PENGAMATAN MORFOLOGI DAN STRUKTUR SEL EUBACTERIA

Putri Dea Amelia1 , Nurul Huda2, Hasrul Satria Nur³

1. Program Studi Biologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yani Km 36, Banjarbaru, 70713,
Indonesia
2. Laboratorium Mikrobiologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan A. Yani Km 36, Banjarbaru, 70713,
Indonesia

E-mail: melly.bbm1@gmail.com

Abstrak

Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morfologi, struktur dan sifat-sifat yang khas, begitu pula dengan
bakteri. Praktikum ini bertujuan untuk mempelajari perbedaan morfologi dari masing-masing sel mikrobia. Morfologi
sel mikrobia dapat diamati dengan dua cara, yaitu pengamatan sel hidup yang tidak diwarnai dan pengamatan sel mati
yang diwarnai tanpa mewarnai lingkungan sekitarnya. Pengamatan morfologi sel khamir dilakukan dengan membuat
preparat basah yang diberi larutan methylen blue. Pengamatan morfologi fungi dilakukan dengan membuat preparat
yang diambil dari biakan fungi yang telah disediakan kemudian diberi laktofenol blue. Pencirian morfologi termasuk
usaha mengidentifikasi mikroorganisme, dimana pada pencirian morfologi akan didapatkan karakteristik morfologi
antara lain bentuk sel, ukuran sel, susunan sel meliputi tetrahedron, rangkaian, rantai, status Gram positif atau negatif.

Abstract

microorganisms present in nature have unique morphology, structure and properties, as well as bacteria. This practice
aims to study the morphological differences of each microbial cell. Microbial cell morphology can be observed in two
ways, namely the observation of non-dyeed living cells and the observation of dead cells that are colored without
coloring the surrounding environment. Observation of morphology of yeast cells is done by making wet preparations
given methylen blue solution. Fungi morphology observation was done by making preparations taken from fungi
cultures that have been provided and then given laktofenol blue. Morphological identification involves identifying
microorganisms, which in morphological stability will be obtained morphological characteristics such as cell shape, cell
size, cell arrangement include tetrahedron, chain, chains, Gram positive or negative status.

