MEDIUM KULTIVASI MIKROB

Putri Dea Amelia1, Gusti Nur Aida Fasha2 dan Hasrul Satria Nur2,3
1. Program Studi Biologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yan Km 36, Banjarbaru,
70713
2. Laboratorium Mikrobiologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yani Km 35,8
Banjabaru, 70713, Indonesia

E-mail: melly.bbm@gmail.com

Abstrak
Penelitian mikroorganisme di laboratorium diperlukan suatu tempat kultivasi mikrob yang disebut dengan media. Media
tumbuh bagi mikrob memiliki keanekaragaman dalam hal tipe nutrisi tergantung mikroba yang mengimbanginya.
sumber nutrien bisa berasal dari alamiah maupun buatan seperti campuran zat-zat kimiawi. Mikrob memiliki tiga
komponen yaitu mikro nutrisi, mikro nutrisi, dan faktor pertumbuhan. Media berdasarkan komposisinya dibedakan
menjadi media sintetik dan komplek. Media dapat dikelompokkan berdasarkan tipenya media selektif dan media
deferensial. Media juga dapat dikelompokkan berdasarkan konsistensinya menjadi cair, media semi cair, dan media
padat.

Abstract

Microorganism research in the laboratory required a place of microbial cultivation called the media. Growing media for
microbes have a variety in terms of nutrient-dependent types of microbes that balance them. Nutritional sources can be
made from natural and also made as a mixture of chemicals. Microbial has three components, namely micronutrients,
micronutrients, and growth factors. Media based on composition are divided into synthetic and complex media. Media
can be grouped based on the type of media selective and differential media. Media can also be grouped based on their
consistency into liquid, semi-liquid media, and solid media.

