Halaman 1

Tersedia online www.jocpr.com

Jurnal Kimia dan Farmasi, 2016, 8 (3): 58-63
Mengulas artikel
ISSN: 0975-7384
CODEN (USA): JCPRC5
58
Metode analisis HPLC yang berbeda dengan itraconazole
Verma Vikrant
*
dan Singh Umesh Kumar
Departemen Farmasi, Universitas Farmasi Kharvel Subharti, Swami Vivekan dan Universitas Subharti, Meerut
_____________________________________________________________________________________________
ABSTRAK
Artikel review saat ini membahas metode yang dikembangkan untuk itraconazole dengan metode HPLC. Beragam macam
kolom, kombinasi fase bergerak, degasser yang digunakan untuk penelitian ini. Aliran yang berbeda dimana disesuaikan
untuk mobile kombinasi fasa. Dalam beberapa metode studi degradasi paksa juga dilakukan dan metode dikembangkan
divalidasi menurut pedoman ICH. Setelah mempelajari berbagai artikel penelitian, terungkap bahwa HPLC Metode
pengembangan itrakonazol telah dilakukan dalam berbagai bentuk sediaan itrakonazol dan masih ada yang besar potensi
metode baru untuk dikembangkan dengan kombinasi fase dan kolom seluler yang berbeda. Metode baru ini data diminta
oleh badan pengatur.
Kata kunci: Itraconazole, Linearitas, antijamur
_____________________________________________________________________________________________
PENGANTAR
Itrakonazol adalah (1- (buta-2-yl) -4- {4- (4- (4- {2R, 4S) -2- (2,4-diklorofenil) -2- (1H-1,2 , 4 triazol- 1- ylmetil) 1, 3-
dioxolan - 4 -yl] metoksi} fenil) piperazin -1-yl] fenil} 4, 4-dihidro-1H-1,2,4 triazole-5-satu) adalah anggota golongan
obat yang dikenal sebagai anti jamur. Ini digunakan untuk penghambatan enzim sitokrom p450 jamur "lanosterol 4
demethylase ", yang digunakan dalam konversi lanosterol menjadi ergosterol, yang merupakan sterol utama pada membran
sel jamur, sehingga menghambat replikasi dan meningkatkan kematian sel jika terjadi perubahan sel ragi menjadi hipotetis
invasive hifa
Survei literatur mengungkapkan bahwa sangat sedikit metode yang dilaporkan untuk analisis Itraconazole yang meliputi
Spektroskopi UV, Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography, Ultra Pressure Liquid Kromatografi, LCMS,
metode HPTLC. Artikel ini membahas metode yang ada untuk dikembangkan itraconazole oleh HPLC. Sarvani Paruchuri
dkk. mengembangkan fase balik sederhana, ekonomis, selektif, tepat dan akurat metode kromatografi cair kinerja untuk
analisis Itraconazole dan Zat Terkait dan divalidasi menurut pedoman ICH. Itraconazole dipisahkan dengan baik
menggunakan Thermo Hypersil BDS C18, 150mm X 4,6 mm, Kolom 5μm untuk kuantifikasi uji dalam mode isokratis
dengan fase gerak yang terdiri dari penyangga: Asetonitril (65:35) dengan laju alir 1,5 ml / menit dan Thermo Hypersil
BDS C18, 100 mm x 4,6 mm, kolom 3 μm untuk Terkait kuantifikasi zat dalam mode gradien dengan fase gerak yang
terdiri dari 0,08M tetra butil amonium hidrogen sulfat: Asetonitril dengan laju alir 1,5 ml / menit.

