BON-11160; No.

of pages: 11; 4C: 6, 8

ELSEVIER

Artikel

MOLEKULER GENETIKA OSTEOSARKOMA

Kirby Rickela,1, Fang Fanga,1, Jianning Taoa,b

Abstrak
Osteosarcoma adalah bentuk dominan dari kanker tulang, yang mempengaruhi sebagian
besar remaja. Kemajuan terbaru dibuat dalam studi genetika molekuler dari osteosarcoma telah
mengubah pandangan kita tentang penyebab penyakit dan thera-peutic pendekatan yang
berkelanjutan bagi pasien. Seperti kita semakin dekat dengan mendapatkan katalog lebih lengkap
dari gen pengemudi kanker kandidat dalam bentuk umum kanker, lanskap mutasi somatik di
osteosarcoma yang muncul dari tahap pertama. Dalam ulasan ini, kami merangkum seluruh
genom baru-baru ini dan / atau seluruh exome studi genomik, dan kemudian menempatkan
temuan ini dalam konteks keunggulan genetik mutasi somatik dan proses mutasi pada manusia
os-teosarcoma. Salah satu pelajaran di sini adalah bahwa tingkat mutasi somatik dan
kompleksitas genom oste-osarcoma yang mirip dengan bentuk umum dari kanker dewasa.
Demikian, jumlah yang jauh lebih tinggi dari sampel daripada yang saat ini diperoleh diperlukan
untuk melengkapi katalog mutasi pengemudi dalam osteosarcoma manusia. Secara paralel, studi
genetik pada spesies lain telah mengungkapkan gen sopir kandidat dan peran mereka dalam asal-
usul os-teosarcoma. Ulasan ini juga merangkum driver baru diidentifikasi di rekayasa genetika
model tikus (GEMMs) dan membahas pemahaman kita tentang dampak alam dan jumlah driver
pada latency tumor, sub-jenis, dan potensi metastasis dari osteosarcoma. Hal ini menjadi jelas
bahwa tim sinergis terdiri dari tiga driver (satu 'pembalap pertama' dan dua 'driver sinergis')
mungkin diperlukan untuk menghasilkan model hewan yang rekapitulasi osteosarcoma agresif
dengan latency singkat. Akhirnya, terapi kanker baru sangat dibutuhkan untuk meningkatkan
tingkat kelangsungan hidup dan kualitas hidup bagi pasien osteosarcoma. Beberapa kerentanan
dalam osteosarkoma diilustrasikan dalam ulasan ini untuk contoh peluang bagi generasi
berikutnya terapi bertarget molekuler. Namun, masih banyak pekerjaan untuk menyelesaikan
pemahaman kita tentang dasar mutasi somatik dari osteosar-koma, untuk mengembangkan model
hewan yang dapat diandalkan penyakit manusia, dan menerapkan informasi ini untuk
membimbing pendekatan therapeu-tic baru untuk mengurangi morbiditas dan mortalitas langka
ini penyakit.
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

1. Pendahuluan
Kanker tulang dan sendi merupakan penyakit genetik yang langka. Di Amerika Serikat,
sekitar 3300 diagnosa baru dan sekitar 1490 kematian akibat penyakit ini diproyeksikan untuk
2016[1]. Ketiga bentuk yang paling umum dari kanker tulang primer adalah osteosarcoma, tumor
Ewing, dan chondrosarcoma. Osteosarcoma (OS), juga disebut sebagai osteogenik sar-koma,
adalah yang paling sering, terhitung sekitar 20% dari semua menjadi-nign dan ganas neoplasia
tulang dan 2% dari kanker anak[2]. Setiap tahun, sekitar 800 kasus baru OS didiagnosis, dan
setengah dari mereka kembali porting pada anak-anak dan dewasa muda. Mayoritas kasus OS
yang SPO-Radic, tetapi mereka terjadi pada tingkat meningkat pada individu dengan penyakit
Paget tulang (PDB), setelah radiasi terapi, dan sindrom predisposisi kanker tertentu. OS
mempengaruhi pasien dari segala usia tetapi menunjukkan distribusi bimodal, dengan puncak
pertama pada usia 15-19 tahun (8 kasus / juta / tahun) dan puncak kedua pada 75-79 tahun (6
kasus / juta / tahun), dengan dataran rendah tengah (1 -2 kasus / juta / tahun) di anak per-berusia
25-59 tahun [3]. Studi OS epidemiologi telah memberikan petunjuk etiologi tambahan, seperti
asosiasi dengan pubertas, tinggi, dan gangguan pertumbuhan tulang dan remodeling; Namun,
faktor risiko ENVI-ronmental kuat belum diidentifikasi[3,4].
OS dapat timbul di tulang, tapi itu istimewa mempengaruhi metaphyses tulang panjang
(distal femur N proksimal tibia N humerus proksimal). distribusinya pada orang tua lebih
bervariasi dan sering termasuk kerangka aksial dan tengkorak[2]. Diagnosis klinis OS terutama
didasarkan pada pengamatan osteoblas ganas dan produk mereka, yaitu tulang imma-mendatang
atau osteoid. OS dapat secara histologis dibagi menjadi konvensional, telangiektasis, sel kecil,
permukaan bermutu tinggi, menengah, kelas rendah cen-netral, periosteal, dan varian parosteal.
Konvensional OS (intramedulla bermutu tinggi), jenis yang paling umum pada anak-anak dan
remaja, mencakup sekitar 85% dari semua kasus OS dan dapat dibagi lagi berdasarkan kehadiran
jenis sel tertentu (yaitu, osteoblastik, fibroblastik, chondroblastic)[5]. Meskipun beberapa subtipe
menampilkan karakteristik fitur genetik dan perilaku biologis, dasar molekuler untuk setiap
subtipe tidak dipahami dengan baik [6]. Di klinik, pasien OS diperlakukan dengan cara yang
sama, terlepas dari subtipe[7]. Sejak tahun 1970, penggunaan kemoterapi dan operasi telah
menyebabkan peningkatan dramatis dalam tingkat kelangsungan hidup jangka panjang, dari B20
70%. Namun, kemajuan terus dalam terapi standar untuk meningkatkan tingkat kelangsungan
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

hidup telah melambat selama tiga dekade terakhir. Selanjutnya, pasien OS dengan metastasis,
sebagian besar di paru-paru, menunjukkan tingkat ketahanan hidup 5 tahun yang buruk, pada
urutan 40% atau kurang[8]; maka pendekatan pengobatan tambahan dan agen diperlukan.
Faktor etiologi dan mekanisme patogenetik yang mendasari pengembangan OS yang
kompleks, tapi kemajuan signifikan telah dibuat untuk-bangsal memahami penyebabnya. Upaya
yang dilakukan selama beberapa de-cades terakhir telah difokuskan pada identifikasi yang
disebut 'driver' mutasi hadir dalam kasus predisposisi diwariskan, serta di OS sporadis[5,6,9, 10].
gen penyebab kanker (sering disebut gen driver atau driver) mengandung mutasi driver, yang
memberikan keuntungan proliferatif ke sel-sel kanker, menyebabkan tumor clone perkembangan.
Hal ini berbeda dengan 'penumpang' mu-tations yang tidak menghasilkan keuntungan
pertumbuhan[11]. Driver dapat dibagi menjadi setidaknya dua jenis: onkogen aktif dan gen
supresor tumor tidak aktif (TSG). Saat ini, hanya driver TSG telah diidentifikasi dalam Sindrom
keluarga mewarisi dengan kecenderungan untuk OS[5]. Secara khusus, TSGs termasuk p53, Rb,
RECQL4, BLM, dan WRN memainkan peran penting dalam pengembangan OS pada pasien
dengan Li-Fraumeni, dia-reditary retinoblastoma, Rothmund-Thomson, Bloom atau Werner syn-
dromes, masing-masing (Tabel 1). Peran kausal untuk p53 dan / atau Rb telah terungkap di
seluruh spesies[10,12-15]. model tikus rekayasa genetika (GEMMs) dilengkapi dengan p53 dan /
atau mutasi Rb telah digunakan untuk mengidentifikasi gen driver baru, untuk model
osteosarcomagenesis manusia, dan untuk mempelajari subtipe OS yang berbeda serta metastasis
dan non-metastasis fitur[16-24]. Memahami peran func-tional gen pembalap di GEMMs telah
memperluas pengetahuan kita tentang genetika molekuler dari OS dan akhirnya akan maju
penyelidikan praklinis ke dalam strategi terapi baru dan obat-obatan[5,24-27]. Namun, dalam
beberapa tahun terakhir analisis genom sampel OS manusia telah memberikan wawasan baru ke
dalam gen pengemudi dan jalur sinyal tergantung terlibat dalam beberapa peristiwa penting
dalam OS patogenesis termasuk inisiasi, progresi, ketidakstabilan kromosom (CIN),
chromothripsis, invasi, dan metastasis. Dalam ulasan ini, kita membahas gen sopir calon novel
yang telah diidentifikasi oleh generasi sekuensing maupun oleh studi genetik in vivo maju dan
mundur di GEMMs, peran gen sopir tersebut dan interaksi mereka dalam pengembangan OS,
dan sopir mutasi tergantung jalur genetik sebagai target untuk terapi kanker.

