Multiplexing untuk menghemat waktu, uang, dan sampel

Mengukur beberapa analit secara bersamaan dalam waktu

yang sama untuk menjalankan satu tes ELISA. Protokol
ProcartaPlex tersedia dalam format 96-baik dan 384-baik
untuk analisis throughput tinggi.

Immunoassays berdasarkan teknologi Luminex xMAP (multi-

analte profiling) memungkinkan deteksi simultan dan
kuantisasi beberapa protein yang disekresikan (sitokin,
khemokin, faktor pertumbuhan, dll.) Dan telah tak ternilai
untuk studi komprehensif sistem biologis. Teknologi high-
throughput ini menghasilkan hasil yang sebanding dengan
ELISA tetapi dengan efisiensi, kecepatan, dan jangkauan
dinamis yang lebih besar. Plus, multiplexing lebih murah per
hasil target.

Tes Bio-Plex® dibangun di sekitar teknologi Luminex xMAP

yang terkenal menggunakan platform aliran cytometric
berbasis manik yang didedikasikan untuk analisis multipleks.
Tes tersedia untuk banyak kelas biomolekul dan spesies
termasuk sitokin dan faktor pertumbuhan, dan sebagai panel
keadaan penyakit khusus seperti kanker, respon imun fase
akut, dan penanda diabetes. Pengujian tersedia dalam
beberapa konfigurasi termasuk kit multipleks all-in-one, set
satu piksel, dan kit kustom termasuk opsi pra-templat. Kit
yang tersedia secara komersial biasanya dikembangkan
dengan protokol yang dioptimalkan. Atau, tes dapat
dikembangkan dan dioptimalkan oleh laboratorium individu
dengan menggunakan antibodi dan manik-manik COOH.
Desain Pengujian Multipleks

Mirip dengan ELISA, mayoritas tes dirancang berdasarkan

format sandwich immunoassay. Secara singkat, manik-
manik yang ditangkap antibodi-digabungkan pertama
diinkubasi dengan standar antigen atau sampel untuk waktu
tertentu. Piring tersebut kemudian dicuci untuk
menghilangkan bahan tak terikat, diikuti dengan inkubasi
dengan antibodi deteksi biotinylated. Setelah membasuh
antibodi biotinylated, manik-manik diinkubasi dengan
konjugat streptavidin-phycoerythrin reporter (SA-PE).
Setelah penghapusan kelebihan SA-PE, manik-manik
dilewatkan melalui pembaca array, yang mengukur
fluoresensi SA-PE yang terikat (Gambar 1).
Manik-manik Assay Multipleks

Substrat untuk sandwich antibodi adalah manik. Karakteristik

manik menentukan kompatibilitas instrumen dan alur kerja
dan dapat diklasifikasikan menjadi dua kategori dasar,
nonmagnetik dan magnetik. Manik-manik bukan magnetik
berukuran lebih kecil (5,6 μ) dan digunakan dengan alur
kerja vakum; mereka tidak kompatibel dengan instrumen
tertentu yang memanfaatkan magnet untuk tujuan
pencitraan. Manik-manik nonmagnetik memanfaatkan alur
kerja vakum yang membutuhkan pelat filter dan filtrasi
vakum untuk mencuci manik-manik. Manik-manik magnetik
dilapisi dengan magnetit dan karena itu lebih besar
ukurannya (6.5 μ); mereka dapat digunakan dengan alur
kerja magnetik serta alur kerja vakum. Manik-manik
magnetik (6.5 μ) ini kompatibel dengan semua instrumen
ilmu kehidupan yang tersedia saat ini dari mitra Luminex
manapun. Dalam alur kerja magnetik, manik-manik dicuci di
dalam sumur dengan pengeluaran dan pencucian aspirasi.