Halaman 2
Verma Vikrantand Singh Umesh Kumar
J. Chem. Pharm. Res., 2016, 8 (3): 58-63
______________________________________________________________________________
59
Waktu retensi ditemukan menjadi 6,2min dan% assay ditemukan 99,9%. Persentase pemulihannya adalah ditemukan 99,6
sampai 101,2%. Metode yang diusulkan divalidasi untuk presisi, akurasi, linieritas, jangkauan, spesifisitas dan ketahanan.
Obat tersebut dikenai perlakuan degradasi dan kestabilan paksa.
Parameter penting yang ditemukan dalam penelitian ini diberikan pada Gambar1, Tabel1-3.
Gambar 1. Parameter linieritas
Tabel.1.Validation Parameters
Parameter
Pengujian kadar logam
Linearitas
10-200mcg / ml
Presisi (% RSD)
0,2
Ketepatan
100,2
Pengujian kadar logam
99,9
Ketangguhan (% RSD)
0,33
Tabel.2.Oktimitasi Kondisi Kromatografi
Parameter
Pengujian kadar logam
Kolom
Thermohypersil BDS C18 150X4.6mm, 5μm
Fase mobile
Penyangga: ACN (65:35)
Laju alir
1.5ml / min
Panjang gelombang
UV di 225nm
Volume injeksi
10μl
Suhu kolom 25 C
0

Jalankan Waktu
12min
Tabel.3.Linearity Data
Zat terkait

M. Salomi, dkk. Mengembangkan metode RP-HPLC yang telah divalidasi untuk memperkirakan Itraconazole secara murni
dan bentuk sediaan farmasi. Dengan metode RP-HPLC sederhana, cepat dan tepat dikembangkan untuk
 Halaman 3
Verma Vikrantand Singh Umesh Kumar
J. Chem. Pharm. Res., 2016, 8 (3): 58-63
______________________________________________________________________________
60
kuantifikasi Itraconazole dalam bentuk sediaan murni dan farmasi. Kuantifikasi dilakukan dengan menggunakan Dionex
C18 4.6 X 250mm, kolom selektivitas polaritas 5μm yang disempurnakan dan fase gerak terdiri dari metanol dan pH 7,5
kalium dihidrogen fosfat dalam perbandingan 40:60 dan dihilangkan dengan ultrasonication. Tingkat alirnya adalah 1.5ml
/ menit dan efluen dipantau pada 306nm. Waktu retensi Itraconazole ditemukan 5,2 menit. Metode ini divalidasi dalam hal
linearitas, presisi, akurasi, spesifisitas, ketahanan, batas deteksi dan batas kuantitasi sesuai dengan ICH pedoman.
Linearitas Itraconazole berada pada kisaran 200-600 μg / mL. Persentase pemulihan Itraconazole adalah 99,33% sampai
99,66% dari formulasi kapsul. Metode yang diusulkan sesuai untuk penentuan Itrakonazol dalam bentuk sediaan farmasi.
2

Parameter penting yang ditemukan dalam penelitian diberikan pada Tabel 4-6.
Tabel 4: Parameter kromatografi yang dioptimalkan
Parameter kromatografi yang optimal
Elusi
Isokratik
Fase mobile
metanol dan pH 7,5 KH PO (40:50)
2 4