Tabel 1. Genetika sindrom osteosarcoma diwariskan.

 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

Gene Sindroma fenotipe

 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

mutasi

p53 Li-Fraumeni insiden yang lebih tinggi kanker termasuk

Sindroma payudara, otak, adrenocortical, leukemia, dan
sarkoma. Insiden OS adalah 3%.
RB1 Turun temurun Tumor di retina terjadi di masa kecil.
retinoblastoma Insiden OS adalah 12,1%.
Rothmund-
RECQL4 Thomson Poikiloderma, perawakan pendek, kulit kepala jarang
Sindroma rambut, bulu mata dan alis, tulang
kelainan, cacat ray radial, dan
Fitur penuaan dini. Juga, lebih tinggi
kejadian kanker. timbulnya
osteosarcoma adalah 32% dari sebuah penelitian kohort.
Insiden yang sebenarnya tidak diketahui.
BLM (RECQL2) Sindrom Bloom fitur dermatologi termasuk
photosensitivity, dan telangiektasis
eritema dan keganasan dari
saluran pencernaan, alat kelamin, dan kencing
sistem. Pasien telah bernada tinggi suara,
patung singkat, dan mengurangi lemak subkutan
bersama dengan insiden yang lebih tinggi kanker
termasuk OS.
WRN (RECQL3)Sindrom Werner Penuaan dipercepat awal di
masa remaja. Insiden OS adalah 7.7%.

2. Genom lanskap osteosarcoma

2.1. Mutasi osteosarcoma somatik diungkapkan oleh generasi sequencing
Untuk mengidentifikasi mutasi sopir berunding keuntungan klonal dan proses yang mutasi
somatik yang dihasilkan, beberapa kelompok telah dilakukan seluruh sekuensing genom (WGS)
dari 47 sampel OS dengan kontrol normal dipasangkan, seluruh exome sequencing (WES) dari
111 sampel dengan kontrol normal dipasangkan, dan seluruh transcriptome se-quencing dari 36
sampel [28-33]. Studi ini terdeteksi kelas yang berbeda dari mutasi DNA seperti mutasi somatik
titik, yang meliputi substitusi basa tunggal, dan indels, yang insersi atau delesi segmen kecil
DNA. Mutasi DNA lainnya diklasifikasikan sebagai struktural var-iations (SV), yang meliputi
penyusunan ulang dan somatik perubahan jumlah copy (SCNAs). Penyusunan ulang terjadi
ketika untai DNA yang bro-ken dan kemudian bergabung kembali ke segmen DNA yang berbeda
di kedua sama atau kromosom lain. SCNAs terjadi ketika jumlah salinan perubahan dalam
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

genom diploid normal. Salin nomor peningkatan dapat mengaktifkan driver Onko-gen sementara
pengurangan jumlah salinan atau hilangnya fragmen DNA dapat menonaktifkan driver TSG.
Dalam sebuah studi WGS dari 34 sampel OS pediatrik, Chen et al. diidentifikasi 50.426
divalidasi urut mutasi somatik dan 10.806 variasi struktural (SV), dengan perbedaan yang cukup
besar dalam jumlah setiap jenis mutasi antara sampel individu. Jumlah rata-rata urut mutasi dan
SVs di OS adalah 1483 dan 317 per sampel, kembali spectively, yang secara signifikan lebih
tinggi daripada di medulloblastoma dan T-sel akut sampel leukemia lymphoblastic[28]. Chen et
al. juga iden-tified 122 gen kanker dengan setidaknya satu SV breakpoint, menyiratkan bahwa
mereka dapat berfungsi sebagai driver kandidat dalam pengembangan OS. Namun, karena
rekening daerah penyandi protein hanya ~ 1% dari genom, yang paling urutan mutasi ini dan
SVs mungkin terjadi di luar daerah coding. Dengan kata lain, sebagian besar perubahan dalam
noncoding re-gions dan “gurun gen” yang mungkin mutasi penumpang. Meskipun gen sopir
dengan definisi mengandung mutasi driver, juga mungkin mengandung mutasi penumpang.
Adapun kanker tulang, selama tahap pra-ganas, sel-sel tulang yang terus menerus mengganti
berusia tulang tis-sue menumpuk mutasi somatik. Semua ini mutasi pre-ganas mutasi penumpang
mungkin bahwa tidak berpengaruh pada inisiasi tumor. Secara umum,[34]. Dengan demikian,
mayoritas mutasi ditemukan oleh sekuensing DNA adalah penumpang mungkin bukan driver.
Dalam sebuah studi WES kedua dari 59 sampel dan WGS dari 13 sampel, Perry et al.
melaporkan hypermutations lokal dan rantai kompleks belakang rangements karakteristik OS di
hampir semua kasus. Jumlah rata-rata penyusunan ulang somatik adalah 230 per tumor, dan rata-
rata nonsilent tingkat mutasi somatik adalah 1,2 mutasi per megabase[32]. frekuensi tinggi ini
peringkat OS sebagai memiliki tingkat mutasi somatik tertinggi di antara kanker pada anak.
Sebaliknya, neuroblastoma, yang menunjukkan frekuensi tertinggi kedua, memiliki 0,5 mutasi
per megabase, dan Ewing sarcoma memiliki frekuensi hanya 0,15; untuk perbandingan, fre-
quency untuk kanker payudara dewasa adalah 1,2[35,36]. Ini berarti bahwa cata-log gen
pengemudi dan proses mutasi di OS mungkin unik dibandingkan dengan tumor anak lainnya,
seperti Ewing sarcoma, yang merupakan contoh dari kanker gen-driven fusion.
Dalam penelitian ketiga, terdiri dari 123 tumor, Kovac dkk. mengamati bahwa SCNA
terpengaruh 0,2-87% dari genom OS. Sebuah genom khas mereka mantan amined terkandung 69
peristiwa SCNA. Dalam wilayah protein-coding, tumor indi-vidual berisi median dari 21 varian
berpotensi fungsional nukleotida tunggal (SNVs) (kisaran 4-174) dan 7 indels kecil (kisaran 2-
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

210)[30]. Hal ini menunjukkan bahwa OS pelabuhan mutasi titik jauh lebih banyak daripada
tumor lainnya pediatrik solid dan leukemia, yang memiliki rata-rata mutasi 9,6 point per
tumor[34]. Selain itu, Kovac dkk. terdeteksi divalidasi mutasi pada 388 gen dan mengidentifikasi
14 gen sebagai driver utama, yang merata bertanggung jawab untuk 87% kasus OS. Ini 14 gen
meliputi: TP53, RB1, BRCA2, BAP1, RET, MUTYH, ATM, PTEN, WRN, RECQL4, rhatj,
FANCA, NUMA1, dan MDC1, yang sebagian besar adalah ei-ther driver kanker terkenal atau
telah dilaporkan dalam konteks kerentanan kanker. Selain itu, sebagian besar dari mereka telah
diidentifikasi sebagai gen somatik bermutasi oleh beberapa kelompok[28,29,31-33]. Namun,
peran beberapa gen yang diketahui dalam konteks OS, seperti FANCA, NUMA1, dan
MDC1[30]. Meja 2daftar yang dipilih gen yang begitu-matically bermutasi dalam setidaknya dua
sampel OS. gen ini dapat diklasifikasikan-fied ke jalur kanker signaling yang mengatur proses
seluler tiga inti: nasib sel, kelangsungan hidup sel, dan pemeliharaan genom[34].