Tes xMAP dapat berisi manik-manik bukan magnetik atau

magnetik sebagai substrat. Manik-manik magnetik COOH
adalah komponen inti terbaru dari tes xMAP. Mereka unik
karena menunjukkan sifat-sifat fluorescent dan magnet.
Manik-manik diwarnai dengan formulasi pewarna fluoresen
milik Luminex (Gambar 2). Proses pewarnaan melibatkan
pembengkakan partikel bead dalam pewarna yang
mengandung pelarut, yang memungkinkan molekul pewarna
meresap ke dalam lapisan atau lapisan polimer.
Penghapusan pelarut dalam langkah berikutnya
mengecilkan manik-manik dan menjebak molekul pewarna
dalam partikel manik. Lapisan magnetit dari manik adalah
salah satu fitur penting yang memungkinkan banyak dari tes
baru untuk diotomatisasi dengan stasiun pencucian robot.
Keuntungan Tes Berbasis Manik Magnet

Penggunaan manik-manik magnetik menganugerahkan

sejumlah manfaat, termasuk kemudahan pemisahan dan
kesesuaian untuk otomatisasi. Setelah dilapisi dengan
molekul ligan, manik-manik magnetik berguna untuk
menangkap dan memisahkan berbagai target. Konstituen
sampel yang tidak diinginkan seperti partikel besar atau
berserat atau matriks sampel kental dapat hanyut mengikuti
langkah pemisahan magnetik sederhana. Secara
keseluruhan, pemisahan magnetik yang sangat efisien
menghilangkan molekul-molekul pengganggu potensial,
memungkinkan deteksi target yang sensitif (Gambar 3).
Uji Kualitas

Kualitas pengujian ditentukan oleh serangkaian eksperimen

yang menetapkan karakteristik kinerja dari pengujian, seperti
akurasi, presisi, spesifisitas dan sensitivitas. Dengan
mempertimbangkan bahwa pengujian harus memberikan
hasil yang dapat diandalkan, konsep kualitas pengujian
umumnya dilihat dalam perspektif yang lebih luas. Desain
alur kerja pengujian, matriks sampel yang akan diuji, dan
kegunaan hasil uji juga harus dipertimbangkan.

Kurva standar immunoassay secara inheren nonlinear.

Dengan demikian, minimal enam poin standar non-nol yang
diuji dalam rangkap dua direkomendasikan untuk
memastikan ketangguhan suatu pengujian. Hubungan
konsentrasi-respons paling sering dipasang ke model logistik
4- atau 5-parameter.
Uji Definisi Kinerja

Kekhususan - kemampuan untuk menilai dengan tegas

analit spesifik dengan adanya komponen pengganggu
matriks.

Untuk menyelidiki reaktivitas silang terkait-antibodi terkait

pada immunoassays multipleks, percobaan berikut biasanya
dilakukan:

Percobaan antigen tunggal (mengevaluasi spesifisitas dari

antibodi penangkap)
Eksperimen deteksi tunggal (mengevaluasi spesifisitas
antibodi deteksi, dan untuk beberapa derajat spesifisitas dari
antibodi penangkap)
Eksperimen eksklusi antigen (juga evaluasi kekhususan
antibodi penangkap di hadapan semua analit kecuali untuk
target spesifiknya)
Akurasi - keakuratan prosedur analitik mengungkapkan
kedekatan kesepakatan antara nilai yang diterima baik
sebagai nilai sebenarnya konvensional atau nilai referensi
yang diterima. Parameter ini sering digunakan untuk menilai
kecocokan kurva ke titik-titik standar dengan menghitung
rasio konsentrasi yang diamati hingga konsentrasi yang
diharapkan dari setiap titik standar (Gambar 4).
Uji rentang kerja - rentang konsentrasi di mana pengujian
tepat dan akurat. Batas-batas rentang kerja penetapan
ditentukan oleh batas bawah kuantisasi (LLOQ) dan batas
atas kuantisasi (ULOQ). Dua parameter utama yang
mendikte batas-batas ini adalah ketelitian intra-assay (%
CV) dan pemulihan kurva standar (Gambar 5).
Gambar 6. Intra dan ketepatan antar-assay.

