Pemekatan Keratinase dari Bacillus sp.

24 untuk Meningkatkan Aktivitas

Dehairing
Suharti, Arinta Agni Dewantari, dan Nurlaili Lisdiyarini
Jurusan Kimia, FMIPA
Universitas Negeri Malang
suharti.fmipa@um.ac.id

Abstrak
Keratinase dapat diproduksi oleh Bacillus sp MD24 dengan menggunakan bulu ayam sebagai substrat.
Ekstrak kasar keratinase tersebut terbukti dapat digunakan sebagai agen dehairing. Namun demikian,
proses dehairing memerlukan waktu 72 jam karena rendahnya aktivitas keratinase. Penelitian ini
bertujuan meningkatkan kemampuan keratinase sebagai agen dehairing. Dua hal telah dilakukan dalam
upaya meningkatkan aktivitas ekstrak kasar enzim yaitu peningkatan produksi enzim dan pemekatan
enzim. Usaha untuk meningkatkan produksi enzim dilakukan dengan suplementasi media menggunakan
sumber karbon tambahan berupa gula sederhana (sukrosa, glukosa, atau fruktosa). Peningkatan
konsentrasi enzim dengan cara pemekatan dilakukan melalui pengendapan enzim menggunakan amonium
sulfat dengan tingkat kejenuhan 80%. Enzim hasil pengendapan diuji kemampuannya dalam dehairing
kulit kambing pada berbagai waktu inkubasi. Penelitian menunjukkan bahwa suplementasi media dengan
karbon sederhana memberikan hasil yang kontradiksi dimana penambahan sukrosa, glukosa, atau fruktosa
justru menurunkan produksi ekstrak kasar keratinase. Sedangkan pemekatan mampu meningkatkan
aktvitas enzim dari 8,79 U/mL sebesar 20,3 U/mL dan mampu menghilangkan bulu dengan waktu
perendaman selama 48 jam.

Kata-kata kunci: Bacillus, keratinase, gula sederhana, pemekatan

Abstract
Keratinase can be produced by Bacillus sp MD24 under chicken feathers as a substrate. The crude
extract keratinase is proven to be used as a dehairing agent. However, dehairing process takes 72 h
because of the low activity of keratinase. This study aims to improve the ability of keratinase as dehairing
agents. Two things have been done in an effort to increase the activity of the crude extract, increasing
production of enzymes and enzyme pre-concentration. Efforts to increase enzyme production were done
by supplementing the media using additional carbon sources using simple carbohydrates (sucrose,
glucose, or fructose). Enzyme pre-concentration was done by enzyme precipitation using ammonium
sulphate at 80% saturation level. The precipitated enzyme was tested for its ability to dehair the goat skin
at various incubation times. Supplementation of the medium with simple carbohydrate showed
contradictory results where the addition of sucrose, glucose, or fructose actually decreased the
production of keratinase. As expected, the pre-concentration increased the activity of the enzyme from 8.3
U/mL of 20.3 U/mL and the concentrated enzyme is capable to remove the goat hairs with immersion time
for 48 hours.

Keywords: dehairing, keratinase, simple carbohydrate, pre-concentration

PENDAHULUAN
Industri penyamakan kulit di Indonesia telah
mengalami sejarah panjang dan pertumbuhan yang
pesat untuk memproduksi bahan-bahan berbahan
kulit. Bahan baku industri ini berbasis kepada
sumber daya alam dalam negeri, sehingga mampu
memberikan nilai tambah yang cukup tinggi. Hal
ini didukung dengan semakin meningkatnya
pasokan bahan baku seiring dengan meningkatnya
produksi ternak. Contohnya jumlah populasi
ternak kambing di Jawa Timur dari tahun ke tahun
mengalami peningkatan rata-rata sebesar 3,32%
per tahun (Disnak Jatim, 2016). Hasil samping
industri pemotongan hewan yang berupa kulit
diolah menjadi barang-barang kulit, seperti: tas,
sarung tangan, garmen, dan lain-lain. Pengolahan
kulit yang dikenal dengan penyamakan kulit
mampu mengubah kulit mentah menjadi kulit yang
lebih stabil, tidak mudah membusuk, dan cocok