2.2. Kompleksitas penataan ulang genomik dan chromothripsis

Sebelum munculnya studi DNA GWS, keunggulan dari OS seperti-euploidy dan
ketidakstabilan genom, serta heterogenitas tumoral telah diamati dengan pendekatan
konvensional seperti: karyotyping, perbandingan genom hibridisasi (CGH), fluoresensi
hibridisasi in situ ( IKAN), kuantitatif polymerase chain reaction (qPCR), dan analisis
konformasi polimorfisme dosa-gle-strand [6]. studi kanker genom tidak hanya secara sistematis
menilai tingkat mutasi, mutasi gen driver, penyusunan ulang, dan menyalin sejumlah perubahan
selama pengembangan OS, tetapi juga telah mengungkapkan mekanisme baru untuk acara mutasi
tersebut. “Chromothripsis” (dari bahasa Yunani, “thripsis” = “menghancurkan”) adalah proses
dimana penyusunan ulang genomik besar dan hypermutations lokal (juga disebut kataegis)
diperoleh dalam peristiwa bencana tunggal[37]. Kebanyakan sel menderita puluhan hingga
ratusan istirahat DNA dalam satu-off peristiwa bencana ini diperkirakan akan mati, tetapi setiap
sel yang bertahan krisis ini kemungkinan akan memiliki keunggulan pertumbuhan se-lective
signifikan, mempromosikan perkembangan ke arah kanker. Dur-ing chromothripsis, gen sopir
mungkin timbul secara bersamaan oleh beberapa mekanisme: menurun copy nomor
(penghapusan TSGs), peningkatan jumlah salinan (amplifikasi onkogen), penjajaran coding se-
quences dari dua gen (produksi perpaduan Onko-protein) , atau membawa bersama-sama dari
gen utuh dengan promotor gen yang berbeda yang mengakibatkan disregulasi ekspresi gen-nya.
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

Proses ini secara fundamental berbeda dari bertahap lebih bertahap, atau akuisisi progresif
mutasi gen pengemudi oleh sel-sel tumor yang paling[11]. “Kataegis” (dari bahasa Yunani,
“kataegis” = “shower” atau “badai”) adalah sebuah fenomena yang sering menyertai
chromothripsis, dimana wilayah-al hypermutation ditandai dengan beberapa mutasi basis terjadi
pada breakpoint penataan ulang di dekatnya. Proses ini mungkin melibatkan apo-lipoprotein B
mRNA-editing enzim polipeptida-seperti (APOBEC) keluarga protein katalitik[38]. Dalam
sampel OS manusia, sekitar 50-85% menunjukkan pola kataegis[28,32]. Chromothripsis telah
fre-quently terdeteksi di pilih kasus OS (3 dari 9 sampel OS utama dalam satu studi, 4 dari 34 di
studi lain)[28,37]. Menariknya, chromothripsis baru-baru ini dikaitkan dengan baik somatik dan
germline TP53 mutasi medulloblastoma pediatrik dan akut myeloid leuke-mia[39]. Oleh karena
itu, penyelidikan lebih lanjut pada tingkat asosiasi menjadi-tween TP53 mutasi dan
chromothripsis di osteosarcoma kemungkinan akan meningkatkan pemahaman kita tentang dasar
genetik ini agresif dis-kemudahan. Sel-sel kanker juga telah berevolusi untuk mentolerir
kompleksitas genom untuk menghindari apoptosis, misalnya, dengan mengakuisisi mutasi pada
gen seperti TP53 yang mengontrol respon seluler terhadap kerusakan DNA. Oleh karena itu,
kompleksitas ge-nomic adalah sebagian hasil dari kanker daripada penyebabnya[34].
Apa yang menginduksi chromothripsis di OS genom? Satu studi baru-baru ini
menunjukkan bahwa krisis telomer dapat menginduksi chromothripsis dan kataegis selama
tumorigenesis[40]. Telomere menjaga integritas genom pada sel normal, dan shortening progresif
mereka setelah banyak divisi sel menginduksi ketidakstabilan kromosom. Selama krisis telomer,
kehilangan telomere mempromosikan end-to-end kromosom fusi dan kromosom disentrik, yang
rusak selama mitosis dan menjalani kerusakan-fusion-jembatan (BFB) siklus, mengakibatkan
ratusan DNA menerobos TREX1- fragmentasi dimediasi [40]. Mesin perbaikan DNA dapat
menyelamatkan genom dengan cepat jahitan fragmen kromosom bersama-sama secara acak dan
orientasi. Bahkan, BFB telah dilaporkan sebelumnya sebagai mekanisme untuk menghasilkan
OS kelainan sitogenetika dan genet-ic heterogenitas [41]. Dalam sel-sel kanker, penuaan
replikatif dihambat dengan menjaga panjang telomer baik melalui aktivasi telomerase (enzim
biasanya bertanggung jawab untuk replikasi telomer) atau perpanjangan alter-pribumi telomere
(ALT) jalur, sebuah telomerase-indepen-dent mekanisme pemeliharaan telomer. telomere yang
lebih panjang dan aktivitas ALT tinggi yang umum di OS, menunjukkan kontribusi ALT
ketidakstabilan genomik[42]. ALT pada tumor dikaitkan dengan perubahan rhatj, yang berulang
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

bermutasi pada pasien OS (Meja 2) [28,30,32]. Kontribusi penting dari ALT dan rhatj untuk
pengembangan OS dan impli-kation untuk terapi dibahas lebih lanjut dalambagian 4.

Tabel 2. Divalidasi mutasi somatik pada gen kanker kandidat diidentifikasi dalam studi genom.
Gen Sinyal jalur Frekuensi

onkogen
Cdk4 siklus sel / apoptosis 1/20 (Perry et al.), * (Kovac dkk.)
MDM2 siklus sel / apoptosis 2/52 (Chen et al.), 3/59 (Perry et al.)
MYC siklus sel / apoptosis 3/20 (Perry et al.)
CARD11 siklus sel / apoptosis 1/34 (Chen et al.), 3/20 (Perry et al.)
EGFR PI3K-mTOR; RAS 2/34 (Chen et al.)
GNAQ PI3K-mTOR; RAS; MAPK 2/34 (Chen et al.)
GNAS APC; PI3K-mTOR; TGF-beta; 2/34 (Chen et al.)
RAS
JAK1 IFN 2/34 (Chen et al.), 2/20 (Perry et al.)
MAML2 Takik 1/34 (Chen et al.)
FBXW7 Takik 1/34 (Chen et al.), * (Kovac dkk.)
ALK PI3K-mTOR; RAS 1/34 (Chen et al.), 2/20 (Perry et al.)
PDGFRA PI3K-mTOR; RAS 2/34 (Chen et al.), 3/20 (Perry et al.)
PDGFRB PI3K-mTOR; RAS 1/34 (Chen et al.), 1/20 (Perry et al.)
PIK3CA PI3K-mTOR 1/34 (Chen et al.), 5/20 (Perry et al.)
APC APC * (Kovac dkk.)
CTNND1 siklus sel / apoptosis * (Kovac dkk.)
BLM siklus sel / apoptosis 1/34 (Chen et al.)
CCNE1 siklus sel / apoptosis 2/20 (Perry et al.) * (Kovac dkk.)
COPS3 siklus sel / apoptosis 4/20 (Perry et al.)
PDPK1 PI3K-mTOR 1/20 (Perry et al.)
AKT1 PI3K-mTOR 1/20 (Perry et al.)
E1F4B PI3K-mTOR 2/20 (Perry et al.)
WRN pengendalian kerusakan DNA 2/123 (Kovac dkk.)
Notch1-3 Takik * (Kovac dkk.)
Notch4 Takik 1/20 (Perry et al.) * (Kovac dkk.)
PRKCA siklus sel / apoptosis * (Kovac dkk.)
gen supresor tumor
EP300 modifikasi kromatin; 1/34 (Chen et al.), 3/123 (Kovac dkk.)
APC; TGF-beta; TAKIK
SMAD4 TGF-beta 2/34 (Chen et al.), 1/20 (Perry et al.)
Runx1 regulasi transkripsi 1/34 (Chen et al.)
ARID1A modifikasi kromatin 3/20 (Perry et al.) * (Kovac dkk.)
ATM pengendalian kerusakan DNA 2/20 (Perry et al.), 3/123 (Kovac dkk.)
RB1 siklus sel / apoptosis 61% (Perry et al.), 10/34 (Chen et
al.), 47% (Kovac dkk.)
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

CDKN2A siklus sel / apoptosis, DNA 6/20 (Perry et al.), 15% SPMB (Kovac
pengendalian kerusakan et al.)
TP53 siklus sel / apoptosis, DNA 75% (Perry et al.), 90% (Chen et al.),
pengendalian kerusakan 47% (Kovac dkk.)
rhatj modifikasi kromatin 10/20 (Chen et al.), 7/20 (Perry et al.),
11/123 (Kovac dkk.)
FANCA modifikasi kromatin 1/34 (Chen et al.), 2/20 (Perry et al.),
3/123 (Kovac dkk.)
RECQL4 modifikasi kromatin 1/20 (Perry et al.), 3/123 (Kovac dkk.)
BRCA1 pengendalian kerusakan DNA 2/34 (Chen et al.), 91% SCNA (Kovac
et al.)
BRCA2 pengendalian kerusakan DNA 78% SCNA (Kovac dkk.)
MLH1 pengendalian kerusakan DNA 1/34 (Chen et al.), 1/20 (Perry et al.)
CBL PI3K-mTOR; RAS 1/34 (Chen et al.), 1/20 (Perry et al.)
PTCH1 landak 1/34 (Chen et al.), * (Kovac dkk.)
NF1 RAS 2/34 (Chen et al.), 3/20 (Perry et al.)
MAP2K4 MAPK 1/34 (Chen et al.), 2/20 (Perry et al.)
AKT2 PI3K-mTOR 1/34 (Chen et al.), 1/20 (Perry et al.)
PIK3R1 PI3K-mTOR 1/34 (Chen et al.), 1/20 (Perry et al.)
PTEN PI3K-mTOR 2/34 (Chen et al.), 7/20 (Perry et al.),
50% SPMB (Kovac dkk.)
TSC2 PI3K-mTOR 3/20 (Perry et al.), 1/7 (Bousquet et
Al.)
GAS7 regulasi transkripsi 5/34 (Chen et al.), 1/20 (Perry et al.)
MLLT3 regulasi transkripsi 1/34 (Chen et al.), 2/20 (Perry et al.)
DLG2 Wnt 18/34 (Chen et al.), 5/20 (Perry et al.),
24% SCNA (Kovac dkk.)
VHL PI3K-mTOR; RAS; STAT * (Kovac dkk.)
BAP1 pengendalian kerusakan DNA 38% SCNA (Kovac dkk.)
Catatan: * Nomor tidak tercantum dalam kertas

