Nama : Nur Wilda

NIM : 160210103011

Kelas : A

Genom Editing

1. Pembeda ZFN, TALEN, CRISPR-Cas 9

Jawab:
Perbedaan ZFN TALEN CRISPR-Cas 9
Susunan ZFNs terdiri dari sebuah TALENs memiliki keseluruhan CRISPR/Cas9 terdiri atas dua
domain penempel DNA, arsitektur yang mirip dengan komponen utama, yaitu
yang diturunkan dari ZFNs, dengan perbedaan protein Cas dan single guide
protein-protein faktor utama pada domain penempel RNA (sgRNA). Cas9
transkripsi zinc-finger, yang DNA yang berasal dari protein merupakan protein yang
berdampingan dengan TAL effector, yaitu faktor menjadi karakteristik sistem
domain nuklease dari enzim transkripsi dari bakteri patogen CRISPR/Cas tipe II.
restriksi Fok-1. tanaman.

Pemotongan Seperti nuklease induknya,
ZFNs harus membentuk
dimer supaya bisa
memotong DNA. Domain
penempel DNA, yang dapat
didesain untuk menempel
lokasi genomik target
manapun, adalah rangkaian
tandem zinc fingers
Cys2His2, yang masing-
masing mengenali 3
nukleotida pada sekuen
target DNA.
TALENs juga memotong
dalam bentuk dimer, memiliki
sekuen target yang relatif
panjang (terpendek yang sudah
dilaporkan adalah 13
nukleotida per monomer, atau
26 nukleotida) dan nampaknya
memerlukan persyaratan yang
lebih longgar dibanding ZFNs
untuk panjang jarak antara
situs-situs penempelan.
Cas9 sebagai enzim nuklease
yang memotong DNA target
di sekuen dekat protospacer
adjacent motif (PAM).
Protein Cas9 mengandung
dua domain yang homolog
dengan nuklease RuvC dan
HNH, yang masing-masing
memotong satu dari untai
ganda DNA, sehingga
dihasilkan potongan tumpul
(blunt cut) pada sekuen DNA
target.

2. Mekanisme / mode of action CRISPR-Cas 9

Jawab:
Terdiri atas tiga mekanisme utama yakni akuisisi DNA, pemrosesan crRNA, dan interferensi
 Keterangan dari gambar yakni:
1. Pada saat DNA asing masuk ke dalam sel, maka dengan segera
2. Fragmen DNA asing tersebut akan direkam sebagai memori genetik dan disimpan dalam spacer yang
disebut dengan tahapan akuisisi DNA. Ketika ada virus dengan fragmen DNA yang sudah pernah
direkam, langkah selanjutnya adalah pemrosesan crRNA.
3. Gen CRISPR akan melakukan transkripsi menghasilkan CRISPR RNA (crRNA) sedangan gen Cas9
akan menghasilkan protein Cas9.
4. tracrRNA juga disintesis (lokasi gen di Gambar 1) dan bergabung dengan crRNA. Gabungan kedua
RNA tersebut dinamakan guide RNA (gRNA) atau disebut RNA Pemandu.
5. RNA pemandu akan bergabung dengan Cas9.
6. Kompleks RNA Pemandu/Cas9 akan mengikat DNA asing
7. Memotongannya menjadi DNA inaktif.
3. Syarat gen bisa diedit CRISPR-Cas 9

4. Yang dibutuhkan untuk melakukan CRISPR-Cas 9

5. Contoh aplikasi CRISPR-Cas 9 (5)