Linearitas pengenceran - Linearitas pengenceran

menentukan kesesuaian kurva standar untuk mencerminkan
jumlah relatif analit dalam matriks yang kompleks. Pada
Gambar 7 linearitas pengenceran prolaktin ditunjukkan.
Linearitas pengenceran dinilai dengan meningkatkan
kuantitas antigen rekombinan yang diketahui menjadi
matriks serum dan plasma manusia. Konsentrasi yang
diamati dan diharapkan dalam rentang kerja pemeriksaan
diplot. Nilai koefisien korelasi (R2) mencerminkan linearitas
pengenceran untuk pengujian. Hasil representatif
ditampilkan.
serum manusia; plasma manusia.

Paralelisme - ukuran dampak efek matriks pada pengujian

dalam matriks sampel yang berbeda. Kurva standar paralel
yang dihasilkan dalam pengencer standar (kotak biru) dan
dalam matriks sampel (lingkaran merah) dibandingkan, dan
perbedaan nilai kemiringan digunakan untuk menilai
kompatibilitas matriks antara kurva standar dan matriks
sampel (Gambar 8).

Sensitivitas (batas deteksi) - batas terdeteksi terendah

analit, tetapi belum tentu kuantitatif. Nilai dapat didefinisikan
secara berbeda oleh manufaktur assay yang berbeda.
Laboratorium Bio-Rad mendefinisikan nilai sebagai
konsentrasi analit yang sesuai dengan intensitas fluoresen
median (MFI) latar belakang (atau standar nol) ditambah dua
standar deviasi (SD) dari rata-rata latar belakang LKM.
Dengan menggunakan nilai MFI yang dihitung (y), nilai
konsentrasi yang sesuai dapat diperkirakan menggunakan
regresi logistik-5PL yang ditunjukkan pada Gambar 9.
Immunoassay mengandalkan penggunaan antibodi untuk
mengidentifikasi antigen target dalam sampel, dan berbagai
format telah berevolusi sejak Rosalyn Yalow dan Solomon
Berson pertama kali mendeskripsikan radioimmunoassay
untuk mendeteksi insulin dalam plasma manusia pada tahun
1960. Sementara sejumlah besar imunoasai adalah
singleplex. , dirancang untuk mendeteksi hanya satu analit
spesifik, multiplexing telah menjadi semakin populer karena
menghemat waktu dan bahan sampel berharga dengan
menggabungkan deteksi beberapa analit menjadi satu
reaksi.
Menurut Dan Pregibon, manajer umum, inovasi platform di
Abcam, “di masa lalu, para peneliti mungkin telah
mempelajari satu atau dua protein kunci sebagai penanda
biologis yang relevan untuk pengembangan penyakit atau
keampuhan pengobatan; Namun pendekatan ini dapat
membatasi sebagai tanggapan terhadap penyakit atau
perawatan dapat halus atau bervariasi di seluruh pasien.
Pilihan yang lebih disukai adalah pendekatan multipleks
yang menggunakan beberapa biomarker dalam panel, dan
mampu memberikan gambaran yang lebih akurat tentang
tanggapan sel atau pasien yang kompleks. ”

Pendekatan berbasis manik

Salah satu pendekatan sukses multiplexing adalah dengan

melumpuhkan antibodi pada manik-manik. Ini dicontohkan
oleh Luminex, yang xMAP® Technology memungkinkan
deteksi simultan hingga 500 analit berbeda. xMAP
bergantung pada mikrosfer khusus, warna-kode dengan
berbagai kombinasi pewarna merah, infra merah, dan
merah-oranye dengan intensitas yang berbeda. Setiap
microsphere dilapisi dengan antibodi penangkap tertentu
dan, setelah pengikatan analte, antibodi deteksi berlabel
ditambahkan sebelum sampel dibaca dalam Instrumen
Luminex®. Warna-coding manik-manik memungkinkan
diferensiasi cepat dan mudah dari peristiwa mengikat
individu.

Salah satu pendekatan sukses multiplexing adalah dengan

melumpuhkan antibodi pada manik-manik.