Keywords: medium, microbial, nutrients

1. Pendahuluan anorganik ditambah sumber karbon organik seperti

gula, namun ada pula bakteri yang memerlukan suatu
Dalam bidang mikrobiologi untuk menumbuhkan dan media yang sangat kompleks selain mengandung
mempelajari sifat-sifat mikroorganisme diperlukan sumber karbon dan nitrogen perlu penambahan darah
suatu media sebagai tempat pertumbuhan atau bahan-bahan kompleks lainnya. Media harus
mikroorganisme. Media pertumbuhan harus memenuhi mengandung nutrisi yang merupakan subtansi dengan
persyaratan nutrisi yang dibutuhkan suatu berat molekul rendah dan mudah larut dalam air.
mikroorganisme. Nutrisi yang dibutuhkan Nutrisi dalam media harus memenuhikebutuhan dasar
mikroorganisme untuk pertumbuhannya meliputi mahluk hidup[2].
karbon, nitrogen, unsur non logam seperti sulfur dan
fosfor, unsur logam Ca. Zn, Na, K, Cu, Mn, Mg, Fe, Media yang umum digunakan untuk menumbuhan
vitamin, air, dan energi [1]. mikroorganisme di laboratorium seperti bakteri adalah
media (Na) Nutrient agar. Mahalnya harga media serta
Media merupakan bahan yang dapat digunakan sebagai melimpahnya sumber daya alam dan pemanfaatan
tempat pertumbuhan mikroorganisme seperti bakteri. limbah yang dapat digunakan sebagai media
Beberapa jenis bakteri dapat hidup baik pada media pertumbuhan mikroorganisme mendorong para peneliti
yang sangat sederhana, yang hanya mengandung garam untu menemukanmedia alternatif dari bahan-bahan
yang mudah di dapat dan tidak memerlukan biaya yang
mahal. Bahan yang digunakan harus mengandung
nutrisi yang dibutuhkan untuk pertumbuhan bakteri
seperti karbohidrat dan protein. Berbagai sumner
protein juga berhasil digunakan sebagai media
alternatif pertumbuhan mikroorganisme [3].
Media berfungsi sebagai tempat tinggal, sumber makanan, dan
penyedian nutrisi bagi mikroorganisme yang akan
dibiakan pada media, selain itu media juga berfungsi
untuk membiakkan, mengasingkan, mengirimkan dan
meyimpan mikroorganisme dalam waktu yang lama di
laboratorium. Media berdasarkan sifat terbagi menjadi
3 yaitu Media padat, Media semi padat semi cair,
Media cair. Media berdasarkan Komposisi/susunannya
terdiri atas media Sintesis, semisintesis, dan media non
sintesis. Berdasarkan tujuan yaitu media selektif
ataupenghambat dan media diperkaya. Jenis Media
yang sering digunakan,yaituNutrientAgar, Nutrient
Broth (NB), PDA (Potato Dextrose Agar),
SalmonellaShigella (SS) Agar, EosinMethylene Blue
Agar (EMBA)[4].
Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu
bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan atau
nutrisi yang diperlukan oleh mikroorganisme untuk
pertumbuhannya. Mikroorganisme memanfaatkan
nutrisi di dalam media berupa molekul-molekul kecil
yang dirakit untuk menyusun komponen sel. Dengan
media, pertumbuhan dapat dilakukan dengan isolasi
mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga
memanipulasi komposisi media pertumbuhannya.
Bahan dasar adalah air (H2O) sebagai pelarut dari
agar-agar (rumput laut) dimana agar-agar tersebut
berfungsi sebagai pemadat media . Media biakan yang
mampu mendukung optimalisasi pertumbuhan
mikroorganisme harus dapat memenuhi persyaratan
nutrisi bagi mikroorganisme.unsur tersebut berupa
garam organik, sumber energy (karbon), vitamin dan
zat pengatur tumbuh (ZPT). Selain itu dapat pula
ditambahkan komponen lain seperti senyawa organik
dan senyawa kompleks lainnya [5].
Media dibuat berdasarkan kebutuhan dan kegunaan,
seperti media padat dan cair yang digunakan untuk
pertumbuhan, media transport, dan transfer
pertumbuhan mikrob selama proses isolasi sebelum
kultivasi pada media pertumbuhannya, media
penyimpanan yang digunakan bagi penyimpanan dan
peremajaan biakan murni. Media dapat dibedakan
berdasarkan tipenya, yaitu media yang dapat dibedakan
menjadi media selektif dan deferensial. Media selektif
merupakan media yang bertambah zat kimia tertentu
yang bersifat selektif untuk mencegah pertumbuhan
mikroorganisme yang tidak di inginkan. Media
diferensial merupakan media yang dapat digunakan
untuk membedakan jenis kelompok mikroorganisme
yang satu dengan yang lainnya ditandai dengan adanya
suatu reaksi atau ciri khas misalnya blood agar[6].
Media berdasarkan berdasarkan konsistensinya
dikelompokkan menjadi media cair (broth media),
media semi cair (semi broth media), dan media padat
(solid media). Media padat (solid media) dibuat dengan
cara penambahan agar-agar dengan konsentrasi 1,5-
2,0%, sedangkan media semi cair dalam kisaran 0,5-
1,0%, dan untuk media cair tanpa ditambahkan agar-
agar.
2. Metode Praktikum
Alat yang digunakan dalam praktikum adalah tabung
reaksi, kapas untuk menyumbat mulut tabung reaksi,
gelas ukur besar, labu erlenmeyer, hot plate stirer,
pengaduk magnet, pipet volumentrik dan autoklaf.
Bahan yang digunakan adalah akuades, kerat gelang,
kertas dan alat catat. Media sebelum digunakan dicatat
terlebih dahulu tanggal kadaluarsanya dan beberapa
komposisi yang terkandung dalam media tersebut,
medai yang digunakan berdasarkan kebutuhan
percobaan mikrobiologis, sebagai contoh jika media
dibuat untuk keperluan 300 ml, maka harus dihitung
jumlah gram bahan yang akan ditimbang dari masing-
masing formula media yang tertera pada kemasan.
Pada praktikum kali ini, secara berkelompok diberikan
pengenalan beberapa tipe media kultivasi mikrob.
Pembutan Medium Nutrient Agar, natrium agar
ditimbang menggunakan neraca analitik sebanyak 6
gram dan dimasukkan kedalam labu erlenmeyer, lalu
ditambahkan akuades sebanyak 300 ml menggunakan
gelas ukur, kemudian akuades dituangkan kedalam
labu erlenmeyer yang sudah terisi dengan media Na.
Setelah akuades dimasukkan lalu stirrer magnetik
dimasukkan kedalam erlenmeyer dan dipanaskan di
waterbath . Setelah media mendidih lalu cairan media
dimasukkan kedalam tabung reaksi dan mulut tabung
disumpal dengan kapas yang rapi dan dibungkus
menggunakan kertas lalu di sterilisasi menggunakan
autoklaf dengan suhu 121°C dengan kisaran waktu
selama 12-15 menit. Perhitungan dalam pembuatan
media mikrob dapat menggunakan rumus :
Tsm: Fm (gi-1) = vn (ml) x Tsm/ (L) : vt (ml)
Keterangan Fm = Formula Media
Vn = Volume Media
Vt = Volume total
Tsm/ (L) = Total media yang diperlukan
Pembuatan Medium Potato Dextrose Agar (PDA),
untuk membuat medium PDA tahapan pertama yang
dilakukan adalah menimbang media PDA di atas
neraca analitik sebanyak 11,7 gram dan dimasukkan
kedalam labu erlenmeyer, lalu ditambahkan akuades
sebanyak 300 ml menggunakan gelas ukur, kemudian
akuades dituangkan kedalam labu erlenmeyer yang menggunakan autoklaf dengan suhu 121°C dengan
sudah terisi dengan media di panaskan dalam air kisaran waktu selama 12-15 menit. Perhitungan dalam
mendidih dan diaduk sampai cairan media homogen pembuatan media mikrob dapat menggunakan rumus :
dan laruran sampai berubah warna keruh menjadi
bening. Setelah media mendidih lalu cairan media Tsm: Fm (gi-1) = vn (ml) x Tsm/ (L) : vt (ml)
dimasukkan kedalam tabung reaksi dan mulut tabung
disumpal dengan kapas yang rapi dan dibungkus Keterangan Fm = Formula Media
menggunakan kertas lalu di sterilisasi menggunakan Vn = Volume Media
autoklaf dengan suhu 121°C dengan kisaran waktu Vt = Volume total
selama 12-15 menit, dan sampai mencapai Ph 5,6-0,2 Tsm/ (L) = Total media yang diperlukan
pada suhu 25°C. Perhitungan dalam pembuatan media
mikrob dapat menggunakan rumus :
3. Hasil dan Pembahasan
Tsm: Fm (gi-1) = vn (ml) x Tsm/ (L) : vt (ml)