Keywords: bacterial morphology, yeast cells, fungi cells

1. Pendahuluan Perbedaan struktur dinding sel bakteri Gram positif dan

Karakterisasi dan klasifikasi sebagian besar
mikrobia seperti bakteri berdasarkan pada reaksi
enzimatik ataupun biokimia. Mikroba dapat tumbuh
pada beberapa tipe media, memproduksi tipe metabolit
tertentu yang dideteksi dengan interaksi mikrobia
dengan reagen test yang menghasilkan warna
reagen[7]. Pewarnaan Gram merupakan pewarnaan
differensial yang sangat berguna dan paling banyak
digunakan dalam laboratorium mikrobiologi.
Pewarnaan ini merupakan salah satu tahap penting
identifikasi bakteri. Pewarnaan Gram memisahkan
bakteri menjadi kelompok Gram positif dan negatif.
Gram negatif menyebabkan perbedaan reaksi dalam
permeabilitas zat warna dan penambahan larutan
pemucat. Sebagian besar dinding sel bakteri Gram
positif terdiri dari peptidoglikan, sedangkan dinding sel
bakteri Gram negatif mempunyai kandungan lipida
yang tinggi dibandingkan dinding sel bakteri Gram
positif. Lipida ini akan larut dalam alkohol dan aseton
yang digunakan sebagai larutan pemucat, sehingga
pori-pori dinding sel membesar dan meningkatkan
daya larut kompleks kristal violet yodium pada dinding
sel bakteri Gram negatif [3].
 Isolat yang berasal dari agar darah yang akan
diwarnai dipilih dari koloni yang memiliki morfologi
khas Streptococcus dan mempunyai karakter β-
hemolisis. Koloni khas Streptococcus adalah kecil dan
transparan seperti tetes embun. Tahapan pewarnaan
Gram diawali dengan membuat preparat ulas kemudian
difiksasi diatas api. Diberi larutan kristal violet selama
1 menit dan dicuci dengan air, lalu diberi larutan lugol
selama 1 menit 20 detik, dandan larutan pemucat
selama 10 dicuci dengan air. Terakhir diberikan larutan
safranin selama 15 detik dan dicuci dengan air,
kemudian dikeringkan dengan kertas saring, lalu
diamati dengan mikroskop menggunakan perbesaran
10 x 100[3]. Penelitian tentang mikroorganisme tanah
dapat menjadi inventarisasi koleksi mikroorganisme
untuk keperluan konservasi mikroorganisme tanah[4].
Mikroorganisme terdapat di berbagai tempat
seperti tanah, debu, air, udara, kulit dan selaput lendir.
Mikroorganisme dapat berupa bakteri, fungi, protozoa
dan lain-lain. Mikroorganisme mudah terhembus udara
dan menyebar ke mana-mana karena ukuran selnya
kecil dan ringan. Indonesia merupakan negara yang
terletak di daerah tropis dengan kelimpahan
keanekaragaman hayati berupa keanekaragaman flora,
fauna dan mikroorganisme. Keberadaan
mikroorganisme di alam sangat luas meliputi daratan
atau tanah, perairan dan udara. Jenisjenis
mikroorganisme meliputi protista (alga, protozoa),
monera (bakteri, cyanobakteria) dan fungi (jamur
benang dan khamir). Keberadaan mikroorganisme
khamir di tanah tidak begitu tinggi jika dibandingkan
dengan bakteri dan jamur benang. Namun, khamir di
tanah memegang peranan penting dalam menstimulasi
dekomposisi dan mineralisasi senyawa organik di
dalam tanah. Selain itu khamir juga memegang peran
penting dalam hidrolisis selulosa yang berada di dalam
tanah. Khamir dikenal memiliki rentang ekologi yang
cukup luas dan mampu hidup pada daerah ekstrem
serta umumnya banyak ditemukan pada lingkungan
yang memiliki bahan organik tinggi. Beberapa
kelompok khamir yang dominan ditemukan dalam
ekosistem tanah adalah genus Cryptococcus, Candida
dan Debaryomyces. Sekitar 1% khamir dilakukan
isolasi dan identifikasi dari total perkiraan
keanekaragaman khamir di dunia. Diantara 89 genera
khamir yang pernah terdaftar dalam monograf khamir
sebanyak 37 genera atau 42% ditemukan di Indonesia.
Penelitian tentang khamir banyak dilakukan dalam
bentuk eksplorasi dari berbagai ekosistem di Indonesia.
Hal ini karena diyakini jumlah khamir di alam jauh
lebih tinggi dibandingkan khamir yang telah diketahui
