Soal Ujian Akhir Semester “ Molekuler of Malignancy”

Assoc.Prof.DR.dr.H Agung Putra, MSi.Med

Tanggal: 30 Juli 2021

Sel kanker adalah sel yang memperoleh kemampuan survival ketika terpapar berbagai

agen mutagenik. Hasil penelitian melaporkan bahwa sel kanker memiliki berbagai

kemampuan untuk bertahan terhadap lingkungan mikroseluler yang tidak

menguntungkannya termasuk terhadap agen kemoterapi maupun radioterapi.

Kemampuan dikenal sebagai Hallmark of cancer.

Pertanyaan:

1. Salah satu hallmark of cancer adalah mampu bertahan dalam area yang miskin

vaskuler dan mampu membuat auto-vaskulerisasi pada area tersebut untuk

keberlangsungan hidupnya. Bagaimanakah mekanisme molekuler vaskulerisasi

tersebut.

Angiogenesis adalah hasil dari rangkaian yang sangat teratur dari kejadian molekuler

dan seluler, sehingga migrasi, proliferasi, dan diferensiasi sel-sel endotel menjadi

formasi kapiler baru yang kemudian dapat berkembang menjadi pembuluh darah yang

lebih matur. Kaskade angiogenik meliputi fase aktivasi dan fase resolusi. Ketika sel-

sel endotel yang dirangsang untuk tumbuh, mengeluarkan protease, heparanase, dan

enzim pencernaan lain yang mencerna membran basal di sekitar pembuluh darah.

Pemisahan ekstraseluler matriks memungkinkan pelepasan faktor proangiogenik dari

matriks. Hubungan antar sel-sel endotel menjadi bercelah, dan pembuluh darah baru

dibentuk yang tumbuh ke arah sumber rangsangan. Selain sel endotel mengalami

proliferasi dan migrasi, sel-sel progenitor hematopoetic endotel juga berkontribusi

terhadap pembentukan lumen kapiler. Resolusi kemudian menghasilkan maturasi dan

stabilisasi pembentukan mikrovesel yang baru oleh pembuluh darah dengan pericytes,

rekonstruksi membran basal, dan pembentukan kompleks junction. Dalam jaringan

pembuluh darah tumor, fase resolusi tidak lengkap, sehingga terbentuk mikrovesel

yang tidak teratur dan berkelok-kelok, dengan lapisan endotel parsial dan fragmen

membran basal serta peningkatan permeabilitas mikrovaskuler. Pembuluh darah

tumor cenderung merusak aturan konvensional mikrosirkulasi, menyebar tanpa

organisasi dan mengubah diameter pembuluh darah dengan diferensiasi yang hilang

di arteriol, kapiler, dan venula.

Gambar 1. Molekul pro- dan antiangiogenik

Faktor Proangiogenik
Sel-sel kanker mampu merangsang angiogenesis dengan cara memproduksi beberapa
faktor angiogenik, termasuk vascular endotelial-derived growth factor (VEGF),
angiopoetin, basic fibroblast-like growth factor (bFGF), epidermal growth factor
(EGF), interleukin 8 (IL-8), dan transforming growth factor β (TGF-β), serta berbagai
molekul lain. Selain sel tumor, sel-sel endotel tumor, sel stroma, dan sel-sel inang
yang bersirkulasi (sel progenitor endotel, trombosit, dan makrofag) mampu
mensekresi modulator angiogenesis [7]. Trombosit darah misalnya , telah diusulkan
untuk berkontribusi dalam angiogenesis dengan cara pelepasan molekul
 proangiogenik poten dari granul α. Trombosit membawa mediator kelompok besar,
seperti VEGF-A, platelet-derived growth factor (PDGF), dan bFGF. Selain itu, faktor
pertumbuhan hepatosit, EGF, angiopoetin-1, fibronectin, dan heparanase disekresikan
setelah aktivasi trombosit dapat lebih merangsang tumor untuk angiogenesis.

Faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF)

Salah satu molekul yang memainkan peran penting dalam angiogenesis tumor VEGF,
salah satu sitokin angiogenik paling poten. Hal ini pertama kali ditandai karena
kemampuannya untuk menginduksi kebocoran pembuluh darah dan oleh karena itu
juga dikenal sebagai faktor permeabilitas pembuluh darah.
Enam anggota yang diketahui dari kelompok VEGF telah ditemukan: VEGF-A, -B,
-C, -D, dan -E serta faktor pertumbuhan plasenta. VEGF-A terutama terlibat dalam
angiogenesis, sedangkan VEGF-C dan VEGF-D yang terlibat dalam
lymphangiogenesis. Kelompok VEGF mengaktifkan sel endotel dengan pengiriman
sinyal melalui reseptor VEGF (VEGFR-1, -2, -3). VEGFR-1 (fms-like tyrosine
reseptor kinase, Flt-1) dan VEGFR-2 (kinase insert domain containing receptor,
KDR) terletak di pembuluh darah endotel dan diregulasi selama angiogenesis,
sedangkan VEGFR-3 diekspresikan pada limfatik. Efek angiogeneik terutama
diberikan melalui pengikatan VEGF-A ke VEGFR-2. VEGFR-2 mengalami
dimerisasi dan fosforilasi tirosin yang bergantung pada ligan pada sel endotel yang
intak serta menghasilkan mitogenik, kemotaktik, dan sinyal prosurvival. VEGF-C
mengikat VEGFR-3, merupakan mitogenik pada sel endotel limfatik dan
menginduksi hiperplasia yang sudah ada sebelumnya pada pembuluh limfatik.
Produksi VEGF diregulasi oleh beberapa faktor pertumbuhan utama yang sering
diekspresikan oleh tumor, termasuk EGF, TGF-α dan -β, FGF, dan PDGF. Hormon,
seperti estrogen dan TSH (thyroid-stimulating hormone), dan sitokin inflamasi,
termasuk IL-1 dan IL-6, juga menginduksi ekspresi VEGF pada banyak jenis sel. Hal
ini tidak dapat diabaikan bahwa VEGF memiliki peran pada sel-sel tumor secara
langsung, dengan menghambat interaksi VEGF dengan reseptor non-tyrosine kinase
neuropilin, ko-reseptor VEGF yang mempengaruhi mitogenesis sel.
2.
Angiopoetin
Angiopoetin (Ang-1-Ang-4) terlibat dalam pertumbuhan dan perkembangan
pembuluh darah pada berbagai jenis tumor. Di antara empat angiopoetin yang
diketahui, Ang-1 dan Ang-2 adalah yang paling dikenali oleh sitokin, baik dalam hal
mengerahkan fungsi biologis mereka dengan cara mengikat reseptor Tie-2. Ang-1
mendukung kelangsungan hidup sel endotel, pertumbuhan, dan menstabilkan
jaringan vaskuler dengan membawa pericytes pada segmen imatur pembuluh darah.
Sebaliknya, Ang-2, diekspresikan pada situs remodelling vaskuler, menyebabkan
hilangnya pericytes dan mengekspos sel endotel pada faktor-faktor angiogenik.
Dengan kehadiran VEGF, destabilisasi ini menginduksi respon angiogenik. Ekspresi
Ang-1 cenderung terbatas pada sel-sel tumor, sedangkan Ang-2 juga terlihat pada
mikrovaskularisasi. Dalam beberapa kasus, Ang-1 yang diekspresikan oleh sel-sel
tumor tetap tidak berubah, sedangkan ekspresi Ang-2 tampak meningkat khususnya
pada jenis tumor yang mendapat vaskularisasi tinggi.
Faktor Pertumbuhan Fibroblast