Faktor lain dalam induksi chromothripsis kerusakan chro-mosomal fisik, seperti yang
disebabkan oleh radiasi pengion [43]. Sebuah pulsa radiasi pengion menginduksi DNA untai
ganda istirahat, mengarah ke sirkulasi terkekang ratusan pecahan DNA genomik dalam nukleus.
Potongan-potongan ini, pada gilirannya, secara acak disisipkan bersama-sama dengan mesin
perbaikan DNA. Fenomena ini menjelaskan mengapa radiasi OS baik manusia atau hewan
tergantung pada dosis (dosis yang lebih tinggi menginduksi mutasi pengemudi lebih banyak
sekaligus)[44]. Sebagian besar kasus OS kedua-ary timbul karena radiasi pengion, dengan atau
tanpa kemoterapi[9]. Radiasi diperkirakan menyebabkan hingga 3% dari kasus OS, beberapa
yang dapat muncul sampai 30 tahun setelah paparan. Hal ini dimungkinkan karena jika hanya
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

satu sel mengakuisisi mutasi driver dari acara tersebut, klon ini kemudian akan hadir masa laten
yang cukup.

2.3. Katalogisasi gen sopir kanker pada osteosarcoma manusia

Identifikasi gen pembalap kanker telah menjadi tujuan utama dari penelitian kanker selama
beberapa dekade terakhir [11]. Saat ini, setidaknya ada 595 gen sopir mutasi (2,7% dari 22.000
gen yang mengkodekan pro-teins dalam genom manusia) dilaporkan dalam berbagai macam
kanker dengan bukti kuat bahwa ini berkontribusi tumorigenesis[45] (http: //
cancer.sanger.ac.uk/census). Untuk menyelidiki kelayakan menciptakan katalog com-prehensif
gen kanker, Lawrence et al. dianalisis 4742 kanker pada manusia dengan kontrol normal
dipasangkan di 21 jenis kanker[36]. Menggunakan WES analisis genom, gen kanker hampir
semua dikenal di jenis tumor ini bisa diidentifikasi. Mereka menggunakan metode statistik yang
ketat untuk memperkirakan bahwa hampir saturasi dapat dicapai dengan 600- 5000 sampel per
jenis tumor, tergantung pada latar belakang mutasi fre-quency. Untuk OS manusia dengan rata-
rata 1,2 mutasi per megabase, sekitar 1000 sampel yang diperlukan untuk mendapatkan katalog
lengkap dari gen sopir kanker (setidaknya orang-orang dari frekuensi menengah). Ini adalah
tantangan yang luar biasa karena kelangkaan OS. Genom Konsorsium Kanker Internasional
(ICGC, lihathttp://www.icgc.org/home) Telah pro-berpose untuk urutan 250 sampel OS, dan
proyek TARGET OS, melalui kolaborasi multi-pusat, telah mencirikan 100 sampel OS
menggunakan berbagai metode, termasuk WGS dan WES (https: // OCG.
cancer.gov/programs/target/projects/ osteosarkoma). Jadi, masih ada banyak pekerjaan yang
perlu dilakukan untuk menghasilkan katalog komprehensif gen pengemudi kandidat dalam OS
manusia.
Upaya sequencing komprehensif selama dekade terakhir telah kembali vealed
pemandangan genom dari bentuk umum dari kanker manusia [34,36,46]. Jenis kanker yang
diberikan terdiri dari sejumlah kecil driver gen yang bermutasi pada frekuensi tinggi (N20%).
Gen yang sangat bermutasi telah disebut “gunung”[34]. Namun, ada banyak gen pengemudi
lebih yang ditemukan bermutasi pada frekuensi menengah 2-20% dan frekuensi yang lebih
rendah dari b2% (disebut “bukit” dan “ekor”, re-spectively)[38]. Sebuah gunung di salah satu
jenis kanker dapat berupa bukit atau ekor dalam jenis lain, sejalan dengan bukti yang
menunjukkan bahwa gen pengemudi yang sama bisa berulang kali “kembali ditemukan” dengan
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

berbagai frequen-badan-dalam jenis tumor yang berbeda. Sebagian besar pegunungan dan
sebagian dari bukit dideteksi melalui GWS sebelumnya telah diidentifikasi melalui resolusi
rendah genome-wide layar menggunakan tes biologis untuk mengubah aktivitas DNA sel kanker
secara keseluruhan, atau melalui mu-tational ditargetkan layar dipandu oleh menebak biologis
baik-informasi untuk menemukan mutasi gen di garis kuman atau sel somatik[11]. Berapa
banyak lebih gen yang mengandung germline atau sopir somatik mutasi telah belum ditemukan?
Studi dari bentuk umum kanker menunjukkan bahwa pla-teau sedang mencapai[34]. Misalnya,
Nik-Zainal et al. dilakukan WGS untuk 560 kanker payudara dan terdeteksi total gen sopir 93
kanker, dan 90% dari mereka tumpang tindih dengan 595 gen sopir dikenal ([46]). Di antara
90%, hanya lima gen kanker memiliki bukti ada atau equiv-okal sebelumnya. Nik-Zainal et al.
juga menemukan bahwa gen fusi dominan aktif dan non-coding mutasi pengemudi tampaknya
menjadi langka, meskipun gen kanker jarang bermutasi addi-tional mungkin ada. Oleh karena itu
mereka menyimpulkan bahwa mayoritas besar mutasi pengemudi termasuk gen ini; gunung dan
bukit di kanker payudara yang sekarang dikenal. OS memiliki tingkat mutasi somatik mirip
dengan kanker payudara (1,2 per juta megabases). Dengan demikian, dapat dibayangkan bahwa
sebuah katalog lengkap dekat dari OS berisi sekitar 100 gen driver, dengan sebagian besar dari
mereka mungkin tumpang tindih dengan 595 driver diketahui.
OS gen sopir gunung termasuk p53, Rb, CDKN2A dan PTEN telah diidentifikasi oleh
investigasi yang ditargetkan sebelumnya, serta melalui skr-sewa berisi GWS [28-33,47-50]. Gen-
gen yang tercantum dalamMeja 2adalah kandidat yang baik untuk driver gunung atau bukit.
Mereka benar-benar tumpang tindih dengan 595 driver dikenal, kecuali untuk DLG2. OS
pegunungan mendekati duduk-uration, tetapi bukit-bukit dan ekor pasti akan terungkap sebagai
GWS terus. Pada akhirnya, DLG2 atau bukit calon dan ekor gen pengemudi lain akan perlu
divalidasi oleh tes biologis. Sebuah studi baru-baru ini tersirat bahwa beberapa jalur onkogenik
mendorong ketidakstabilan kromosom selama perkembangan OS dan mengakibatkan akuisisi
BRCA1 / sifat 2-kekurangan[30]. Kovac dkk. menemukan pola tanda tangan substitusi dasar
dalam mengatur kasus OS mirip dengan tanda tangan substitusi dasar 3 dan 5 dari kanker
payudara. Kehadiran mereka sangat terkait dengan penataan ulang signa-membangun struktur 1,
3, dan 5 dalam kanker payudara[46]. Kanker, ditunjukkan dengan mengatur ulang-ment
signature 1 sering menunjukkan TP53 mutasi, pengayaan untuk substitusi dasar tanda tangan 3,
dan defi-siensi Indeks rekombinasi homolog tinggi (HRD). Mereka dengan tanda tangan
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

