitarnya. PTHrP diyakini
untuk meningkatkan resorpsi tulang osteoclastic. Konsisten dengan ini, PTHrP ekspresi mRNA adalah
sangat up-diatur dalam metastasis tulang, dibandingkan dengan metastasis otak atau paru-paru. Dalam
hal yang sama
set tulang MDA-MB-231 yang diturunkan dan metastasis jaringan lunak, ekspresi VEGF-A,-B,
dan-C sangat up-diatur dalam tulang / sumsum tulang metastasis dibandingkan dengan mereka yang
otak atau paru-paru. Penting, VEGF juga merupakan target gen TGF langsung pada sel epitel [67].
Konsisten dengan pengamatan, pengobatan tumor tikus bantalan dengan anti-2G7
TGF antibodi penetralisir secara signifikan mengurangi tingkat sirkulasi VEGF [112] (Genentech,
Aplikasi Paten US 2005/0276802 A1).
Akhirnya, Hiraga et al. [113] baru-baru ini meneliti peran siklooksigenase-2 (PTGS2/COX2),
di payudara metastasis kanker tulang. COX-2 protein jelas atas-disajikan dalam metastasis tulang
dari pasien dengan berbagai jenis kanker. Selain itu, MDA-MB-231 sel-sel-COX 2
ketika mereka metastasis ke tulang tetapi tidak ketika tumbuh di fatpad susu, menunjukkan bahwa
lingkungan mikro tulang khusus induksi ekspresi COX-2. Yang penting, PTGS2 /
COX2 juga merupakan target utama transkripsional TGF di MDA-MB-231 dan sel epitel lainnya
[67]. Selain itu, ekspresi COX-2 telah rusak di MDA-MB-231 sel yang diekspresikan
dominan-negatif TR-II reseptor, terkait dengan metastasis tulang menurun dan mengurangi
osteoclastic resorpsi tulang. Demikian pula, pengobatan dengan inhibitor COX-2 secara signifikan
metastasis tulang ditekan dengan jumlah osteoclast menurun dan peningkatan apoptosis
MDA-MB-231 sel. Hasil ini menunjukkan bahwa TGF mungkin berasal tulang-up-mengatur PTGS2 /
COX2 ekspresi di sel kanker payudara, sehingga meningkatkan prostaglandin E (2) produksi,
yang pada gilirannya, merangsang penghancuran tulang osteoclastic, menyebabkan perkembangan
tulang litik
metastasis [113]. Singkatnya, satu set setidaknya tujuh gen, IL-11, CTGF, CXCR4, MMP-1,
PTHrP, VEGF dan PTGS2/COX2, telah diidentifikasi sebagai driver tulang kanker payudara manusia
metastasis dalam model-231 MDA-MB, dan masing-masing gen transcriptionally diatur
oleh dan tergantung pada TGF signaling in vivo. Dengan demikian, studi ini memberikan dukungan kuat
untuk
TGF menargetkan jalur sinyal untuk mencegah atau menghambat metastasis tulang oleh payudara
seperti basal
sel kanker.
Penting untuk dicatat bahwa, sementara peran TGF telah mapan dalam pengembangan
metastasis osteolytic oleh-231-sel basal seperti kanker payudara MDA-MB, sedikit yang diketahui
tentang peran jalur ini dalam pengembangan osteoblastic metastasis yang lebih
sering terlihat di kanker payudara. Dalam hal ini, menarik bahwa payudara manusia T47D
karsinoma sel, yang menimbulkan metastasis osteoblastic dalam 3-6 bulan berikutnya intrakardial
injeksi [114115], mengekspresikan reseptor estrogen tetapi seluruhnya tidak responsif terhadap TGF
berdasarkan
fakta bahwa gen TGFBR2 adalah transcriptionally diam. Dengan demikian, sel-sel ini setia
mereproduksi fenotipe yang berbeda, ER +, CD44-, CD24 +, payudara TGFBR2-lumen populasi sel kanker
baru-baru ini digambarkan oleh Shipitsin et al. [78]. Akibatnya, jika TGF
berkontribusi pada pembentukan metastasis osteoblastic dalam hal ini, ia harus melakukannya
seluruhnya melalui
parakrin mekanisme. Berbeda dengan MDA-MB-231 sel yang mengandalkan PTHrP, yang tropisme tulang

dari MCF7 ER-positif, ZR75-1 dan sel T47D tampaknya tergantung pada endotelin-1
(EDN1) [115.116]. Menariknya, ekspresi gen EDN1 juga sangat diinduksi oleh TGF
[67117118]. Dengan demikian, orang bisa berspekulasi bahwa metastasis tulang T47D dapat didorong
oleh rilis
dari TGF dari matriks tulang diikuti dengan induksi endotelin-1 pada populasi sel stroma,
yang pada gilirannya, merangsang aktivitas osteoblas.
Selain sublines tulang-tropik, Minn et al. [119] telah juga digunakan dalam pemilihan vivo untuk
mengisolasi MDAMB-
231 klon yang sangat paru tropik. Ekspresi gen tanda tangan klon paru-tropik
adalah berbeda dari yang klon tulang-tropik. Sembilan gen diidentifikasi tidak hanya sebagai penanda
tetapi juga sebagai mediator fungsional metastasis paru-spesifik. Mungkin yang paling penting dari
perspektif kami, beberapa gen ini juga TGF sasaran, termasuk GRO1/CXCL1, MMP2,
ID1 dan PTGS2/COX2. Hal ini menunjukkan bahwa mikro paru-paru juga mengandung aktif
TGF, yang memberikan keuntungan yang sangat selektif untuk sel tumor TGF-responsif, tapi
mendirikan metastasis di paru-paru memerlukan yang berbeda-beda efektor metastasis daripada di
tulang mikro. Menariknya, Gupta et al. [120] menunjukkan bahwa kombinasi perlakuan dengan
antibodi anti-EGFR, cetuximab, spektrum yang luas MMP inhibitor dan GM6001
celecoxib COX-2 inhibitor mengurangi laju pertumbuhan tumor primer disertai dengan pembuluh darah
cacat yang diendapkan hipoksia jaringan dan apoptosis sel tumor, berkurang kehadiran
beredar sel tumor, dan mencegah perkembangan micrometastases untuk macrometastases
di paru-paru mencit MDA-MB-231 bantalan. The TGF-ketergantungan protein efektor
menimbulkan pertanyaan apakah efikasi terapi yang bisa lebih jauh potentiated oleh penambahan
dari antagonis jalur TGF.
Kerjasama antara TGF dan aktivasi gen ras dalam mengarahkan perkembangan kanker payudara
Menggunakan terpolarisasi EpRas Ha-ras-mengubah sel epitel murin susu sebagai model mereka
sistem, Janda et al. [121] menunjukkan bahwa Ha-ras onkogen bekerja sama dengan TGF untuk
menyebabkan EMT, yang dicirikan oleh morfologi sel spindel-seperti, hilangnya epitel spidol
dan kohesi sel, dan induksi marker mesenchymal. Menariknya, pengobatan dengan
TGF sendirian diinduksi hilangnya sel-sel kontak dan fenotipe sel spindle-seperti yang sepenuhnya
reversibel setelah penarikan faktor dan tidak terkait dengan mesenchymal berkelanjutan
fenotipe. Menggunakan inhibitor spesifik dan mutan Ha-ras efektor-spesifik, peneliti ini
menunjukkan bahwa Raf hiperaktif / mitogen-aktif protein kinase (MAPK) diperlukan untuk
EMT, sedangkan aktivasi phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) menyebabkan hamburan dan
melindungi dari TGF-induced apoptosis. Entah hyperactivation dari jalur PI3K atau Raf /
Jalur MAPK sudah cukup untuk pembentukan tumor xenograft, sedangkan EMT penuh ditiupkan dan
metastasis diperlukan aktivasi simultan dari kedua jalur. Konsisten dengan temuan ini,
TGF menghambat sinyal oleh mengekspresikan reseptor TR-II dominan-negatif menyebabkan
pembalikan EMT (mesenchymal untuk transisi epitel), penghambatan invasiveness in vitro dan
menghasilkan pengurangan yang signifikan dalam pertumbuhan tumor primer dan kemampuan
metastasis in vivo
[69]. Dengan demikian, tampaknya EMT menutup in vitro berkorelasi dari metastasis, karena keduanya
membutuhkan sinergi
antara TGF-dan Raf / kaskade sinyal MAPK sehingga [69.121]. Studi-studi ini jelas menggambarkan
bahwa
TGF dan Ha-ras jalur harus bekerja sama untuk mendorong EMT, susu motilitas dan sel kanker
invasiveness in vitro, dan metastasis in vivo, dan memberikan alasan untuk menggabungkan TGF
ditargetkan agen dengan agen yang menghambat jalur mitogenic Ras-dependen.
Kerjasama antara TGF dan HER2/neu dalam mengarahkan perkembangan kanker payudara
Beberapa studi in vitro telah menunjukkan bahwa berlebih dari HER2/neu diaktifkan
(ErbB2) onkogen dalam susu MCF10A untransformed manusia sel epitel mengkonversi
TGF dari faktor anti-migrasi netral atau bahkan ke sangat pro-migrasi dan-invasif faktor [122-124].
Ternyata ini sinergis tindakan TGF dan HER2/neu sinyal
jalur in vitro telah lebih lanjut didukung oleh pembastaran tikus transgenik yang
menyatakan gen neu diaktifkan dalam kelenjar susu dengan strain yang disajikan baik
konstitutif aktif TGF1 atau diaktifkan TR-aku gen [64-66]. Dalam kedua kasus, tumor yang
dikembangkan pada hewan bigenic menimbulkan sejumlah paru secara signifikan lebih tinggi
metastasis dari orang-orang dari neu tikus transgenik tunggal. Temuan ini menunjukkan bahwa, sekali sel

menerobos penghalang TGF anti-proliferasi, TGF menjadi faktor pro-metastasis kuat.

Konsisten dengan gagasan ini, dinyatakan tumor bigenic tingkat yang lebih tinggi Smad2 terfosforilasi,
Akt, mitogen-diaktifkan protein kinase (MAPK), dan P38, serta aktivitas Rac1 lebih tinggi daripada
tumor mengekspresikan neu sendiri [64]. Dalam hal mekanisme yang mendasari menengahi
sinergi antara HER2/neu dan TGF sinyal jalur, Northey et al. [125] telah
memetakan efek sinergis dari TGF-induced motilitas dan invasi terhadap sinyal-sinyal yang berasal
dari residu tirosin 1226/1227 dan 1253 dari HER2/neu, khususnya yang melibatkan ShcA
adaptor protein, yang berinteraksi dengan HER2/neu melalui residu. Secara keseluruhan, ini
studi memberikan alasan lebih lanjut untuk pengembangan klinis pengobatan kombinasi
menggunakan jalur antagonis TGF dan jalur faktor penghambat pertumbuhan spesifik, seperti
HER2/neu.
Singkatnya, TGF tumor-terkait tampaknya memberkati neoplastik sel epitel susu
dengan keunggulan selektif karena respon mengubah sel tumor sendiri
untuk TGF (tumor efek sel-otonom) serta tindakan TGF pada sel inang mendukung
infrastruktur. Secara keseluruhan, bukti eksperimental mendukung mount sebuah onkogenik,
prometastatic peran dari TGF sinyal telah dihasilkan cukup antusias untuk
pengembangan jalur TGF antagonis sebagai pengobatan anti-novel payudara metastatik
[126-128].
TGF dan kanker payudara manusia
TGF produksi dikaitkan dengan pengembangan kanker payudara
Beberapa studi telah menunjukkan bahwa TGFs dapat dideteksi dalam spesimen kanker payudara
manusia.
Selain itu, jaringan tumor muncul untuk menyatakan tingkat yang lebih tinggi dibandingkan yang sesuai
TGF
jaringan normal, dan asosiasi TGFs dengan kanker tampaknya paling kuat di
maju tahap perkembangan tumor. Misalnya, TGF1, -2 dan-3-spesifik mRNA bisa
terdeteksi di sebagian besar kanker payudara primer [129] dan tampaknya lebih banyak
dari dalam jaringan payudara normal [130]. Selain itu, beberapa penelitian telah melaporkan
immunostainable
TGF1, -2, dan -3 untuk dihubungkan dengan mayoritas karsinoma payudara manusia utama
[131-135]. Selain itu, sebagian secara signifikan lebih besar dari karsinoma invasif disajikan
TGF immunodetectable daripada karsinoma in situ [131], dan terkuat pewarnaan diamati
di Karsinoma invasif dengan metastasis kelenjar getah bening yang terkait [133136], menunjukkan
bahwa ada
mungkin hubungan semi-kuantitatif antara produksi TGF dan perkembangan tumor.
Selain laporan-laporan dari ekspresi TGF meningkat di karsinoma payudara, tingkat plasma
TGF juga telah dilaporkan meningkat pada pasien dengan kanker payudara [137], untuk
mengkorelasikan
dengan stadium penyakit [138], dan untuk mengurangi berikut reseksi dari tumor primer [139]. Paling
baru-baru ini, Grau et al. [140] meneliti hubungan antara sirkulasi dan tingkat TGF
keseluruhan dan penyakit-bebas bertahan hidup. tingkat TGF diukur dalam sampel plasma baru-baru ini