Keterangan Fm = Formula Media

Vn = Volume Media
Vt = Volume total
Tsm/ (L) = Total media yang diperlukan

Pembuatan medium MRS, dalam pembuatan media

mrs ini menimbang media menggunakan neraca
analitik sebanyak 15,66 gram dan dimasukkan Gambar 1. Penambahan akuades
kedalam labu erlenmeyer, lalu ditambahkan akuades
sebanyak 300 ml menggunakan gelas ukur, kemudian
akuades dituangkan kedalam labu erlenmeyer yang
sudah terisi dengan media MRS. Setelah akuades
dimasukkan lalu stirrer magnetik dimasukkan kedalam
erlenmeyer dan dipanaskan bagiannya stirrnya saja
sampai homogen. Setelah homogen lalu cairan media
dimasukkan kedalam tabung reaksi dan mulut tabung
disumpal dengan kapas yang rapi dan dibungkus
menggunakan kertas lalu di sterilisasi menggunakan Gambar 2. Pemanasan media PDA, MEA dan MRS
autoklaf dengan suhu 121°C dengan kisaran waktu
selama 12-15 menit. Perhitungan dalam pembuatan
media mikrob dapat menggunakan rumus :

Tsm: Fm (gi-1) = vn (ml) x Tsm/ (L) : vt (ml)

Keterangan Fm = Formula Media Gambar 3. Pemanasan media NA dengan

Vn = Volume Media Waterbath
Vt = Volume total
Tsm/ (L) = Total media yang diperlukan

Pembuatan Medium Malt Ekstrak Agar (MEA),

tahapan pertama kali yaitu menimbang media sebanyak
14,4 gram dan dimasukkan kedalam labu erlenmeyer,
lalu ditambahkan akuades sebanyak 300 ml
menggunakan gelas ukur, kemudian akuades
dituangkan kedalam labu erlenmeyer yang sudah terisi
dengan media MEA. Setelah akuades dimasukkan lalu Gambar 4. Media NA,PDA,MEA dan MRS
stirrer magnetik dimasukkan kedalam erlenmeyer dan disterilisasi dalam autoklaf
dipanaskan di atas hot plate. Setelah media mendidih
lalu cairan media dimasukkan kedalam tabung reaksi
dan mulut tabung disumpal dengan kapas yang rapi dan
dibungkus menggunakan kertas lalu di sterilisasi