selama ini[4].
Bakteri, yang merupakan mikroorganisme
prokariotik, adalah organisme yang paling banyak dan
paling sederhana di dunia seperti yang kita kenal.
Prokariota tidak memiliki inti dan organel kompleks.
Karena kebanyakan prokariota berbagai ukuran kurang
dari sepuluh mikrometer (µm), mikroskop digunakan
untuk mempelajari bakteri. Identifikasi bakteri sangat
penting dalam mikrobiologi dan patologi karena
melayani dasar pemahaman penyakit. Karena ini,
berbagai jenis metode telah diperkenalkan untuk
mengklasifikasikan bakteri dalam mikrobiologi. Dokter
dan ahli mikrobiologi umumnya mempekerjakan
mengetik skema yang bergantung pada skema
mengetik fenotip untuk mengembangkan bakteri
morfologi dan pewarnaan sifat organisme[5].
Aktivitas amilolitik pada media padat dilakukan
dengan menumbuhkan isolat bakteri pada media NA
pati dan diinkubasi pada suhu kamar selama 48 jam
kemudian ditetesi dengan larutan lugol yodium (JKJ)
pada permukaan medium. Isolat bakteri yang mampu
membentuk zona jernih di sekeliling koloninya setelah
diteteskan larutan JKJ merupakan bakteri amilolitik.
Aktivitas amilolitik dideterminasi dengan mengukur
diameter koloni dan diameter zona bening. Screening
isolat bakteri berdasarkan aktivitas selulolitik
dilakukan dengan menumbuhkan isolat bakteri pada
media minimal agar dengan Carboxymethylcellulosa
(CMC) sebagai sumber C-nya. Hidrolisis selulosa
dideteksi dengan meneteskan larutan Congo red pada
permukaan media agar. Terbentuknya zona jernih di
sekeliling koloni bakteri menunjukkan adanya aktivitas
selulolitik[8]. Staphylococcus mengandung
polisakarida dan protein yang bersifat antigenik dan
merupakan substansi penting di dalam struktur dinding
sel. Peptidoglikan merupakan suatu polimer
polisakarida yang mengandung subunit-subunit yang
tergabung, merupakan eksoskeleton yang kaku pada
dinding sel. Peptidoglikan dirusak oleh asam kuat atau
lisozim. Hal tersebut penting dalam patogenesis
infeksi, yaitu merangsang pembentukan interleukin-1
(pirogen endogen) dan antibodi opsonik, juga dapat
menjadi penarik kimia (kemotraktan) leukosit
polimorfonuklear, mempunyai aktifitas mirip
endotoksin dan mengaktifkan komplemen[2].
Koloni-koloni bakteri yang terpisah dan tampak
berbeda masing-masing diambil sebanyak satu jarum
inokulasi dan dikulturkan ke media NA (yang telah
ditambahkan NaCl sebanyak 10%) menggunakan
metode cawan gores. Kemudian diinkubasi pada suhu
370°C selama 48 jam. Tahapan berikutnya adalah
pengamatan terhadap morfologi koloni yang meliputi
bentuk, warna, ukuran, tepian dan elevasi koloni.
Pengamatan morfologi sel meliputi uji pewarnaan
Gram, pewarnaan spora, bentuk sel dan uji pergerakan
bakteri atau motilitas. Pengamatan bentuk sel
dilakukan bersamaan dengan hasil pewarnaan Gram.
Tahapan pewarnaan Gram dilakukan sebagai berikut,
sebanyak satu sampai dengan dua tetes akuades
diteteskan pada kaca objek, selanjutnya diambil koloni
tunggal dari masing-masing isolat bakteri
menggunakan jarum inokulasi kemudian disebar secara
merata. Olesan bakteri dibiarkan kering dan
difiksasi[1]. Bakteri termofilik dapat dimanfaatkan
dalam bidang bioteknologi karena memiliki efisiensi
dalam keadaan suhu tinggi. Semakin tinggi temperatur
maka semakin tinggi pula laju difusi. Selain itu, enzim
pada bakteri termofilik juga mampu mengakatalisis
reaksi biokimia pada suhu tinggi dan umumnya lebih
stabil dari bakteri mesofilik. Enzim yang terdapat pada
bakteri termofilik juga dapat dimanfaatkan pada
industri antara lain enzim amylase, selulase, xilanase,
kitinase dan protease. Protease dapat digunakan untuk
beberapa aplikasi seperti detergen, farmasi,
pengempukan daging dan proses pengolahan limbah
industry[6].
2. Metode Praktikum
Pewarnaan sederhana
Metode pewarnaan sederhana yang dilakukan