didiagnosis pasien kanker payudara pada populasi berbasis kasus kontrol Shanghai Kanker Payudara
Studi. Median tindak lanjut waktu 7,2 tahun. Dibandingkan dengan pasien dengan terendah
kuartil dari TGF plasma, pasien dengan kuartil tertinggi TGF plasma memiliki signifikan
lebih buruk secara keseluruhan-hidup dan bebas penyakit, sementara ini tidak terjadi pada pasien
dengan kedua
dan kuartil ketiga plasma TGF tingkat, terlepas dari tahap penyakit. Dengan demikian, yang tertinggi
beredar tingkat TGF dikaitkan dengan kelangsungan hidup lebih buruk independen dari tahap
penyakit. Selain itu, Baselga et al. [141] baru-baru ini melaporkan plasma TGF1 tingkat di 23 pasien
dengan metastasis kanker payudara dan tulang. Plasma TGF 1 tingkat yang meningkat pada lebih dari
setengah
pasien kanker dan positif berkorelasi dengan faktor platelet meningkat 4 (PF4) tingkat,
PTHrP, von Willebrand Factor (vWF) dan interleukin (IL) -10. Apakah atau tidak meningkat
TGF kadar plasma adalah indikasi penyakit metastatik TGF-bergantung dan, karenanya,
prediksi respons terhadap antagonis jalur TGF adalah pertanyaan yang secara aktif sedang
mengejar dalam uji klinis berlangsung.
Perubahan dari TGF komponen jalur sinyal pada kanker payudara
Dalam sebuah penelitian awal, TGF reseptor tipe I (TGFR1) mRNA terdeteksi pada payudara normal
dan pada
90% dari kanker payudara. TGFR2 dan -3 mRNA reseptor yang disajikan lebih jarang [142].
Gobbi et al. melaporkan bahwa hilangnya T R-II ekspresi kedua protein berkorelasi dengan kemajuan
dan dengan tingkat tinggi histologis karsinoma payudara invasif [143144]. Selanjutnya,
Buck et al. [145] memeriksa ekspresi RI dan T-II oleh imunohistokimia di 246
kanker payudara invasif spesimen. Ekspresi T RI kuat berkorelasi dengan ukuran tumor
dan nodal status tetapi hanya lemah dengan kelangsungan hidup secara keseluruhan. Sebaliknya, T R-
II ekspresi
berkorelasi berbanding terbalik dengan kelangsungan hidup secara keseluruhan, tetapi hanya pada
pasien dengan kanker ER-negatif. Dengan demikian,
kelangsungan hidup pasien dengan ER-negatif, T R-II + tumor dipersingkat secara signifikan,
sedangkan kerugian
T R-II ekspresi pada subkelompok ER negatif dikaitkan dengan kelangsungan hidup lebih baik secara
keseluruhan,
dibandingkan dengan pasien dengan kanker ER-positif. Selain itu, dalam ER-positif
subset, T R-II ekspresi tidak berdampak pada hasil pasien [145]. Temuan-temuan ini
sangat konsisten dengan yang dilaporkan oleh Shipitsin et al. [78]. Dalam studi dari 286 pasien,
peneliti ini melaporkan bahwa TGFR2 dan 15 gen TGF -diatur (termasuk CTGF,
COLIA1, FN1, SERPINE1, MMP9) yang paling kuat disajikan dalam ER-negatif, CD44 +,
CD24lo tumor, dan dikaitkan dengan shortening signifikan jauh metastasis bebas
kelangsungan hidup [146]. Konsisten dengan penelitian ini, Padua et al. [147] baru-baru ini melaporkan
bahwa
ekspresi TGF 153 respon tanda tangan gen diprediksi untuk pengembangan paru-paru
metastasis dan hasil yang buruk ER-negatif tetapi tidak kanker payudara ER-positif.
Meskipun dua studi gagal untuk mendeteksi perubahan struktural gen TGFR2 di SD
kanker payudara invasif [148149], Lucke et al. [150] ditemukan mutasi beberapa TGFR2 payudara
kanker spesimen. Demikian pula, acara meskipun Baxter et al. [151] tidak menemukan bukti untuk
TGFR1
mutasi gen, kami melaporkan bahwa satu tertentu C ke A mutasi transversi menghasilkan
serin untuk tirosin substitusi pada kodon 387 (S387Y) hadir di dua dari 31 payudara primer
karsinoma dan 5 dari 12 metastasis kelenjar getah bening. TGFR1 mutan ini memiliki kemampuan
dilemahkan
untuk menengahi efek TGF -tergantung pada ekspresi gen dibandingkan dengan wild type T RI oleh
sumoylation mencegah reseptor [149152]. Dengan demikian, TGFR1 dan mutasi gen -2
kadang-kadang ditemukan pada kanker payudara tapi ini jelas peristiwa frekuensi rendah. Namun,
mutasi dapat memiliki sifat fenotipik cukup dramatis. Sebagai contoh, kami baru-baru ini
menggambarkan mutasi kanker terkait pada gen TGFR2 yang memberikan fenotipe ganda dalam
yang Smad2 / 3 sinyal hilang, sementara Smad1 / 5 signalling ini konstitutif diaktifkan dan drive
motilitas sel dan [invasi 6].
Selain TGFR2, ekspresi Smad4 berkurang dalam subset kecil dari kanker payudara dibandingkan dengan
epitel kelenjar normal [15.153]. Dalam tangan kita sendiri tidak adanya baik Smad4 dari
terfosforilasi ekspresi Smad2 di kelenjar getah bening kanker payudara positif sangat
berhubungan dengan ketahanan hidup yang lebih pendek [15]. Di sisi lain akumulasi, Smad3 nuklir
di primer kanker payudara invasif berkorelasi dengan derajat diferensiasi tinggi, meskipun efeknya
pada kelangsungan hidup pasien itu [jelas 154]. Dengan demikian, kehilangan ekspresi Smad dan / atau
aktivasi tidak
terjadi pada kanker payudara namun peristiwa frekuensi rendah dan signifikansi klinis tetap
pasti.
Secara keseluruhan, penelitian ini menunjukkan bahwa sebagian besar kanker payudara manusia
mengekspresikan
semua TGF kanonik komponen jalur sinyal meskipun sering lebih rendah dari normal tingkat (Gambar
3A), sementara lengkap inaktivasi jalur sinyal oleh penghapusan atau mutasi
dari TGF reseptor-atau gen Smad jarang terlihat dalam kanker payudara. Selain itu, temuan ini
konsisten dengan model yang retensi sebagian TGF sinyal berkaitan dengan EMTmediated
invasi, dan metastasis fenotipe agresif terutama di ER-negatif
subtipe kanker payudara, sedangkan yang tidak aktif lengkap dari TGF sinyal jalur adalah
terkait dengan kurangnya EMT, invasi kohesif, dan kecenderungan yang lebih rendah untuk metastasis
[42,67].
TGF memainkan peran penting dalam mengatur diri dalam pembaharuan dan diferensiasi normal dan
jaringan ganas payudara
sel-sel kanker payudara memulai memiliki fenotipe mesenchymal dan aktif
TGF sinyal-Al-Hajj et al. [155] baru-baru ini digunakan penanda permukaan sel untuk mengisolasi
subpopulasi sel kanker payudara yang mampu melakukan pertumbuhan tumor dalam kekebalan
kekurangan
tikus. Sel-sel kanker-memulai apa yang disebut (CIC) atau sel-sel kanker payudara induk memiliki + CD44,
CD24-/lo, lin-fenotipe. Baru-baru ini, ALDH1 diidentifikasi sebagai penanda bahwa lebih mempersempit
menuruni kanker payudara fenotipe sel batang [156157]. Populasi sel dengan fenotipe ini
sangat diperkaya dalam memulai sel tumor. Selain itu, tumor yang muncul dari Cics
berisi tambahan CD44 +, CD24lo sel tumorigenic serta beragam campuran fenotipik
populasi sel non-tumorigenic mirip dengan yang hadir di awal tumor. Jadi, Cics
yang secara operasional didefinisikan sel yang memiliki kemampuan pembaruan diri serta kemampuan
untuk
menimbulkan progeni sel lebih berbeda (non-tumorigenic). Menindaklanjuti awal ini
pengamatan, Shipitsin et al. [78] meneliti ekspresi gen-dan profil genetik sel
terisolasi dari kanker payudara dan jaringan normal dengan menggunakan penanda permukaan sel,
CD44 dan
CD24. Kebanyakan sel tumor mengandung populasi yang baik terutama ER-positif,
-CD44, CD24 + atau ER-negatif, CD44 +, CD24lo. Gen yang diekspresikan dengan co-
CD44 + termasuk VIM, CTGF, SERPINE1, SPARC, serta TGFBR2. Bahkan, banyak
gen aktif ditranskripsi oleh sel CD44 + dikaitkan dengan fenotipe mesenchymal
dan / atau yang TGF target [67]. Selain itu, keberadaan gen ini berkorelasi dengan tanda tangan
penurunan pasien bertahan hidup. Berbeda dengan ER-negatif, CD44 +, CD24lo, TGFBR2 sel +
populasi, dalam dibedakan ER-positif, CD44-, sel CD24 + lumen, TGF signaling
jalur tidak aktif karena membungkam transkripsional epigenetik gen TGFBR2.
Dengan demikian, diferensiasi dari nenek moyang susu ke dalam sel epitel lumen tampaknya
terkait dengan mematikan sinyal TGF [78]. Mungkin yang paling menarik, pengobatan
ER-negatif, CD44 +, CD24lo, TGFBR2 + sel kanker payudara metastatik dengan dual
TGF reseptor kinase inhibitor, LY2109761, menghasilkan pembalikan mesenchymal mereka untuk
yang lebih epithelioid-CD44, CD24 + fenotipe. Sebaliknya, telah dikenal untuk beberapa waktu
yang TGF dapat menginduksi sel-sel epitel jinak mammae untuk menjalani epitel-ke-mesenchymal
transisi (EMT), efek yang dapat diblokir oleh pengobatan dengan reseptor kinase TGF
inhibitor [83-85]. Dengan demikian, secara agregat, studi ini telah memberikan bukti kuat untuk kritis
peran TGF dan TGF pensinyalan dalam mengatur dinamika populasi sel dalam normal
ganas payudara dan jaringan dengan mendukung pembaruan sel induk diri dan menghambat komitmen
untuk diferensiasi.
Fillmore dan Kuperwasser [158] baru-baru ini diuji hipotesis bahwa kanker payudara didirikan
garis sel mungkin mempertahankan program diferensiasi hirarkis yang ditemukan payudara primer
tumor. Menggunakan CD44 sama dan marker sel permukaan CD24, peneliti ini menunjukkan
itu, mirip dengan primer kanker payudara manusia, garis payudara karsinoma sel manusia entah
didominasi CD44-, CD24 atau CD44 + +, CD24lo atau terdapat campuran dari dua jenis sel.
Namun, bertentangan dengan harapan mereka, frekuensi tumor sel memulai cukup mirip
di baris-baris sel, menunjukkan bahwa CD44 +, CD44-CD24lo versus, CD24 + fenotip
yang lebih mencerminkan subtipe kanker basal versus lumen dari itu mereka tercermin
ada atau tidak adanya sifat sel induk. Analisis lebih lanjut menunjukkan bahwa masing-masing
manusia garis sel karsinoma payudara, secara independen dari fenotipe predominan mereka, juga
terdapat sub-populasi jauh lebih kecil dari CD44 + / + sel CD24-/lo/ESA, yang sangat
diperkaya untuk sel nenek moyang mampu memulai tumor ganas di dalam susu yang fatpad.
Selanjutnya, ini + CD44 / CD24-/ESA subpopulasi + mampu memperbarui diri, untuk menyusun kembali
budaya sel orangtua dengan CD44-/CD24 + / ESA + dan / CD44 + CD24-/ESA- sel, untuk mempertahankan

BrdU label, dan untuk bertahan hidup preferentially pengobatan dengan kemoterapi sitotoksik. Paling
penting, ini subpopulasi sel induk seperti dapat diidentifikasi di beberapa berbeda
sel baris, termasuk dengan fenotipe dominan lumen atau basal-seperti. Seiring serupa
baris, Horwitz et al. [159] xenografts baru-baru ini diperiksa berasal dari lumen (ER-positif,
-CD44, CD24 +, TGFBR2-) sel-sel kanker payudara T47D. Meskipun xenografts ini adalah
terutama terdiri dari lumen-seperti ER-positif, PR-positif, KRT5-sel, mereka juga
berisi subpopulasi kecil sel yang CD44 + dan ER-negatif, PR-negatif,
KRT5 +. Yang paling penting, ini + CD44, KRT5 + fraksi sel sangat diperkaya untuk sel-sel yang
adalah clonogenic in vitro dan mampu memulai kembali pertumbuhan tumor in vivo dibandingkan
dengan
Sel CD44-fraksi. Selama ekspansi koloni CD44 + yang berasal dari in vitro, yang-ER negatif,
PR-negatif, KRT5 populasi + hadir sejak awal tapi tidak berkembang dengan meningkatnya
ukuran koloni, sedangkan jumlah dibedakan ER-positif, PR-positif, KRT5-sel diperluas
linier dengan pertumbuhan koloni. Demikian pula, tumor yang berasal dari sel-sel CD44 vivo + berisi
kecil statis ER-negatif, PR-negatif, CD44 +, CD24lo, KRT5 + populasi, sebuah intermediate
ER-negatif, PR-negatif, KRT5-populasi, dan ER-positif berkembang, PR-positif,
KRT5-sel penduduk. Temuan ini sangat menyarankan bahwa mungkin lumen tumor payudara
berisi minoritas CD44 +, ER-negatif, PR-negatif, KRT5 + (+ mungkin TGFBR2)
penduduk yang memiliki kapasitas untuk menghasilkan mayoritas dibedakan sepenuhnya ER-positif,
PR-positif, KRT5-, KRT18 + sel. Menariknya, pengamatan ini mengingatkan sel T47D
yang terisolasi oleh kekurangan estrogen berkepanjangan in vitro [88]. Sel-sel ini tidak lagi
disajikan ER, tapi disajikan peningkatan kadar mRNA TGF. Orang mungkin berspekulasi bahwa
kekurangan estrogen menyebabkan ekspansi selektif dari + CD44, ER-negatif, PR-negatif,
KRT5 + nenek moyang seperti populasi, model yang siap diuji.
Neve et al. [160] baru-baru ini ditandai sebuah panel yang lebih besar dari jalur sel kanker payudara
manusia, baik
oleh profil ekspresi gen dan hibridisasi genomik komparatif. Hasil yang diperoleh
sangat konsisten dengan yang dilaporkan oleh Fillmore et al. [161]. Unsupervised pengelompokan
profil transkripsional mengungkapkan beberapa kelompok besar, yang muncul bersamaan dengan orang-
orang
dijelaskan untuk sampel klinis tumor. Dalam studi ini, garis-seperti kanker basal dikarakterisasi
oleh ER rendah dan ekspresi CAV1 tinggi. Kelompok ini mengandung setidaknya dua subdivisi utama,
seperti disebut basal (BL) A (KRT5-, KRT14 +) dan B (VIM +). The BLA erat cocok dengan basallike
subset awalnya didefinisikan oleh Perou et al. [162], sedangkan cluster HDB menunjukkan sebuah batang

sel-seperti ekspresi profil dan preferentially disajikan CD44, MSN, TGFBR2, CAV1,
CAV2, VIM, SPARC dan AXL, sementara ekspresi CD24 rendah. Pengamatan ini telah
dikonfirmasi secara independen et al Charafe-Jauffret. [163]. Peneliti ini diinterogasi 31
manusia jalur sel kanker payudara dan menemukan bahwa sel-sel berkumpul ke Luminal, basal dan
Mesenchymal subkelompok. Dalam studi ini, garis dasar-seperti juga ditandai dengan
berlebih dari CD44, MSN, TGFBR2,, CAV1 CAV2, EGFR, MET, Lyn, ETS1, dan berbagai
annexins, serta sejumlah gen kolagen,, MMP1 PLAU, TIMP1, FN1, dan SPARC.
Yang terakhir adalah gen TGF-diatur terlibat dalam EMT, ECM Renovasi dan invasi.
Selain itu, sebuah subset dari kanker basal-seperti diistilahkan sebagai "mesenchymal" subtipe yang
dicirikan oleh
vimentin tinggi (VIM) dan ekspresi CD24 rendah, sesuai dengan baik untuk kelompok ditunjuk sebagai
cluster HDB dijelaskan oleh Neve et al. [160]. HDB / sel mesenchymal yang ditampilkan di kedua
studi menyerupai "basal-mioepitel" sel dalam ekspresi gen mesenchymal
produk, tapi tidak memiliki sejumlah cytokeratins terlihat pada sel-sel mioepitel. Blick et al. [164]
memeriksa ekspresi penanda untuk EMT (VIM, CDH1, CDH2, FN1) di baris-baris sel.
VIM tidak hadir dalam mayoritas garis lumen dan jelas atas-disajikan di HDB, tetapi
juga cukup luas juga disajikan dalam baris sel BLA. E-Cadherin (CDH1), di sisi lain,
sebuah diskriminator penting antara BLA (yang semuanya mengungkapkan tingkat dekat dengan median)
dan HDB, yang telah mengurangi ekspresi. Anehnya, delapan dari 25 jalur sel Luminal juga
menunjukkan ekspresi CDH1 berkurang. N-Cadherin (CDH2) dan fibronektin (FN1), klasik
digunakan untuk memantau EMT, masing-masing menunjukkan pengayaan relatif pada subkelompok
HDB, dibandingkan dengan
yang lain subkelompok, meskipun FN1 ekspresi relatif tinggi dalam beberapa baris lumen.
garis CDH2-negatif Beberapa berkerumun sebagai mesenchymal, terutama MDA-MB-231. Pada
keseluruhan, ada konkordansi wajar antara ekspresi dan driver EMT HDB /
Mesenchymal fenotipe. SNAI2 itu diekspresikan dalam cukup beberapa baris BLA serta sebagian
baris dalam kelompok HDB. Twist diungkapkan dalam garis HDB sebagian besar, tapi mengejutkan, juga
di
lumen beberapa baris. Tinggi ekspresi relatif dari kedua ZEB1 dan TCF4 terbatas terhadap HDB
baris. Semua anggota HDB memiliki ekspresi ELK3 relatif tinggi, seperti yang dilakukan beberapa anggota