Valerie Stone, ilmuwan aplikasi lapangan senior,

menjelaskan bahwa "Teknologi xMAP menawarkan
beberapa keunggulan dibandingkan metode yang lebih
tradisional, termasuk penghematan sampel dan waktu serta
reproduktifitas yang luar biasa. Karena mikrosfer xMAP
diproduksi dalam volume tinggi dalam satu lot, ini
memberikan standardisasi yang tidak bisa disediakan oleh
planar fase-padat. Lebih jauh lagi, teknologi ini sangat
fleksibel dan dapat dikustomisasi dengan melampirkan
probe spesifik ke microsphere yang berwarna unik. ”Yang
penting, Teknologi xMAP juga menjawab kebutuhan aplikasi
yang membutuhkan baik throughput yang tinggi dan tinggi
pada saat yang bersamaan. Menurut Stone, "untuk aplikasi
yang membutuhkan throughput hingga 1.000 sampel per
hari dan multipleksing dari satu hingga 500 tes per sampel,
Teknologi xMAP berdiri sendiri."

Teknologi FirePlex® Abcam menawarkan spesifisitas,

kecepatan, dan skala untuk memberikan hasil yang akurat
atas banyak sampel, dan luasnya data biologis dari volume
sampel yang terbatas. Pregibon mengatakan bahwa “banyak
sampel biologis penting seringkali hanya tersedia dalam
jumlah terbatas, dan tes yang sensitif diperlukan untuk
mendeteksi konsentrasi rendah protein dalam volume kecil.
Teknologi FirePlex kami menggunakan partikel hidrogel tiga
dimensi yang membawa 'barcode' unik yang, bila
dikombinasikan dengan antibodi spesifik Abcam, dapat
mendeteksi protein di sejumlah besar sampel dan berbagai
konsentrasi protein. ”

Pregibon menambahkan bahwa "spesifisitas antibodi dan

sensitivitas adalah sesuatu yang kami di Abcam sangat
serius karena antibodi sangat penting untuk hasil yang dapat
diandalkan dan direproduksi dalam aplikasi apa pun.
Pasangan antibodi dalam Immunoassays FirePlex biasanya
menggunakan teknologi monoklonal kelinci rekombinan dan
memberikan sensitivitas superior, konsistensi, dan
jangkauan dinamis. Setiap pasangan antibodi yang
dikembangkan untuk Immunoassays FirePlex divalidasi
pada berbagai jenis sampel, termasuk plasma manusia dan
tikus, serum, cairan serebrospinal (CSF), urin, dan
supernatan sel budaya.
Gambar: Abcam’s FirePlex immunoassays menampilkan
panel multipleks yang dapat disesuaikan yang
memungkinkan pengguna menganalisis hingga 75 analit per
sumur menggunakan 12,5 µL sampel. Tes tersebut dapat
dianalisis pada aliran cytometer.

Menurut Pregibon, pada 2015, Abcam memperkenalkan

validasi knockout pada skala di katalog mereka.
“Menggunakan teknologi CRISPR pengeditan gen dari
Horizon Discovery, validasi KO memberikan kontrol negatif
yang sebenarnya untuk mengkonfirmasi spesifisitas antibodi
terhadap protein yang diinginkan, mencegah masalah
seputar ketidakberhasilan. Upaya berkelanjutan kami untuk
memvalidasi antibodi dalam katalog kami telah
mengkonfirmasi kekhususan lebih dari 1.000 antibodi. ”
Kit immunoassay FirePlex dapat digunakan untuk
menjalankan pengujian pada cytometers arus yang tersedia,
sehingga tidak perlu membeli peralatan khusus. Keuntungan
lebih lanjut adalah bahwa tidak ada persyaratan untuk pra-
pemrosesan biofluida, yang diketahui berpotensi merusak
atau mengurangi tingkat protein dan volume sampel. "Selain
itu, teknologi FirePlex juga tersedia untuk memfasilitasi studi
miRNA sehingga baik protein dan panel biomarker miRNA
dapat dengan mudah dihasilkan langsung dari biofluida
mentah," kata Pregibon.