Fibroblast growth factors (FGFs ) adalah famili heparin yang mengikat protein. FGF-
1 (asam) dan FGF-2 (dasar) yang digambarkan sebagai induktor angiogenik. Semua
FGFs mengikat proteoglikan sulfat heparan (GAG) dari matriks ekstraseluler (ECM).
FGFs dapat mengikat empat reseptor spesifik transmembrane tirosin kinaseyang
menginduksi reseptor untuk mengalami dimerisasi dan aktivasi. FGF-1 dan FGF-2
menginduksi proliferasi sel endotel dan diferensiasi sel epiblast menjadi sel endotel.
Selanjutnya, FGF-2 merangsang pelepasan aktivator plasminogen urin dan
kolagenase dalam sel endotel serta bertindak sebagai kemo-atraktan untuk sel-sel
tersebut.
Faktor Antiangiogenik
Adanya faktor angiogenik tidak cukup untuk memulai pertumbuhan pembuluh darah
baru. Faktor pro-angiogenik diimbangi oleh sejumlah molekul antiangiogenik alami.
Beberapa contoh molekul antiangiogenik adalah faktor antiangiogenik
thrombospondin-1 (TSP-1 dan angiostatin/ endostatin.
Thrombospondin-1
 Thrombospondin termasuk dalam famili protein matriks ekstraseluler (ECM). CD36
(juga dikenal sebagai GP88, GP IV, GP IIIb) yang merupakan reseptor seluler penting
bagi TSP-1 pada endotel mikrovaskuler dan diperlukan untuk aktivitas
antiangiogenik. Aktivitas antiangiogenik dari TSP-1 yang berada dalam domain
struktural yang dikenal sebagai TSP tipe 1 ulangan. Interaksi antara TSP-1 dan
reseptornya mengaktifkan urutan peristiwa intraseluler yang akhirnya mengakibatkan
apoptosis sel endotel [18]. Sebagai tambahan dari efek antiangiogenk yang dimediasi
CD36, TSP-1 dapat berpotensi menghambat angiogenesis melalui interaksi dengan
pro-MMP2 / 9, MMP-2/9 atau induksi penghentian siklus sel. Namun, penelitian yang
berbeda melaporkan peran kontroversial dari TSP-1 pada angiogenesis yang
bergantung pada status fungsional TSP-1 domain / fragmen. Beberapa enzim
proteolitik, termasuk trombin, plasmin, dan tripsin, menghasilkan dua fragmen TSP-1
dari 25 dan 140 kDa. Meskipun sebagian besar aktivitas antiangiogenk yang
dimediasi melalui reseptor CD36 terletak di fragmen 140-kDa, efek positif pada
angiogenesis telah terdeteksi pada ikatan heparin 25-kDa fragmen TSP-1.
Endostatin/ Angiostatin
Endostatin adalah fragmen plasminogen 38-kDa. Injeksi sistemik angiostatin telah
terbukti dapat menghambat neovaskularisasi tumor dan pertumbuhan metastasis.
Fungsi angiostatin sebagai inhibitor ETC ditingkatkan dan t-PA dikatalisasi oleh
aktivasi plasminogen. Penghambatan matriks yang ditingkatkan oleh aktivasi
plasminogen menyebabkan pengurangan migrasi dan invasi endotel, sebuah langkah
penting dalam pembentukan dan pertumbuhan mikrovaskuler. Endostatin yang
dihasilkan oleh pembelahan fragmen 20-kDa kolagen XVIII, proteoglikan yang
ditemukan di dinding pembuluh dan membran basal. Endostatin merupakan sitokin
kuat yang menghambat migrasi sel endotel dan merangsang apoptosis sel endotel dan
penghentian siklus sel.