penataan ulang 3 dan 5 yang sangat terkait dengan kehadiran BRCA1 / 2 mutasi atau BRCA1
promotor hiper-metilasi. Pentingnya BRCA1 ciri / 2-defi-sien dalam aplikasi terapi dibahas lebih
lanjut dalam Bagian 4. Status tanda tangan mutasi dan BRCA1 promotor hiper-methyla-tion
perlu diselidiki dalam studi genomik OS masa depan.
Mayoritas sampel OS dikenakan GWS sejauh berasal dari anak, dan subtipe sebagian besar
osteoblastik dan OS chondroblastic, dengan beberapa kasus fibroblastik dan OS telangiektasis
[28,30-32]. Candi-date mutasi sopir bertanggung jawab untuk OS dewasa dan subtipe lainnya
telah dilaporkan, namun peran khusus mereka sebagai driver tidak baik di bawah-berdiri. Di satu
sisi, germline dan mutasi somatik di sequestosome 1 (SQSTM1) tidak ditemukan di GWS
sampel OS. Namun, mutasi di SQSTM1 sering ada pada pasien dengan PDB, yang ditandai
dengan remodeling tulang yang luas dengan jaringan tulang membesar dan melemah, yang
mempengaruhi sebagian besar individu N50 tahun[51]. PDB adalah penyakit tulang yang paling
umum kedua metabolisme setelah osteoporosis, dan sekitar 1% dari individu yang terkena
selanjutnya akan mengembangkan OS[52,53]. Satu pertanyaan re-maining adalah apakah
SQSTM1 dapat berfungsi sebagai driver untuk PDB-in-teknya OS. driver fusion baru lainnya
belum dilaporkan dalam studi mereka sequencing, tetapi beberapa telah ditemukan di OS sel
kecil, sub-jenis OS manusia, termasuk EWSR1-CREB3L1, LRP1-SNRNP25, dan KCNMB4-
CCND3[54,55]. Di sisi lain, GNAS, MDM2, dan Cdk4 (Meja 2) Telah sering dilaporkan sebagai
gen pengemudi dalam parosteal os-teosarcoma, yang ditandai dengan kromosom cincin [56,57].
Di masa depan, data yang GWS cukup akumulasi dari setiap subtipe individu akan membantu
menentukan apakah gen sopir kanker subtipe spesifik ada, dan frekuensi mereka. Informasi ini
akan meningkatkan pemahaman kita tentang lanskap genom untuk setiap subtipe dari OS dan
akhirnya memandu dokter untuk mengobati pasien berbeda-beda individu.
Lanskap genetik kanker mungkin tidak sepenuhnya lengkap sampai kami sepenuhnya
memahami pentingnya belum jenis lain dari gen driver, yang disebut gen Epi-driver. gen ini tidak
sering bermutasi, tetapi di-manfaat memiliki modifikasi epigenetik yang menganugerahkan
selektif pertumbuhan iklan-pandang ke tumor[34]. gen epi-driver dinyatakan aberrantly pada
tumor karena perubahan DNA metilasi atau kromatin modifica-tion dan bertahan sebagai sel-sel
tumor membagi. Hal ini tidak diketahui berapa banyak Epi-driver ada atau apa peran mereka
sebagai driver dari tumorigenesis. Dalam konteks OS, penghambatan faktor Wnt 1 (WIF1) dapat
dianggap sebagai gen Epi-driver karena ekspresi menyimpang nya diatur oleh modifikasi
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

epigenetik[58,59]. Pengkajian mendalam pada epige-netic mekanisme OS-spesifik, regulasi

Mirna, proteomik, non-coding RNA, dan ekspresi profiling telah baru-baru dibahas di tempat
lain[60- 64]. Berbeda dengan titik mutasi di daerah coding, kemampuan kita untuk dis-cover dan
memahami jenis-jenis driver seperti Epi-driver masih terbatas. Banyak driver kanker penting
lainnya mungkin bersembunyi di tempat-tempat yang kita tidak dapat dengan mudah
menginterogasi[38]. Ini termasuk jumlah copy mengubah-negosiasi, penyusunan ulang
kromosom, dan driver ditemukan di noncoding daerah. penelitian lebih lanjut tentang Epi-driver
dan driver lainnya yang tidak diketahui akan menjadi penting[34]. Singkatnya, sementara bidang
genomik OS telah membuat kemajuan yang signifikan, eksplorasi lebih lanjut dan analisis WGS
dari sampel pasien OS akan diminta untuk melengkapi pemahaman kita tentang dasar molekuler
penyakit.

3. Memahami peran mutasi gen pengemudi dalam mengembangkan-ment dari

osteosarcoma
3.1. Sopir gen baru yang diidentifikasi dalam maju dan mundur studi genetika
Mutasi pengemudi pada gen p53 telah terdeteksi dalam 65-90% dari pasien anak dengan
OS [28,30,32]. Peran p53 sebagai faktor-tor memicu dalam inisiasi OS telah dikonfirmasi oleh
penelitian di GEMMs melalui spektrum penuh mutasi. Ini termasuk penghapusan germline dari
salah satu atau kedua alel (p53± atau p53- / -), Osteoblas spesifik penghapusan salah satu atau
kedua alel menggunakan sistem Cre-loxP (Cre+ p53 flox /+ atau Cre+ p53 flox / flox), dan
pengenalan mutasi titik dikenal (p53 R172H atau R270H) yang lazim pada pasien OS manusia
dengan sindrom Li-Fraumeni [13,14,18,19,22,65,66]. Untuk mengidentifikasi gen driver baru
yang berkontribusi terhadap pengembangan OS, Moriarity et al. melakukan Sleeping Beauty
berbasis transposon layar genetik maju pada tikus dengan atau tanpa mutasi p53 R270H[19].
Secara total, mereka mengidentifikasi 191 kandidat gen yang mungkin tergantung pada mutasi
p53 untuk OS mengembangkan-ment. Khususnya, mereka juga menemukan 65 kandidat gen
yang dapat mendorong pembentukan tumor tanpa mutasi p53 somatik. Di antara mereka,
Sema4d dan Sema6d yang fungsional divalidasi sebagai onkogen di OS manusia[19]. Selain itu,
33 yang baru diidentifikasi gen sopir kanker tumpang tindih dengan 595 gen sopir konsensus
manusia, dan banyak yang komponen ErbB, PI3K-Akt-mTOR dan MAPK jalur sinyal. Setelah
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

validasi fungsional, mereka akan menjadi kandidat masa depan yang berharga yang dapat
digunakan untuk Gener-makan model tikus baru, dan untuk pengembangan target terapi baru.
Selama beberapa dekade terakhir, beberapa gen driver baru telah diidentifikasi melalui
studi genetik terbalik pada tikus, termasuk Prkar1a, Wif1, BRCA2, APC, Twist1, NF2, Notch1,
FOS, PTEN, dan Ptch1 [16, 19,58,67-72]. Sebelum GEMMs tersebut dihasilkan, somatik sopir
mu-tations untuk gen ini di OS manusia tidak dilaporkan, namun kebanyakan dari mereka adalah
gen konsensus dalam bentuk umum lainnya dari kanker manusia. Misalnya, mutasi somatik pada
komponen Notch sig-naling jalur belum ditemukan dalam kanker langka mesenkim yang
diturunkan seperti OS, sampai GWS terbaru dan layar genetik maju pada tikus mutasi
diidentifikasi dalam FBXW7, MAML2, Notch1, Notch 2, Notch3 dan Notch4[19,28-33]. Tao et
al. dihasilkan model tikus OS (cNICD tikus), dan menemukan bahwa ekspresi bentuk terpotong
mengaktifkan reseptor Notch1 di osteoblas sudah cukup untuk mendorong OS de-velopment[73].
Khususnya, cNICD tikus dikembangkan lesi osteosclerotic parah dan menunjukkan peningkatan
remodeling tulang sebelum OS disajikan[74]. Di satu sisi, jenis lesi tulang pra-kanker sejauh ini
hanya dilaporkan di GEMMs berdasarkan mutasi pada gen seperti Notch1, APC, Prkar1a, dan
Ptch1, tapi tidak pada tikus dengan mutasi p53 [16,67,68,72]. Ini berarti bahwa proses mutasi
yang berbeda mungkin ditandai dengan mutasi pengemudi biasanya timbul dari gen yang terlibat
di jalur sinyal evolusioner. Bisa dibayangkan bahwa tu-mors berasal dari kelompok ini GEMMs
meniru OS manusia pada pasien dengan kondisi tulang-lesi seperti PDB. Di sisi lain, melalui
urutan seluruh transcriptome dan analisis jalur, Tao et al. juga menemukan bahwa dua jenis
tumor (Notch-driven dan p53-driven) share beberapa jalur kanker kanonik genetik, termasuk
Wnt, PI3K / mTOR, dan p53, serta BRCA1 dalam menanggapi kerusakan DNA[16]. Hal ini
penting untuk menunjukkan bahwa mutasi pengemudi di PI3K yang / mTOR dan jalur BRCA1
baru-baru ini telah terdeteksi dalam studi GWS dari OS manusia[30,32].