Suharti, dkk., Pemekatan Keratinase dari Bacillus sp. 24 untuk Meningkatkan Aktivitas Dehairing... 1
Journal Cis-Trans (JC-T) Volume 1, Nomor 2, Desember 2017, e-ISSN 2549-6573
untuk beragam kegunaan (Mustakim, dkk., 2010).
Meskipun pengolahan kulit memberikan
kontribusi besar bagi perekonomian secara global,
namun juga menimbulkan pencemaran bagi
lingkungan. Limbah-limbah dari industri
pengolahan kulit dapat mengubah sistem di
lingkungan dan menjadi media transmitan bagi
berbagai penyakit (Arunachalam, dkk., 2009).
Secara garis besar proses penyamakan kulit terdiri
dari tiga tahap, yaitu: pra-penyamakan,
penyamakan, dan pasca penyamakan. Pada tahap
pra-penyamakan, kulit terlebih dahulu melalui
proses dehairing (buang rambut) dengan
merendamnya dalam kapur (Ca(OH)2) dan sulfida
(Na2S) yang menghasilkan limbah berupa gas H2S
(hidrogen sulfida), bubur rambut, dan lumpur
kapur (Jaouadi, dkk., 2009). Gas H2S merupakan
gas yang berbahaya bagi kesehatan.
Salah satu metode alternatif yang dapat
digunakan untuk mengurangi dampak pencemaran
lingkungan dalam proses dehairing yaitu
pemanfaatan teknologi enzim dalam proses
penyamakan kulit. Menurut Kandasamy, dkk.
(2012), protease spesifik yang disebut keratinase
dapat diaplikasikan pada proses dehairing kulit
kambing. Bulu dan rambut merupakan protein
fibrous yang kaya akan sulfur. Struktur keratin
kaya akan ikatan disulfida yang membedakan sifat
keratin dari protein pada umumnya. Enzim-enzim
protase seperti tripsin, pepsin, dan papain tidak
mampu mendegradasi keratin. Keratin hanya dapat
didegradasi oleh enzim protease spesifik yaitu
keratinase karena kemampunnya dalam
memutuskan ikatan peptida dan disulfida yang
terdapat pada keratin (Gupta & Ramnani, 2006).
Riesmi (2015) telah berhasil mengisolasi bakteri
indigenous (Bacillus sp. MD24 ) dari tanah yang
mampu menghasilkan enzim keratinase. Bakteri
Isolat Bacillus sp. MD24 dapat mendegradasi bulu
ayam yang diamati selama 10 hari dengan
%weight loss sebesar 71,01%.
Penelitian lebih lanjut tentang keratinase dari
Bacillus sp. MD24 telah dilakukan antara uji
potensi ekstrak kasar keratinase sebagai agen
dehairing (Zuhriyah, 2016). Hasil uji coba
menunjukkan bahwa keratinase tersebut dapat
digunakan sebagai agen dehairing, namun masih
memerlukan waktu yang lama (72 jam). Hal ini
kurang menguntungkan bagi industri penyamakan
kulit. Lamanya waktu dehairing kemungkinan
dapat disebabkan oleh rendahnya aktivitas ekstrak
kasar keratinase. Peningkatan aktivitas enzim
dalam proses dehairing kulit kambing telah
diupayakan dengan dua cara yaitu peningkatan
2
produksi dan pemekatan enzim. Peningkatan
produksi enzim dilakukan dengan optimasi
pertumbuhan sel salah satunya dengan mencari
media yang lebih baik yang mampu menghasilkan
biomassa (jumlah sel) yang tinggi dan mampu
menghasilkan metabolit yang diinginkan dalam
konsentrasi yang tinggi. Sumber karbon digunakan
sebagai sumber nutrisi tambahan non protein yang
digunakam sebagai sumber energi kimia untuk
meningkatkan biomassa, sedangkan pemekatan
umumnya dilakukan menggunakan garam atau
pelarut organik. Hasil studi terdahulu
menunjukkan amonium sulfat pada tingkat
kejenuhan antara 60-80% dapat diaplikasikan
untuk pemurnian enzim protease alkali dari
Bacillus brevis (Mahariyanti, 2015). Tulisan ini
melaporkan hasil upaya peningkatan aktifitas
keratinase dari Bacillus sp. MD24 dan
kemampuanya dalam mempercepat proses
dehairing.
METODE
Persiapan Media
Media yang digunakan terdiri dari dua jenis
yaitu media NA (nutrient agar) dan media keratin.
Media NA padat digunakan untuk peremajaan sel
dan media NA cair digunakan untuk pembuatan
starter. Sedangkan media keratin digunakan
