MEDIUM KULTIVASI MIKROB

Muhammad Randy Febryan1, Anjar Pribadi2 dan Hasrul Satria Nur2,3

1. Program studi D3 Analisis Farmasi dan Makanan, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A.
Yani Km 36, Banjarbaru, 70713, Indonesia

2. Program Studi Biologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yan Km 36, Banjarbaru,
70713, Indonesia

3. Laboratorium Mikrobiologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yani Km 35,8
Banjabaru, 70713, Indonesia

E-mail: mhmmdrandy99@gmail.com

Abstrak
Pertumbuhan mikroorganisme sangat bergantung pada kandungan nutrisi yang terdapat dalam lingkungan sekitarnya.
Pengkulturan mikroba di dalam lab dilakukan di dalam medium. Medium dapat dibagi menjadi beberapa kelompok
berdasarkan komposisinya, berdasarkan tipenya, dan berdasarkan konsistensinya. Berdasarkan konsistensinya medium
dibagi menjadi medium padat, semi padat, dan cair. Media adalah suatu substansi yang terdiri dari campuran zat-zat
makanan (nutrisi) yang diperlukan untuk pertumbuhan dan perkembangbiakan jasad renik (mikroorganisme). Saat ini
media agar merupakan media yang sangat umum digunakan dalam penelitian-penelitian mikrobiologi. Media agar ini
memungkinkan untuk dilakukannya isolasi bakteri dari suatu sampel, karakterisasi morfologi, sampai penghitungaan
bakteri. Pada praktikum kali ini pembuatan media pertumbuhan mikrob menggunakan media cair NA (nutrient agar),
media padat NB (nutrient broth), dan SDA (sabouraund dextrose agar). Ketiga media tersebut termasuk dalam media
kompleks karena komponennya tidak diketahui. Praktikum ini bertujuan agar mahasiswa bisa mengenal beberapa tipe
media kultivasi mikrob dan dapat menyiapkan media kultivasi mikrob dalam bentuk medium cair, semi padat, dan
padat. Kultivasi mikroba bertujuan untuk mengetahui atau mempelajari sifat fisiologis mikroba. Kultur mikroba
digunakan untuk menentukan jenis organisme, dengan kelimpahan dalam sampel yang diuji, atau keduanya.

Kata Kunci: Agar, Isolasi, Kultivasi, Media, Medium, Mikrobiologi

1. Pendahuluan Di dalam suatu populasi bakteri, tidak semua sel

Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran
zat-zat hara (nutrien) yang berguna untuk membiakkan
mikroba. Dengan menggunakan bermacam-macam
media dapat dilakukan isolasi, perbanyakan, pengujian
sifat fisiologis dan perhitungan sejumlah mikroba.
Supaya mikroba dapat tumbuh baik dalam suatu media,
maka medium tersebut harus memenuhi syarat-syarat,
antara lain : harus mengandung semua zat hara yang
mudah digunakan oleh mikroba, harus mempunyai
tekanan osmosis, tegangan permukaan dan pH yang
sesuai dengan kebutuhan mikroba yang akan tumbuh,
tidak mengandung zat-zat yang dapat menghambat
pertumbuhan mikroba, harus berada dalam keadaan
steril sebelum digunakan, agar mikroba yang
ditumbuhkan dapat tumbuh dengan baik [1].
mampu hidup terus. Pertumbuhan atau kultivasi mikrob
sangat tergantung pada kandungan nutrisi yang
terdapat pada lingkungan sekitarnya, dan pada
ketersediaan berbagai komponen yang diperlukan
untuk aktivitas hidup, komponen-komponen tersebut
meliputi makro nutrisi, mikro nutrisi, dan faktor
pertumbuhan.
Komponen nutrisi yang dibutuhkan oleh
mikroorganisme yaitu makronutrien dan mikronutrien.
Makronutrien yang dimaksud disini adalah nutrisi yang
dibutuhkan dalam jumlah yang cukup besar, seperti C,
H, O, N, S, P, K, Ca, Mg, dan Fe. Sedangkan
mikronutrien merupakan nutrisi yang dibutuhkan
dalam jumlah yang cukup sedikit, misalnya Mn, Mo,
Zn, Cu, Ni, Bo, Cl, Na, Si, dan masih banyak lagi [2].