3.2. Jumlah gen driver yang diperlukan untuk mengembangkan osteosarcoma

Dekade studi fungsional, serta upaya sequencing genom baru-baru ini telah
mengungkapkan ada sejumlah terbatas, mungkin antara dua dan delapan, gen pengemudi besar-
efek di sebagian besar tumor [34,75]. Dalam setiap jenis sel tertentu, driver ini membentuk tim
sinergis mempromosikan tumor-igenesis dan generasi clone. Mungkin ada jumlah yang lebih
besar dari efek kecil driver yang membantu memperluas clone, tapi dengan definisi mereka tidak
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

berkontribusi inisiasi tumor dan untuk sebagian besar tumorigenic pheno-type. Kontribusi dan
fungsional peran gen pengemudi besar efek dalam pengembangan OS telah diselidiki di
GEMMs. Seorang pengemudi yang dapat memicu proses tumorigenic tulang diklasifikasikan
sebagai pembalap pertama. Kelompok driver pertama meliputi p53, Notch1, Myc, Fos, NF2,
Wif1, BRCA2, APC, Ptch1, dan Prkar1a. Kekuatan dan sifat setiap pengemudi berbeda.
Misalnya, p53 dan Notch dapat mendorong pembentukan OS dengan penetrasi yang lengkap,
sedangkan Wif1 dan BRCA2 dapat menginduksi OS hanya dalam persentase kecil dari
tikus[16,17,58,70]. Selanjutnya, APC, Ptch1, dan Prkar1a hanya menginduksi tumor tulang
ganas jinak atau kelas rendah, tetapi tidak maju OS[67,68,72]. Seorang pengemudi yang tidak
dapat memicu proses tulang tu-morigenic diklasifikasikan sebagai sopir sinergis. Seorang
pengemudi sinergis harus bekerjasama dengan sopir pertama untuk mempercepat inisiasi tumor
dan pertumbuhan, tetapi mungkin ada sebagai mutasi germline sebelum pembalap pertama
muncul dari mutasi somatik. Kelompok driver sinergis meliputi Rb1, Twist, PTEN, dan Juni
Misalnya, 56% dari OS pa-tients memiliki kedua TP53 dan RB1 mutasi inaktivasi[32]. Konsisten
dengan ini, meskipun inaktivasi Rb1 saja pada tikus tidak bisa menginduksi pembentukan tumor
tulang, pasangan sinergis mutasi p53 / Rb1 memperpendek latency rata-rata OS ganas 292-128
hari (OSX-Cre+ p53fl / fl vs OSX-Cre+ p53fl / fl
PRBfl / fl tikus) [17]. Khususnya, dua atau lebih
driver pertama juga dapat membentuk tim untuk mempercepat tumorigenesis. Hal ini
dicontohkan oleh pasangan p53 / Notch sinergis, yang memperpendek latency rata-rata OS 346-
154 hari pada tikus (COL1A1 2,3 kb Cre+ p53 fl / fl
vs COL1A1 2,3 kb Cre+ p53fl / fl Notch ICD +

tikus) [16]. Dalam hal ini, Notch dapat mengambil peran seorang sopir sinergis, dan sebaliknya.
Baru-baru ini, sebuah studi dari kombinasi sinergis dari tiga pembalap menunjukkan tikus yang
dengan mutasi pada p53, Rb1, dan Prkar1a (COL1A1 2,3 kb Cre + p53fl / fl pRb1fl / fl Prkar1afl / +
atau RbΔ / ΔOB p53Δ / ΔOB Prkar1a+ /ΔOB) Dikembangkan tumor dalam 44 hari dan hidup tidak lebih
dari 77 hari (rata-rata 63 hari). Ini adalah latency signifikan lebih pendek dibandingkan dengan
yang terlihat pada tikus dengan mutasi hanya dalam dua driver ini, p53 dan Rb1 (COL1A1 2,3
kb Cre+ p53fl / fl
pRb1fl / fl
atau RbΔ / ΔOB
p53) (140-267 hari, dengan rata-rata 203 hari) [24].
Demikian, jumlah driver secara signifikan mempengaruhi latency tumor ment mengembangkan-;
seperti yang dicontohkan di sini, dari satu driver (346 hari di p53 Δ / ΔOB), Untuk dua pembalap
(203 hari di RbΔ / ΔOB p53Δ / ΔOB), Tiga driver (63 hari di RbΔ / ΔOB p53Δ / ΔOB Prkar1a+ / ΔOB). Di sini,
kita perlu menunjukkan bahwa model tikus genetik dijelaskan oleh Chen et al. awalnya tidak de-
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

ditandatangani untuk membuktikan bahwa tiga mutasi p53, Rb dan Prkar1a sebenarnya terlihat
pada pasien OS pediatrik. ekspresi yang lebih rendah dari PRKAR1A telah dikaitkan dengan
respon terhadap kemoterapi dalam studi dari 54 pasien OS manusia, tetapi mutasi somatik dari
Prkar1a atau Prka1b hanya baru-baru ini ditemukan di sejumlah pasien anak OS[30,32,72]. Oleh
karena itu, masih harus ditentukan apakah ini tiga mutasi berdampingan dalam tumor yang sama
manusia OS pediatrik pa-tients. Namun, dapat dibayangkan bahwa “tiga pembalap” model
ilustrasi pada penelitian ini menghubungkan jumlah perantara dengan latensi tumor yang juga
sejajar dengan model matematika yang digenerasikan oleh studi kohort epidemiologi mengenai
kanker usus besar, yang mana ditemukan bahwa hanya tiga jalan mutasi gen perantara yang
dibutuhkan untuk membentuk kanker paru-paru dan kolorektal.76
Tidak diragukan lagi, disamping mempengaruhi onset, latensi, dan waktu untuk bertahan
hidup, baik jumlah dan sifat perantara secara signifikan dapat membentuk fitur pembentukan OS.
Secara histologis, OS konvensional pada manusia dapat di sub-klasiikasikan menjadi:
osteoblastic (50%), yang mana memiliki derajat variable mineralisasi serta ditandai oleh
produksi matriks osteoid yang melimpah; kondroblastik (25%), yang menyajikan tingkat variable
daerah kondroid dicampurkan dengan sel-sel spindle maligna dan ditandai oleh produksi matriks
kartilaginosa; atau fibroblastic (25%), yang terdiri dari sel-sel spindle bermutu tinggi atau sel
pleomorfik bermutu tinggi yang tidak terdiferensiasi. 77 Mutasi driver khusus untuk setiap subtipe
OS manusia tidak begitu jelas, tetapi studi genetik mengenai GEMMs mutasi driver dapat
memberikan petunjuk tambahan. Pada model tikus (Gambar 1), OS osteoblastik secara efisien
diprakarsai oleh satu driver, seperti p53 (kehilangan dua alel)17 atau oleh dua driver, seperti Ptch1
(kehilangan satu alel) dan p53 (kehilangan satu alel) dengan penetrasi sekitar 70%. 67 OS
fibroblastik dapat secara efisien diprakarsai oleh satu driver, seperti Notch16 atau oleh dua driver,
seperti p53 (kehilangan dua alel) dan Rb1 (kehilangan dua alel).17,21,23 Dalam kasus yang terakhir,
driver Rb1 tidak hanya mempercepat perkembangan tumor, tetapi juga mengganti subtipe tumor
dari osteoblastik menjadi fibroblastik. Khususnya, Rb1 mengatur pilihan dan genetik pada MSCs
dan sel MSC, yang menjelaskan pengamatan pada tikus dimana terjadi hilangnya p53 dan Rb1
(Osx-Cre+ p53fl/fl pRbfl/fl dan Prx1-Cre+ p53fl/fl pRbfl/fl) juga menyebabkan persentase yang tinggi
terjadinya tumor dengan jenis lainnya seperti hibernoma dan rhabdomiosarkoma. 17,21,23,78 Untuk
menguji apakah sel asal mula (benih) berkontribusi pada fase diferensiasi akhir dalam
transformasi sel-sel OS, Quist et al. menghapus p53 dan Rb1 menggunakan Prx1-Cre, Col1a1
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

2.3 kb Cre, dan OC-Cre dan menemukan bahwa diferensiasi tumor tidak berkorelasi dengan
diferensiasi sel asal.23 Mereka menyatakan bahwa diferensiasi akhir dari sel OS (seperti halnya,
perluasan proses mineralisasi dan produksi matriks osteoid) mungkin dipengaruhi oleh proses
silencing dari regulator epigenetik seperti DNA-metil transferase. Mereka juga menemukan
periode laten osteosarkomagenesis yang serupa di tiga kelompok tikus, yang memperkuat konsep
bahwa jumlah driver memainkan peran penting dalam inisiasi dan perkembangan OS.
Selanjutnya, OS kondroblastik dapat diinduksi oleh salah satu driver seperti Fos, dua driver (Apc
dan Twist), atau tiga driver (p53, Rb1, dan Prkar1a) (Gambar 1).24,68,69 Meskipun demikian, tumor
pada tikus yang diinduksi dari set driver inisiasi yang sama terkadang bermanifestasi sebagai OS
fibroblastik, kondroblastik, atau osteoblastik, serta campuran dari tiga subtipe ini. Hal ini
menimbulkan pertanyaan apakah driver tambahan diperlukan untuk memunculkan subtipe
tertentu seperti OS kondroblastik.