mengklarifikasi kemampuan mikroba untuk
mendegradasi keratn dan produksi enzim. Media
keratin padat terdiri dari; 0,03% K2HPO4;0,04 %
KH2PO4; 0,05% NaCl; 0,01 % MgCl2.6H2O; dan
1,5% agar dan 0,5% keratin bubuk, sedangkan
media keratin cair untuk produksi digunakan 0,1
% bulu ayam utuh dan agar dihilangkan dari
komponen media. Gula sederhana berupa sukrosa,
glukosa dan atau fruktosa ditambahkan ke dalam
media produksi untuk melihat pengaruh gula
tersebut terhadap produksi enzim.
Peremajaan Biakan Murni Bacillus sp. MD
Peremajaan biakan murni bakteri Bacillus sp.
dilakukan secara aseptik. Media NA padat
digunakan secara rutin untuk penyimpanan biakan
sedangkan media keratin padat digunakan untuk
meyakinkan biakan yang disimpan memang
mampu menghasilkan keratinase ekstraselular.
Inokulum diinokulasikan pada suhu 37˚C selama
24 jam.
Produksi Ekstrak Kasar Keratinase Bacillus sp.
MD24
Starter disiapkan dengan cara mengambil 2 ose
biakan murni bakteri yang telah diremajakan dan
diinokulasikan dalam 10 mL media cair Nutrient
 Suharti, dkk., Pemekatan Keratinase dari Bacillus sp. 24 untuk Meningkatkan Aktivitas Dehairing...
Broth (NB). Selanjutnya, inokulum cair tersebut
diinkubasi pada suhu 37˚C diiringi aerasi pada
kecepatan 100 rpm selama 18 jam. Selanjutnya,
starter diinokulasikan ke dalam 100 mL media
produksi dan diinkubasi pada suhu 37˚C diiringi
aerasi pada kecepatan 100 rpm selama 48 jam.
Enzim ekstrak kasar dan bula ayam yang belum
terdegradasi dipisahkan secara filtrasi
menggunakan kertas saring Whatman 40. Kertas
saring yang berisi sisa bulu ayam dikeringkan dan
diukur massanya untuk perhitungan persentase
massa bulu yang hilang (Weight Loss). Filtrat hasil
penyaringan dipisahkan dari sel dengan cara
sentrifugasi dingin selama 15 menit dengan
kecepatan 10.000 rpm pada suhu 4˚C. Supernatan
selanjutnya diperlakukan sebagai ekstrak kasar
enzim.
Uji Aktivitas Keratinase Bacillus sp. MD24
Uji aktifitas dilakukan sesuai prosedur yang
dikembangkan oleh Suharti, dkk. (artikel sudah
disubmit). Sebanyak 5 mL keratin 1% yang telah
dilarutkan dalam 50 mM buffer tris-HCl pH 8
dimasukkan dalam tabung reaksi. Selanjutnya, 1
mL enzim keratinase ditambahkan pada tabung
reaksi tersebut, yang kemudian divortex dan
diinkubasi pada suhu 37˚C selama 30 menit.
Setelah itu, aktivitas enzim dihentikan dengan
menambahkan 2 mL TCA 10% dan sebanyak 1
mL buffer tris-HCl 50 mM ditambahkan ke dalam
campuran. Campuran divortex dan diinkubasi pada
suhu 4˚C selama 30 menit dan disentrifugasi pada
10.000 rpm selama 10 menit. Supernatan hasil
sentrifugasi ditentukan kadar tirosinnya dengan
mengukur absorbansinya pada panjang gelombang
280 nm. Kontrol reaksi enzimatis diisi larutan
dengan komposisi sama, hanya saja tahapan
penambahan enzim keratinase diganti dengan
buffer tris-HCl 50 mM, serta pada tahapan
penambahan buffer tris-HCl 50 mM diganti
penambahan enzim keratinase. Absorbansi tirosin
sampel dikurangi dengan absorbansi tirosin pada
kontrol untuk mengetahui absorbansi tirosin yang
dibebaskan selama degradasi keratin oleh
keratinase.
Pemekatan Ekstrak Kasar Keratinase dengan
Ammonium sulfat 80%
Ekstrak kasar keratinase diendapkan dengan
penambahan garam ammonium sulfat sedikit demi
sedikit sampai dengan tingkat kejenuhan 80%
sambil diaduk perlahan. Penambahan dilakukan
pada temperature 4oC. Campuran selanjutnya
disimpan selama 24 jam untuk mengoptimalkan
proses pengendapan. Protein yang mengendap
dipisahkan dengan sentrifugasi pada suhu 4˚C
selama 20 menit dengan kecepatan 8000 rpm.
Endapan yang dihasilkan dilarutkan kembali
dalam 20 mL buffer 50 mM Tris-HCl pH 8,0 yang
mengandung 1 mM. Logam Ca adalah logam