1
2
Semua makhluk hidup memerlukan karbon sebab unsur
karbon terdapat dalam semua mikromolekul penyusun
sel seperti protein, karbohidrat, asam nukleat, dan
lippid. Berdasarkan sumber karbon, mikroba dapat
digolongkan atas makhluk heterotrof dan autotrof.
Makhluk autotrof bila digunakan karbondioksida
sebagai sumber karbon, bila makhluk tersebut
memperoleh energinya dari cahaya disebut
fotoautotrof, dan bila makhluk tersebut memperoleh
energinya dengan cara mengoksidasi senyawa kimia
maka disebut kemoautotrof. Makhluk hetetotrof
menggunakan bahan organik sebagai sumber karbon.
Disamping itu pula, mikrob juga memerlukan
komponen factor pertumbuhan (growth factor), faktor
tumbuh sering juga disebut zat tumbuh dan hanya
diperlukan dalam jumlah yang sangat sedikit.
Berdasarkan struktur dan fungsinya dalam
metabolisme, factor tumbuh digolongkan menjadi asam
amino, sebagai penyusun protein; basa purin dan
pirimidin, sebagai penyusun asam nukleat; dan vitamin
sebagai gugus prostetis atau bagian aktif dari enzim
[3].
Medium dapat dibagi berdasarkan konsistensinya.
Berdasarkan konsistensinya, medium dibagi menjadi
medium padat, semipadat, dan cair. Medium padat
dimana pada media digunakan bahan pemadat,
misalnya agar-agar. Jumlah tepung agar yang
ditambahkan tergantung kepada jenis mikroba yang
dibiakkan. Bila mikroba memerlukan kadar air tinggi
maka jumlah tepung agar harus rendah/sedikit, tetapi
bila kadar air harus rendah makan penambahan tepung
agar harus lebih banyak. Media padat umumnya
dipergunakan untuk bakteri, ragi, jamur dan kadang-
kadang mikroalgae. Media cair yaitu bila ke dalam
media tidak ditambahkan zat pemadat. Umumnya
dipergunakan untuk pembiakan mikroalgae, kadang-
kadang bakteri dan ragi. Media semi padat atau semi
cair. Media semi padat atau semi cair yaitu bila
penambahan zat pemadat hanya 50% atau kurang.
Umumnya diperlukan untuk pertumbuhan mikroba
yang banyak memerlukan kandungan air dan hidup
anaerobik atau fakultatif, atau untuk pemeriksaan
pergerakkan bakteri [4].
Media adalah suatu substansi yang terdiri dari
campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan
untuk pertumbuhan dan perkembangbiakan jasad renik
(mikroorganisme). Didalam laboratorium mikrobiologi,
kultivasi media sangat penting untuk isolasi. Zat
makanan yang dibutuhkan bakteri pada umumnya
sangat bervariasi, dapat berbentuk senyawa-senyawa
organic sederhana atau senyawa-senyawa organic
komplek (majemuk). Untuk menumbuhkan bakteri
pada tanah cukup dengan mempergunakan senyawa
organik sederhana, tetapi bakteri pathogen
menumbuhkan media yang mengandung ekstrak
daging bagi pertumbuhan bakteri, mudah larut dalam
air, tidak rusak atau menggumpal pada suhu tinggi dan
juga berfungsi sebagai penyangga (buffer). Pepton
dapat dibuat dengan pengasaman atau hidrolisa dengan
enzim dari protein hewani atau protein nabati. Selain
mengandung zat makanan media harus mengandung
NaCl untuk menaikkan tekanan osmose media.
Tekanan ini sangat penting bagi kesetimbangan
fisiskokhemis suatu sel bakteri yang tumbuh dalam
media tersebut [5].
Untuk memelihara suatu mikroorganisme yaitu bakteri