bertujuan untuk membedakan morfologi bentuk dan
susunan sel bakteri. Prosedur yang dilakukan yaitu
dengan membersihkan objek glass dengan alcohol
terlebih dahulu, kemudian tetesi dengan 1 tetes
aquades. Jarum ose dipanaskan pada lampu spiritus,
cawan berisi biakan bakteri dipanaskan dan diambil 1
ose biakan bakteri Bacillus Thuringinensis. Bakteri
yang menempel pada jarum ose kemudian diletakkan
pada objek glass dan diratakan sambil dipanaskan.
Teteskan safranin 0,2%. Diamkan selama satu menit.
Langkah terakhir yaitu bilas objek glass tersebut
dengan aquades.
Pewarnaan Endospora
Pewarnaan endospora dilakukan untuk isolat bakteri.
Prosedur yang dilakukan yaitu meneteskan 5 tetes
aquades steril kedalam tabung reaksi lalu bakteri
Bacillus subtilis dimasukkan kedalam tabung reaksi
yang sudah berisi aquades, selanjutnya diteteskan
karbol fustisin sebanyak lima tetes. Tahap selanjutnya
memanaskan suspensi dam kemudian diletakkan di atas
kaca benda yang sudah steril mengunakan teknik
aseptik lalu diteteskan nigrosin sebanyak 1 tetes
kemudian di smer.
Pewarnaan Kapsul
Metode pewarnaan kapsul yang dilakukan bertujuan
untuk melihat apakah bakteri yang diamati memiliki
kapsul dan melihat bagian kapsul tersebut. Prosedur
yang dilakukan yaitu dengan meneteskan tinta india
pada objek glass dan diratakan sampai menutupi
seluruh permukaan objek glass. Ratakan tinta india
dengan tipis dan diamkan sampai kering. Selanjutnya,
panaskan jarum ose dan ambil biakan bakteri sebanyak
1 ose dan letakkan bakteri yang diambil pada objek
glass. Teteskan crystal violet dan diamkan satu menit.
Bilas objek glass dengan aquades.
Pewarnaan Gram
Pengamatan morfologi sel bakteri dilakukan dengan
pewarnaan Gram. 1−2 tetes aquades steril diletakkan di
atas kaca objek,koloni bakteri di ambil satuose dari
media diletakkan di atas aquades steril dan sebarkan
merata, biarkan olesan tersebut kering karena udara.
Setelah olesan benar-benar kering kemuadian lalukan
kaca objek tersebut beberapa kali di atas nyala api
sampai kaca objek terasa agak panas bila ditempelkan
pada punggung tangan. Kemudian ditetesi dengan
larutan kristal ungu (Gram A), dan didiamkan selama
satu menit, kemudian cuci menggunakan aquades pada
botol semprot dan dikeringkan. Selanjutnya ditetesi
dengan larutan iodium (Gram B) dan dibiarkan selama
2 menit, dicuci menggunakan aquades pada botol
semprot dan dikeringkan. Kemudian ditetesi dengan
larutan etanol 95% (Gram C) selama 30 detik, dicuci
menggunakan aquades pada botol semprot dan
dikeringkan. Setelah itu ditetesi dengan larutan
safranin (Gram D) atau zat penutup dan didiamkan
selama 30 detik, kemudian dicuci menggunakan
aquades pada botol semprot dan dikeringkan.
Selanjutnya diamati dengan menggunakan mikroskop
pada pembesaran kuat(9).
3. Hasil dan Pembahasan
Pada kegiatan praktikum ini, pewarnaan secara
langsung dilakukan dengan menggunakan kristal violet
dan CuSO4.5H2O. Pewarnaan secara langsung ini
dimaksudkan untuk mewarnai sel-sel bakteri yang
diamati. Apabila bakteri mempunyai kapsul, maka
dalam pengamatan sel bakteri akan tampak berwarna
ungu dan diselubungi oleh kapsul yang berwarna biru
muda. Kristal violet merupakan larutan yang yang
mempunyai kromophore atau butir pembawa warna
yang bermuatan positif (memiliki kation) sedangkan
muatan yang berada di sekeliling bakteri bermuatan
negatif (memiliki anion), sehingga terjadi adanya tarik
menarik antara kedua ion tersebut. Hal inilah yang
menyebabkan bakteri berwarna ungu. Dan
terbentuknya warna biru muda pada kapsula
disebabkan karena kapsula menyerap CuSO4.5H2O.
Pewarnaan sederhana, merupakan pewarna yang
paling umum digunakan. Berbagai macam tipe
morfologi bakteri (kokus, basil, spirilum, dan
sebagainya) dapat dibedakan dengan menggunakan