yang mampu menginduksi aktifitas keratinase dari
Bacillus sp MD24 (Zuhriyah, 2016). Larutan
enzim tersebut kemudian didialisis menggunakan
membran selofan melawan 50 mM buffer Tris-
HCl yang mengandung1 mM CaCl2 pada suhu
4˚C. Pergantian buffer dilakukan setiap 3 jam
selama 12 jam.
Uji Dehairing Kulit Kambing
Kulit kambing direndam dalam larutan enzim
dan diinkubasi pada suhu 37˚C. Setiap 24 jam
sekali, kulit kambing dihilangkan bulunya dengan
cara menggosoknya menggunakan spatula.
Sebagai kontrol, kulit kambing direndam dalam
larutan buffer yang digunakan untuk melarutkan
enzim.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Regenerasi Biakan Murni Bakteri Bacillus sp.
MD24
Isolat bakteri yang digunakan pada penelitian
ini merupakan biakan murni yang sebelumnya
telah diisolasi dalam media keratin-agar yang
diteliti oleh Riesmi (2015). Regenerasi Bacillus sp.
dari kultur murni MD24 merupakan tahap awal
untuk mendapatkan bakteri yang sehat dan
produktif. Regenerasi isolat bakteri dilakukan pada
media padat Nutrient Agar (NA) dan media
keratin. Gambar 1 menunjukkan koloni Bacillus sp
pada media keratin padat. Setelah beradaptasi
dengan media tumbuhnya, perkembangbiakan
Bacillus sp. MD24 dapat mudah diamati dengan
beberapa ciri-ciri yang jelas, terutama mengenai
bentuk, warna, kerapatan (density), dan
pengelompokkan koloni-koloni.
Gambar 1. Koloni Bacillus sp. MD24 dalam Media Keratin
3
Journal Cis-Trans (JC-T) Volume 1, Nomor 2, Desember 2017, e-ISSN 2549-6573
Produksi Ekstrak Kasar Keratinase Bakteri
Bacillus sp. MD24
Pada tahap ini, sel bakteri melalui fase adaptasi
yang lebih panjang karena tidak dilakukan
adaptasi menggunakan media produksi
(pembuatan starter). Penelitian Hidayati (2016)
menunjukkan bahwa terjadi peningkatan aktivitas
keratinase Bacillus sp. MD24 dari hari ke-1 hingga
ke-3, dimana aktivitas tertinggi diperoleh pada hari
ke-3. Dalam penelitian ini enzim ekstrak kasar
yang diperoleh pada hari ke-3 memiliki aktivitas
keratinase sebesar 8,61 U/mL dengan persentase
Weight Loss yaitu 43,4. Nilai aktivitas keratinase
tersebut tidak berbeda jauh dengan hasil yang
diperoleh Hidayati (2016) yaitu sebesar 9,97
U/mL.
Pengaruh Konsentrasi Sumber Karbon
terhadap Produksi Keratinase
Ketika isolat Bacillus sp. MD24 ditumbuhkan
pada media bulu ayam, maka bakteri akan
memperoleh nutrisi yang berbeda dan lebih sedikit
dibanding dalam media NA dan NB. Dalam proses
pertumbuhan bakteri Bacillus sp. MD24 di dalam
media produksi, bakteri memperoleh beberapa
nutrisi makronutrien dan sedikit mikronutrien.
Makronutrien karbon dan nitrogen diperoleh dari
substrat bulu ayam, K+ dari K2HPO4, Mg2+ dari
MgSO4, sedangkan mikronutrien Na+ dari NaCl.
Pada tahap ini, Bacillus sp. MD24 juga melakukan
aktivitas metabolisme dan menghasilkan enzim
keratinase. Isolat bakteri hanya memperoleh
nutrisi dari bulu ayam sehingga memaksanya
melakukan proses ekskresi keratinase dari dalam
sel untuk memecah keratin dan memanfaatkan
sumber karbon untuk proses pertumbuhan.
Pada penelitian ini dipelajari pengaruh
penambahan sumber karbon yang berupa
karbohidrat sederhana yang diharapkan dapat
digunakan sel sebagai sumber energi untuk
meningkatkan kecepatan pertumbuhan. Sumber
karbon yang digunakan bersama dengan bulu
ayam adalah sukrosa, glukosa, dan fruktosa.
Sedangkan media yang berisi bulu ayam (tanpa
penambahan sumber karbon) digunakan sebagai
pembanding. Aktivitas keratinase tertinggi pada
media produksi yang hanya mengandung bulu
ayam saja, sebesar 8,607 U/mL dan nilai
persentase weight loss 43,38 %, kemudian diikuti
sukrosa 0,5% yang memiliki aktivitas enzim 5,62
U/mL dan weight loss 28,90 %. Seperti dalam
penelitian Hidayati (2016) menunjukkan bahwa