BLA, namun tidak ada jalur sel luminal. ELF3, juga merupakan protein ETS-domain, adalah nyata
underexpressed oleh garis HDB sebagian besar sel. Baru-baru ini grup mobilitas tinggi protein A2
(HMGA2), yang disebabkan oleh jalur Smad selama EMT TGF-mediated, ditunjukkan
untuk mengintegrasikan masukan transkripsional untuk ekspresi SNAI1, SNAI2, Twist dan inhibitor
diferensiasi 2 (ID2), masing-masing yang telah terlibat dalam EMT. Dengan demikian, interaksi yang rumit
terlihat antara faktor-faktor transkripsi EMT-mengemudi dapat dikoordinasikan oleh HMGA2. Secara
ringkas,
himpunan bagian dari manusia garis sel kanker payudara (disebut HDB atau Mesenchymal) menampilkan
konstitutif
mesenchymal fenotipe seperti yang didefinisikan oleh morfologi mereka dalam 2D dan 3D budaya,
ekspresi gen
pola (termasuk retensi TGFBR2 ekspresi), hilangnya sel epitel dan spidol
ekspresi marker mesenchymal, kemampuan untuk menyerang sebagai sel tunggal dan dengan sangat
metastatik
potensial. Sel baris ini tampaknya akan berasal dari dan rekapitulasi fenotipe suatu himpunan bagian
kanker payudara basal-seperti yang berkaitan dengan tanda tangan respon TGF gen diaktifkan,
kecenderungan tinggi untuk metastasis dan hasil yang buruk.
Serangkaian studi baru-baru ini melaporkan elegan oleh Mani et al. [60] telah memberikan dukungan
lebih lanjut
untuk hubungan utama antara mesenchymal dan fenotip sel batang dan peran TGF
dalamnya. Pengobatan dengan TGF atau ekspresi ektopik dari baik Twist atau SNAI1 transkripsi
disebabkan faktor non-tumorigenic, diabadikan HMEC untuk mengakuisisi-fibroblas seperti,
mesenchymal penampilan, berhubungan dengan downregulation tanda epitel (seperti Ecadherin
(CDH1), dan upregulation tanda mesenchymal (seperti N-cadherin (CDH2),
vimentin (VIM), dan fibronektin (FN1)). Yang paling penting, ketiga perlakuan tersebut terkait
dengan pergeseran kelompok sel dari didominasi CD44-, sel CD24 + untuk sebagian besar
CD44 +, sel CD24lo. Selain itu, pergeseran fenotipik dikaitkan dengan dramatis (30-40 -
flip) pengayaan dalam jumlah sel yang mampu menimbulkan mammospheres, sebuah fungsional
assay untuk fenotipe stem cell. Penelitian lebih lanjut menunjukkan bahwa batang putatif
sel melahirkan populasi sel yang beraneka ragam yang disajikan baik cytokeratins basal (KRT14 +) atau
lumen cytokeratins (KRT8 atau 18 +), baik di mammospheres dan budaya 2D. Untuk mengatasi
kemungkinan bahwa induksi EMT bisa memaksa konversi CD44-, sel CD24 + untuk membendung
seperti sel CD44 +, CD24lo, SNAI1 atau Twist secara selektif disajikan dalam CD44-, sel CD24 +.
Sebagian besar CD44-, sel CD24-mengalami EMT, sebagaimana dinilai oleh morfologi mereka,
dan menimbulkan CD44 +, CD24lo sel. Selain itu, sel-sel mesenchymal-muncul berasal
de novo oleh inducing EMT dalam CD44-, sel CD24 + terbentuk> mammospheres 10 kali lipat lebih dari
-CD44, CD24 + sel yang terinfeksi dengan vektor kontrol, menunjukkan kemungkinan bahwa luminal sel
dapat kembali ke keadaan yang lebih primitif sel batang.
Untuk mengatasi kemungkinan bahwa memaksa EMT juga dapat mempromosikan generasi kanker
batang
sel dari sel neoplastik dibedakan, SNAI1 atau Twist yang diekspresikan dalam
diabadikan HMEC yang telah sepenuhnya ditransformasikan oleh pengenalan bentuk aktif dari
yang HER2/neu onkogen atau dengan onkogen Ha-Ras. Dalam kedua model, induksi EMT
secara dramatis meningkatkan frekuensi mammosphere pembentukan sel-sel (yaitu, sel induk), serta
sebagai jumlah koloni dalam agar lunak, menunjukkan bahwa EMT dikaitkan dengan kedua
anchorageindependent
pertumbuhan dan batang fenotipe sel-seperti. Namun, berikut EMT, xenografted
transforman HER2/neu-driven gagal untuk membentuk tumor lebih efisien dibandingkan sel yang tidak
diobati di Selain peran penting dalam aktivasi TGF, CD44 tampaknya juga meningkatkan reseptor TGF
signal pada MDA-MB-231 sel kanker payudara manusia [173]. Co-immunoprecipitation
percobaan menunjukkan bahwa MDA-MB-231 sel selektif mengungkapkan varian CD44 3
(CD44v3) dan CD44v3 itu dan TR-aku (dan pada tingkat lebih rendah, TR-II) reseptor adalah
hadir dalam satu kompleks di vivo. Selain itu, domain sitoplasma dari CD44 terikat
TRI dengan afinitas tinggi. Selain itu, pengikatan hyaluronan untuk CD44 di MDA-MB-231 sel
merangsang TR-aku aktivitas kinase, mengakibatkan Smad2 / 3 fosforilasi dan PTH-rP
produksi. Yang paling penting, diaktifkan TR-aku kinase terfosforilasi CD44, yang ditingkatkan
mengikat interaksi dengan protein cytoskeletal, ankyrin, terkemuka, pada gilirannya, untuk tumor
meningkat
migrasi sel. Secara keseluruhan, penelitian ini menunjukkan bahwa CD44 merupakan instrumen tidak
hanya dalam mengaktifkan TGF laten, tetapi juga langsung secara fisik berinteraksi dengan reseptor
TGF
kompleks, sehingga aktivasi lebih lanjut dari beberapa jalur sinyal yang diperlukan untuk sel tumor
migrasi dan, mungkin, metastasis.
Pemersatu model peran TGF signal pada normal dan ganas payudara
jaringan-Secara keseluruhan, penelitian diringkas dalam bagian "sel-sel kanker payudara telah memulai
fenotipe mesenchymal dan TGF aktif sinyal "dan" The CD44 dan TGF sinyal
jalur yang langsung terhubung "yang sangat konsisten dengan model TGF tindakan normal
epitel kelenjar susu yang TGF memainkan peran penting dalam menjaga sel induk
populasi dengan penyeimbang diferensiasi ke dalam lumen, sel basal atau mioepitel
(Gbr. 2). Model ini mengasumsikan keberadaan populasi sel induk yang primitif multipotent
adalah ER-negatif, PR-negatif, + TGFBR2 CD44 +, CD24lo, ESA +, KRT5 +, ALDH1 +, dan mungkin
mengekspresikan marker mesenchymal. Ketika sel-sel membagi, mereka menimbulkan baik untuk
fenotipik putri identik sel induk atau precursor progeni dibedakan (lumen,
basal, atau mioepitel). sel Luminal adalah epithelioid (ESA +, + KRT8/18, CDH1 +), ER mengungkapkan
dan PR, adalah CD44-, CD24 +, dan gen TGFBR2 adalah transcriptionally diam (TGFBR2-). Itu
progeni basal dan mioepitel mengekspresikan cytokeratins basal (KRT5/6/14 +) dan / atau mioepitel
spidol (SMA, P63), kurangnya ESA (ESA-), dan tampaknya diperkaya untuk CD44 +, CD24lo sel.
Sangat mungkin bahwa sel-sel ini terus mengekspresikan TGFBR2, tetapi ini masih harus dibuktikan.
Salah satu faktor penentu fundamental dari proporsi sub-populasi ini berbeda dalam
normal atau jaringan kanker adalah rasio batang pembelahan sel yang menimbulkan putri sel induk
versus dibedakan progeni [174]. Kami mengusulkan bahwa paparan TGF mengarah ke pengayaan
populasi sel dengan + CD44 multipotent, CD24lo clonogenic / tumor sel yang memulai
mengekspresikan marker mesenchymal (EMT) [60], sedangkan perlakuan dengan reseptor kinase TGF
inhibitor menyebabkan pengayaan dengan CD44-, CD24 +, TGFBR2-non-clonogenic dibedakan
sel luminal [78]. Menariknya, beberapa kelompok telah menunjukkan bahwa TGF / TR-aku kinase /
Smad2 / 3 signalling ini diperlukan untuk menjaga sel-sel induk embrionik manusia di pluripotent
mereka,
negara tidak dibeda-bedakan [175.176], dan fungsi hilir dari jalur signaling Wnt,
yang terlibat dalam pemeliharaan sel batang pada jaringan yang berbeda, termasuk susu yang
kelenjar [177]. Jadi, kami mengusulkan model yang TGF sinyal merupakan penentu utama dari nasib
keturunan sel induk, dan nikmat-pembaharuan diri ke kolam sel induk dalam susu normal
kelenjar. Model ini memperkirakan bahwa aktivasi konstitutif TGF sinyal yang terkait dengan
kanker payudara invasif dan metastasis bisa berkontribusi untuk terus memperkaya kanker batang
sel kolam, sehingga secara tidak langsung meningkatkan potensi metastasis, resistensi obat dan miskin
pasien bertahan hidup. Dalam konteks ini, perlu dicatat bahwa EMT normal serta ganas
sel epitel manusia tampaknya terkait erat dengan keadaan sel induk [60].
Dilapiskan ke dinamika populasi ini dalam epitel kelenjar susu adalah
peran estrogen sistemik dan progestin dalam mengatur TGF signaling (lihat bagian "Ekstensif
cross-talk antara estrogen-dan jalur sinyal TGF "). The ER / PR-positif lumen
sel menanggapi estrogen dengan memproduksi faktor pertumbuhan mitogenic dan dengan menurunkan
TGF
produksi. model kami memprediksi bahwa kondisi ini akan mendukung komitmen sel induk
sel anakan menjadi lebih dibedakan sel nenek moyang. Selain itu, karena gen TGFBR2 adalah
transcriptionally dibungkam dalam sel anak lumen, ini akan lebih lanjut
mendukung ekspansi klonal mereka. Sebaliknya, anti-estrogen menginduksi TGF produksi, yang, bahkan

jika menghambat laju proliferasi sel induk, akan menguntungkan diri mereka atas komitmen
pembaharuan
untuk diferensiasi.
Pada tingkat biokimia, orang bisa membayangkan sebuah sirkuit yang mengatur pensinyalan estrogen
produksi dan sekresi (laten) TGF oleh sel ER-positif ke dalam kelenjar
mikro, yang kemudian menjadi diaktifkan pada permukaan sel CD44 + tetangga
sel, sehingga mendorong atau mempertahankan fenotipe sel induk, sementara, pada saat yang sama,
membatasi proliferasi dari populasi yang sama. Setelah kanker ini CD44 + sel batang istirahat
melalui penangkapan penghalang pertumbuhan TGF-mediated, kemampuan mereka untuk
mengaktifkan TGF laten melalui
CD44 dan MMPs akan memilih untuk ekspansi lanjutan kanker sel batang kolam oleh
membatasi diferensiasi ke sel lumen, dan, akibatnya, mempromosikan invasi,
diseminasi dan metastasis.
Dengan demikian, model kami memprediksi bahwa pengobatan kanker basal seperti dengan antagonis
mungkin TGF
anti-tumor efek dengan mengubah sel induk penduduk putatif ke dalam lumen, nonproliferating
(Dan, mungkin, non-metastasis), fenotipe (transisi mesenchymal-ke-epitel,
MET). Sebaliknya, para agen bisa memusuhi efek terapi anti-estrogen di
estrogen-tergantung lumen kanker. Namun, sekali sel-sel ini menjadi estrogen-independent
karena mereka melarikan diri dari tahanan pertumbuhan TGF-mediated, model kami menyediakan
alasan untuk
termasuk jalur TGF antagonis dalam program pengobatan. Masing-masing prediksi adalah
diuji dalam sistem model serta dalam uji klinis.
Norton dan Massagu [178] baru-baru ini diajukan hipotesis bahwa transisi dari epitel
sel kanker ke fenotipe mesenchymal motil (EMT) tidak hanya diperlukan untuk invasi dan
penyebaran ke situs jauh, tetapi juga dapat terjadi secara lokal dalam tumor primer dan yang
kapiler tidur. Daya tarik dari model ini adalah bahwa ia akan menjelaskan beberapa yang berbeda
karakteristik kanker, termasuk heterogenitas histologis dalam massa tumor primer,
perkembangan nodul satelit di sekitar tumor primer dan, dalam beberapa kasus, multifocality.
Dalam pengertian yang lebih luas, model ini menyiratkan metastasis yang merupakan proses yang
berkesinambungan yang dinamis dan memprediksi
bahwa metastasis primer sekunder dapat benih metastasis. Pertanyaan-pertanyaan ini saat ini telah
hasil eksperimen dan awal ditujukan muncul untuk memvalidasi hipotesis (Joan
Massagu, komunikasi pribadi). Mungkin yang paling penting adalah implikasi terapeutik
model ini. Secara umum diasumsikan bahwa, sekali metastasis telah dibentuk, agen yang
target proses diseminasi (EMT, sel migrasi, invasi, kolonisasi pada sekunder
situs) akan sedikit nilai klinis. Namun, jika hipotesis Norton-Massagu ternyata
harus benar, agen tersebut dapat memiliki nilai terapeutik lebih besar daripada umumnya percaya.
Dalam hal ini, antagonis jalur TGF mungkin merupakan yang pertama dari kelas baru ini agen
untuk menjalani evaluasi klinis.
TGF signal pada kanker payudara subtipe-Seperti disebutkan sebelumnya, Shipitsin et al. [78]
melaporkan bahwa TGF jalur signaling gen, khususnya TGFBR2, secara selektif diekspresikan
pada tumor yang terisolasi CD24lo sel CD44 +, dan transcriptionally dibungkam dalam sel CD44-CD24 +
populasi. Selain itu, peneliti ini melaporkan bahwa 15 TGF-diatur gen
(Termasuk CTGF,, COLIA1 FN1, SERPINE1, MMP9) yang paling kuat disajikan dalam CD44 +
tumor juga dikaitkan dengan kelangsungan hidup bebas diperpendek metastasis jauh [146]. Baru-baru
ini,
peneliti dari MSKCC menunjukkan bahwa gen gen 153 TGF respon tanda tangan
(TBRS) sangat disajikan dalam sekitar sepertiga dari primer kanker payudara manusia,
merata di seluruh himpunan bagian ER-ER-positif dan negatif [147]. Selain itu,
ekspresi ini TBRS pada kanker ER-negatif diprediksi kuat untuk pengembangan
metastasis paru-paru dan hasil yang buruk. Temuan-temuan ini sangat konsisten dengan
demonstrasi oleh Buck dkk. [145] bahwa kelangsungan hidup pasien dengan ER-negatif, tumor +
TGFR2secara signifikan lebih pendek dibandingkan dengan ER-negatif, TGFBR2-kanker. Sebaliknya,
ekspresi dari TBRS pada kanker ER-positif tidak mempengaruhi [hasil 147], dan juga tidak
ekspresi TGFBR2 [145].
Di institusi kita sendiri, Alexe et al. [179] baru-baru ini mengembangkan sebuah classifier yang sangat
kuat dari gen
ekspresi profil dari kanker payudara manusia menggunakan analisis komponen utama dan konsensus
ensemble clustering. Clustering diterapkan ke profil ekspresi konsisten membagi kanker payudara
sampel sepanjang split / + ER-ER, yang mungkin mengakibatkan kesalahan klasifikasi dari beberapa
sampel.
Hal ini terutama yang berkaitan dengan subset HER2-overexpressing, yang meliputi ERpositive
dan-negatif kasus. Untuk menghindari masalah ini, Alexe et al. [179] pertama
diidentifikasi tumor + HER2 berdasarkan co-amplifikasi dari tiga atau lebih dari gen terletak di
yang HER2/neu amplikon: HER2/neu, GRB7, STARD3, dan PPARB. Setelah memisahkan HER2-
positif dari sampel HER2-negatif, setiap set dianalisis secara terpisah oleh kepala sekolah
Analisis komponen dan clustering konsensus ensemble. Analisis ini tegas mengidentifikasi
total enam subtipe kanker payudara besar, yang meliputi dua himpunan bagian dari tumor HER2-positif,
dua himpunan bagian dari HER2 negatif, ER-negatif "basal-seperti" tumor, dan dua himpunan bagian dari
ERpositive,
HER2-negatif "lumen" tumor [179]. Menariknya, kelompok HER2-positif
dapat dengan mudah dibagi baik oleh profil ekspresi gen dan histopatologi menjadi dua yang sangat
himpunan bagian yang berbeda: HER2 (I) tumor mengandung menyusup limfositik berlimpah, sangat
mengekspresikan
tanda tangan gen limfosit-asosiasi, dan terkait dengan hasil klinis yang sangat baik.
Sebaliknya, HER2 (NI) subset tidak memiliki infiltrasi limfositik dan limfosit terkait
gen tanda tangan, dan berhubungan dengan reaksi desmoplastic kuat dan hasil klinis miskin.
Demikian pula, seperti basal-1 (Ba1) tumor subset berhubungan dengan interferon sebuah / interleukin
respon tanda tangan gen tidak ditemukan dalam subset Ba2, dan berkaitan dengan prognosis yang lebih
baik
Ba2 dari tumor. Kami kemudian mengajukan pertanyaan apakah 153-gen TBRS dijelaskan oleh Padua
et al. [147] (TBRSMSKCC) serta tanda tangan 92-gen serupa dikembangkan di kita sendiri
laboratorium [67] (TBRSCINJ) dikaitkan dengan kanker payudara subset tertentu. Seperti ditunjukkan
pada Gambar. 3B, yang TBRSMSKCC itu sangat positif terkait dengan tumor dalam HER2 yang (NI),
Ba2 dan LA1 subhimpunan. Hasil ini divalidasi di tiga independen publik
data kanker payudara ekspresi set dari pusat yang berbeda [147.180.181]. Selain itu,
TBRSCINJ memberikan hasil identik dengan yang dikembangkan oleh Padua et al. [147]. Kepala sekolah
perbedaan antara dua instrumen adalah bahwa TBRSMSKCC mencakup sejumlah besar
ESTs, sedangkan tanda tangan TBRSCINJ dikembangkan hanya menggunakan gen beranotasi, yang akan
memfasilitasi validasi klinis.
Hubungan antara ekspresi dan ketahanan hidup TBRSMSKCC dieksplorasi menggunakan
data dari pasien dengan penyakit kelenjar getah bening yang negatif, yang tidak menerima ajuvan
sistemik
terapi (Gambar 3C). Ekspresi dari sebuah TBRS dikaitkan dengan ketahanan hidup miskin.
Namun, dalam analisis subset, TBRS tidak berhubungan dengan perbedaan dalam ketahanan hidup
dalam lumen Sebuah subset, meskipun ada kecenderungan efek negatif dalam lumen
B subset. tren serupa ditemukan antara ekspresi TBRS dan kelangsungan hidup pada kedua basallike
kanker subhimpunan. Seperti dilaporkan sebelumnya Alexe et al. [179], pasien dengan HER2 (I) kanker
memiliki hasil signifikan lebih baik dibandingkan dengan HER2 (NI) kanker. Namun, di antara
HER2 (NI) kasus, ekspresi dari sebuah TBRS prediksi untuk bertahan hidup sangat miskin, sedangkan
kelangsungan hidup pasien tumor yang tidak mengekspresikan TBRS pada dasarnya bisa dibedakan
dari mereka dengan DIA (I) penyakit. Hasil ini menunjukkan bahwa aktivasi dari jalur TGF
sebagian besar rekening untuk prognosis pasien miskin dengan HER2 (NI) kanker payudara, dan bahwa
hal ini
subset tertentu dapat memperoleh manfaat tertentu dari pengobatan dengan antagonis jalur TGF.
Gagasan ini mudah dapat diuji dalam uji klinis.
Terlepas dari asosiasi mencolok kami menemukan antara TBRS dan kanker payudara
subtipe, orang harus hati-hati bagaimana seseorang menafsirkan pengamatan ini, sebagai biologis
makna dari suatu TBRS positif masih harus ditentukan. Sebuah asosiasi positif TBRS dengan kanker
payudara mungkin mencerminkan ketergantungan tumor pada jalur signaling (oleh, misalnya,
mengemudi invasi dan / atau metastasis), khususnya di HER2 (NI) dan, mungkin, Ba2
subclusters. Di sisi lain, ekspresi TBRS dengan prognosis yang baik tumor lumen A
dapat menunjukkan bahwa, dalam konteks ER-positif, mungkin TGFBR2-sel kanker,
ekspresi TBRS mencerminkan respons yang kuat dari stroma, sel inang kebal dan lainnya
TGF . Dalam konteks ini, menarik bahwa lumen-jenis karsinoma mammae PyVmT-driven
yang berkembang pada latar belakang TGFBR2null genetik secara khusus terkait dengan kuat
kemokin-driven sel kekebalan menyusup [53,55]. Dengan demikian, dalam konteks kanker ER-negatif,
ungkapan TBRS mungkin merupakan tanda-bio yang memprediksi untuk respon terhadap TGF
jalur lawan, sementara, untuk kanker ER-positif, pengobatan dengan target agen TGF
dapat mempercepat pertumbuhan tumor dan merugikan pasien. Pertanyaan kritis ini akan
harus hati-hati ditangani dalam mendatang uji klinis dari agen di kanker payudara dan
penyakit lainnya.
Terapi studi praklinis antagonis TGF melawan kanker payudara
in vivo
TGF antagonis dalam pembangunan jalur klinis
Dua pendekatan untuk penargetan TGF / Smad signaling berada dalam tahap awal pengembangan
klinis
(Tabel 1). Ini termasuk (1) netralisasi ligan TGF dan (2) selektif penghambatan
TGF reseptor kinase. Ekstensif praklinis studi di sejumlah syngeneic yang berbeda serta
sebagai model xenograft kanker payudara metastatik menunjukkan bahwa kedua jenis agen telah serupa
sifat anti-metastasis terhadap metastasis tulang dan paru-paru [126].
Eksperimental Model
Mengingat TGF 's pleiotropic efek pada kedua sel tumor dan sel inang, dan peran dalam dugaan
tumor metastasis, penilaian rinci efek anti-tumor antagonis TGF hanya dapat
dicapai dengan menggunakan model kanker payudara metastatik (Tabel 2). Ini terbatas ini
penelitian untuk beberapa model garis sel, termasuk sel kanker payudara metastatik murin
baris 4T1 (Balb / C), EMT6 (Balb / C) dan R3T (129S1), dan manusia metastatik MDAMB-
231, MDA-MB-435, MCF10ACA1A dan baris sel MX-1 yang diinokulasi ke dalam
imunodefisiensi tikus. Perlu dicatat bahwa masing-masing baris mewakili sel socalled
basal-seperti kanker payudara, karena mereka ER-negatif, PR-negatif, HER2/neu-negative,
CD24lo, dan mengekspresikan CD44 serta penanda mesenchymal [160.163.182.183]. Satu-satunya
kanker payudara model spontan yang efisien menimbulkan metastasis adalah MMTV /
PyVmT mouse model transgenik [184185]. Berbeda dengan baris seperti karsinoma sel basal,
karsinoma yang muncul di latar belakang PyVmT telah ditunjukkan untuk berbagi banyak fitur
kanker payudara jenis manusia lumen, meskipun mereka tidak mengungkapkan ER [56]. Sebuah
membedakan
fitur tumor ini adalah ekspresi tinggi XBP1, yang merupakan lumen manusia tumordefining
gen. Tumor ini juga menyatakan gen ketat persimpangan komponen struktural,
termasuk Occludin, Tight Junction Protein 2, dan 3 E-cadherin (CDH1) dan lumen
keratins KRT8 dan -18.
Dalam hal tes metastasis, beberapa penelitian telah digunakan tes metastasis spontan
di mana sel-sel yang disuntikkan orthotopically ke fatpad susu dan metastasis berasal di
situs utama injeksi, sementara yang lain telah menggunakan tes metastasis eksperimental, di mana
sel tumor yang disuntikkan langsung ke baik sirkulasi vena atau arteri untuk menimbulkan
paru atau ekstrapulmoner metastasis, masing-masing. Akhirnya, di sebagian besar praklinis
penelitian yang dilakukan dan dilaporkan sampai saat ini, pengobatan dengan antagonis TGF segera
dimulai
setelah inokulasi sel tumor. Adalah penting untuk menyadari bahwa, dalam kondisi, sulit
untuk menganggap efek anti-metastasis diamati baik penghambatan tumor micrometastatic
koloni pembentukan atau penekanan pertumbuhan lesi metastasis.