Gambar 1. Ilustrasi perkembangan subtipe OS. (a) hipotesis "single driver" menyatakan bahwa
setiap subtipe diinduksi oleh driver pertama subtype yang spesifik (A, B, atau C) dalam sel-sel
proliferatif, yang kemudian menentukan tiga subtipe osteosarkoma (OS): OS osteoblastik, OS
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

fibroblastik, dan OS kondroblastik. (b) hipotesis “multiple drivers” menyatakan bahwa setiap
subtipe diinduksi oleh dua atau lebih driver, diilustrasikan pada gambar terdapat tiga driver
pertama (D, F, H) di samping driver sinergis (E, G, I), yang kemudian menentukan subtipe OS
yang berbeda. Panah merah menunjukkan stem cell mesenkimal dari osteoblast yang
berproliferasi.

Kesimpulan bahwa hampir semua mutasi pada lesi metastasis sudah ada di sejumlah besar
sel tumor primer membantu kita memahami peran driver inisiator dalam metastasis, yang
bertanggung jawab pada sebagian besar kematian penderita kanker.34 Terlepas dari jumlah awal
driver, OS menampilkan insiden serupa metastasis (32% di Osx-Cre+ p53fl/fl vs. 37% di Osx-Cre+
p53fl/flpRbfl/fl tikus).21 Bagaimana driver mempengaruhi formasi metastasis adalah cerita yang
berbeda. Zhao et al. mengamati bahwa 31% dari Cre+ F/+ tikus (Col2.3-Cre + p53fl/+)
menunjukkan lesi metastasis dibandingkan dengan 55% untuk Cre+ R/+ tikus (Col2.3-Cre +
p53R172H/+).18 Selain itu, mutasi titik p53 dikaitkan dengan onset dini dan tingkat metastasis yang
lebih tinggi pada OS manusia daripada tanpa mutasi. 66 Mereka mengamati lebih lanjut
downregulation dari ekspresi gen NKD2, sebuah regulator negatif dari Wnt-signaling, pada OS
metastatis. Hal ini menyiratkan bahwa R172H mutasi (menyesuaikan hotspot mutasi R175H
manusia) dapat memicu peningkatan Wnt pathway signaling dan meningkatkan potensi
metastasis sel. Hal ini menunjukkan bahwa sebuah driver-dependent signaling pathway mungkin
dapat berguna pada targeted therapy dalam tatalaksana OS. Pada penelitian lainnya, Mutasaers et
al. mengamati bahwa 70% tikus shRNA (Osx-Cre+ p53.1224+ pRbfl/fl) memiliki penyakit
metastasis dibandingkan dengan 29% hewan Cre: lox (Osx-Cre + p53fl/flpRbfl/fl).20 Kekuatan driver
p53 (atau dosis p53) dikontrol oleh mekanisme pembungkaman p53 berbasis shRNA, yang
secara signifikan berdampak pada potensi metastasis di tikus shRNA. Selain itu, sifat driver juga
mempengaruhi proses mutasi pada penataan ulang kromosom. Sebagai contoh, OS yang
diiinduksi Notch jarang menyajikan kromosom kecil atau fragmen, yang notabene sering
terdeteksi di OS yang diinduksi p53.16 Secara keseluruhan, hal ini menunjukkan bahwa sifat
mutasi driver sangat mempengaruhi keadaan metastasis OS, bukan dari jumlah mutasi driver.
GEMM juga membantu pemahaman mengenai mutasi baik yang terdapat di sel normal dan
tumor. Peneliti menemukan bahwa penghapusan Recombination Signal Binding Protein untuk
Immunoglobulin Kappa J Region (Rbpj), sebuah faktor transkripsi pada jalur Notch, memblok
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

secara komplit formasi tumor pada tikus cNICD, namun jarang mempengaruhi formasi tumor
pada tikus dengan mutasi p53.16 Hal ini menegaskan konsep bahwa mutasi pada berbagai
komponen jalur tunggal adalah eksklusif dan tidak terjadi pada tumor yang sama.34 Dalam
konteks tumor mutan p53, delesi Rbpj termasuk mutasi passenger, yang juga menunjukkan
bahwa jalur kanonik Notch depeden Rbpj tidak sangat diperlukan untuk proses inisiasi tumor. 16
Meskipun demikian, hal ini tidak mengesampingkan kemungkinan bahwa OS yang diinduksi p53
menggunakan Notch signaling pathway pada tahap selanjutnya dari perkembangan tumor, seperti
invasi dan metastasis, atau induksi angiogenesis, dua hallmark kanker. 79,80 Pada kanker payudara,
Notch signaling pathway sangat penting dalam penyebaran sel tumor ke tulang.80 Demikian juga
halnya, mutasi pada gen RECQL4 telah lama diakui sebagai yang bertanggung jawab untuk OS
pada pasien dengan autosomal resesif Rothmund-Thomson Syndrome (RTS), sindrom kanker
keluarga ketiga di samping Li-Fraumeni dan sindrom retinoblastoma herediter (Tabel 1). 81
Kehilangan total fungsi Recql4 pada tikus menyebabkan kematian embrionik, yang menyiratkan
bahwa gen RECQL4 yang termutasi pada pasien RTS mungkin memiliki cukup aktivitas residual
untuk mempertahankan kelangsungan hidup sel.82 Pada sel skeletal, hilangnya fungsi Recql4
sepenuhnya menyebabkan kelainan perkembangan tulang dan osteoporosis dewasa, tetapi tidak
menginduksi perkembangan OS.83,84 Lu et al. berpendapat bahwa Recql4 sangat penting untuk
pengembangan skelet dengan memodulasi aktivitas p53 in vivo.83 Ng et al. menyatakan lebih
lanjut bahwa alel mutasi dari Recql4 dapat menjelaskan penekanan tumor dan kerentanan untuk
OS.84 Data tikus ini konsisten dengan proposal sebelumnya berdasarkan studi klinis, bahwa ada
dua jenis RTS: Tipe II, yang menyajikan Fitur OS dan Tipe I, yang tidak. 81 Penelitian lebih lanjut
diperlukan untuk menentukan bagaimana Recql4 berinteraksi secara genetik dengan p53, dan
jenis mutasi RECQL4 apa yang dapat menyebabkan OS. Secara keseluruhan, pemahaman
peneliti mengenai dasar molekuler perkembangan OS telah meningkat dengan menggunakan
pendekatan lintas spesies, terutama melalui GEMMs. Publikasi lainnya mengenai OS
menggunakan sampel tikus, anjing, babi, dan ikan telah ada, namun tidak akan dijelaskan secara
rinci dalam publikasi ini.12,26,27,85-88

4. Kerentanan genetik driver-dependent sebagai target terapi osterosarcoma

Seperti pedang bermata dua, gen driver tidak hanya memberi pertumbuhan keuntungan,
tetapi juga menciptakan kerentanan dalam sel kanker. Hal ini mungkin berasal dari driver itu
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