Bacillus sp. MD24 memiliki aktivitas optimum
pada media produksi yang berisi bulu ayam saja,
4
dengan aktivitas enzim ekstrak kasar keratinase
yaitu 9,97 U/mL. Terkait konsentrasi sumber
karbon, sukrosa 1%, glukosa 1%, dan fruktosa 1%
menunjukkan penurunan aktivitas keratinase jika
dibandingkan dengan sumber karbon yang sama
dengan konsentrasi 0,5% (Tabel 1). Sedangkan
peningkatan aktivitas keratinase berdasarkan
penambahan sumber karbon berturut-turut dari
yang paling rendah ke tinggi yaitu: fruktosa,
glukosa, sukrosa, kemudian bulu ayam tanpa
penambahan karbon. Hasil ini tidak sesuai dengan
harapan.
Penurunan aktivitas mungkin dikarenakan
jumlah keratinase yang semakin terbatas (Ghose
dan Ray, 2010). Pada kondisi dimana hanya bulu
ayam yang digunakan sebagai sumber karbon dan
nitrogen, sel membutuhkan asam amino yang
diperoleh melalui degradasi keratin pada bulu
ayam oleh keratinase yang dilepaskannya untuk
dua hal yaitu sumber energi dan materi penyusun
struktur sel. Apabila karbohidrat sederhana seperti
glukosa dan fruktosa tersedia dalam medium
bersama dengan bulu ayam, maka glukosa dan
fruktosa akan lebih mudah diserap oleh sel
dibandingkan protein keratin. Sel akan lebih
menghemat energy dengan menggunakan gula
dibandingkan memproduksi keratinase untuk
memperoleh asam amino sebagai sumber energy.
Hal ini berakibat pada penurunan produksi enzim
keratinase oleh sel bakteri. Meskipun demikian,
keratin masih tetap dibutuhkan oleh sel sebagai
sumber asam amin khusunya untuk bahan dasar
sintesis protein. Hipotesis ini perlu ditunjang
dengan data jumlah sel. Pada penelitian ini tidak
dilakukan penghitungan jumlah. Apabila hipotesis
ini benar, kemungkinan produksi keratinase akan
meningkat kembali apabila glukosa dan fruktosa
setelah habis dalam medium produksi. Sedangkan
sukrosa yang merupakan disakarida (D-glukosa
dan D-fruktosa) bersifat lebih kompleks dan
membutuhkan enzim invertase (disebut juga
sucrase atau saccharose) untuk menghidrolisisnya
menjadi monosakarida. Mengingat sel bakteri
membutuhkan energi, maka sel lebih cenderung
untuk memproduksi keratinase agar aktivitas
metabolismenya tetap berjalan. Sehingga aktivitas
keratinase terbilang lebih tinggi pada penambahan
sumber sukrosa dibandingkan dengan glukosa dan
fruktosa. Namun, hal tersebut perlu dipastikan
lebih lanjut dengan pengukuran aktivitas enzim
invertase. Penelitian lebih lanjut perlu dilakukan
untuk melihat pengaruh karbohidrat kompleks
terhadap pertumbuhan.
 Suharti, dkk., Pemekatan Keratinase dari Bacillus sp. 24 untuk Meningkatkan Aktivitas Dehairing...
Terkait dengan variasi konsentrasi, keratinase
pada medium yang ditambahkan sukrosa 0,5%
memiliki aktivitas lebih tinggi dibandingkan
sukrosa 1%, demikian pula pada glukosa dan
fruktosa. Hal ini menunjukkan semakin kecil
konsentrasi penambahan sumber karbon, maka
semakin tinggi produksi keratinase. Hasil ini
sejalan dengan penelitian Syam (2008) yang
menunjukkan bahwa aktivitas enzim selulase
tertinggi terdapat pada media dengan konsentrasi
selulosa 1% dengan nilai aktivitas enzim sebesar
0,029 U/mL jika dibandingkan dengan konsentrasi
selulosa sebesar 2% dan 3%.
Berdasarkan hasil penelitian terkait pengaruh
konsentrasi substrat terhadap produksi keratinase,
media produksi bulu ayam dan sukrosa 0,5%
memiliki aktivitas yang lebih tinggi dibandingkan
penambahan sumber karbon yang lain. Hal ini
perlu juga diketahui waktu optimum produksi
keratinase untuk mengetahui waktu terbaik
melakukan inkubasi media produksi keratinase.
Persentase bulu ayam terdegradasi tertinggi
pada media produksi berisi bulu ayam yang
diinkubasi hingga hari ke-5 yaitu 61,8. Demikian