Kolom
Dionex C18column
Laju alir
1.5ml / min
Deteksi
306nm
Volume injeksi 10μl
Waktu retensi
5.278 min
Jalankan waktu
7 mnt
Tabel 5: Parameter kesesuaian sistem
Nilai parameter
Waktu retensi
5.278 min
Pelat teoritis 8609.000
Faktor ekor
1.138
Tabel 6: Hasil Linearitas untuk Itraconazole
S.No
Konsentrasi (μ g / ml)
Area AU (n = 6)
1 200 3564715
2
300
5346123
3
400
7179256
4
500
8907315
5
600
10694359
Kumudhavalli et al. , mengembangkan cairan kinerja fase tinggi yang sederhana, spesifik, akurat dan presisi
metode kromatografi dan divalidasi untuk estimasi Itraconazole dalam bentuk sediaan kapsul. Inertsil C-18,
Kolom 5μm memiliki diameter internal 250 x 4.6mm dalam mode isokratik dengan fase gerak yang mengandung
Tetrabutyl
larutan buffer amonium hidrogen sulfat dan asetonitril dengan perbandingan 40: 60v / v digunakan. Tingkat alirnya adalah
1.5ml / menit dan efluen dipantau pada 225nm. Waktu retensi untuk Itraconazole adalah 5.617 min. Metode
divalidasi untuk linieritas, akurasi, presisi, spesifisitas, batas deteksi, batas kuantifikasi dan ketahanan.
Batas deteksi dan batas kuantifikasi masing-masing ditemukan 0,85μg / ml dan 2,60μg / ml dan pemulihan
Itraconazole dari formulasi kapsul ditemukan 98,3 sampai 100,3%. Parameter kesesuaian sistem seperti
pelat teoritis dan faktor tailing ditemukan 2927.43 dan 1.08 Metode yang diusulkan berhasil dilakukan
diterapkan untuk penentuan kuantitatif Itraconazole dalam formulasi kapsul. 3 parameter penting diberikan dalam
tabel 7 dan tabel 8
Tabel 7: Validasi dan Parameter Kesesuaian Sistem
Rentang linier (μg / ml)
50 - 200 μg / ml
Koefisien korelasi
0,9993
Waktu retensi (min)
5.61
Faktor ekor
1.08
Batas deteksi (μg / ml)
0,85 μg / ml
Batas kuantifikasi (μg / ml)
2,60 μg / m
Presisi (RSD%)
0,27%

Halaman 4
Verma Vikrantand Singh Umesh Kumar
J. Chem. Pharm. Res., 2016, 8 (3): 58-63
______________________________________________________________________________
61
Tabel 8: Hasil Studi Kekokohan
Faktor
Tingkat
Berarti *% RSD
Kecepatan alir (ml / menit)
1.4ml / min
1.6ml / min
1803429
1803429
0,1
0,1
Rasio fase bergerak
8:62
42:58
1651399
1682078
0.5
0.4
Suhu kolom
25
35 C
o