2. Sesungguhnya jaringan normal sekitar sel yang mengalami mutagenik pada awalnya

dapat melakukan supresi pada sel mutagenik tersebut ketika sel tersebut melakukan
 pembelahan yang tak terkontrol, namun pada sel kanker hal ini tidak terjadi. Jelaskan

mengapa hal ini terjadi.

Sel yang mengalami mutagenik dan berproliferasi secara berlebihan akan

mengekspresikan tumor antigen. Tumor antigen dapat dikenali oleh makrofag

jaringan dan dipresentasikan kepada sel t sitotoksik untuk mengeliminasi sel tersebut

dengan bantuan granzyme. Namun sel tumor dapat menghidari proses tersebut

dengan ‘mengakali’sistem imun. Sel tumor dapat mengekspresikan PD-1 sehingga

terbentuk ikatan PD1/PD1Ligand. Ikatan ini secara fisiologis menghasilkan sinyal ‘do

not kill me’kepada sel T sitotoksik. Selain itu sel kanker juga membentuk ikatan

CD47/SIRP α. Interaksi reseptor dan ligand tersebut akan menyebabkan defosforilasi

berbagai substrat dan menyebabkan penurunan jalur sinyalisasi sehingga menurunkan

efek fagositosis oleh makrofag. CD47 sering juga disebut sebagai sinyal “do not eat

me”.

3. Kemampuan sel kanker membelah terus menerus tanpa batasan mendorong sel kanker

tersebut abadi atau immortal. Jelaskan secara molekuler mengapa dan bagaimana

upaya untuk mengkontrolnya

Sel kanker dapat melakukan pembelahan sel secara terus menerus dikarenakan

adanya hiperaktifitas telomerase. Telomerase merupakan kompleks yang tersusun

atas telomerase reverse transcriptase (TERT) yang dikode oleh gen hTERT dan

human telomerase RNA (hTR) yang dikode oleh gen hTERC. Telomerase memiliki

fungsi untuk memperpanjang telomer sehingga sel dapat membelah secara terus

menerus. Hal ini dapat terjadi ketika terjadi ketidakseimbangan antara upregulating
 transcription factor dan downregulating transcription factor, dimana terdapat

peningkatan aktifitas upregulating transcription factor. Upregulating transcription

factor terhadap gen hTERT adalah ETS, c-MYC, SP1, dan NF-kB. Sementara

downregulating transcription factor adalah WT1 dan MZF2. Ketidakseimbangan ini

disebabkan oleh mutasi transisi C>T −124 bp and −146 bp upstream pada ATG start

site dalam kromosom 5. Mutase tersebut menghasilkan 11 bp nucleotide stretch (5′-

CCCCTTCCGGG-3′) yang mengatur ETS.

Upaya untuk mengkontrol hal ini adalah dengan menggunakan penghambat

telomerase. Salah satu penghambat telomerase yang paling “menjanjikan” adalah

oligonucleotide imetelstat (GRN163L). Imetelstat memiliki sekuens (5′-palmitate-

TAGGGTTAGACAA-NH2-3′) yang mengikat pada regio 13-nucleotide milik hTR

dan memiliki afinitas serta sensitifitas yang tinggi terhadap holoenzim telomerase,

yang menyebabkan inhibisi aktifitas enzim.

4. Bagaimana strategi induksi apoptosis yang usulkan dalam upaya mengeliminasi sel

kanker tersebut, termasuk bagaimana mekanisme apoptosis yang anda tawarkan.

Induksi apoptosis dapat terjadi dengan cara menstimulasi molekul proapoptosis dan

menghambat molekul antiapoptosis. Beberapa diantaranya adalah inhibitor BCL-2,

yang merupakan protein antiapoptosis. Pada keadaan normal protein ini diinhibisi

oleh protein BH3 ketika terdapat stress apoptosis sehingga terjadi aktifasi BAX dan

BAK. BAX dan BAK akan beroligomerisasi sehingga menyebabkan terjadi

peningkatan permeabilisasi pada dinding luar mitokondria. Setelah itu, terjadi

pelepasan protein sitokrom c, second mitochondria-derived activator of caspase

(SMAC), dan Omi yang kemudian membentuk apoptosom. Di dalam apoptosom

terjadi aktifasi kaspase-9 yang selanjutnya mengaktifkan kaspase-3 dan 7 yang

menyebabkan degradasi protein dalam sel dan menyebabkan kematian sel.

Contoh lain adalah penghambat X-linked inhibitor of apoptosis protein (XIAP). pada

keadaan normal XIAP dihambat oleh protein Omi. XIAP bekerja sebagai penghambat

kaspase yang akan menyebabkan kematian sel.