halnya dengan media produksi yang berisi bulu
ayam dan sumber karbon sukrosa 0,5%, yang
mengalami peningkatan pada hari ke-5 yaitu 58,8.
Hal ini ternyata berbeda dengan uji aktivitas
keratinase tertinggi media berisi bulu ayam saja
pada hari ke-3. Persentase Weight Loss media bulu
ayam tertinggi pada hari ke-5 yaitu sebesar 61,8
dengan aktivitas keratinase 5,05 U/mL. Sedangkan
Weight Loss pada hari ke-3 yaitu 42,4 dengan
aktivitas keratinase yaitu 8,61 U/mL. Hal ini
mengindikasikan bahwa untuk mengamati
produksi keratinase maka parameter yang tepat
melalui nilai uji aktivitas keratinase, bukan nilai
uji Weight Loss. Selain itu, diperlukan penelitian
lebih lanjut terkait waktu inkubasi dalam rentang
waktu yang lebih lama.
Pengaruh Waktu Penyimpanan terhadap
Aktivitas
Aktivitas enzim dapat menurun selama
penyimpanan atau selama pemakaian. Kedua
substrat tersebut perlu dipertahankan aktivitas
enzimnya agar dapat dipergunakan dalam rentang
waktu yang lama. Proses penyimpanan keratinase
dilakukan dalam lemari pendingin pada suhu 4˚C.
Temperatur ini dipilih untuk keperluan industry
untuk menghindari denaturasi akibat proses
Freezing and Thawing. Telah lama diketahui
bahwa suhu rendah lebih baik daripada suhu tinggi
untuk penyimpanan enzim. Hasil uji aktivitas
keratinase pada beberapa variasi waktu
penyimpanan (0, 24, 48, dan 72 jam) dapat dilihat
pada Tabel 2.
Media produksi keratinase pada waktu
penyimpanan pada 24, 48, dan 72 jam mengalami
penurunan aktivitas keratinase. Hal ini
menunjukkan bahwa proses penyimpanan dapat
mempengaruhi kerja enzim yang disebabkan oleh
2 hal, yaitu: denaturasi dan autokatalis. Pada suhu
sekitar 1 − 4˚C, penyimpanan dapat menahan
kecepatan reaksi kimia dan enzimatis, termasuk
pertumbuhan dan metabolisme bakteri. Proses
penyimpanan dalam suhu rendah juga dapat
mengakibatkan terdenaturasinya protein
keratinase, artinya terputusnya sejumlah ikatan air
dan berkurangnya kadar protein yang dapat
diekstraksi dengan larutan garam. Selain itu,
semakin lama penyimpanan, semakin banyak pula
keratinase yang dapat mengalami kerusakan
karena terjadinya proses autokatalis. Keratinase
yang ada mengkatalisis reaksi hidrolisis protein
keratinase yang lain. Oleh karena itu, jumlah
enzim akan semakin sedikit dan aktivitas
keratinase turut mengalami penurunan.
Penentuan Kemampuan Ekstrak Kasar
Keratinase Bacillus sp. MD24 sebagai Agen
Dehairing Kulit Kambing
Penentuan kemampuan ekstrak kasar keratinase
Bacillus sp. MD24 dalam proses dehairing
dilakukan dengan cara merendam kulit kambing
ukuran 2x2 cm yang dikeringkan tanpa bahan
kimia dalam larutan ekstrak kasar keratinase
selama 0, 24, 48, dan 72 jam. Sebelumnya, ekstrak
kasar keratinase ditambahkan kation logam
divalen yaitu ion Ca2+ 1mM yang mampu
meningkatkan aktivitas ekstrak kasar keratinase
(Zuhriyah, 2016), dengan kondisi optimum
produksi keratinase isolat Bacillus sp. MD24 pada
temperatur 37˚C dan pH 8 (Purwati, 2015).
Pengamatan dilakukan secara langsung dengan
membandingkan kulit kambing sebelum dan
sesudah mengalami reaksi enzimatis. Dari hasil
penelitian menunjukkan bahwa ekstrak kasar
keratinase Bacillus sp. MD24 memiliki
kemampuan dehairing (buang rambut) pada kulit
kambing yang dibuktikan dengan proses
perendamannya menggunakan ekstrak kasar
keratinase dengan waktu perendaman selama 72
jam (Tabel 3). Aktivitas keratinase dalam tahap ini
yaitu 8,15 U/mL dengan persentase Weight Loss
sebesar 42%. Proses pemekatan keratinase perlu
dilakukan untuk memperoleh hasil yang lebih
baik. Ekstrak kasar keratinase telah menunjukkan
kemampuannya dalam proses dehairing kulit
5
Journal Cis-Trans (JC-T) Volume 1, Nomor 2, Desember 2017, e-ISSN 2549-6573