The Cytometric Bead Array (CBA) dari BD Biosciences

adalah aplikasi aliran cytometry berbasis manik yang
populer yang memungkinkan pengguna untuk menghitung
banyak protein secara bersamaan. Manik-manik berlapis
antibodi digunakan untuk menangkap analit dan, karena
intensitas fluoresensi setiap manik dalam larik adalah unik,
hingga 30 protein yang berbeda dapat dideteksi secara
bersamaan dalam satu tabung tunggal. Portofolio BD CBA
mencakup tes untuk pengukuran berbagai protein larut dan
intraseluler, dengan dua format yang berbeda tersedia untuk
memenuhi beragam kebutuhan peneliti.

Matthew Miceli, manajer produk global untuk reagen

penelitian di BD Biosciences, menjelaskan bahwa "BD CBA
Flex Sets menyediakan metode deteksi yang terbuka dan
dapat dikonfigurasi, sehingga peneliti dapat membangun
multipleks mereka sendiri. Pengujian Enhanced Sensitivity
Flex Set kami memberikan tingkat sensitivitas tambahan,
dan dapat mendeteksi serendah 0,274 pg / mL dalam uji
multiplexing; ini memungkinkan peneliti untuk mendapatkan
hasil kuantitatif dari sampel yang mengandung analit dengan
kelimpahan yang sangat rendah. Kami juga menawarkan kit
BD CBA, yang telah dikonfigurasikan oleh area fungsional
biologi. Ini memungkinkan pengukuran hingga tujuh analit
pada flow cytometers yang memiliki laser 488 nm tunggal.
”Fleksibilitas sistem CBA diteruskan oleh BD CBA Flex Set
Functional Beads, manik-manik tak terkonjugasi yang
memungkinkan para peneliti mengkonjugasikan antibodi
atau protein mereka sendiri. minat menggunakan kimia
sulfo-SMCC.
Alternatif berbasis manik

Sistem Quantibody® RayBiotech adalah alternatif canggih

untuk multiplexing berbasis manik, menggabungkan
spesifisitas dan sensitivitas yang luar biasa dari ELISA
dengan throughput tinggi dari array berbasis chip kaca.
Dengan platform ini, hanya 50 µL sampel yang diperlukan
untuk kuantifikasi hingga 40 protein dalam quadruplicate
(atau 1,5 mL untuk 1.000-target array Quantibody, yang
dikenal sebagai Kiloplex), dilaporkan memberikan efisiensi
80 kali lipat lebih besar daripada ELISA tradisional.

Menurut Mike Mao, direktur senior penelitian dan

pengembangan, “Kuantibodi menggunakan pasangan
antibodi yang dicocokkan secara hati-hati untuk deteksi
protein target dan, tidak seperti pengujian multipleks
berbasis manik, tidak ada gangguan antara antibodi
penangkap. Sebuah panel antibodi penangkap dicetak
dalam quadruplicate pada slide standar dan, setelah langkah
pemblokiran, sampel ditambahkan. Pengikatan terdeteksi
melalui inkubasi dengan campuran antibodi biotinilasi, diikuti
oleh fluorophore streptavidin-terkonjugasi, dan kemudian
sinyal divisualisasikan menggunakan pemindai laser
fluoresensi. Dengan waktu pemrosesan hanya enam jam, ini
adalah metodologi yang sangat efisien. ”

Alat Pencarian Immunoassay Biocompare

Temukan, bandingkan, dan tinjau immunoassays
dari berbagai pemasok Pencarian
Sementara pengembangan tes singleplex sering relatif
mudah, tes multipleks dapat memakan waktu lebih lama
untuk menghasilkan, dan untuk alasan inilah peneliti secara
teratur beralih ke penyedia eksternal daripada
mengembangkan tes seperti di rumah. Namun karena
teknologi terus berkembang, vendor membuka format
multiplexing untuk peneliti yang sebelumnya tidak memiliki
akses ke opsi penelitian yang kuat ini, sehingga semakin
mungkin bahwa ketergantungan pada multipleks
immunoassays akan terus menunjukkan pertumbuhan yang
signifikan.