agen tunggal aktivitas antagonis TGF

TGF menetralkan antibodi-GC1008 (kappa IgG4 manusia, Genzyme, Inc), 1D11
(Mouse IgG1), dan 2G7 (mouse IgG2b, Genentech ) semua afinitas tinggi monoklonal
mampu menetralkan ketiga isoform mamalia utama TGF (yaitu, 1, 2, dan antibodi
3). TGF sangat kekal antara spesies, dan keduanya senyawa klinis pada manusia,
GC1008, dan rekan-rekan murin nya, 1D11 dan 2G7, telah sama-penetralisir TGF
properti. Namun, 1D11 dan 2G7 tidak imunogenik dalam mouse, dan properti ini
izin berkepanjangan administrasi untuk tikus.
Efek anti-tumor dari 1D11 murin dan 2G7 antibodi telah diuji di beberapa
berbeda praklinis model kanker syngeneic dan xenograft susu (Tabel 2). Arteaga et
al. [186] adalah yang pertama menunjukkan bahwa penyuntikan intraperitoneal 2G7 (Genentech ),
ditekan
intra-abdomen tumor pertumbuhan serta metastasis paru MDA-MB-231 payudara manusia
sel kanker yang telah diinokulasi secara intraperitoneal. Carano et al. [112] (US Paten
2005/0276802 A1) menunjukkan bahwa pengobatan mencit dengan 2G7 berikut susu fatpad
inokulasi sel kanker 4T1 syngeneic mengurangi volume metastasis paru-paru oleh ~ 50%.
Menariknya, pengobatan 2G7 dikaitkan dengan normalisasi plasma VEGF tingkat,
menyarankan kemungkinan bahwa efek yang dimediasi 2G7s setidaknya sebagian melalui penghambatan

angiogenesis. Selain itu, pengobatan karsinoma mammae timbul secara spontan di

PyVmT tikus transgenik dengan 2G7 juga menyebabkan keterlambatan signifikan pertumbuhan tumor
[112] (AS
Paten 2005/0276802 A1). Dalam percobaan yang dilaporkan oleh Pinkas et al. [187], 4T1 susu
sel karsinoma diinokulasi dengan injeksi intrakardial kiri ke ventrikel menimbulkan tulang
metastasis. Pengobatan dengan antibodi anti-TGF 1D11 menunjukkan penurunan yang signifikan
dalam jumlah lesi litik tulang serta manfaat kelangsungan hidup [187]. Menggunakan sel 4T1 dalam
assay paru metastasis eksperimental, Nam et al. menunjukkan bahwa dengan perlakuan secara signifikan
1D11
ditekan baik jumlah dan ukuran tumor metastasis ke paru-paru [188-190]. Secara keseluruhan, dalam
syngeneic model ini, efek terapi dilihat dengan antibodi penetralisir TGF
terhadap metastasis tulang atau paru-paru muncul dengan urutan yang sama besarnya.
Di laboratorium kita sendiri, kita telah melakukan beberapa eksperimen pengobatan di vivo untuk
menilai
efektivitas dari antibodi monoklonal murine anti-TGF, 1D11 di metastasis eksperimental
model menggunakan tulang-tropis serta paru-tropik MDA-MB-231 sel kanker payudara manusia (Ge
et al. naskah dalam persiapan). Untuk tujuan ini, kami menggunakan sublines dari basal sel-seperti
MDAMB-
231 sel kanker payudara manusia yang bermetastasis ke paru-paru preferentially
(MDA-231-4175TR) atau tulang (MDA-231-SCP2TR dan 2860TR). Pengobatan dengan 1D11 itu
mampu memblokir fosforilasi TGF-diinduksi dari reseptor Smads terkait, Smad 2 dan
-3, Di masing-masing baris sel. Sementara 1D11 tidak berpengaruh pada pertumbuhan sel in vitro, hal itu
menghambat
TGF-merangsang migrasi dan tumor sel-invasiveness ke Matrigel . Untuk menentukan
efek 1D11 pada metastasis tulang-atau paru-paru, sel yang diinokulasi pada tikus athymic telanjang, dan
pengobatan dengan 1D-11 telah dimulai pada hari berikutnya. Pengobatan dengan antibodi 1D-11
secara signifikan mengurangi beban metastasis MDA-231-SCP2TR atau 2860TR-diturunkan
tulang serta metastasis MDA-231-4175TR-diturunkan ke paru-paru oleh ~ 40%. Secara keseluruhan, ini
Hasil ini mendukung gagasan bahwa TGF memainkan peran di kedua metastasis tulang dan paru-paru
basallike
kanker payudara, dan yang menghambat sinyal TGF menghasilkan efek terapeutik
independen dari jaringan tropisme-sel metastatik.
Larut fusi-reseptor TGF Studi konstruksi menggunakan tikus transgenik mengekspresikan
reseptor TR-II larut: Fc fusion protein (Fc: TRII) didorong oleh promotor MMTV-LTR /
enhancer telah menunjukkan aktivitas anti-metastatik tanpa meningkatkan tumor primer
insiden [45]. Ini menunjukkan bahwa Fc: TR-II selektif mungkin menetralkan tidak diinginkan
TGF terkait dengan metastasis, sedangkan fungsi hemat homeostatik dari TGF di normal
jaringan. Selanjutnya, Muraoka et al. [191] melaporkan bahwa pemberian sistemik Fc: TRII untuk
MMTV / tikus transgenik PyVmT menghambat pengembangan metastasis paru-paru. Fc: TRII juga
menghambat perkembangan paru-paru metastasis dari tumor EMT 4T1 dan mouse-6 susu
diinokulasi ke dalam susu fatpad dari syngeneic BALB / c tikus.
Sepanjang garis yang sama, Bandyopadhyay et al. [192] meneliti apakah ekspresi dipotong
domain ekstraselular larut dari reseptor tipe III TGF (sTR-III) mungkin memusuhi
tumor-mempromosikan kegiatan TGF oleh eksekusi TGF aktif yang dihasilkan oleh sel-sel kanker.
AC medium MDA-MB-231 sel kanker payudara manusia direkayasa untuk menghasilkan
sTR-III efektif dinetralkan aktif TGF1 dan -2. Selain itu, kejadian tumor dan pertumbuhan
tingkat sTR-III-mengungkapkan MDA-MB-231 klon pada tikus telanjang athymic secara signifikan
lebih rendah dibandingkan sel kontrol. Selain itu, sel kontrol sedangkan orthotopically diinokulasi
memberikan
menimbulkan metastasis paru spontan, tak satu pun dari sTR-III-tikus mengungkapkan sel-diinokulasi
metastasis paru dikembangkan [192]. Hasil yang sama diperoleh menggunakan kedua payudara manusia
line karsinoma sel, MDA-MB-435 [193]. Selanjutnya, Matrigel tes plug menunjukkan bahwa
volume darah di Matrigel plugs mengandung sTR-III-sel mengungkapkan secara nyata
lebih rendah dari yang mengandung sel-sel kontrol masing-masing, dan ini berkorelasi dengan
penurunan
dalam jumlah microvessel. Selain itu, perawatan sel endotel manusia dengan rekombinan
sTR-III secara signifikan menghambat kemampuan mereka untuk membentuk struktur web kapiler di
Matrigel. Ini
Hasil penelitian menunjukkan bahwa penekanan tumor sTR-III-dimediasi mungkin karena, setidaknya
sebagian, karena
penghambatan angiogenesis [194]. Secara keseluruhan, penelitian ini menunjukkan bahwa larut
reseptor selektif dapat menetralkan TGF tidak diinginkan terkait dengan metastasis, sedangkan
hemat peran peraturan dari TGF pada jaringan normal.
TGF rasa anti-oligonucleotides-Anti-akal oligonucleotides terhadap TGF
ligan telah ditunjukkan untuk menimbulkan regresi tumor di sejumlah syngeneic berbeda dalam vivo
tumor model, ternyata dengan meningkatkan anti-tumor-sel T sitotoksik aktivitas. Misalnya, Taman
et al. [195] TGF1 antisense disajikan secara stabil di EMT6 sel tumor mammae murin menggunakan
vektor retroviral. Sel-sel EMT6as-TGF1 dikeluarkan kurang dari setengah jumlah TGF1
diproduksi oleh sel tumor transduced dengan vektor kontrol, dan medium kultur dari sel-sel ini
juga menunjukkan penurunan kapasitas untuk menghambat alloantigen-spesifik tanggapan sel T
sitotoksik
in vitro. Selain itu, pertumbuhan tumor pada mencit disuntik dengan sel tumor EMT6as-TGF1 adalah
menghambat dibandingkan dengan mencit disuntik dengan sel tumor kontrol. Hasil ini menunjukkan
bahwa
ekspresi TGF1 antisense oleh sel EMT6 transduced menurun tumorigenicity mereka,
mungkin dengan menghilangkan penekanan kekebalan. Sebuah oligonukleotida anti-akal diarahkan
terhadap TGF2, AP-12.009, saat ini sedang menjalani uji klinis untuk pasien dengan ganas
gliomas dan kanker pankreas [196-199].
Kimia kelas kimia TR kinase inhibitor-Beberapa TR kinase yang berbeda
inhibitor telah dikembangkan dan telah ditunjukkan untuk memblokir TGF-induced Smad
fosforilasi, reporter gen aktivasi, dan tanggapan selular sel epitel payudara
in vitro, termasuk penangkapan dan EMT siklus sel, pada konsentrasi submicromolar [14.200]. Ini
serin-treonin kinase inhibitor mengikat ke situs ATP pengikatan TR-aku kinase dan mungkin
menjaga enzim dalam konfigurasi aktif nya [201]. Kami telah memeriksa efek dari
oral bio-tersedia senyawa, SD-208 (Scios, Inc), pada susu mouse metastatik
karsinoma sel baris (R3T dan 4T1) [83]. Ketika orthotopically disuntikkan ke mouse
fatpad susu, baik R3T dan sel 4T1 bentuk tumor primer yang efisien bermetastasis ke
paru-paru dan organ lainnya. Sampai dengan 60 mg / kg SD-208 dapat dikelola dengan aman oleh gavage
setiap hari
sampai 84 hari. Selain itu, pengobatan R3T syngeneic atau 4T1 tikus dengan tumor-bearing
secara oral SD-208 menghambat pertumbuhan tumor primer serta jumlah dan ukuran
metastasis paru-paru. Sebaliknya, SD-208 gagal untuk menghambat pertumbuhan tumor atau metastasis
di R3T
athymic nude tikus. Selain itu, in vitro anti-4T1 sel-sel T sitotoksik tanggapan dari splenocytes
dari hewan obat-perlakuan ditingkatkan dibandingkan dengan sel dari hewan kontrol. Di
Selain itu, SD-208 pengobatan mengakibatkan penurunan angiogenesis tumor. Selain itu, SD-208 serta
lainnya TR-aku kinase inhibitor juga mampu menghambat cancerderived payudara manusia
tulang dan paru-paru metastasis pada tikus telanjang di vivo [202203], menunjukkan bahwa yang
terapeutik
efek dapat dikaitkan, setidaknya sebagian, untuk tindakan di sel tumor sendiri atau non-imun
sel host. Dengan demikian, efek terapi SD-208s dapat dikaitkan, sebagian, untuk meningkatkan
antitumor
T-sel sitotoksik aktivitas, angiogenesis tumor dan efek menghambat sel-otonom di
tumor sel sendiri.
Para peneliti di Eli Lilly & Co, baru-baru ini mengembangkan serangkaian inhibitor kimia
TR-I dan II kinase TR-domain pada backbone pyrazole [128,204-209]. Biokimia dan
analisis selular dikonfirmasi sifat yang sangat selektif dari senyawa-senyawa, termasuk
klinis kandidat, LY2157299 (saat ini dalam tahap I uji klinis). Selain itu, senyawa ini
menunjukkan aktivitas anti tumor in vivo terhadap 4T1 mouse dan-1 MX karsinoma mammae manusia
[210]. Plasma tingkat LY2157299, fraksi Smad2 terfosforilasi dan -3 (pSmad) di
tumor jaringan, dan ukuran tumor yang digunakan untuk menurunkan semi-mekanis
pharmacokineticpharmacodynamic
model kerja obat. tingkat obat plasma terkait dengan intratumoral pSmad
dephosphorylation, dan ini, pada gilirannya, untuk tumor hambatan pertumbuhan [210]. Dalam upaya
untuk memperluas
struktur-aktivitas hubungan dari domain quinoline dari seri dihydropyrrolopyrazole, ini
peneliti yang sama baru-baru ini mengembangkan suatu senyawa secara lisan bioavailable kedua dengan