Gambar 5. Media PDA yang sudah disterilisasi
Gambar 6. Media Na yang sudah disterilisasi
Gambar 7. Media MEA yang sudah disterilisasi
Gambar 8. Media MRS yang sudah disterilisasi
Pada praktikum kali ini adalah membuat media
kultivasi mikrob, media sebelum digunakan untuk
medium kultivasi mikrob diperiksa terlebih dahulu
komposisi dan tanggal kadaluarsa dari bahan tersebut.
Media yang digunakan adalah Nutrient Extrack Agar
(NA), Potato Dextrose Agar ( PDA), MRS, dan MEA,
Semua media tersebut dicampurkan dengan akuades
sebanyak 300ml dan sebelum dicampurkan dengan
akuades media ditimbang terlebih dahulu sesuai
dengan keperluan praktikum dengan menggunakan
rumus berikut :
Tsm: Fm (gi-1) = vn (ml) x Tsm/ (L) : vt (ml)
Keterangan Fm = Formula Media
Vn = Volume Media
Vt = Volume total
Tsm/ (L) = Total media yang diperlukan
Potato Dextrose Agar (PDA) merupakan media yang
sangat umum digunakan untuk mengisolasi dan
pertumbuhan fungi dalam wilayah luas di laboratorium
serta komposisinya diketahui dengan pasti.
Berdasarkan komposisinya PDA termasuk dalam
media semi sintetik karena tersusun atas bahan alami
(kentang) dan bahan sintesis (dextrose dan agar).
Kentang merupakan sumber karbon (karbohidrat),
vitamin dan energi, dextrose sebagai sumber gula dan
energi, selain itu komponen agar berfungsi untuk
memadatkan medium PDA. Masing-masing dari ketiga
komponen tersebut sangat diperlukan bagi
pertumbuhan dan perkembang biakkan
mikroorganisme terutama jamur. Hal yang pertama kali
dilakukan untuk membuat media PDA ini harus lah
terlebih dahulu menimbang berat media dengan
menggunakan neraca analitik namun sebelum
menimbang kita harus melihat terlebih dahulu
komposisi dan tanggal kadaluarsa pada kemasan
media. Pada penimbangan media memiliki rumus
tersendiri dan biasanya jika pelarutnya dengan jumlah
1 liter maka media PDA digunakan sebanyak 52,2 gr
namun pada praktikum kali ini pelarut akuades
digunakan sebanyak 300 ml sehingga ditimbang media
sebanyak 11,7 gram.
Nutrient Agar merupakan medium yang mengandung
sumber nitrogen dalam jumlah cukup yang dapat
digunakan untuk budidaya bakteri dan perhitungan
organisme dalam air, limbah, kotoran dan bahan
lainnya. Formulasi Nutrient Agar terdiri dari daging
sapi ekstrak, peptone dan agar, formula ini tergolong
relative simpel untuk menyediakan nutrisi-nutrisi yang
dibutuhkan oleh sejumlah besar mikroorganisme yang
tidak terlalu fastdioud. Daging ekstrak sapi
mengandung senyawa yang larut dalam air termasuk
karbohidrat, vitamin, nitrogen organik dan juga garam.
Peptone merupakan sumber utama dari nitrogen
organik yang sebagian merupakan asam amino dan
peptida rantai panjang [5]. NA digunkan untuk
pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang
tidak selektif dalam mikroorganisme heterotrof. Media
ini merupakan media yang sederhana digunakan dalam
prosedur bakteriologi seperti uji biasa dari air,
sewage,produk pangan, pembawa kultur dan untuk
mengisolasi organisme dalam kultur murni [6]. Dalam
media Na pertumbuhan baik untuk bakteri namun
tidak dapat tumbuh untuk kapang dan khamir, media
ini termasuk medium semi alamiah karena tersusun
atas bahan alami dan bahan sintesis. Bahan yang
digunakan untuk komposisi media Na ini memiliki
fungsi seperti ekstrak daging sapi sebagai sumber
vitamin B, mengandung nitrogen organuk dan
senyawa karbon. Pepton sebagai sumber utama nutrisi
dan agar untuk memadatkan medium Na [7].
Man Rogosa and Sharpe (MRS) merupakan media
standar untuk kultivasi bakteri asam laktat (BAL) dan
merupakan media yang paling sesuai untuk media