pewarna sederhana, yaitu mewarnai sel-sel bakteri
hanya digunakan satu macam zat warna saja.
Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan pewarna-
pewarna sederhana karena sitoplasmanya bersifat
basofilik (suka akan basa) sedangkan zat-zat warna
yang digunakan untuk pewarnaan sederhana umumnya
bersifat alkalin (komponen kromoforiknya bermuatan
positif). Percobaan yang telah dilakukan dengan
menggunakan metode pewarnaan sederhana
menggunakan bakteri E. Coli setelah diamati memiliki
morfologi dengan bentuk bacilus dan bakteri ada yang
berpasangan dan berkelompok.
Pewarnaan endospora pada percobaan
menggunakan bakteri Bacillus subtilis yang memiliki
tujuan untuk mengetahui fase istirahat bakteri dari
kondisi ekstrime yang mana endospora dapat membuat
bakteri tumbuh pada lingkungan yang ekstrim. Setelah
dilakukan pengamatan dibawah mikroskop terdapat
bentuk morfologi dari bakteri Bacillus subtilis yaitu
berbentuk batang (basillus). Dari hasil pewarnaan
spora terlihat bakteri berwarna ungu ada titik merah,
dengan bentuk basil. Letak sporanya berada pada
subterminal. Letak endospora berbeda dengan spesies
bakteri yang lain. Tipenya ada yang central yaitu lokasi
dari sel vegetatifnya di tengah, terminal letak sel
Gambar 1. proses teknik aseptik pada jarum ose dan kaca
vegetatifnya berada di ujung atau pinggir dan tipe
benda menggunakan api bunsen burner.
subterminal berarti lokasi endosporanya berada di
antara tengah dan pinggir dari sel vegetatif. Bakteri
yang berbentuk basil memiliki endospora yang terletak
di subterminal(10).
Teknik pewarnaan selanjutnya yaitu dengan
cara pewarnaan gram yang mana teknik ini bertujuan
untuk mengetahui bakteri yang tergolong gram negatif
mau pun positif. Penyebab adanya perbedaan antara
bakteri gram positif dan negatif berkaitan dengan
struktur dan dinding sel yang dimiliki oleh bakteri
tersebut. Pada percobaan yang telah dilakukan Gambar 2. Pemanasan pada jarum ose sampai berwarna
menggunkan bakteri E.coli dan didapatkan bentuk merah
morfologinya yaitu berbentuk basil namun tidak
terdapat koloni yang terbentuk. Bakteri E.coli termasuk
kedalam bakteri gram negatif karena membentuk
warna merah, karena gram negatif merupkan bakteri
yang tidak mempertahankan zat pewarna metil ungu
pada metode pewarnaan gram.
Kapsula berfungsi dalam penyesuaian diri
dengan lingkungannya. Misalnya berperan dalam
mencegah terhadap kekeringan, mencegah atau
menghambat terjadinya pencantelan bakteriofag, Gambar 3. Pengambilan bakteri yang akan digunakan
bersifat anti fagosit sehingga kapsul memberikan sifat untuk pewarnaan didalam tabung reaksi
virulen bagi bakteri. Kapsula juga berfungsi untuk alat yang berisi bakteri.
mencantelkan diri pada permukaan. Pada percobaan
yang telah dilakukan menggunakan bakteri
Lactobacillus asidopilus yang mana terlihat bentuk
morfologinya yang berbentuk basill dan tidak terdapat
koloni pada pengamatan praktikum yang telah
dilakukan .
Teknik dasar yang paling digunakan untuk
mengklasifikasikan bakteri didasarkan pada bentuk
bakteri dan sel pengaturan. Bentuk yang paling biasa
dari bakteri termasuk batang, cocci (bulat), dan bentuk
spiral. Pengaturan seluler terjadi tunggal, dalam seri,
dan dalam kelompok. Beberapa spesies memiliki satu Gambar 4. Hasil bakteri E. Coli dalam pewarnaan
untuk banyak proyeksi yang disebut flagela yang sederhana
memungkinkan bakteri untuk berenang dan bergerak.
Cocci atau coccus untuk satu sel adalah sel-sel bulat,
kadang-kadang diratakan ketika berada berdekatan satu
sama lain. Bakteri kokus bisa eksis secara individual,
berpasangan, dalam kelompok empat, dalam rantai,
dalam kelompok atau dalam kubus yang terdiri dari
delapan sel. Basil adalah bakteri berbentuk batang yang
juga dapat terjadi secara individual, di pasangan, atau
dalam rantai[5].