menunjukkan keampuhan antitumor melawan MX-1 xenografts sub-kulit, LY2109761, yang

merupakan perwakilan dari TR inhibitor kinase yang memiliki aktivitas terhadap baik TR-I dan-II
reseptor [209]. Untuk menyelidiki kemungkinan klinis utilitas LY2109761 di metastatik
kanker payudara, kami memeriksa dampaknya pada metastasis eksperimental dari tulang dan paru-
tropik
sublines dari basal sel-seperti MDA-MB-231 sel kanker payudara manusia. LY2109761 mampu
untuk memblokir fosforilasi TGF-diinduksi dari reseptor-Smads yang terkait, dan untuk membujuk
dephosphorylation dari Smads diaktifkan. Sementara pelabuhan-tergantung pertumbuhan sel tidak
terpengaruh, stimulasi in vitro TGF migrasi yang dimediasi sel dan invasi dihambat oleh
LY2109761. Awal satu hari setelah injeksi tumor sel, mencit diinokulasi dengan lungtropic
MDA-231-4175TR atau dengan sel tulang-tropik SCP2TR diobati dengan LY2109761
dua kali sehari oleh gavage selama 5 minggu. pengobatan LY2109761 mengurangi beban-paru juga
sebagai metastasis tulang oleh ~ 40%.
Bandyopadhyay et al. [202] baru-baru ini melaporkan efektivitas TGF lain pyrazole berbasis
tipe I reseptor kinase inhibitor (Biogen IDEC HTS466284, Eli Lilly LY364947), pada awal
sistemik tulang dan paru-paru metastasis yang sangat metastasis payudara MDA-MB-435-FL manusia
karsinoma sel. Sistemik administrasi inhibitor kinase melalui injeksi intraperitoneal
efektif mengurangi jumlah dan ukuran paru-paru metastasis di kedua orthotopic dan eksperimental
metastasis tes tanpa mempengaruhi pertumbuhan tumor primer. Selain itu, kinase inhibitor
pengobatan mengurangi kejadian metastasis tulang yang tersebar luas awal [202]. Seiring serupa
baris, Ehata et al. [211] baru-baru ini meneliti efek dari jenis novel TGF aku reseptor kinase
inhibitor, Ki26894, pada tulang metastasis dari payudara yang sangat tropis tulang-MDA-MB-231-D
manusia
sel kanker. Pengobatan dengan Ki26894 diblokir TGF signal pada sel MDA-MB-231-D, sebagai
terdeteksi oleh penindasan fosforilasi Smad2 dan inhibisi target TGF-responsif
Aktivitas gen. Selain itu, penurunan motilitas Ki26894 dan invasi MDA-MB-231-
diinduksi oleh sel D TGF in vitro. Radiografi sinar-X menunjukkan bahwa pengobatan sistemik Ki26894
dimulai 1 hari sebelum inokulasi sel MDA-MB-231-D ke dalam ventrikel kiri BALB /
nu c tikus nu / wanita metastasis tulang mengakibatkan penurunan dan kelangsungan hidup lama
dibandingkan
untuk tikus kendaraan yang diobati. Secara keseluruhan, studi-studi ini menunjukkan bahwa TGF
berperan dalam kedua boneand
paru metastasis kanker payudara basal-suka, dan yang menghambat sinyal TGF hasil di
efek terapeutik independen dari jaringan tropisme-sel metastatik. Selain itu,
menetralisir antibodi, 1D11 (bagian "antibodi TGF menetralisir"), dan TR kimia
inhibitor kinase, LY2109761, tampaknya menghambat metastasis untuk gelar yang sama, di kedua
menyebabkan
pengurangan sekitar sepertiga menjadi setengah beban metastasis. Singkatnya, studi-studi praklinis telah
memberikan bukti yang meyakinkan menargetkan
TGF jalur baik menggunakan perangkap ligan reseptor kinase inhibitor dapat menghambat kedua awal
paru-paru dan metastasis tulang di berbagai syngeneic serta kanker payudara allogeneic
model dan menyarankan bahwa target utama adalah potensi clonogenic metastasis. Selain itu, dalam
vivo aktivitas sel tertentu terhadap garis tampaknya berkorelasi dengan in vitro mesenchymal
fenotipe yang TGF EMT drive, sel motilitas dan invasi sel. Selain itu, baik
efek autokrin dari TGF pada sel tumor diri sendiri maupun dampaknya pada sel host
mungkin berkontribusi terhadap aktivitas terapeutik TGF antagonis in vivo. Temuan ini
konsisten dengan konsep yang TGF isyarat memainkan peran yang berbeda dalam kompleks
interaksi antara tumor dan sel inang yang merupakan ceruk pra-metastasis. Signaling
jalur tampaknya mendasar diubah pada sel tumor sedemikian rupa sehingga sel-sel tumor
menginterpretasikan sinyal masuk sebagai pro-invasif, sementara mereka tidak lagi menghambat
pertumbuhan. Ini
hasil dalam sekresi TGF-induced protein metastasis-effector, yang mengerahkan prometastatic
tindakan pada host mikro. Selain itu, kompartemen stroma
menjadi diubah ("aktif") menanggapi TGF, dan ini juga jawaban stroma
memberikan kontribusi untuk mempersiapkan niche metastasis untuk lebih mendukung kelangsungan
hidup sel tumor. Dengan demikian,
kaya TGF bioaktif akan memberikan tekanan selektif yang menguntungkan mikro
pertumbuhan dan invasi sel tumor dengan fenotipe tertentu.
Kombinasi terapi pendekatan
Kombinasi dengan agen sitotoksik atau radiasi pengion-Beberapa studi menunjukkan
peran dari TGF dalam mediasi resistensi terhadap agen DNA merusak. Jadi, Ohmori et al. [212]
pertama melaporkan bahwa pengobatan MDA-MB-231 sferoid sel tumor payudara manusia tumbuh di
tiga dimensi budaya menggunakan murin 2G7 netralisasi antibodi anti-TGF potentiated
cisplatin (CDDP)-mediated sitotoksisitas, terkait dengan penurunan lebih besar dari sepuluh kali lipat
CDDP IC50. Hasil ini menunjukkan bahwa sel tumor TGF terkait dapat melindungi sel dari
kerusakan DNA dan bahwa pemberian inhibitor TGF postchemotherapy dapat memfasilitasi
kemajuan luar G1 / S, berpotensi meningkatkan efektivitas kemoterapi sitotoksik. Sepanjang
baris yang sama, Teicher et al. [213] putatif memeriksa peran dari TGF di in vivo resistensi
oleh administrasi TGF-menetralisir antibodi untuk hewan bantalan EMT-6 susu
karsinoma atau agennya alkylating tahan sublines, EMT-6/CTX atau EMT-6/CDDP. Pengobatan
hewan tumor-bantalan dengan antibodi netralisasi 2G7 pan-TGF oleh intraperitoneal
injeksi setiap hari pada hari 0-8 pasca-implantasi sel tumor meningkatkan sensitivitas orangtua
EMT-6 tumor untuk siklofosfamid (CTX) dan CDDP dan nyata meningkatkan sensitivitas
dari tumor EMT-6/CTX untuk CTX dan tumor EMT6/CDDP untuk CDDP, sebagaimana ditentukan oleh
mantan
kelangsungan hidup sel tes in vivo. Hewan menanggung EMT-6/CTX dan tumor EMT-6/CDDP telah
serum lebih tinggi dibanding kontrol tingkat laktat atau orangtua EMT-6 binatang tumor-bearing, yang
dikurangi dengan rejimen anti-TGF, menyarankan TGF yang mungkin berperan dalam mengatur
autophagy. Dengan demikian, pengobatan dengan antibodi penetralisir TGF-dipulihkan sensitivitas obat
di
alkylating tumor agen-tahan, mengubah baik tumor dan metabolik negara tuan rumah.
Penyidik di Genzyme, Inc juga telah memeriksa efek anti-tumor dari TGF-pan
menetralisir antibodi, 1D11, dalam kombinasi dengan chemotherapeutics umum terhadap berbagai
kanker mammae model. Kombinasi 1D11 dengan CDDP menghasilkan jangka panjang
selamat di murin payudara kanker tulang metastasis eksperimental 4T1 assay. Baru-baru ini,
ini peneliti yang sama menunjukkan setidaknya efek dosis-tergantung aditif 1D11 terhadap
beberapa tumor xenografts manusia (termasuk payudara dan sel ginjal) bila dikombinasikan dengan
varietas
agen sitotoksik, termasuk paclitaxel, CDDP, doxorubicin, atau CTX. Demikian pula, para ilmuwan di
Genentech telah menunjukkan bahwa tikus TGF anti-antibodi monoklonal, 2G7, potentiates yang
keberhasilan docetaxel dalam tes 4T1 metastasis paru spontan [112] (US Paten
2005/0276802 A1). Bandyopadhyay et al. [214] menentukan apakah keberhasilan itu doksorubisin di
hambat
pertumbuhan tumor dan metastasis paru dapat ditingkatkan dengan perlakuan simultan dengan
TGF jenis pyrazole berbasis aku reseptor kinase inhibitor (Biogen IDEC HTS466284, Eli Lilly
LY364947). Dalam studi ini, kanker payudara murin sel 4T1 diinokulasi ke kedua inguinalis
bantalan lemak susu dari mencit Balb / c. Pengobatan dengan doxorubicin dengan atau tanpa inhibitor
kinase
dimulai baik dalam waktu 2 hari inokulasi sel tumor atau sekali rata-rata volume tumor
mencapai 60-70 mm3. Hasil dari kedua kelompok eksperimen menunjukkan bahwa, sementara TRI
inhibitor saja gagal untuk menghambat pertumbuhan tumor, itu doksorubisin ditingkatkan secara
signifikan's antitumor
kegiatan. Analisis metastasis paru dengan protokol perawatan dini mengungkapkan yang luar biasa
pengurangan jumlah metastasis paru-paru setelah pengobatan kombinasi dibandingkan dengan
baik kendaraan atau doxorubicin sendirian. Sebaliknya, apabila pengobatan dimulai setelah
munculnya tumor teraba, tidak ada perbedaan yang signifikan dalam jumlah paru-paru
metastasis antara kelompok perlakuan dan kontrol placebo, menunjukkan bahwa TGF memainkan nya
Kolonisasi peran utama metastasis awal daripada mengendalikan pertumbuhan macrometastases.
Dari sudut pandang mekanistik, telah dikenal untuk beberapa waktu bahwa radiasi pengion adalah
inducer ampuh TGF aktivasi dalam jaringan normal dan neoplastik [215]. Pengion radiationinduced
kerusakan DNA selular memunculkan sebuah program pengendalian kerusakan dikoordinasikan oleh
kinase
aktivitas protein ATM yang TGF diperlukan [24]. Baru-baru ini, Kirshner et al. [22]
melaporkan bahwa TGF menghambat sinyal di sel-sel epitel susu menggunakan bahan kimia TR-aku
reseptor kinase inhibitor dilemahkan autophosphorylation ATM dan secara signifikan mengurangi nya
aktivitas kinase, sambil menambahkan TGF1 dipulihkan kembali ATM fungsional dan hilir DNA
kerusakan tanggapan. Penelitian-penelitian telah menemukan link aktivasi kritis antara TGF1
dalam mikro dan ATM, yang mengarahkan respon sel epitel stres genotoksik
dan, secara tidak langsung, jaringan integritas. Dengan demikian, selain perannya dalam kontrol siklus sel
homeostatik
dan kelangsungan hidup, TGF1 memainkan peran yang kompleks dalam mengatur respon terhadap
stres genotoksik, yang
kegagalan yang dapat memberikan kontribusi pada perkembangan kanker. Sebaliknya, menghambat
TGF
dapat digunakan untuk keuntungan kita dalam terapi kanker, sebagai agen ini mungkin peka tumor DNA
kerusakan dan meningkatkan kematian sel [25].
Dukungan untuk konsep ini baru-baru ini disediakan oleh Biswas et al. [23]. Menggunakan MMTV
tersebut /
model PyVmT transgenik kanker payudara metastatik, peneliti ini menunjukkan bahwa
administrasi radiasi pengion (atau doxorubicin) meningkatkan sirkulasi tingkat TGF1 sebagai
serta jumlah beredar metastasis sel tumor dan paru-paru. Efek ini telah dibatalkan
oleh administrasi antibodi pan-TGF menetralisir, 2G7. Beredar PyVmT-mengungkapkan
sel tumor tidak tumbuh ex vivo di hadapan antibodi TGF, menunjukkan bahwa autokrin
TGF memberikan sinyal untuk kelangsungan hidup sel-sel ini. radiasi pengionan gagal untuk
meningkatkan paru
bantalan metastasis tumor pada tikus yang tidak memiliki reseptor TGFBR2, menunjukkan bahwa
Peningkatan ini disebabkan metastasis, setidaknya sebagian, untuk efek sel-otonomi TGF pada
sel kanker itu sendiri. Data ini berimplikasi TGF diinduksi oleh radiasi pengion atau sitotoksik
kemoterapi sebagai sinyal pro-metastasis sel tumor dan memberikan alasan lebih lanjut bagi
simultan penggunaan agen DNA merusak dalam kombinasi dengan TGF inhibitor untuk menekan
pertumbuhan dan metastasis tumor paru-paru.
Kombinasi dengan immunotherapy-Meskipun studi praklinis TGF
antagonis dalam model kanker mammae syngeneic telah menunjukkan kemampuan mereka untuk
merangsang
anti-tumor kekebalan, itu sedikit mengherankan bahwa telah dilaporkan dalam hal kombinasi
immunotherapy [216]. Kobie et al. [217] menunjukkan bahwa paparan TGF menghambat kemampuan
sel dendritik untuk menyajikan antigen, merangsang tumor-peka limfosit T, dan bermigrasi ke
kelenjar getah bening pengeringan. Sebaliknya, netralisasi TGF menggunakan-pan-TGF menetralkan
2G7 antibodi monoklonal meningkatkan kemampuan vaksin berbasis sel dendritik menghambat
pertumbuhan tumor mammae didirikan murin 4T1. Pengobatan tumor 4T1 transduced dengan
sebuah gen antisense TGF1 (4T1-AST) dengan kombinasi sel dendritik dan 2G7 antibodi monoklonal
menghambat pertumbuhan tumor dan menghasilkan regresi lengkap tumor di
40% dari tikus. Hasil ini menunjukkan bahwa netralisasi TGF dalam tumor-bearing
tikus secara dramatis meningkatkan efektivitas vaksin berbasis sel dendritik. Jika hasil ini dapat
divalidasi dalam sistem model lain, pendekatan ini harus dipertimbangkan untuk klinis
pembangunan.
Kombinasi dengan oncolytic dkk virus-Seth. [218] baru-baru ini mengusulkan sebuah novel
pendekatan untuk terapi kanker gen di mana oncolytic efek dari infeksi adenoviral
vektor digabungkan dengan ekspresi selektif protein fusi larut terdiri dari jenis
II TGF reseptor domain II ekstraseluler dan bagian Fc dari IgG (Fc: TRII) memusuhi
TGF aktif dalam lingkungan mikro tumor. Sebuah oncolytic adenovirus mengekspresikan FC: TRII,
dibangun oleh rekombinasi homolog. Infeksi MDA-MB-231 dan MCF-7
sel kanker payudara manusia dengan virus ini diproduksi FC: TRII, yang dirilis ke
menengah. AC medium yang mengandung Fc: TRII terikat TGF1 dan menghambat TGF-
tergantung turunan dalam sel target. Infeksi MDA-MB-231, MCF-7, dan 76NE manusia
sel-sel kanker payudara dengan adenovirus menyebabkan tingginya tingkat replikasi virus, sebanding
dengan yang virus wild type, sementara tidak ada replikasi non-proliferasi sel-sel normal.
Langsung suntikan virus ke MDA-MB-231 karsinoma payudara manusia xenografts disebabkan tumor
regresi di lebih dari 85% dari binatang [218]. Dalam studi lanjut di mana Fc: TRII cDNA
diklon ke vektor adenoviral persyaratan mereplikasi menunjukkan bahwa adalah mungkin untuk
membangun sebuah virus oncolytic mengungkapkan FC: TRII, di mana kedua replikasi virus dan gen
ekspresi tetap utuh, dan yang mempertahankan aktivitas oncolytic dalam sebuah xenograft tumor
manusia
model, menunjukkan bahwa hal itu dapat dikembangkan sebagai agen antikanker potensial [219].
Kombinasi dengan antagonis lainnya onkogenik-Beberapa jalur yang berbeda
mouse model genetik kanker payudara telah menunjukkan suatu sinergi nyata antara
yang TGF sinyal jalur dan jalur pertumbuhan faktor dalam berkendara metastasis (dirangkum
dalam bagian "Kerjasama antara TGF dan aktivasi gen ras di driving kanker payudara
progresi "). Studi ini memberikan alasan yang kuat untuk menguji efek terapeutik
kombinasi dari TGF agen obat yang ditargetkan dengan target HER2/neu atau isyarat EGF
jalur. Namun, ada penelitian praklinis di sepanjang jalur tersebut belum dilaporkan.
Sebuah badan besar bukti eksperimental dan klinis mendukung gagasan bahwa terapeutik
efek terapi antiestrogen ditengahi, setidaknya sebagian, oleh TGF (lihat bagian "Ekstensif
cross-talk antara estrogen-dan jalur sinyal TGF "). Dengan demikian, dalam konteks ini, orang akan
memprediksi bahwa terapi kombinasi antagonis jalur TGF dengan anti-estrogen akan
menjadi antagonis. Di sisi lain, setelah kanker payudara telah menjadi resisten terhadap anti-estrogen
dan / atau estrogen-independen, mungkin rasional untuk menggabungkan dua modalitas. Gagasan ini
didukung oleh penelitian awal oleh Arteaga et al. di mana resistensi tamoxifen bisa diatasi
oleh pengobatan dengan TGF netralisasi antibodi [100]. Tamoxifen paradoks dirangsang
proliferasi varian tamoxifen-tahan LCC2 dari MCF7 sel kanker payudara manusia
(MCF7/LCC2) in vitro, dan ini tidak terpengaruh oleh antibodi penetralisir pan-TGF, 2G7.
Namun, pengobatan dengan tamoxifen menyebabkan percepatan pertumbuhan xenograft MCF7/LCC2
tumor pada tikus telanjang, dan, dalam hal ini, penambahan 2G7 pertumbuhan disebabkan
penangkapan lengkap. Ini
pembalikan resistensi tamoxifen in vivo oleh 2G7 tidak terjadi dalam krem / tikus telanjang, yang kurang
alam-fungsi sel pembunuh, menunjukkan bahwa mekanisme kekebalan tubuh mungkin terlibat dalam
efek antitumor. Konsisten dengan ini, TGF2 antisense oligodeoxynucleotides meningkatkan
sensitivitas sel MCF7/LCC2 pada sel-sel pembunuh alami di hadapan tamoxifen. Selain itu,
tamoxifen tumor MCF7/LCC1 sensitif yang nyata lebih sensitif terhadap tamoxifen di alam
pembunuh-aktif dari pada tikus kekurangan. Data-data ini mendukung pernyataan bahwa sel pembunuh
alami host
fungsi menengahi, sebagian, efek antitumor dari tamoxifen dan TGF2 yang bisa membatalkan ini
mekanisme, sehingga memberikan kontribusi untuk tamoxifen [resistensi 100]. Jika temuan ini dapat
dikonfirmasikan dan divalidasi dalam sistem model lain, percobaan kombinasi dari anti-estrogen dan
TGF
antagonis dapat dianggap dalam pengaturan klinis resistensi anti-estrogen.
Mekanisme aksi TGF antagonis pada hewan-model pedang bermata triple