atau jamur, dari media yang ada serta membedakan
bahwa setiap mikroorganisme memiliki peranan yang
berbeda dalam kehidupan, baik yang merugikan
maupun yang menguntungkan. Setiap sel tunggal
mikroorganisme memiliki kemampuan untuk
melangsungkan aktivitas kehidupan dan tidak
memerlukan tempat yang besar, mudah ditumbuhkan
dalam media buatan yang dilakukan dalam percobaan
ini, dan tingkat pembiakannya relative cepat saat
inkubasi [6].
Agar-agar, gelatin atau gel silika merupakan bahan
untuk membuat medium menjadi padat. Namun, yang
paling umum digunakan adalah agar-agar. Meskipun
bahan utama agar-agar adalah gelatin, yaitu suatu
kompleks karbohidrat yang diekstraksi dari alga marin
genus Gelidium, namun sebagian besar
mikroorganisme tidak dapat menggunakannya sebagai
makanan sehingga agar-agar dapat berlaku hanya
sebagai pemadat. Saat ini media agar merupakan media
yang sangat umum digunakan dalam penelitian-
penelitian mikrobiologi. Media agar ini memungkinkan
untuk dilakukannya isolasi bakteri dari suatu sampel,
karakterisasi morfologi, sampai penghitungaan bakteri
yang dikenal dengan nama total plate count [7].
2. Metode Praktikum
Praktikum ini dilaksanakan pada hari senin, 19 maret
2018 pada pukul 10.30-12.00 WITA yang betempat di
Laboratorium Mikrobiologi FMIPA Universitas
Lambung Mangkurat. Praktikum ini bertujuan agar
mahasiswa bisa mengenal beberapa tipe media
kultivasi mikrob dan dapat menyiapkan media kultivasi
mikrob dalam bentuk medium cair, semi padat, dan
padat. Pada praktikum kali ini pembuatan media
pertumbuhan mikrob menggunakan media cair NA
(nutrient agar), media padat NB (nutrient broth), dan
SDA (sabouraund dextrose agar). Ketiga media
tersebut termasuk dalam media kompleks karena
komponennya tidak diketahui.
Media Padat Nutrien Agar (nutrient agar) dalam
metodenya, proses pada media ini diawali dengan
memasukkan media NA 20 gram kedalam gelas beker
yang berisi 250 ml aquadest. Kemudian dipanaskan
diatas kompor listrik sampai semua bahan terlarut
3
sempurna yakni dengan tidak adanya lagi buram pada
warna. Setelah media terlarut, selanjutnya dimasukkan
ke dalam labu erlenmeyer, kemudian labu erlenmeyer
tutup rapat dengan kapas, kemudian lapisi dengan
aluminium foil. Sterilkan dengan otoklaf pada tekanan
1 atm, dan diatur temperaturnya 121℃ selama 15-20
menit. Setelah selesai media nutrien agar didinginkan
kemudian simpan didalam lemari khusus untuk
meyimpan media tersebut.
Media Cair Nutrien Broth (nutrient agar) hampir
sama seperti pada metode pembuatan media NA.
Dalam metodenya, proses pada media ini diawali
dengan memasukkan media NB 0,8 gram kedalam
gelas beker, kemudian ditambahkan 250 ml aquades.
Selanjutnya panaskan campuran media NB dengan
aquades tadi diatas kompor listrik sampai semua bahan
terlarut sempurna. Kemudian dimasukkan kedalam
labu erlenmeyer, tutup rapat dengan kapas, dan lapisi
dengan aluminium foil. Sterilisasikan dengan otoklaf
pada tekanan 1 atm, lalu atur temperatur pada 121℃
selama 15-20 menit, sebelumnya lihat bahan apakah
bersifat termolabil atau tidak, jika iya maka panaskan
dalam waktu yang singkat saja. Setelah selesai