kambing, namun perlu dilakukan pemekatan agar selofan dengan larutan buffer (Dewantari, 2014).
memperoleh waktu perendaman yang lebih Setelah melalui tahap dialisis, larutan enzim
singkat. Pemekatan ekstrak kasar keratinase dapat keratinase diuji aktivitas enzimnya dan digunakan
dilakukan dengan metode pengendapan amonium sebagai agen dehairing kulit kambing.
sulfat untuk mengendapkan protein atau enzim
Aktivitas enzim sebelumnya yaitu 8,79 U/mL
yang diinginkan.
dan setelah pemekatan mengalami kenaikan
Enzim keratinase yang telah terendapkan oleh sebesar 20,3 U/mL. Kenaikan aktivitas enzim
amonium sulfat didialisis selama 12 jam dengan 4 keratinase juga mempengaruhi kemampuannya
kali pergantian buffer. Tahap awal dialisis yaitu dalam dehairing kulit kambing. Pada perendaman
aktivasi membran selofan untuk menahan protein selama 48 jam, sebagian besar rambut telah
yang dimiliki oleh isolat Bacillus sp. MD24. terlepas dari permukaan kulit kambing. Hal ini
Dialisis dilakukan dengan tujuan untuk menunjukkan apabila larutan enzim keratinase
menghilangkan garam amonium sulfat serta dipekatkan, maka aktivitas enzim dapat
pengotor yang masih ada pada larutan. mengalami kenaikan dan proses dehairing kulit
Penggantian buffer setiap 3 jam sekali perlu kambing menjadi lebih cepat 24 jam dari
dilakukan untuk mencegah kesetimbangan ion sebelumnya.
antara larutan yang berada di dalam membran
Tabel 2. Persentase Keratinase Sisa terhadap Waktu Penyimpanan
Tabel 1. Persentase Penurunan Aktivitas Keratinase terhadap Variasi
Waktu Persentase Sisa
Konsentrasi Penambahan Berbagai Jenis Sumber Karbon Jenis Sumber
Penyimpanan Aktivitas
Karbon
Penurunan Aktivitas (jam) Keratinase (%)
Jenis Sumber Karbon
Keratinase (%) 0 100
Bulu ayam (tanpa
Bulu ayam saja 0 24 71,6
penambahan sumber
Sukrosa 0,5% 34,7 48 54,9
C)
72 20,2
Sukrosa 1% 64,4 0 100
Glukosa 0,5% 54,4 Bulu ayam + Sukrosa 24 80,6
0,5% 48 74,1
Glukosa 1% 66,9
72 28,6
Fruktosa 0,5% 73,3
Fruktosa 1% 93,1