pertumbuhan dan produksi bakteri. Pada medium MRS
digunakan glukosa sebagai sumber karbon dengan
konsentrasi 20 g/L. Karbohidrat merupakan sumber
karbon dan energi utama pertumbuhan bakteri asam
laktat, sehingga pertumbuhan dan aktivitas
metabolisimenya dipengaruhi oleh sumber karbon
tersedia. Jenis-jenis bakteri asam laktat memiliki
perbedaan dalam kebutuhan gulanya, oleh karena itu
meskipun MRS merupakan media standar untuk
kultivasi bakteri asam laktat perlu untuk dilakukan
modifikasi guna mendapatkan formulasi yang optimum
untuk pertumbuhan dan aktivitas metabolisme bakteri
asam laktat.
Medium Malt Ekstrak Agar (MEA) biasanya
digunakan untuk media pertumbuhan yeast dan
khamir, berdasarkan formula yang direkomendasikan
oleh Thom dan Church harus mengandung formulasi
yang tepat dari sumber karbon, protein dan nutrisi yang
penting untuk pertumbuhan ragi dan jamur, seperti
dextrose ditambahkan ke media untuk memberikan
energi, Selain itu Agar Malt Ekstrak mengandung
pencernaan jaringan hewan (pepton) yang memiliki
sumber asam amino bergizi dan senyawa nitrogen
untuk pertumbuhan jamur dan ragi. PH diatur hingga
sekitar 5,5 untuk meningkatkan pertumbuhan jamur
dan sedikit menghambat pertumbuhan bakteri yang
umumnya ditemukan sebagai kontaminan lingkungan.
Kloramfenikol ditambahkan untuk meningkatkan sifat
penghambatan Malt Extract Agar dengan
Chloramphenicol untuk menghambat pertumbuhan
bakteri yang berlebihan sambil memungkinkan isolasi
selektif dari jamur dan ragi. MEA (Malt Extract Agar)
digunakan sebagai media pertumbuhan khamir.
Dimana dalam pembuatannya terlebih dahulu
melarutkan MEA (Malt Extract Agar) sebanyak 14,4
gram kedalam erlenmeyer 250 ml dan menambahkan
aqades 300 ml setelah itu dipanaskan diatas hot plate
dengan diikuti dengan pengadukan menggunakan
magnetic stirer, tujuan dari pengadukan dan pemanasan
untuk menghomogenkan MEA dengan aquades dan
pemanasan bertujuan untuk mempercepat pelarutan
dari MEA. Setelah dipanaskan beberapa menit larutan
berubah warna dari coklat menjadi tua hal ini
menujukkan larutan telah menjadi homogen kemudian
larutan didinginkan dan diukur pHnya, Ph pada MEA =
5,4 ± -0,2 pH maksimal 5,6 dan pH minimal 5,2. pH
yang diperoleh pada percobaan ini yaitu 5,6. Setelah itu
dimasukkan kedalam autoklaf dengan mulut
Erlenmeyer ditutup dengan kapas dan diluarnya
dibungkus yang bertujuan untuk mengurangi
kontaminsi.
4. Kesimpulan
Pembuatan media kultivasi mikrob harus memenuhi
syarat yang menjadi pertumbuhan suatu
mikroorganisme. Dimana mendia yang digunakan
mengandung nutrisi, Ph, tekanan osmotik yang sesuai
dengan mikroba yang akan ditumbuhkan pada media
sesuai dengan komposisinya. Pembuatan media
berdasarkan komposisi, tipe dan konsistensinya.
Daftar Acuan
[1] Harti, A.S. 2015. Mikrobiologi Kesehatan. Penerbit
Abndi. Yogyakarta. Hal; 117, 191.
[2] Cappuccino, J.G &Natalie, S. (2013). Manual
Laboratorium biologi; alih bahasa,
Nur Miftahurrahmah. Jakarta: EGC.
[3] Yusran, M. 2013. Media Pertumbuhan Mikroba
Bakteriologi 3. Bandung . Hal ; 112.
[4] suriawiria, U. 2011. Mikrobiologi Dasar. Papas
Sinar Sinanti. Jakrta.
[5] Suhardi, S.H., Koesnandar,D. K. Indriani, H.
Arnaldo 2015. Biosafety:
PedomanKeselamatan Kerja di
Laboratorium Mikrobiologi dan
Rumah Sakit .PT. Multazam Mitra
Prima.
[6]. Rakhmawati, A. 2012. Penyiapan Media
Mikroorganisme. Pelatihan
Laboratorium Guru SMA kab.
Purworejo. Universitas Negri
Yogyakarta. Yogyakarta. Hal : 6.
[7] Sugiawan, W. 2016.. Pengikat Efektivitas Media
Isolasi Khamir Contoh Kecap Dengan
Penambahan Kecap Temu Teknis
Nasional Tenaga Fungsional
Pertanian. Hal : 1-2.