dinginkan media nutrien, kemudian simpan didalam
lemari khusus untuk menyimpan media tersebut.
Media Sabouraund Dextrose Agar (sabouraund
dextrose agar) hampir sema seperti proses-proses
pembuatan sebelumnya, yaitu diawali dengan
memasukkan media SDA 65 gram kedalam gelas beker
yang berisi 250 ml aquadest, kemudian panaskan diatas
kompor listrik sampai semua bahan terlarut buram pada
warna. Masukkan hasil media yang telah dipanaskan
hingga terlarut tadi ke dalam labu erlenmeyer,
kemudian tutup rapat labu erlenmeyer dengan kapas,
kemudian lapisi dengan aluminium foil. Selanjutnya
sterilkan dengan otoklaf pada tekanan 1atm, dan diatur
temperatur 121℃ selama 15-20 menit. Setelah selesai
media didinginkan dan disimpan didalam lemari
khusus untuk menyimpan media tersebut.
3. Hasil dan Pembahasan
Dalam membuat media kultivasi sebagai tempat
pembiakan bakteri echericia coli ada beberapa media
yang digunakan, yaitu medium kultivasi nutrient agar,
medium kultivasi nutrient broth, dan medium kultivasi
sabouraund dextrose agar. Untuk perhitungan massa
bahan dari nutrient agar, nutrient broth, dan sabouraud
dextrose agar, dapat dilakukan dengan menggunakan
rumus perhitungan berikut.
𝑉𝑛 (𝑚𝑙) 𝑥 𝑇𝑆𝑀 (𝑔𝑟𝑎𝑚/𝐿)
Rumus: = ...gram.
𝑉𝑡 (𝑚𝑙)
Bahan- bahan yang digunakan memiliki massa yang
berbeda-beda saat dicampur dengan aquadest. Cara
perhitungannya adalah sebagai berikut :
1. Nutrient Agar = 20 gram/liter
NA dalam aquadest 250 ml :
250 𝑚𝑙 𝑥 20 𝑔𝑟𝑎𝑚/𝐿
= 5 𝑔𝑟𝑎𝑚
1000 𝑚𝑙
2. Nutrient Broth = 8 gram/liter
NB dalam aquadest 250 ml :
250 𝑚𝑙 𝑥 8 𝑔𝑟𝑎𝑚/𝐿
= 2 𝑔𝑟𝑎𝑚.
1000 𝑚𝑙
3. Sabouraud Dextrose Agar = 65 gram/liter
SDA dalam aquadest 250 ml :
250 𝑚𝑙 𝑥 65 𝑔𝑟𝑎𝑚/𝐿
= 16,25 𝑔𝑟𝑎𝑚
1000 𝑚𝑙
Jenis-jenis media kultivasi mikrob dapat dibedakan
menjadi beberapa jenis, yaitu berdasarkan
komposisinya, berdasarkan tipenya, dan berdasarkan
konsistensinya. Media kultivasi mikrob berdasarkan
komposisinya dibagi menjadi 2 kelompok yaitu media
sintetik dan media kompleks. Media sintetik atau
media terdefinisi adalah media dengan komposisi
komponen penyusunnya diketahui, sedangkan media
kompleks adalah media dengan beberapa komponen
atau bahan penyusunnya tidak diketahui. Lalu media
kultivasi mikrob berdasarkan tipenya juga terbagi
menjadi 2, yaitu media selektif atau media yang
digunakan untuk menumbuhkan mikrob tertentu, dan
media diferensial atau media yang digunakan untuk
membedakan kelompok tertentu bakteri. Selanjutnya
media kultivasi mikrob berdasarkan konsistensinya
terbagi menjadi 3 yaitu media cair, media padat, dan
media semi padat. Seperti halnya dalam praktikum ini,
pada percobaannya menggunakan media kultivasi yang
berdasarkan konsistensinya, contohnya media NA
dalam bentuk padat. Media dengan konsistensinya ini
dibuat berdasarkan jumlah persentasi atau konsentrasi
bahan pemadat yang lazim digunakan berasal dari agar-
agar dari rumput laut. Agar-agar ini digunakan karena
tidak dapat dihidrolisis oleh mikrob sebagai sumber
nutrisi dan juga tidak meleleh pada suhu 45°C. Kisaran
persentasi agar-agar untuk media padat 1,5-2,0%,
media semi padat dalam kisaran 0,5-1,0%, dan untuk
media cair tidak ditambahkan agar-agar kedalam media
tersebut.
4