1676695
1664691
0,6
0,7
Azevedo et al. mengembangkan Metode HPLC-FLD untuk Kuantisasi Itraconazole dalam Asam Laktat-Ko-glikolat Poli
Nanopartikel, Plasma dan Jaringan. Dalam prosedur kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) ini menggunakan
Deteksi fluorometrik dikembangkan untuk penentuan itrakonazol dalam poli polimer (asam laktat-glikolat)
nanopartikel, plasma dan jaringan. Linearitas, batas deteksi dan kuantifikasi, pemulihan, presisi, selektifitas dan
stabilitas didirikan. Metode yang dikembangkan diuji dalam deteksi itraconazole dan kuantifikasi
biodistribusi nanopartikel diberikan secara intraperitoneal ke tikus betina Balb / C. Studi ini dikembangkan
metode analitik untuk HPLC dengan deteksi fluorometrik untuk kuantifikasi itrakonazol dalam polimer
nanopartikel, jaringan dan plasma, yang sensitif, berbiaya rendah, layak untuk penggunaan rutin dan potensial
aplikasi dalam biodiesel itrakonazol dan studi farmakokinetik. 4
Dengan menggunakan metode analisis yang dikembangkan, waktu retensi ITZ adalah 7,6 menit dan waktu retensi standar
internal adalah 9,1
min dengan 11 menit untuk setiap lari
Kromatografi berjalan selesai pada 11 menit, jangka pendek bila dibandingkan dengan kebanyakan metode untuk ITZ
kuantifikasi HPLC, sehingga menghasilkan limbah yang kurang, sesuai dengan prinsip kimia analitik hijau.
Parameter penting yang ditemukan diberikan pada tabel 9
Tabel 9 Linear parameter regresi dan batas deteksi dan kuantifikasi untuk itrakonazol (area vs Konsentrasi)
Kurva kalibrasi
Rentang konsentrasi /
(μg mL-1)
Slope mencegat
r2
LOD /
(μg mL-1)
LOQ /
(μg mL-1)
Fase mobile
10-0,20
720801 -4366.1 0,9992
0.151
0,459
Fase mobile
0,2-0,01
780523
297,6
0,9999
0.003
0.008
Kideny
10-0,02
707156
14640
0,9996
0,001
0.004
Hati
10-0,02
642671
5640
0,9994
0.007
0,020
Paru-paru
10-0,02
691500
11502
0,9999
0.009
0,026
Limpa
10-0,02
646530
12203
0,9999
0,020
0,061
Plasma
10-0,02
653569
12560
0,9998
0,039
0.117
Andelija Malenovic et al. Secara Chemometrically dibantu dioptimalkan dan divalidasi metode RP-HPLC untuk analisis
itrakonazol dan kotorannya. Dalam optimasi dan validasi yang dibantu secara chemometrik ini, RP-HPLC
Metode yang dimaksudkan untuk analisis kuantitatif itrakonazol dan pengotornya dalam bentuk sediaan farmasi adalah
dilakukan Untuk mencapai resolusi kromatografi yang diinginkan dengan sejumlah percobaan minimal
Jumlah waktu, desain Box Behnken digunakan untuk secara simultan mengoptimalkan beberapa kromatografi penting
parameter, seperti kandungan asetonitril dalam fase gerak, pH fasa berair dan kolom
suhu. Pemisahan antara itrakonazol dan pengotor F diidentifikasi sebagai kritis dan dipilih sebagai respons
selama optimasi.
Komposisi fase gerak optimal yang ditetapkan adalah asetonitril / air pH 2,5 yang disesuaikan dengan asam o-fosfat (50:50,
V / V). Pemisahan dilakukan pada Zorbax Eclipse XDB-C18, 4,6 × 150 mm, kolom ukuran partikel 5 m dengan
laju alir 1 mL menit -1, suhu kolom ditetapkan pada 30 o C dan deteksi UV pada 256 nm. Metode yang mapan adalah
kemudian dikenai validasi metode dan parameter validasi yang diperlukan diuji. 5
Parameter penting yang ditemukan diberikan pada tabel 10 dan tabel 11
 Halaman 5
Verma Vikrantand Singh Umesh Kumar
J. Chem. Pharm. Res., 2016, 8 (3): 58-63
______________________________________________________________________________
62
Tabel10. Parameter penting untuk linieritas
Parameter Itraconazole Impurity B Impurity F
Sebuah
42.63
89.78
59.91
b
41.92
1.05
0,56
R
0,9999
1.0000
1.0000
tb

0,617
3.083
1.726
Tabel 11. Parameter penting untuk akurasi
Konsentrasi 1 (mg mL -1)

160
0,8
0,8
Pemulihan 1 (%)
101.2 98.5 94.3
Konsentrasi 2 (g mL-1)

200
1.0
1.0
Pemulihan 2 (%)
104.3 99.9 96.7
Konsentrasi 3 (mg mL -1)