Image courtesty of Dreamstime.

Multiplex immunoassays mengukur beberapa analit secara

bersamaan dalam satu percobaan. Multiplex immunoassays
tersedia dalam satu dari dua format:
Bab-format berbasis di mana antibodi menangkap melekat
pada manik-manik
MENGAPA MENGGUNAKAN MEREKA?
Format planar di mana antibodi terikat ke permukaan padat
seperti lempeng mikro atau kaca geser
Multipleks immunoassays memiliki beberapa keunggulan
dibandingkan dengan tes ‘singleplex’ seperti ELISA dan
Western blot termasuk:
• Volume sampel yang lebih kecil • Lebih banyak data
• Waktu kurang aktif
• Biaya rendah
• Kemudahan pengembangan
• Peluang untuk otomatisasi
PERTIMBANGAN UNTUK MENGHASILKAN MULTIPLEX
MEMILIH PLATFORM
Pertimbangkan kriteria seperti rentang dinamis dari target
yang dituju, jenis tes, opsi untuk kit komersial dan / atau uji
pembuatan rumah, platform yang terbukti, dukungan teknis
dan ilmiah, komunitas pengguna, investasi awal, adaptasi
terhadap alur kerja yang sudah ada, dan publikasi ilmiah .
MENETAPKAN ASSAY ANDA
Merancang suatu uji yang berfungsi untuk semua analit
dapat menjadi tantangan. Penyaringan ekstensif harus
dilakukan sebelum memilih pasangan buffer dan antibodi.
Untuk membantu mengembangkan dan menyederhanakan
alur kerja Anda, dapatkan kontak dengan pengguna platform
dan manfaatkan pertemuan pengguna (seperti xMap
Connect). Tanyakan pada penyedia multipleks plaform Anda
— banyak ilmuwan memiliki staf yang dapat menawarkan
dukungan untuk menyederhanakan alur kerja Anda.

KESALAHAN
Standardisasi yang buruk: Penyiapan sampel yang rendah
dan efek matriks sampel biologis dapat mempengaruhi hasil
Adaptasi protokol kit yang buruk menghasilkan CV yang
lebih besar dan hasil data yang buruk, kehilangan data, dan
peningkatan LOD
Meremehkan efek pencucian yang benar
SOLUSI
Lihatlah ke biologi target termasuk rentang biologis,
stabilitas dari waktu ke waktu, sensitivitas suhu, dll.
Ketahui dampak dari uji yang dipilih sebelum seleksi
Cuci sesuai protokol atau mungkin lebih banyak lagi

Sumber daya:
Resources:

Thanks to Wilco de Jager, Ph.D., Senior Field Applications Scientist at Luminex for
sharing his insights and expertise
1. https://www.biocompare.com/Editorial-Articles/331822-Multiplex-Immunoassays-Tools-
Optimization-and-Application/
2. https://www.abcam.com/kits/multiplex-immunoassay-techniques-review-of-methods-
western-blot-elisa-microarray-and-luminex 3. https://www.rdmag.com/article/2018/04/rise-
multiplex-immunoassays-drug-discovery

Dengan banyak pilihan yang tersedia dalam pengujian

multipleks berbasis manik, memilih panel kanan dapat
menjadi tantangan. Mulailah dengan mempertimbangkan
target yang sangat penting untuk eksperimen Anda, dan
persempit pilihan Anda ke panel yang berisi mereka.
Sejumlah besar target dapat diukur tanpa meningkatkan
volume sampel masukan, jadi pertimbangkan panel yang
berisi target tambahan di jalur terkait atau paralel. Ini sangat
membantu dalam studi penemuan awal, di mana Anda ingin
memaksimalkan peluang mengidentifikasi semua biomarker
yang terpengaruh. Juga, konsultasikan lembar data produk
vendor atau alat online untuk informasi tentang opsi
pengujian, rentang kerja, reproduktifitas dan kompatibilitas
tipe sampel. Mempertimbangkan kompleksitas panel
multipleks yang optimal, pilih yang memiliki data kinerja dan
reagen yang jelas yang dikembangkan khusus untuk target
utama Anda.