Gambar 1. Proses memasukkan bahan pada labu Gambar 4. Memasukkan kertas lakmus kedalam
erlenmayer. Proses ini dilakukan tabung Erlenmeyer yang berisi media.
setelah penimbangan bahan Proses ini untuk menentukan pH yang
sesuai

Gambar 5. Proses pembungkusan media yang

Gambar 2. Proses memasukkan air aquadest diawali dengan ditutup menggunakan
kedalam labu erlenmayer yang sudah kapas, kemudian dilapisi dengan
berisi media kertas dan karet gelang

Gambar 3. Menempatkan labu Erlenmeyer yang Gambar 6. Proses sterilisasi media pada autoklaf.
berisi media ke atas Hot Plate Stirrer Sterilisasi menggunakan media panas
dengan kecepatan rendah ke tinggi basah
5

Tabel 1. Media yang digunakan untuk media Daftar Acuan

pertumbuhan mikrob beserta isi
Kandungannya
[1] Sutedjo, Mikrobiologi Tanah, Rineka Cipta,
Media Keterangan Jakarta, 1991.
Nutrien Broth Lab-lemco powder, yeast
extrak, pepton, NaCl, pH [2] Darkuni, M. N., Mikrobiologi (Bakteriologi,
Virologi, dan Mikologi), Universitas Negeri
Nutrien Agar Lab-lemco powder, yeast Malang, Malang, 2001.
extrak, pepton, NaCl, agar,
pH [3] Fifendi, M. & M. Biomed, Mikrobiologi,
Kencana, Jakarta, 2017.
Sabouraud Dextrose Myclological peptone,
Agar glukosa, agar, pH [4] Pelczar & Chan, Dasar-Dasar Mikrobiologi,
Penerbit Universitas Indonesia, Jakarta, 1986.

[5] Hidayat, Y. & Sutarma, Teknik Pembuatan Kultur

4. Kesimpulan
Media, Balai Penelitian Veteriner, Bogor, 1999.
Dalam praktikum ini, mahasiswa diajarkan tentang
[6] Schlegel, H., Mikrobiologi Umum Edisi VI.,
melakukan proses-proses pembuatan atau penyiapan
UGM-Press, Yogyakarta, 1994.
media kultivasi mikrob, media kultivasi dapat
berbentuk media cair, media padat, ataupun media semi
[7] Hadioetomo, R. S., Mikrobiologi Dasar dalam
padat, media yang telah disiapkan dilakukan sterilisasi
Praktek : Teknik dan Prosedur Dasar
menggunakan metode panas uap basah dengan
Laboratorium, PT Gramedia Pustaka Utama,
menggunakan outoklaf dengan suhu 121℃ pada
Jakarta, 1993.
tekanan 1 atm, selama 15-20 menit.

Media dibagi dalam beberapa kelompok menurut

jenisnya, seperti berdasarkan komposisinya,
berdasarkan tipenya, dan berdasarkan konsistensinya.
Sedangkan bahan yang digunakan untuk media yaitu
nutrient agar, nutrient broth, dan sabouraud dextrose
agar. Kultivasi mikroba bertujuan untuk mengetahui
atau mempelajari sifat fisiologis mikroba. Kultur
mikroba digunakan untuk menentukan jenis organisme,
dengan kelimpahan dalam sampel yang diuji, atau
keduanya.

Media berdasarkan komposisinya, terbagi menjadi 2

kelompok yaitu media sintetik dan media kompleks.
Media sintetik adalah media dengan komposisi
komponen penyusunnya diketahui, sedangkan media
kompleks adalah media dengan beberapa komponen
atau bahan penyusunnya tidak diketahui.

Media berdasarkan tipenya, terbagi menjadi 2, yaitu

media selektif atau media yang digunakan untuk
menumbuhkan mikrob tertentu, dan media diferensial
atau media yang digunakan untuk membedakan
kelompok tertentu bakteri.

Media berdasarkan konsistensinya, terbagi menjadi

3 yaitu media cair, media padat, dan media semi padat.