Gambar 5. Hasil pewarnaan endospora pada bakteri
Basillus subtilis
Gambar 6. Hasil pewarnaan kapsul pada bakteri
Lactobacillus asidopilus.
Gambar 7. Hasil pewarnaan gram pada bakteri E.coli
Gambar 8. Hasil pewarnaan gram pada bakteri
Lactobacillus asidopilus.
4. Kesimpulan
Kesimpulan dari praktikum ini adalah pewarnaan pada
sel bakteri adalah cara untuk mempermudah
mengamati bakteri di bawah mikroskop sehingga dapat
membantu dalam identifikasi dan klasifikasinya.
Pengecatan bakteri dapat dibagi menjadi bakteri Gram
positif dan bakteri Gram negatif. Adapun hasil yang
diperoleh dari percobaan ini yaitu bakteri Bacillus
subtilis merupakan bakteri Gram positif. Pada semua
percobaan didaparkan bakteri dengan bentuk basil atau
batang.
Daftar Acuan
[1]. Agustina, D., C. Yulvizar., & R. Nursanty. 2013.
Isolasi dan Karakterisasi Bakteri pada
Ikan Kembung (Rastrelliger sp.) Asin
Berkitosan. Jurnal Biospecies. 6(1):
15-19.
[2]. Dewi, A.K. 2013. Isolasi, Identifikasi dan Uji
Sensitivitas Staphylococcus aureus
terhadap Amoxicillin dari Sampel Susu
Kambing Peranakan Ettawa (PE)
Penderita Mastitis di Wilayah
Girimulyo, Kulonprogo, Yogyakarta.
Jurnal Sain Veteriner. 31(2): 138-150.
[3]. Hidayat, R., & F. Alhadi. 2012. Identifikasi
Streptococcus Equi dari Kuda yang
Diduga Menderita Strangles. Jurnal
Ilmu Pertanian Indonesia. 17(3): 199-
203.
[4]. Jumiyanti., S.H. Bintari., & I. Mubarok. 2012.
Isolasi dan Identifikasi Khamir Secara
Morfologi di Tanah Kebun Wisata
Pendidikan Universitas Negeri
Semarang. Jurnal Biosantifika. 4(1):
2012.
[5]. Mohamad, N. A., A. W. Jusoh, Z. H. Zaw & L. W.
Shoon. 2014. Bacteria Identification
From Microscopic Morphology Using
Naïve Bayes. International Journal of
Computer Science, Engineering and
Information Technology (IJCSEIT). 4
(2) : 1-9.
[6]. Pratita, M.Y.E., & S.R. Putra. 2012. Isolasi dan
Identifikasi Bakteri Termofilik dari
Sumber Mata Air Panas di Songgoriti
setelah Dua Hari Inkubasi. Jurnal
Teknik Pomits. 1(1): 1-5.
[7]. Sardiani, N., M. Lilaay., R.G. Budji., D.
Priosambodo., Syahribulan., & Z.
Dwyana. 2015. Potensi Tunikata
Rhopalaea Sp sebagai Sumber
Inokulum Bakteri Endosimbion
Penghasil Antibakteri; 1. Karakterisasi
Isolat. Jurnal Alam dan Lingkungan.
6(11): 1-10.
[8]Yanti, N.A., & A. Munir. 2014. Screening Bakteri
Amilolitik dan Selulolitik dari Limbah
Sagu. Jurnal Penelitian Biologi. 1(1):
1-62.
[9] Nurhidayanti, S., Fatturahman, & M. Ghazali.
2015. Deteksi Bakteri Patogen Yang
Berasosiasi Dengan Kappaphycus
alvarezii(Doty) Bergejala Penyakit Ice-
Ice. Jurnal Sains Teknologi &
Lingkungan. 1(2): 24-30.
[10]. Pratiwi, T. 2008. Mikrobiologi Farmasi.
Jakarta : Erlangga