Kontrol eksperimental

Beberapa jenis kontrol dapat digunakan untuk tes multipleks.

Pertanyaan kunci yang harus ditanyakan adalah: "Apa yang
saya coba untuk kontrol?" Banyak tes multipleks berisi
kontrol dalam kit, dan ini sering dibuat menggunakan antigen
rekombinan yang sama sebagai kurva standar. Meskipun
kontrol seperti itu dapat membantu dengan variasi
pemantauan dalam reagen kit, mereka tidak membangun
konsistensi antara pengukuran sampel, dan ini dapat
menjadi faktor yang sangat penting.
Matriks sampel adalah faktor lain yang dapat mempengaruhi
kinerja pengujian — misalnya, serum dapat berperilaku
sangat berbeda dari lisat kultur sel, karena masing-masing
konsentrasi dan jenis protein nontarget. Pertimbangkan
mengidentifikasi sampel eksperimental dengan volume yang
cukup yang dapat aliquoted dan disimpan dengan tepat
(lihat di bawah) untuk digunakan pada setiap pelat uji.
Idealnya, ini akan menjadi sampel dengan konsentrasi analit
yang mewakili sampel eksperimental Anda.

engumpulan dan penanganan sampel

Pengumpulan dan penanganan sampel yang cermat dapat

mengurangi peluang untuk memperkenalkan variasi ke hasil
akhir Anda. Dengan sampel serum atau plasma, cobalah
untuk menjadwalkan pengumpulan darah pada waktu yang
sama untuk mengurangi dampak variasi diurnal.

Mempertahankan konsistensi dalam jenis sampel di seluruh

eksperimen juga penting. Plasma dan serum, misalnya,
dapat menghasilkan hasil yang berbeda bahkan dari hasil
imbang darah yang sama. Berbagai antikoagulan yang
digunakan dalam pengumpulan plasma dapat memengaruhi
pengukuran, sehingga mempertahankan pemilihan
antikoagulan yang konsisten dalam eksperimen lebih
disukai. Selanjutnya, ketika menggunakan sampel plasma,
heparin, karena dapat mengurangi konsentrasi beberapa
sitokin.

Kepatuhan terhadap alur kerja penanganan dan

pemrosesan sampel yang terdefinisi dengan baik, termasuk
jangka waktu dan suhu untuk setiap langkah, akan
membantu memastikan hasil yang konsisten. Ingat bahwa
banyak biomarker yang sensitif terhadap siklus pembekuan-
beku, sehingga langkah-langkah harus diambil untuk
meminimalkan paparan sampel terhadap berbagai kondisi
suhu.

Bereplikasi

Pertanyaan tentang berapa banyak contoh ulangan untuk

dijalankan di piring sering muncul, dan keputusan paling baik
didorong oleh fokus dan tujuan dari eksperimen. Mungkin
tergoda untuk menjalankan setiap sampel hanya dalam satu
sumur, tetapi menjalankan sampel dalam rangkap
memungkinkan untuk perhitungan variasi sampel (% CV),
dan dengan demikian memberikan ukuran ketepatan dari
pengujian. Jika rangkap tiga sumur dijalankan, CV% tinggi
yang disebabkan oleh kesalahan teknis biasanya dapat
diidentifikasi sebagai sumur outlier, dan sumur itu dapat
dihapus dari analisis. Semua konsentrasi data sampel
berasal dari pengukuran kurva standar, sehingga sangat
penting untuk menjalankan standar dan kosong dalam
rangkap dua atau rangkap tiga untuk memastikan ketepatan
pengukuran kritis ini.