Secara keseluruhan, studi praklinis menunjukkan aktivitas anti-tumor TGF pathwaytargeted
agen di berbagai syngeneic dan allogeneic model kanker payudara memiliki
menyarankan bahwa agen memiliki beberapa mekanisme aksi yang berbeda. Ini termasuk
cellautonomous
sel inang efek serta. Yang terakhir muncul untuk memasukkan sistem imun juga
sebagai mekanisme anti-angiogenic tindakan.
Tumor sel-otonom mekanisme aksi dari TGF jalur antagonis-
Seperti dirangkum dalam bagian "Aktivitas agen tunggal antagonis TGF," baik besar kelas
antagonis jalur TGF dapat secara signifikan mengurangi beban metastatik manusia
sel kanker payudara mencit diinokulasi ke athymic telanjang. Hasil studi ini menunjukkan bahwa
agen bertindak, setidaknya untuk beberapa hal, dengan efek sel menghambat otonomi TGF
yang mendorong invasiveness EMT-dimediasi dan metastasis. Karena sebagian besar dari studi tersebut
dilakukan pada tikus telanjang, mereka pasti menunjukkan bahwa efek terapi dicapai
terlepas dari T-sel kekebalan, meskipun mereka tidak mengesampingkan efek pada antagonis
aktivitas sel NK. Mungkin bukti yang paling menarik yang mendukung efek sel otonom
dari antagonis TGF baru-baru ini disediakan oleh Nam et al. [190]. Menggunakan 4T1 syngeneic
paru metastasis model eksperimental, peneliti tersebut membandingkan anti-metastatik
aktivitas antibodi netralisasi pan-TGF,, 1D11 terhadap orangtua 4T1 sel dengan bahwa pada
sel 4T1 di mana sinyal jalur intrinsik TGF telah dilemahkan oleh
pengenalan reseptor TR-II dominan-negatif. Menariknya, pengenalan
dominan-negatif TR-II reseptor sudah cukup untuk sangat menekan kemampuan mereka metastatik
dan sebagian besar ablated efek-menekan metastasis dari 1D11. Para peneliti memperkirakan bahwa
~ 60% dari kegiatan 1D11 anti-metastasis membutuhkan respon TGF utuh pada tumor sel
sendiri.
Imun mekanisme aksi dari TGF jalur antagonis-
Inokulasi MDA-MB-231 sel kanker payudara manusia ke dalam tikus telanjang athymic menurun
limpa tikus pembunuh alami (NK) aktivitas sel [186]. Suntikan intraperitoneal pan-
TGF menetralisir antibodi, 2G7, setelah inokulasi intraperitoneal sel tumor
ditekan intra-abdomen tumor dan metastasis paru-paru, sedangkan non-penetralisir anti-
antibodi kontrol TGF tidak berpengaruh. Histologis, baik 2G7-diperlakukan dan tumor kontrol
identik. administrasi intraperitoneal dari 2G7 menghasilkan peningkatan yang ditandai dalam limpa tikus
Aktivitas sel NK. Sebaliknya, 2G7 tidak menghambat MDA-MB-231 tumor primer atau metastasis
pembentukan, juga tidak merangsang sitotoksisitas sel-dimediasi NK berwarna krem tikus telanjang NK-
kekurangan.
Akhirnya, menengah AC serum-bebas dari MDA-MB-231 menghambat sel sel NK
aktivitas limfosit darah manusia, dan hambatan ini dapat diblokir oleh 2G7 namun tidak oleh
antibodi spesifik kontrol. Data-data ini didukung peran yang mungkin untuk sel tumor TGF
perkembangan karsinoma mammae oleh tuan rumah menekan sel-mediated imun NK
surveilans [186].
Baru-baru ini, menggunakan 4T1 sel dalam paru-paru metastasis uji eksperimental, Nam et al.
menunjukkan
bahwa pengobatan dengan 1D11 sangat menekan jumlah metastasis ke paru-paru [188].
1D11's anti-tumor aktivitas in vivo tampaknya tergantung pada kombinasi sinergis dari
sel otonom efek pada sel-sel tumor dan efek pada host mikro. Yang terakhir
termasuk penindasan terhadap angiogenesis serta sialoprotein tulang (BSP), yang mengurangi
TGF kemampuan menginduksi degradasi kolagen lokal dan invasi dan memungkinkan untuk
complementmediated
tumor sel lisis. Selain itu, pengobatan dengan peningkatan 1D11 infiltrasi sel NK
dan T sel di lokasi metastasis, dan ekspresi yang disempurnakan coactivators (NKG2D) dan sitotoksik
efektor (perforin dan granzyme B) pada sel CD8 +-T. Pada sel tumor, meningkatkan ekspresi
dari ligan NKG2D (Rae1) dan reseptor kematian (TNFRSF1A) memberikan kontribusi terhadap
peningkatan
imun diperantarai sel-pengakuan dan lisis.
Dalam seri yang sama studi, penipisan sel T CD8 + saja sudah ditemukan menyebabkan paradoks
4T1 pengurangan ukuran tumor, baik pada situs utama dan di metastasis 4T1 yang muncul di
berikut vena paru-paru ekor [189]. Analisis lebih lanjut menunjukkan bahwa CD8 + splenocytes dari
tikus tumor-bearing secara aktif dipromosikan 4T1 pertumbuhan tumor dengan memproduksi
interleukin (IL) -17 di
Menanggapi TGF, dan bahwa pengobatan mencit dengan 1D11 di vivo IL-17 mengurangi ekspresi
baik dalam tumor dan kelenjar getah bening locoregional. IL-17 menekan apoptosis sel tumor
in vitro, dan pemukulan sampai roboh dari reseptor-17 IL di 4T1 sel kanker payudara tikus ditingkatkan
apoptosis dan penurunan pertumbuhan tumor in vivo. Jadi, selain untuk menekan kekebalan
surveilans, tumor-induced TGF aktif dapat menumbangkan lengan CD8 + sistem kekebalan tubuh
ke langsung mendorong pertumbuhan tumor dengan mekanisme IL-17-dependen. Secara ringkas,
ekspresi TGF meningkat pada lingkungan mikro tumor memodulasi sebuah web kompleks
interselular interaksi yang meningkatkan jumlah metastasis. Selain itu, IL-17-
mekanisme tergantung dapat meningkatkan ukuran tumor. antibodi TGF dibalik efek-efek, dan
tidak adanya toksisitas utama TGF antagonisme dalam kompartemen sel satu dan
menghindari komplikasi autoimun adalah meyakinkan untuk pengembangan lebih lanjut dari
agen untuk penggunaan klinis [188-190].
Pengaruh antagonis jalur TGF pada studi tumor angiogenesis-Beberapa
melaporkan bahwa pengobatan dengan antagonis jalur TGF menghambat angiogenesis tumor. Jadi, Ge
et al. [83] menemukan bahwa tumor angiogenesis, sebagaimana tercermin dari kepadatan microvessel
CD34-positif,
menurun secara bermakna pada tumor mammae murin R3T pada hewan diperlakukan dengan
TR-aku inhibitor kinase, SD-208 dibandingkan dengan kontrol hewan, sementara proliferasi sel tumor
(Ki-67 pewarnaan), atau apoptosis (TUNEL) yang tidak terpengaruh. Demikian pula, Nam et al. [190]
ditemukan
bahwa pengobatan tumor 4T1 murin susu dengan 1D11 dikaitkan dengan statistik
penurunan yang signifikan pada kepadatan microvessel dalam tumor primer, meskipun tidak dalam paru-
paru
metastasis. Konsisten dengan temuan ini, pengobatan tumor tikus 4T1 bantalan dengan 2G7
menetralisir antibodi anti-TGF signifikan mengurangi tingkat sirkulasi VEGF [112]
(Genentech, US 2005/0276802 A1 Aplikasi Paten). Temuan ini menunjukkan bahwa, selain
meningkatkan kekebalan anti-tumor, antagonis jalur TGF juga memiliki anti-angiogenic sederhana
sifat in vivo.
Secara ringkas, bukti saat ini menunjukan bahwa antagonis TGF mereka menggunakan efek terapeutik
melalui setidaknya tiga mekanisme yang berbeda, termasuk peningkatan kekebalan anti-tumor,
inhibisi angiogenesis, dan pembalikan dari fenotipe / invasif tumor metastasis sel
sendiri. Nam et al. [190] mampu memperkirakan kontribusi relatif dari sel otonom
versus efek sel inang dari antibodi netralisasi pan-TGF,, 1D11 dengan membandingkan kemanjurannya
terhadap wild type 4T1 kanker mammae murin dengan yang melawan 4T1 tumor mengucapkan
dominan-negatif TR-II reseptor. Menggabungkan data dari beberapa percobaan yang dilakukan di
syngeneic tikus, mereka memperkirakan bahwa 75% dari kemanjuran antibodi tergantung pada kegiatan
CD8 +-sel T sitotoksik, sedangkan 35% bergantung pada keberadaan sel NK, dan ~ 60%
diperlukan suatu respon TGF-b utuh dalam sel tumor itu sendiri. Karena jumlah efek
adalah> 100%, data menunjukkan bahwa pengobatan dengan 1D11 antitumor meningkatkan respon
imun
oleh mekanisme koperasi yang melibatkan beberapa kompartemen selular yang berbeda, termasuk
CD8 + T sel itu, sel NK, dan sel-sel tumor itu sendiri.
Potensi risiko menghambat TGF jalur signaling
tikus yang baru lahir kekurangan genetis TGF1 atau reseptor sel T TGF layar mendalam
dysregulation kekebalan, sebagaimana dibuktikan oleh peningkatan ukuran kelenjar getah bening,
ekspresi penanda memori / aktivasi sel T, peradangan pada berbagai jaringan dan pengembangan
autoantibodies [220221]. Dengan demikian, salah satu perhatian utama jalur potensi jangka panjang
TGF
netralisasi adalah pengembangan immunopathology parah. Untuk mengatasi masalah ini, Ruzek
et al. [222] meneliti efek dari administrasi harian hingga 2,5 mg / kg anti-TGF
(1D11) untuk tikus dewasa selama 3 minggu. Komprehensif hematologi dan histopatologi
evaluasi tidak menunjukkan bukti patologi. Dalam penelitian kedua, periode antibodi pengobatan
diperpanjang sampai 12 minggu, dan tikus diperlakukan dengan 50 mg / kg anti-TGF (1D11) tiga
kali per minggu. Banyak parameter status kekebalan dinilai, termasuk pembunuh alami
(NK) aktivitas sel, respon proliferasi limfosit, aktivitas fagositosis, fenotipik
penilaian subset leukosit, dan pengukuran sitokin serum pro-inflamasi,
auto-antibodi dan imunoglobulin isotypes. Di samping penilaian, histopatologi
jantung, paru-paru, hati, ginjal, kelenjar ludah, kulit, limpa dan kelenjar getah bening juga dilakukan.
Sangat sedikit dari beberapa parameter kekebalan diperiksa menunjukkan perubahan terdeteksi dalam
anti-
TGF-tikus diperlakukan. Perubahan yang diamati terutama terbatas pada limpa dan
termasuk meningkatkan pemulihan sel limpa, meningkatkan persentase makrofag, menurun
persentase sel NK, penurunan aktivitas fagositosis, penurunan tanggapan proliferatif untuk
mitogens dan sedikit peningkatan dalam T dan sel B diaktifkan. Banyak dari parameter yang sama
diperiksa dalam kelenjar getah bening tidak diubah oleh pengobatan anti-TGF. Timus itu
menurun dalam ukuran, tapi berubah hanya sedikit dalam satu populasi sel T berkembang. Sebagian
besar
perubahan yang diamati adalah sederhana dan kembali ke kontrol level berikut penghentian
pengobatan. Temuan serologi satunya adalah peningkatan kadar IgA selektif di dalam anti-TGF-
diperlakukan tikus. Akhirnya, tidak ada bukti peradangan meningkat di salah satu perangkat
jaringan diperiksa. Kesimpulannya, meskipun sederhana perubahan di beberapa imunologi
parameter yang diamati, ini hanya sedikit dan biasanya reversibel setelah menghentikan
pengobatan. Selain itu, perubahan-perubahan yang kecil dibandingkan dengan yang ditemukan dalam
genetik
mouse direkayasa strain kekurangan TGF1 atau dengan TGF T tidak responsif atau sel B [220,
221]. Jadi, netralisasi antibodi-mediated jangka panjang TGF pada mencit normal tidak
terkait dengan kekebalan dysregulation signifikan.
Kekhawatiran kedua administrasi kronis dari jalur antagonis TGF adalah penghambatan
TGF's tumor fungsi penekan dan peningkatan risiko keganasan sekunder. Dalam hal ini
hal, perlu dicatat bahwa lama pemberian 1D11 untuk tikus Apcmin, sebuah model
polyposis adenomatous keluarga, dikaitkan dengan peningkatan frekuensi transisi dari
adenoma untuk adenokarsinoma invasif, cukup mengingatkan pada fenotipe Apcmin/Smad4
tikus heterozigot senyawa [223224]. Selain ini, belum ada laporan yang menunjukkan
bahwa administrasi berkepanjangan atau eksposur terhadap antagonis jalur TGF berkaitan dengan
sebuah frekuensi peningkatan perkembangan tumor invasif spontan. Bahkan, itu menenteramkan
bahwa, pada tikus transgenik yang mengekspresikan reseptor konstitutif TR-II larut: Fc fusion protein
(Fc: TRII) dalam kelenjar susu, tumorigenesis primer tidak ditingkatkan meskipun seumur hidup
paparan dari kelenjar susu ke antagonis TGF larut [45]. Namun demikian, ini
kemungkinan harus hati-hati dipantau dalam uji klinis berlangsung dan masa depan ini
agen.
Perubahan dalam TGF signaling telah terlibat dalam sejumlah warisan atau diperoleh
penyakit kardiovaskuler [225226]. Oleh karena itu, perhatian ketiga adalah bahwa pengobatan kronis
dengan
antagonis TGF mungkin terkait dengan toksisitas kardiovaskuler. Untuk menjawab pertanyaan ini,
Marathea et al. [227] diperlakukan tikus Sprague-Dawley selama 14 hari dengan reseptor TGF kimia
kinase inhibitor, LY2109761. lesi katup ditandai dengan penebalan leaflet, meningkat
jumlah sel-sel interstisial, dan akumulasi stroma myxoid diamati pada hewan
diperlakukan dengan LY2109761, tetapi tidak terlihat pada tikus hanya menerima kendaraan. Interstisial
sel-sel di
katup LY2109761-diperlakukan meningkat immunoreactivity -SMA dan terkemuka nuklir
ekspresi Smad2 terfosforilasi. Temuan-temuan awal menunjukkan bahwa administrasi
dari LY2109761 dapat menyebabkan aktivasi myofibroblast paradoks TGF sinyal di dalam hati katup
tikus Sprague-Dawley. Fenotipe yang diamati, baik dari segi valvulopathy yang
dan aktivasi pSmads itu sangat mirip dengan yang terlihat pada model hewan Marfan
sindrom serta manusia dengan sindrom Marfan seperti karena baik fibrillin atau TGFBR gen
mutasi [35.228]. Selain itu, valvulopathy yang terlihat di LY2109761 tikus perlakuan juga
mengingatkan yang terlihat pada Tgfb2 dan -3 tikus KO ganda, yang berhubungan dengan
hyperphosphorylation
dari Smads BMP 1 dan -5 [229]. Dengan demikian, pasien yang akan diobati dengan
antagonis jalur TGF, terutama reseptor kinase inhibitor, harus hati-hati
dipantau untuk jenis yang tidak biasa toksisitas kardiovaskuler.
Singkatnya netralisasi, kronis TGF tidak muncul secara signifikan mempengaruhi nya
homeostatik fungsi dalam epitel, kompartemen kekebalan atau pembuluh darah. Toksisitas tampaknya
menjadi nyata hanya dalam konteks renovasi semua jenis jaringan, cedera jaringan, patogen
eksposur, atau pada latar belakang kecenderungan kanker genetik. Sebaliknya, terus menerus
administrasi TGF reseptor kinase inhibitor kimia tidak tampak mempengaruhi pembuluh darah
integritas, mungkin dengan kompensasi upregulation ligan TGF. Untuk alasan ini, sedang berlangsung
tahap I uji klinis LY2157299 telah diubah untuk mempekerjakan berselang daripada
terus dosis jadwal.
Uji klinis dari jalur TGF penargetan agen
Ringkasan tahap I uji klinis
Berikut tiga jalur TGF antagonis klinis sedang dalam fase awal klinis
pengembangan (Tabel 1).
AP 12.009 (antisense Pharma GmbH)-AP 12.009 adalah oligodeoxynucleotide antisense
secara khusus ditujukan terhadap TGF2 mRNA, sehingga mengurangi produksi yang TGF2
isoform. 12.009 AP awalnya dikelola oleh infus intra-tumor pada pasien dengan highgrade
gliomas ganas dengan hasil yang menggembirakan [197]. Hasil awal dari yang sedang berlangsung
tahap I / II belajar menggunakan sistemik i.v. AP administrasi 12.009 untuk pasien dengan stadium IV
karsinoma pankreas, melanoma ganas, atau karsinoma kolorektal baru-baru ini melaporkan
[230]. Pada label ini diadakan terus-menerus-, multicenter fase I / II studi (AP 12.009-P001), pasien
AP menerima 12.009 intravena sesuai dengan desain kohort dosis eskalasi. Sampai saat ini, 17
pasien dalam empat kohort telah diperlakukan dengan AP 12.009 yang diberikan sebagai infus kontinyu
selama 7 hari setiap minggu. Dosis membatasi toksisitas (trombositopenia, ruam) diamati
pada dosis 240 mg/m2/day. Satu pasien dengan karsinoma pankreas stadium IV yang menerima 80
mg/m2/day mengalami regresi lengkap metastasis hati dan hidup pada 128 minggu.
Karena kelangsungan hidup bebas perkembangan-pasien yang menerima 80 mg/m2/day lebih baik
daripada di
setiap kelompok lain, dosis ini akan digunakan dalam tahap uji coba II dari perlakuan setiap 7 hari
seminggu lain
jadwal. Sementara itu, eskalasi lebih lanjut dosis menggunakan jadwal perawatan diubah dari 4 hari
12.009 AP administrasi, diikuti dengan interval bebas perawatan 10 hari untuk setiap perawatan
siklus, sedang berlangsung.
GC1008 (Genzyme, Inc)-GC1008 adalah kappa IgG4 antibodi monoklonal manusia yang mampu
menetralkan semua isoform mamalia dari TGF (yaitu, 1, 2, dan 3). GC1008 adalah afinitas tinggi
antibodi dengan KDS dari 1.8, 2.8, dan 1,4 nM untuk TGF 1, 2, dan 3, masing-masing. Dosis tunggal
fase I studi GC1008 untuk pasien dengan fibrosis paru idiopatik saat ini terbuka untuk
pendaftaran. Selain itu, Morris et al. [231] baru-baru ini melaporkan hasil dari suatu, berkelanjutan
pertama di
kanker, ujicoba beragam pusat pemeriksaan keamanan dan efektivitas GC1008. Pasien dengan
melanoma tingkat lanjut atau karsinoma sel ginjal, yang gagal 1 terapi sebelumnya, dirawat di
salah satu dari enam tingkat dosis-kelompok (0,1, 0,3, 1, 3, 10, atau 15 mg / kg) menggunakan desain 3 +
3. Pasien
yang tidak mengalami keracunan membatasi dosis dalam waktu 28 hari dari perawatan pertama yang
diterima
tiga dosis tambahan yang diberikan 2 minggu terpisah. Para pasien yang mencapai penyakit stabil, parsial