Tabel 3. Dehairing Kulit Kambing Menggunakan Ekstrak Kasar Keratinase (0-72 jam)
Aktivitas
Waktu Keratinase 0 jam 24 jam 48 jam 72 jam
(U/mL)

Tanpa Dehairing 0

Dehairing secara
8,15
enzimatis

Hasil Dehairing
20,3
Setelah Pemekatan

6
 Suharti, dkk., Pemekatan Keratinase dari Bacillus sp. 24 untuk Meningkatkan Aktivitas Dehairing
KESIMPULAN
Usaha meningkatkan aktifitas keratinase telah
dilakukan melalui dua cara yaitu optimasi
produksi dan pemekatan enzim. Optimasi produksi
melalui penambahan gula sederhana justru
menurunkan produksi ekstrak kasar keratinase.
Karbohidrat sederhana tersebut mungkin lebih
cepat diserap dan digunakan sebagai sumber
energi dibandingkan bulu ayam sehingga sel
menurunkan produksi karatinasenya untuk
efisiensi. Penambahan karbohidrat kompleks
mungkin perlu dicoba pada berbagai perbandingan
dengan bulu ayam untuk mengoptimalkan
produksi keratinase. Perbandingan massa induser
keratin dan karbohidrat kompleks yang terbaik
DAFTAR RUJUKAN
Arunachalam, C. & Saritha, K. 2009. Protease
Enzyme: an Eco-Friendly Alternative for
Leather Industry. Indian Journal of Science
and Technology, 2(12), 29-32.
Choirani, G. 2017. Pemurnian Enzim Keratinase
Bacillus sp. MD24 Menggunakan Metode
Fraksionasi Amonium sulfat. Skripsi tidak
diterbitkan. Malang: FMIPA Universitas
Negeri Malang.
Data Statistik Populasi Ternak Kab/Kota di Jawa
Timur. Dinas Peternakan Provinsi Jawa
Timur. (http://disnak.jatimprov.go.id), diakses
10 Agustus 2017.
Dewantari, A. 2014. Efektivitas Amilase
Termostabil Isolat Cangar Relatif Terhadap
Amilase Komersial dalam Menghidrolisis
Amilum dari Tapioka, Maizena, dan Tepung
Talas dalam Menghasilkan Glukosa. Skripsi
tidak diterbitkan. Malang: FMIPA Universitas
Negeri Malang.
Ghosh, B & Ray, R. 2010. Saccharification of
Raw Native Starches by Extracellular
Isoamylase of Rhyzopus Oryzae.
Biotechnology, 9(2), P 224-228.
Gumilar, J. 2016. Isolasi dan Identifikasi Bakteri
serta Produksi Enzim Keratinase sebagai
Agensia Buang Rambut Ramah Lingkungan
pada Proses Penyamakan Kulit Domba
Garut. Disertasi tidak diterbitkan.
Yogyakarta: Fakultas Perternakan Universitas
Gadjah Mada.
\ FMIPA Institut Pertanian Bogor.
akan mampu mendorong pertumbuhan sel dan
produksi keratinase. Usaha pemekatan melalui
pemekatan menggunakan amonium sulfat 80 %
mampu menghilangkan bulu pada kulit kambing
pada waktu perendaman yang lebih pendek.
Penelitian lebih lanjut perlu dilakukan untuk
mengetahui rasio enzim dan luas kulit terbaik
untuk keuntungkan industri yang optimum.
Penyimpanan enzim pada temperature 40C
menurunkan aktivitas secara linear, sehingga perlu
dilakukan usaha untuk mempertahankan stabilitas
enzim selama waktu penyimpanan. Liofilisasi
terhadap enzim perlu diuji untuk penyimpanan
enzim yang lebih efisien untuk diaplikasikan
dalam industri.
Gupta, R. & Ramnani, P. 2006. Microbial
Keratinases and Their Prospective
Applications: an Overview. Appl Microbial
Biotechnol, 70, 21-33.
Hidayati, Arina. 2016. Optimasi Produksi
Keratinase dari Bakteri Keratinolitik Bacillus
licheniformis MD24. Skripsitidak diterbitkan.
Malang: FMIPA Universitas Negeri Malang.
Jaouadi, B., Chaabouni, S. E., Ali, M. B.,
Messaoud, E. B., Naili, B., Dhouib, A. &
Bejar, S. 2009. Excellent Laundry Detergent
Compatibility and High Dehairing Ability of
the Bacillus pumilus CBS Alkaline Proteinase
(SAPB). Biotechnology and Bioprocess
Engineering, 14, 503-512.
Mahariyanti, A. 2015. Optimasi Pemurnian Enzim
Protease Alkali Bacillus brevis Menggunakan
Metode Fraksinasi Amonium sulfat. Skripsi
tidak diterbitkan. Malang: FMIPA Universitas
Negeri Malang.
Mustakim, Aris, S., & Kurniawan. 2010.
Perbedaan Kualitas Kulit Kambing Peranakan
Etawa (PE) dan Peranakan Boor (PB) yang
Disamak Krom. Jurnal Ternak Tropika,
11(1), 38-50.
Riesmi, M. 2015. Isolasi dan Identifikasi Bakteri
Indigenous Penghasil Keratinase dari Sampel
Tanah. Skripsi tidak diterbitkan. Malang:
FMIPA Universitas Negeri Malang.
Syam, K. 2008. Optimasi Produksi dan Aktivitas
Enzim Selulase dari Mikrob Selulolitik Asal
Rayap. Skripsi tidak diterbitkan. Bogor:
7
Journal Cis-Trans (JC-T) Volume 1, Nomor 2, Desember 2017, e-ISSN 2549-6573

Zuhriyah, F. 2016. Optimasi Aktivitas Ekstrak

Kasar Keratinase dari Bacillus sp. sebagai
Agen Dehairing Kulit Kambing. Skripsi tidak
diterbitkan. Malang: FMIPA Universitas
Negeri Malang.