Ikuti protokolnya

Setelah Anda menentukan uji multipleks mana yang akan

digunakan dan mengoptimalkan kinerja pengujian, sangat
penting untuk mengikuti protokol secara ketat. Variasi dalam
waktu inkubasi, reagen atau volume sampel, kecepatan dan
suhu yang mengguncang pelat semua dapat mempengaruhi
data yang dihasilkan. Dampak ini dapat diperkuat melalui
beberapa lempeng piring. Pertimbangkan memilih tes
dengan waktu inkubasi yang ditentukan, dan pastikan untuk
mengatur timer untuk setiap langkah inkubasi. Tutup
mungkin cukup baik dalam permainan tapal kuda, tetapi
tujukan untuk mengikuti protokol imunoasai multipleks Anda
secara tepat, dan Anda akan berada di jalan menuju
kesuksesan.

Solusi yang tersedia

Ketika datang untuk memilih immunoassay, peneliti memiliki

banyak pilihan. Manfaat dari kemampuan multipleks
immunoassay Anda datang tidak hanya dari mampu
memeriksa beberapa target dalam satu eksperimen, tetapi
juga dari kemampuan untuk menghemat sampel yang
berharga, yang akhirnya menghasilkan pengujian yang lebih
komprehensif. Dengan mengikuti tips dan panduan yang
kami sediakan, Anda akan dapat lebih mengoptimalkan
immunoassays multipleks Anda. Bio-Rad menawarkan
Sistem Bio-Plex® Immunoassay, didukung oleh teknologi
Luminex xMAP. Sistem komprehensif ini memiliki berbagai
pilihan solusi pengujian, instrumen, dan perangkat lunak
yang dioptimalkan, off-the-shelf yang dirancang untuk
memberikan data immunoassay multipleks berkualitas tinggi
dengan cepat dan efisien.

Step 1
Manik-manik berwarna-kode, pra-dilapisi dengan antibodi
menangkap analit-spesifik untuk molekul yang menarik,
ditambahkan. Beberapa analit dapat dideteksi secara
bersamaan dalam sampel yang sama

Step 2
Antibodi spesifik-analit menangkap analit yang menarik.
Antibodi deteksi biotinylated khusus untuk analit bunga
ditambahkan dan membentuk sandwich antibodi-antigen

Step 3
Phycoerythrin (PE) -conjugated Streptavidin ditambahkan.
Step 4
Manik-manik tersebut dibaca pada instrumen pendeteksian
aliran berbasis laser ganda, seperti analyzer Luminex 200 ™
atau Bio-Rad® Bio-Plex®. Satu laser mengklasifikasikan
manik dan menentukan analit yang dideteksi. Laser kedua
menentukan besarnya sinyal PE yang diturunkan, yang
sebanding dengan jumlah analit terikat.

Jenis Sampel Biofluida untuk Layanan Immunoassay

Serum
Plasma
Air liur

Cairan serebrospinal
Air seni
susu

Lavage bronkial
Hubungi kami tentang jenis sampel biofluida lainnya.

ORB adalah laboratorium Biosafety Level 2 (BSL-2), yang

dilengkapi dengan ilmuwan terlatih untuk menangani sampel
biofluida yang mengandung agen infeksi seperti human
immuno deficiency I atau virus hepatitis C.

Biomarker berbasis Biofluid Tersedia untuk Profil Protein

Multipleks

Onkologi: tumor yang bersirkulasi, angiogenesis, metastasis

Biomarker penyakit kardiovaskular
Imunologi: sitokin / kemokin
Jalur intraseluler: pensinyalan sel, metabolisme sel

Endokrinologi: hormon usus, adipokin, otot dan biomarker

tulang
Neuroscience: penyakit neurodegeneratif, gangguan
neurologis, pensinyalan neuropeptida / neurohormon
Toksisitas ginjal, hati dan cedera vaskular
Memanfaatkan alat seleksi panel ORB pada halaman
profiling protein untuk secara efisien meneliti ratusan
spesies analit spesifik untuk banyak penyakit.