respon, atau respon yang lengkap yang memenuhi syarat untuk pengobatan diperpanjang dengan
GC1008. Dua puluh dua pasien (21 dengan melanoma, satu dengan karsinoma sel ginjal) telah diobati,
termasuk
6 pasien di 15 mg / kg. Tidak ada dosis yang membatasi toksisitas diamati dan 15 mg / kg ditentukan
menjadi maksimal dosis aman. Efek samping kemungkinan berhubungan dengan GC1008 termasuk ruam
kulit
(Grade 1 dari 2 pasien, Grade 2 in 1 pasien, kelas 3 dalam 2 pasien), kelelahan (Grade 1), sakit kepala
(Grade 1, 2), epistaksis, perdarahan gingiva (Grade 1), dan gejala gastrointestinal (Grade 1,
2). Acara hanya merugikan dianggap serius kemungkinan berhubungan dengan pengobatan adalah
welldifferentiated
skuamosa sel kanker kulit pada pasien dengan sejarah dahulu dari kanker ini.
Satu pasien dengan kulit melanoma metastasis mencapai respon parsial berlangsung> 52 minggu pada
diperpanjang pengobatan. Empat pasien dengan melanoma ganas dicapai penyakit stabil (berkisar
22-31 minggu) dan juga menerima perawatan diperpanjang. Tiga dari pasien ini telah mencampur
tanggapan dengan peningkatan beberapa hati mereka atau metastasis paru-paru. Sebuah ekspansi tahap
II
belajar untuk pasien dengan melanoma metastatik telah dimulai, dan tahap II studi untuk pasien
dengan kanker payudara stadium IV yang direncanakan.
LY2157299 (Eli Lilly & Co)-A multi-fase pusat saya percobaan klinis pertama selektif
TGF jenis kimia saya reseptor kinase inhibitor, LY2157299 (Eli Lilly & Co) saat ini
berkelanjutan. Calvo-Aller et al. [232] baru-baru ini melaporkan pengalaman klinis pada tujuh yang
pertama
pasien dengan maju / keganasan metastatik yang dirawat pada penelitian ini. Kohort dari
masing-masing tiga pasien digunakan untuk menentukan keselamatan dan farmakokinetik pada dosis
harian
40 dan 80 mg. Tujuh pertama pasien (tiga dan empat pasien di 40 dan 80 mg dosis,
masing-masing) terdaftar dalam studi ini termasuk tiga dengan kanker usus besar, dan satu pasien
masing-masing dengan
kanker prostat, karsinoma adrenocortical, kanker payudara dan melanoma ganas. LY2157299
ditahan dengan baik pada kedua tingkat dosis dan tidak ada narkoba kelas tiga atau empat toksisitas
adalah
diamati. Profil farmakokinetik dan farmakodinamik dari LY2157299 adalah
ditentukan dengan menggunakan uji farmakodinamik divalidasi dalam tahap studi 0 Baselga et al.
[141] dan menemukan agar sesuai dengan PK praklinis berbasis / pemodelan PD dijelaskan oleh
Farrington et al. [233]. Analisis dua kohort menunjukkan bahwa penyerapan LY2157299 adalah
cepat, dan proporsional AUC untuk dosis obat. The mean t1 / 2 diperkirakan 6,5 jam, dan
tidak ada akumulasi definitif LY2157299 diamati selama dua kali sehari dosis 56-hari
periode. Singkatnya, oral harian LY2157299 aman dan ditoleransi dengan baik pada
dosis tingkat dua dan profil farmakokinetik adalah konsisten dengan prediksi berasal
dari PK praklinis / model PD [141233]. Karena keprihatinan yang diangkat dalam studi hewan
tentang kemungkinan valvulopathy serius dengan dosis terus menerus (lihat bagian "Potensi
risiko menghambat TGF signaling jalur "), sisa ini sidang tahap I sedang
dilakukan dengan menggunakan dosis intermiten LY2157299 jadwal. Selain itu, kelayakan telah
terbatas pada pasien dengan ganas gliomas bermutu tinggi. Penelitian ini diharapkan akan selesai
pada akhir tahun 2008.
Pertanyaan kunci yang perlu dibahas dalam uji klinis masa depan antagonis jalur TGF
Farmakodinamik tindakan inhibisi jalur TGF in vivo-Menilai
sifat farmakodinamik agen terapeutik potensial yang ditargetkan melalui penggunaan
biomarker hilir sangat penting. Idealnya, satu ingin uji jaringan tumor secara langsung tetapi
aksesibilitas terbatas dan invasiveness dari prosedur sampling menimbulkan tantangan besar bagi
mencapai hal ini dalam praktek klinis. Untuk percobaan TGF reseptor kinase inhibitor kimia,
Farrington et al. [233] mengembangkan suatu uji yang menggunakan ex vivo stimulasi TGF1 dari
PBMCs digabungkan dengan pengukuran Smad2 fosforilasi dengan sandwich ELISA.
uji ini telah divalidasi dalam fase 0 studi klinis dan digunakan untuk mendapatkan informasi tentang
TGF sinyal modulasi oleh molekul besar maupun kecil dalam uji klinis berlangsung [141].
Untuk uji klinis dari perangkap ligan, seperti antibodi netralisasi GC1008 pan-TGF, gunakan
antibodi radiolabeled sendiri sebagai detektor tumor terkait target protein dan ukuran
inaktivasi target sedang dipertimbangkan. Recent (pra) studi klinis dengan 124I-dan 89Zr-label katup
tikus Sprague-Dawley. Fenotipe yang diamati, baik dari segi valvulopathy yang
dan aktivasi pSmads itu sangat mirip dengan yang terlihat pada model hewan Marfan
sindrom serta manusia dengan sindrom Marfan seperti karena baik fibrillin atau TGFBR gen
mutasi [35.228]. Selain itu, valvulopathy yang terlihat di LY2109761 tikus perlakuan juga
mengingatkan yang terlihat pada Tgfb2 dan -3 tikus KO ganda, yang berhubungan dengan
hyperphosphorylation
dari Smads BMP 1 dan -5 [229]. Dengan demikian, pasien yang akan diobati dengan
antagonis jalur TGF, terutama reseptor kinase inhibitor, harus hati-hati
dipantau untuk jenis yang tidak biasa toksisitas kardiovaskuler.
Singkatnya netralisasi, kronis TGF tidak muncul secara signifikan mempengaruhi nya
homeostatik fungsi dalam epitel, kompartemen kekebalan atau pembuluh darah. Toksisitas tampaknya
menjadi nyata hanya dalam konteks renovasi semua jenis jaringan, cedera jaringan, patogen
eksposur, atau pada latar belakang kecenderungan kanker genetik. Sebaliknya, terus menerus
administrasi TGF reseptor kinase inhibitor kimia tidak tampak mempengaruhi pembuluh darah
integritas, mungkin dengan kompensasi upregulation ligan TGF. Untuk alasan ini, sedang berlangsung
tahap I uji klinis LY2157299 telah diubah untuk mempekerjakan berselang daripada
terus dosis jadwal.
Uji klinis dari jalur TGF penargetan agen
Ringkasan tahap I uji klinis
Berikut tiga jalur TGF antagonis klinis sedang dalam fase awal klinis
pengembangan (Tabel 1).
AP 12.009 (antisense Pharma GmbH)-AP 12.009 adalah oligodeoxynucleotide antisense
secara khusus ditujukan terhadap TGF2 mRNA, sehingga mengurangi produksi yang TGF2
isoform. 12.009 AP awalnya dikelola oleh infus intra-tumor pada pasien dengan highgrade
gliomas ganas dengan hasil yang menggembirakan [197]. Hasil awal dari yang sedang berlangsung
tahap I / II belajar menggunakan sistemik i.v. AP administrasi 12.009 untuk pasien dengan stadium IV
karsinoma pankreas, melanoma ganas, atau karsinoma kolorektal baru-baru ini melaporkan
[230]. Pada label ini diadakan terus-menerus-, multicenter fase I / II studi (AP 12.009-P001), pasien
AP menerima 12.009 intravena sesuai dengan desain kohort dosis eskalasi. Sampai saat ini, 17
pasien dalam empat kohort telah diperlakukan dengan AP 12.009 yang diberikan sebagai infus kontinyu
selama 7 hari setiap minggu. Dosis membatasi toksisitas (trombositopenia, ruam) diamati
pada dosis 240 mg/m2/day. Satu pasien dengan karsinoma pankreas stadium IV yang menerima 80
mg/m2/day mengalami regresi lengkap metastasis hati dan hidup pada 128 minggu.
Karena kelangsungan hidup bebas perkembangan-pasien yang menerima 80 mg/m2/day lebih baik
daripada di
setiap kelompok lain, dosis ini akan digunakan dalam tahap uji coba II dari perlakuan setiap 7 hari
seminggu lain
jadwal. Sementara itu, eskalasi lebih lanjut dosis menggunakan jadwal perawatan diubah dari 4 hari
12.009 AP administrasi, diikuti dengan interval bebas perawatan 10 hari untuk setiap perawatan
siklus, sedang berlangsung.
GC1008 (Genzyme, Inc)-GC1008 adalah kappa IgG4 antibodi monoklonal manusia yang mampu
menetralkan semua isoform mamalia dari TGF (yaitu, 1, 2, dan 3). GC1008 adalah afinitas tinggi
antibodi dengan KDS dari 1.8, 2.8, dan 1,4 nM untuk TGF 1, 2, dan 3, masing-masing. Dosis tunggal
fase I studi GC1008 untuk pasien dengan fibrosis paru idiopatik saat ini terbuka untuk
pendaftaran. Selain itu, Morris et al. [231] baru-baru ini melaporkan hasil dari suatu, berkelanjutan
pertama di
kanker, ujicoba beragam pusat pemeriksaan keamanan dan efektivitas GC1008. Pasien dengan
melanoma tingkat lanjut atau karsinoma sel ginjal, yang gagal 1 terapi sebelumnya, dirawat di
salah satu dari enam tingkat dosis-kelompok (0,1, 0,3, 1, 3, 10, atau 15 mg / kg) menggunakan desain 3 +
3. Pasien
yang tidak mengalami keracunan membatasi dosis dalam waktu 28 hari dari perawatan pertama yang
diterima
tiga dosis tambahan yang diberikan 2 minggu terpisah. Para pasien yang mencapai penyakit stabil, parsial