sendiri, dari jalur yang diubah yang dibawa oleh driver, atau dari sifat sel kanker unik yang tidak
dimiliki sel normal. Paradigma utama untuk terapi kanker targeted therapy yang bergantung
pada driver adalah penggunaan imatinib (molekul kecil tirosin kinase inhibitor) untuk mematikan
gen KIT yang bermutasi yang menghasilkan bentuk konstitutif tyrosine kinase pada pasien
dengan tumor stroma gastrointestinal (GIST). Dalam uji coba klinis open-label fase II, imatinib
menginduksi respon lengkap atau sebagian pada 80 hingga 90% pasien dengan penyakit yang
tidak dapat diatasi atau disebarluaskan. 89 Mirip dengan OS, GIST adalah jenis kanker mesenkim
yang langka, tetapi ini adalah sarkoma yang paling umum dari saluran usus yang dikenal sebagai
penyakit refraktori terhadap terapi kemoterapi. Sebagian besar obat yang secara klinis disetujui
yang menargetkan gen-gen yang diubah secara genetik diarahkan melawan kinase. Kinase telah
dipelajari secara ekstensif pada tingkat biokimia, struktural, dan fisiologis; oleh karena itu,
mereka relatif mudah untuk ditargetkan dengan inhibitor molekul kecil. 34 Baru-baru ini, jalur
PI3K / mTOR, jalur kinase yang diperkaya, telah diidentifikasi sebagai kerentanan umum untuk
eksploitasi terapeutik dalam konteks OS.32 Perry dkk. menemukan bahwa 24% dari pasien OS
memiliki gen yang diubah secara genetik di jalur ini. Menariknya, beberapa gen juga
diidentifikasi oleh layar mutasi genetik ke depan.19 Beberapa gen yang disisipkan dalam jalur ini
tercantum dalam Tabel 2 dan disorot pada Gambar 2. Secara kebetulan, disregulasi sebagian
besar gen di jalur PI3K / mTOR juga telah diamati pada sekuens transkriptom keseluruhan dari
p53-driven dan Notch-driven OS Gambar 2).16 Ini lebih lanjut menunjukkan bahwa jalur kinase
PI3K / mTOR yang memiliki mutasi dan / atau tingkat ekspresi tinggi akan menjadi target yang
baik untuk inhibitor molekul kecil. Memang, uji klinis fase II telah menghasilkan data yang
menggembirakan; pada 54 pasien dengan sarkoma tulang metastatik atau tidak dapat dioperasi,
pengobatan dengan ridaforolimus (inhibitor molekul kecil dari mTOR kinase) menyebabkan
respon parsial yang dikonfirmasi untuk tiga pasien dan respon manfaat klinis (yaitu respon
lengkap atau sebagian, atau penyakit stabil untuk N16 minggu) untuk 17 pasien. 90 Uji klinis fase
II yang sedang berlangsung dengan sirolimus (juga dikenal sebagai rapamycin, inhibitor
mTROC1) dalam kombinasi dengan kemoterapi akan memberikan informasi tambahan
(ClinicalTrials.gov Identifier:NCT02574728). Namun, karena hanya sebagian kecil pasien OS
mengalami mutasi pada jalur PI3K / mTOR, memperkenalkan perawatan dengan inhibitor
mTOR pada pasien yang tidak memiliki mutasi ini mungkin tidak terbukti bermanfaat. Selain
inhibitor mTOR, Campbell et al. diterapkan paralel kecil mengganggu RNA (siRNA) layar untuk
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

mengidentifikasi dependensi kinase 117 sel kanker garis berasal dari berbagai jenis kanker,
termasuk OS, dan menunjukkan peningkatan sensitivitas jalur sel OS untuk penghambat faktor
pertumbuhan fibroblast reseptor (FGFR).91 Uji klinis terbaru untuk OS telah menguji beberapa
inhibitor molekul kecil dan antibodi monoklonal yang menargetkan gen dan jalur yang berbeda,
termasuk ERBB2, IGF1R, EGFR, PDGFR, VEGFR, KIT, FGFR, SRC, RANKL, AURKA,
HDAC, WNT / beta-catenin, Notch , dan Hedgehog. Fungsi sebagian besar molekul dan jalur
dalam perkembangan tulang dan penyakit telah dipelajari secara rinci.73,92-100 Hasil dari uji coba
yang selesai ini, serta dari penelitian yang mengevaluasi jenis perawatan lain seperti imunoterapi,
telah ditinjau baru-baru ini dan tidak akan dijelaskan di sini. 9,101-105 Secara umum, temuan dari uji
coba terapi yang ditargetkan ini tidak memuaskan. Satu alasan yang mungkin bisa terletak pada
pendekatan menggunakan agen penargetan tanpa mengetahui apakah sel target telah
mengaktifkan mutasi. Dengan demikian, di klinik, status drivermutations di OS harus
dipertimbangkan sebelum pemberian obat tersebut kepada pasien.
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

Gambar 2. Komponen pensinyalan PI3K-mTORC1 diubah pada osteosarcoma. Simplified

ofmutated dan / atau disregulated genes yang disederhanakan pada osteosarkoma manusia dan
tikus (OS) yang berpartisipasi dalam jalur signaling TROC1. Di hadapan faktor pertumbuhan
(misalnya Insulin) atau rangsangan lain, reseptor tirosin kinase (RTK) domain intraseluler trans
terfosforilasi, yang mengarah ke perekrutan subunit peraturan kelas IA PI3K, p85 (dikodekan
oleh gen PIK3R1) dan pelepasan subunit katalitik p100 (dikodekan oleh gen PIK3CA). Salah
satu komponen pensinyalan yang mengaktifkan PI3K adalah Ras. Pengikatan ligan ke RTK
mendorong dimerisasi reseptor dan autofosforilasi residu tirosin berikutnya. Hal ini
memungkinkan RTK untuk berinteraksi dengan protein yang mengandung domain SH2, seperti
Growth Factor Receptor Bound Protein 2 (GRB2), yang dapat mengikat dan mengaktifkan Son
of Sevenless (SOS), yang pada gilirannya, mengaktifkan RAS. Neurofibromin 1 (NF1) secara
negatif mengatur proses ini. Jadi, p110 diaktifkan oleh RAS secara terpisah dari p85. Setelah
aktivasi, PI3K mengkatalisis pembentukan utusan kedua phosphatidylinositol-3,4,5-
trisphosphate (PIP3) pada membran plasma, yang dapat diturunkan oleh penekan tumor,
fosfatase dan tensin homolog (PTEN). Peningkatan kadar PIP3 mengarah pada perekrutan
protein pengikat PIP3, seperti Protein Kinase B Alpha (Akt) dan PDK1. Pada membran, PDK1
(dikodekan oleh PDPK1) memfosforilasi Akt pada Thr308 yang mengarah ke aktivasi parsial
dari Akt. Akt kemudian memfosforilasi substrat bervariasi, termasuk tuberin (dikodekan oleh
TSC2), penghambat mTORC1. Ini menghasilkan aktivasi Ras Homolog Diperkaya di Brain
(Rheb). Activated Rheb mengikat dan mengaktifkan mTORC1. MTORC1 aktif mempromosikan
sintesis protein, lipogenesis, dan metabolisme energi, tetapi menghambat autogenik dan
biogenesis lisosom. Regulator lain mTORC1 dalam OS, termasuk Neurofibromin 2 (NF2) dan
Glycogen Synthase Kinase 3 Beta (GSK3b), yang memediasi pensinyalan Wnt untuk
memfosforilasi dan meningkatkan aktivitas TSC2 dan p53 sebagai respons terhadap kerusakan
DNA. Rapamycin secara selektif menghambat mTORC1. Bentuk bulat: onkogen. Bentuk persegi
panjang: gen supresor tumor (TSG). Teks merah: mutasi yang diidentifikasi dalam sampel OS
manusia [28-32]. Asteris (*) menunjukkan mutasi yang diidentifikasi oleh layar genetik Sleeping
Beauty maju.19 Latar belakang hijau: perubahan ekspresi diidentifikasi oleh analisis transkripom
p53 dan Notch OS [16]. Teks abu-abu: agen yang ditargetkan sedang diuji dalam uji klinis. Garis
 BON-11160; No. of pages: 11; 4C: 6, 8
ELSEVIER

berwarna oranye atau panah berkepala: mekanisme obat (penghambatan atau aktivasi, masing-
masing).

Kerentanan terbesar di OS adalah driver p53. Dengan lebih dari setengah dari semua tumor
manusia membawa mutasi pada gen ini, target terapi tumor p53-mutan adalah salah satu tujuan
utama penelitian kanker. Upaya intens telah dilakukan terhadap pengembangan obat yang dapat
mengaktifkan atau mengembalikan jalur p53. Beberapa sekarang sedang melakukan evaluasi
klinis, dengan hasil yang menjanjikan untuk dua jenis obat molekul kecil: seperti kacang dan
APR-246.106 Nutlin-like mengembalikan fungsi protein p53 wild-type dengan menghalangi
interaksi p53 dengan MDM2, yang secara negatif mengatur p53 dengan menginduksi degradasi
protein p53. Nutlin demikian dapat menjadi obat yang efektif untuk mengobati OS dengan gen
p53 utuh dan tingkat tinggi ekspresi MDM2 seperti OS sel kecil. APR-246 mempromosikan
pembentukan kovalen adducts onmutant p53 R175H dan p53 R273H protein, sering ditemukan
di OS manusia, dan mengembalikan aktivitas p53.106 GEMM dengan mutasi p53 R172H atau p53
R270H (sesuai dengan mutasi manusia R175H atau R273H) akan menjadi model hewan yang
sesuai untuk uji praklinik APR-246. Namun, nutlin-like dan APR-246 tidak cocok untuk jenis
mutasi p53 lainnya seperti protein p53 yang terpotong, delta133p53 dan delta160p53. Kedua
mutasi ini disebabkan oleh pengaturan ulang hotspot TP53 1 hotspot, yang khusus untuk OS
sporadis dan dapat menyebabkan sindrom Li-Fraumeni.28.107