respon, atau respon yang lengkap yang memenuhi syarat untuk pengobatan diperpanjang dengan
GC1008. Dua puluh dua pasien (21 dengan melanoma, satu dengan karsinoma sel ginjal) telah diobati,
termasuk
6 pasien di 15 mg / kg. Tidak ada dosis yang membatasi toksisitas diamati dan 15 mg / kg ditentukan
menjadi maksimal dosis aman. Efek samping kemungkinan berhubungan dengan GC1008 termasuk ruam
kulit
(Grade 1 dari 2 pasien, Grade 2 in 1 pasien, kelas 3 dalam 2 pasien), kelelahan (Grade 1), sakit kepala
(Grade 1, 2), epistaksis, perdarahan gingiva (Grade 1), dan gejala gastrointestinal (Grade 1,
2). Acara hanya merugikan dianggap serius kemungkinan berhubungan dengan pengobatan adalah
welldifferentiated
skuamosa sel kanker kulit pada pasien dengan sejarah dahulu dari kanker ini.
Satu pasien dengan kulit melanoma metastasis mencapai respon parsial berlangsung> 52 minggu pada
diperpanjang pengobatan. Empat pasien dengan melanoma ganas dicapai penyakit stabil (berkisar
22-31 minggu) dan juga menerima perawatan diperpanjang. Tiga dari pasien ini telah mencampur
tanggapan dengan peningkatan beberapa hati mereka atau metastasis paru-paru. Sebuah ekspansi tahap
II
belajar untuk pasien dengan melanoma metastatik telah dimulai, dan tahap II studi untuk pasien
dengan kanker payudara stadium IV yang direncanakan.
LY2157299 (Eli Lilly & Co)-A multi-fase pusat saya percobaan klinis pertama selektif
TGF jenis kimia saya reseptor kinase inhibitor, LY2157299 (Eli Lilly & Co) saat ini
berkelanjutan. Calvo-Aller et al. [232] baru-baru ini melaporkan pengalaman klinis pada tujuh yang
pertama
pasien dengan maju / keganasan metastatik yang dirawat pada penelitian ini. Kohort dari
masing-masing tiga pasien digunakan untuk menentukan keselamatan dan farmakokinetik pada dosis
harian
40 dan 80 mg. Tujuh pertama pasien (tiga dan empat pasien di 40 dan 80 mg dosis,
masing-masing) terdaftar dalam studi ini termasuk tiga dengan kanker usus besar, dan satu pasien
masing-masing dengan
kanker prostat, karsinoma adrenocortical, kanker payudara dan melanoma ganas. LY2157299
ditahan dengan baik pada kedua tingkat dosis dan tidak ada narkoba kelas tiga atau empat toksisitas
adalah
diamati. Profil farmakokinetik dan farmakodinamik dari LY2157299 adalah
ditentukan dengan menggunakan uji farmakodinamik divalidasi dalam tahap studi 0 Baselga et al.
[141] dan menemukan agar sesuai dengan PK praklinis berbasis / pemodelan PD dijelaskan oleh
Farrington et al. [233]. Analisis dua kohort menunjukkan bahwa penyerapan LY2157299 adalah
cepat, dan proporsional AUC untuk dosis obat. The mean t1 / 2 diperkirakan 6,5 jam, dan
tidak ada akumulasi definitif LY2157299 diamati selama dua kali sehari dosis 56-hari
periode. Singkatnya, oral harian LY2157299 aman dan ditoleransi dengan baik pada
dosis tingkat dua dan profil farmakokinetik adalah konsisten dengan prediksi berasal
dari PK praklinis / model PD [141233]. Karena keprihatinan yang diangkat dalam studi hewan
tentang kemungkinan valvulopathy serius dengan dosis terus menerus (lihat bagian "Potensi
risiko menghambat TGF signaling jalur "), sisa ini sidang tahap I sedang
dilakukan dengan menggunakan dosis intermiten LY2157299 jadwal. Selain itu, kelayakan telah
terbatas pada pasien dengan ganas gliomas bermutu tinggi. Penelitian ini diharapkan akan selesai
pada akhir tahun 2008.
Pertanyaan kunci yang perlu dibahas dalam uji klinis masa depan antagonis jalur TGF
Farmakodinamik tindakan inhibisi jalur TGF in vivo-Menilai
sifat farmakodinamik agen terapeutik potensial yang ditargetkan melalui penggunaan
biomarker hilir sangat penting. Idealnya, satu ingin uji jaringan tumor secara langsung tetapi
aksesibilitas terbatas dan invasiveness dari prosedur sampling menimbulkan tantangan besar bagi
mencapai hal ini dalam praktek klinis. Untuk percobaan TGF reseptor kinase inhibitor kimia,
Farrington et al. [233] mengembangkan suatu uji yang menggunakan ex vivo stimulasi TGF1 dari
PBMCs digabungkan dengan pengukuran Smad2 fosforilasi dengan sandwich ELISA.
uji ini telah divalidasi dalam fase 0 studi klinis dan digunakan untuk mendapatkan informasi tentang
TGF sinyal modulasi oleh molekul besar maupun kecil dalam uji klinis berlangsung [141].
Untuk uji klinis dari perangkap ligan, seperti antibodi netralisasi GC1008 pan-TGF, gunakan
antibodi radiolabeled sendiri sebagai detektor tumor terkait target protein dan ukuran
inaktivasi target sedang dipertimbangkan. Recent (pra) studi klinis dengan 124I-dan 89Zr-label anti-VEGF
antibodi monoklonal, seperti bevacizumab, telah menyediakan bukti-of-konsep yang
jenis reagen dapat digunakan untuk mendeteksi target protein disekresikan, seperti VEGF, pada tumor
mikro dengan tingkat akurasi yang tinggi dan spesifisitas menggunakan immuno-positron
emisi tomografi (PET), terutama bila dikombinasikan dengan CT atau MRI imaging anatomis
[234-236]. Uji klinis sedang berlangsung untuk menentukan apakah dosis serapan dari 89Zrbevacizumab
tracer
dalam tumor manusia dapat berfungsi sebagai penanda farmakodinamik kerja obat, dapat
untuk memprediksi respons terhadap bevacizumab terapi, dan dapat digunakan sebagai biomarker awal
respon
untuk terapi. Mengingat kesamaan luar biasa antara VEGF dan TGF sebagai target terapi,
orang mungkin membayangkan pengembangan 89Zr-GC1008 untuk immuno-PET/CT imaging ke alamat
kunci ini pertanyaan yang sama.
Seleksi prediktor-populasi pasien tumor Mengingat respons klinis
heterogenitas (TGF-tergantung dan-independen), pasien kanker payudara tidak dipilih
penduduk cenderung memiliki tingkat rendah menanggapi TGF antagonis. Oleh karena itu,
imperatif yang dikembangkan alat untuk mengidentifikasi tumor yang didorong oleh sinyal aktif TGF
(Kecanduan jalur) serta biomarker prediksi yang akurat dari respons klinis terhadap TGF
jalur antagonis. Pada prinsipnya, orang bisa mengambil salah satu dari dua pendekatan untuk mengatasi
kritis
Masalah: Salah satu pilihan adalah untuk membangun sebuah prediksi yang didasarkan pada data sel
baris-atau binatang, dan kemudian memvalidasi
ini "biomarker" prospektif dalam suatu uji klinis. Namun, karena kesulitan yang melekat
dalam simulasi perilaku tumor manusia menggunakan sistem model hewan percobaan,
terutama untuk target multi-fungsional seperti TGF, dan jumlah terbatas yang tersedia
model hewan, ini mungkin bukan pilihan yang paling menarik. Selain itu, dalam validasi calon
persidangan dalam populasi pasien non-dipilih, tingkat respon klinis secara keseluruhan masih akan
sangat
rendah, bahkan jika prediksi ternyata masih berlaku. Alternatif, pendekatan yang mungkin lebih menarik,

adalah dengan menggunakan seseorang "tebakan terbaik" berdasarkan semua data eksperimental dan
klinis yang tersedia untuk menentukan
mungkin diperkaya untuk responden populasi pasien, dan menggunakan sidang itu sendiri untuk
mengembangkan lebih
prediktor akurat. Dengan konsistensi yang luar biasa di klinis, biologi dan
data percobaan dibahas di atas, ini mungkin merupakan pendekatan yang paling efisien untuk lebih
lanjut
pengembangan agen ini untuk pengobatan kanker payudara. Sebagai tahap II pencobaan GC1008
dan LY2157299 sedang dipertimbangkan untuk pasien dengan kanker payudara metastatik, penting
menekankan fakta bahwa data klinis dan percobaan diringkas dalam bagian "perubahan
dari TGF signal pada kanker payudara-hilangnya homeostasis dan aktivasi EMT "dan" TGF
dan kanker payudara manusia "menunjukkan bahwa ER-negatif (baik basal-suka atau HER2-positif)
payudara
kanker tampaknya didorong oleh TGF dan, karenanya, lebih mungkin untuk manfaat dari
estrogendependent
lumen kanker. Selain itu, ada kemungkinan bahwa ER-positif tumor dengan intrinsik atau
mengakuisisi perlawanan anti-estrogen (estrogen-independen) memperoleh fenotipe yang mirip dengan
bahwa dari subtipe basal atau HER2-positif. The klinis studi ditinjau dalam bagian "TGF
dan kanker payudara manusia "menunjukkan bahwa himpunan bagian dari basal-seperti, payudara
HER2-positif dan lumen
kanker ditandai oleh tanda tangan respons TGF ekspresi gen tinggi. Praklinis
studi genetika dan farmakologi menunjukkan bahwa, setidaknya dalam model mouse metastatik
basallike
atau HER2-positif kanker payudara, jalur TGF memainkan peran utama dalam mempertahankan atau
memperkaya kolam sel induk dalam menetapkan metastasis di lokasi sekunder (bagian
"Perubahan dari TGF signal pada kanker payudara-hilangnya homeostasis dan aktivasi EMT").
Akhirnya, sedangkan efek terapi anti-estrogen pada kanker payudara ER-positif tampaknya
ditengahi, setidaknya sebagian, oleh TGF, resistensi klinis untuk anti-estrogen serta sitotoksik
kemoterapi dapat diatasi dengan netralisasi TGF. Dengan demikian, berdasarkan ini kolektif
bukti, tampaknya yang paling bijaksana untuk fokus terutama tahap uji coba II dari jalur TGF
antagonis pada pasien dengan kanker payudara stadium IV ER-negatif seperti basal dan HER2-positif.
Selain itu, orang mungkin mempertimbangkan termasuk pasien dengan ER-positif tetapi estrogen-
independent
(Yaitu, anti-estrogen tahan) penyakit, sedangkan pasien dengan kanker payudara estrogen-tergantung
harus secara spesifik dikecualikan karena pertentangan potensial antara anti-estrogen
dan TGF antagonis. Yang paling penting, semua uji klinis perlu memasukkan validasi studi biomarker
prediksi putatif, seperti, misalnya, status TGFBR2 dan tumor TBRS
ekspresi gen versus tanda tangan di Ba1 Ba2 dan HER2 (NI) versus-(I) subset, pSmad2
ekspresi, atau 89Zr-GC1008 immuno-PET/CT pencitraan.
Tahap uji coba desain-agen tunggal versus kombinasi II studi-Meskipun beberapa
studi praklinis mendukung gagasan bahwa antagonis jalur TGF mungkin mempotensiasi khasiat
dari HER2 atau antagonis faktor pertumbuhan lainnya, anti-angiogenic terapi, vaksin-dan lainnya
immunotherapies, dan, mungkin, mengatasi resistensi terhadap kemoterapi sitotoksik dan / atau
anti-estrogen, terapi kombinasi pendekatan ini perlu menjalani lebih luas
validasi sebelum dikenakan uji klinis pada manusia. Setelah mengatakan ini, kolektif
praklinis pengalaman menggunakan TGF antagonis dalam kombinasi dengan kemoterapi sitotoksik
dalam model kanker mammae mungkin cukup matang untuk menjamin termasuk sitotoksik
agen di tahap II inhibitor TGF percobaan.
Mekanisme kerja dari antagonis jalur TGF in vivo-Sama seperti penting dalam
memanfaatkan tahap II uji coba untuk memvalidasi prediksi putatif biomarker adalah termasuk studi
yang
alamat mekanisme potensial aksi dari agen baru dalam diri manusia. Seperti dijelaskan dalam bagian
"Studi praklinis terapi antagonis TGF melawan kanker payudara in vivo," binatang
penelitian menunjukkan bahwa inhibitor jalur TGF anti-tumor mengerahkan pengaruhnya oleh
beberapa
mekanisme, termasuk sel efek otonom, serta stimulasi kekebalan yang kuat dan antiangiogenic
tindakan. Menentukan mana yang yang bekerja pada manusia dan yang sejauh, adalah
penting untuk menginformasikan rancangan percobaan kombinasi terapi masa depan. Tahap II penelitian
harus
termasuk, setidaknya, langkah-langkah urut kekebalan spesifik tumor, angiogenesis, dan tumor
fenotipe sel.
Ringkasan dan kesimpulan
Sebagian besar kanker payudara manusia mengekspresikan semua jalur sinyal TGF kanonik
komponen meskipun sering lebih rendah dari tingkat normal, sementara lengkap inaktivasi dari
sinyal jalur oleh penghapusan atau mutasi TGF reseptor-atau Smad gen jarang terlihat
pada kanker payudara. Di sisi lain, berlebih dari TGFs dikaitkan dengan tahap akhir
penyakit dan / atau hasil yang buruk. Konstelasi peristiwa ini, yaitu penurunan atau TGF reseptor-
ekspresi gen Smad dikombinasikan dengan peningkatan tingkat TGFs pada tumor
mikro, sudah cukup untuk membatalkan TGF's tumor dan mengaktifkan efek penekan
itu kemampuan untuk membujuk fenotipe, mesenchymal motil dan invasif. Genetik mouse model dalam
yang TGF sinyal yang baik dilemahkan atau konstitutif diaktifkan mendukung pernyataan bahwa
TGF menekan sinyal de novo pembentukan kanker payudara tetapi mempromosikan metastasis
tumor yang bentuk setelah mereka menembus tumor TGF's penghalang penekan. Di
Selain itu, kegiatan ini pro-metastatik dari TGF yang sinergis dengan pengaktifan-ras Ha
serta jalur HER2/neu. Pengobatan tikus dengan antibodi penetralisir TGF lama
berikut inokulasi sel tumor mammae sangat menghambat pengembangan lungor baik
tulang metastasis dalam model syngeneic, dan rendah hati dalam manusia MDA-MB-231 nude mouse
xenograft model, tapi entah tidak ada atau sederhana retardasi pertumbuhan tumor primer di syngeneic
model, dan tidak ada efek atau bahkan stimulasi pertumbuhan sederhana dalam model xenograft. Jenis
Kimia
Aku TGF reseptor (TR-I) kinase inhibitor kuantitatif menggunakan efek yang sama pada susu
metastasis kanker dan juga muncul untuk dapat memperlambat pertumbuhan xenografts kanker
payudara manusia.
Dalam hal mekanisme aksi, agen ini ditargetkan TGF tidak signifikan mempengaruhi tumor
proliferasi sel apoptosis. Sebaliknya, mereka muncul untuk bertindak dengan setidaknya tiga
komplementer
mekanisme, termasuk derepression kekebalan anti-tumor, penghambatan angiogenesis dan
sel otonom pembalikan karakteristik, mesenchymal motil, fenotipe invasif
basal sel-sel kanker payudara seperti dan HER2-positif. Karena aktivasi tumor-asosiasi TGF sinyal datang
ke dalam bermain relatif terlambat dalam tumor
pembangunan, dan terutama mempengaruhi kemampuan sel tumor untuk menginvasi dan mendirikan
metastasis,
studi praklinis selalu harus mengandalkan mouse model kanker payudara yang
mengikhtisarkan sebagian atau seluruh kaskade metastasis. Hanya dalam jumlah terbatas model kanker
payudara
memenuhi kriteria tersebut, dan beberapa di antaranya adalah estrogen-tergantung. Bahkan, hampir
semua bukti
kemanjuran preklinik antagonis TGF diperoleh dengan menggunakan "triple-negatif" atau basal seperti
kanker payudara model. Sebuah kuat dan mandiri divalidasi tanda tangan dari TGF upregulated
gen jelas berhubungan dengan prognosis buruk himpunan bagian pangkal-seperti payudara dan HER2-
positif
kanker, serta dengan subset prognosis baik kanker payudara lumen. Temuan ini
menyarankan bahwa kehadiran tanda tangan respons TGF mungkin mendorong perkembangan tumor
di
kanker estrogen-independen, tapi mungkin mencerminkan sel penekan respon host dalam
estrogendependent
lumen kanker. Konsisten dengan gagasan ini adalah bukti eksperimental mounting
bahwa TGF memainkan peran kunci dalam memelihara sel induk kolam susu epitel, baik dalam
jaringan payudara normal dan ganas, sebagian oleh inducing transisi epitelial-ke-mesenchymal,
sementara dibedakan, estrogen reseptor positif, sel luminal tidak tanggap terhadap TGF oleh
berdasarkan epigenetik membungkam gen reseptor TGFBR2. Populasi sel yang sama merespon
dengan estrogen oleh downregulating TGF, sedangkan anti-proliferasi dan tindakan proapoptotic
anti-estrogen tampaknya dimediasi oleh TGF. Berdasarkan model yang diusulkan, kami memperkirakan
bahwa
TGF menghambat sinyal dalam susu induk harus mendorong diferensiasi sel ke lumen
atau duktal sel basal. Akibatnya, pengobatan kanker basal-suka atau HER2-positif dengan
antagonis TGF mungkin memiliki efek anti-tumor dengan mengubah sel menjadi lebih epithelioid,
non-proliferasi (dan, mungkin, non-metastasis) fenotipe (mesenchymal-ke-epitel
transisi, MET). Sebaliknya, para agen bisa memusuhi efek terapeutik antiestrogens
pada kanker lumen estrogen-tergantung. Prediksi ini harus diatasi
prospektif dalam uji klinis, tetapi harus menginformasikan seleksi dari populasi pasien yang paling
mungkin manfaat dari pendekatan ini novel anti-metastasis terapi.