240
1.2
1.2
Pemulihan 3 (%)
105.1 95.0 97.6
Durisehvar Ozer Unal et al. metode yang dikembangkan untuk penentuan ITR dan metabolit dari plasma dengan LC-
Sistem MS / MS yang handal dan tangguh. Metode ini menggunakan ekstraksi cairan cair sederhana dan ekonomis dari
obat dari plasma manusia Standar terendah 1.0 ng / mL untuk ITR dan 2.0 ng / mL untuk HITR pada kurva kalibrasi
diidentifikasi sebagai batas bawah kuantifikasi (LOQ) dengan presisi kurang dari atau sama dengan 20%.
Kurva kalibrasi dibuat dari tujuh sampel plasma berduri dalam kisaran 1,0-600.00 ng / mL,
termasuk LOQ untuk ITR dan 2.0-600.00 ng / mL, termasuk LOQ untuk HITR.
Kurva kalibrasi standar adalah linier selama rentang konsentrasi 1,0-600 ng / mL dengan mean r 2 = 0,99509
untuk ITR dan r 2 = 0,99252 untuk HITR masing-masing. LOQ adalah 1.0 ng / mL untuk ITR dan 2.0 ng / mL untuk HITR.
Itu
Kurva kalibrasi memiliki persamaan regresi y = 0,04118x -0.00102 untuk ITR, y = 0,00534x-0,00129 dan untuk HITR
masing-masing. Batas deteksi metode yang dikembangkan serendah sistem LC-MS / MS dengan ekstraksi cair-cair
prosedur. Hasil validasi termasuk spesifisitas, akurasi, pemulihan ekstraksi, linieritas dan jangkauan. Itu
Pengujian dapat diterapkan dengan mudah dengan berhasil pada studi farmakokinetik dan bioekivalensi. 7
Parameter penting yang ditemukan diberikan pada tabel 12-14
Tabel 12 koefisien variasi intra hari dan error relatif% untuk penentuan HITR
Mencicipi
Conc. dari
HITR
(ng / mL)
Berarti conc.
dari HITR
(ng / mL)
Relatif
Kesalahan%
SD CV% n
QC1
2
1,98
98.14
0,13 6,73 18
QC2
6
5.62
100,55 0,47 8,30 18
QC3
30
26.73
89.73
1,29 4,84 18
QC4
480
489.02
102.25 31.73 6.49 18
QC5
600
577,57
101,79 45,02 7,80 18
Tabel 13. Koefisien variasi intra hari dan relatif error% untuk penentuan ITR
Mencicipi
Conc. dari ITR
(ng / mL)
Berarti conc.
dari ITR (ng /
mL)
Relatif
Kesalahan%
SD
CV%
n
QC1
1
0,98
98.88
0,05
5.47
18
QC2
3
3.02
93.71
0,16
5.36
18
QC3
30
26.92
89.11
1.02
3,78
18
QC4
480
490,80
101,88 17.43 3.55
18
QC5
600
610.71
96,26 21.95 3.59
18
Tabel 14. Nilai CV Intra dan Inter Hari
Itraconazole
Hydoxy-ITR
(1-600 ng / mL) (2-600 ng / mL)
Min.
Maks.
Min.
Maks.
Range CV% antar hari (n = 6)
2,43
5.53
1,48
9.79
Range CV% intra hari (n = 18)
3.55
5.47
4.84
8.30

Halaman 6
Verma Vikrantand Singh Umesh Kumar
J. Chem. Pharm. Res., 2016, 8 (3): 58-63
______________________________________________________________________________
63
REFERENSI
[1] Sarvani Paruchuri, Haritha Pavani K; India Journal of Research in Farmasi dan Bioteknologi November -
Desember 2013 Halaman 857-865.
[2] B. Thangabalan, M. Salomi, N. Sunitha, S. Manohar Babu; Asia J. Pharm Ana. 2013; Vol. 3: Edisi 4, halaman 119-
123
[3] V. Kumudhavalli; Py-Daniel, Osmindo R. Pires Junior, Carlos M. Infante C., Maria L. Fascineli, Antonio C.
Tedescod dan Ricardo B. Azevedo, J. Braz. Chem. Soc., Vol. 00, No. 00, 1-7, 2014.
[4] Karen R. Py-Daniel, Osmindo R. Pires Junior, Carlos M. Infante C., Maria L. Fascineli, Antonio C. Tedescod dan
Ricardo B. Azevedo, Metode HPLC-FLD untuk Kuantisasi Itraconazole dalam Asam Laktat-Ko-glikolat Poli
Nanopartikel, Plasma dan Tissue, J. Braz. Chem. Soc., Vol. 00, No. 00, 1-7, 2014
[5] Irena Kasagic Vujanovic, Andelija Malenovic, Marko Jovanovic, Tijana Rakic, Biljana Jancic Stojanovic, Darko
Ivanovic, Acta Pharm. 63 (2013) 159-173.
[6] Zeynep Irem Diler, Durisehvar Ozer Unal, Dilek Demir Erol, Hacettepe Universitas Journal Fakultas
Farmasi, Volume 30 / Nomor 2 / Juli 2010 / pp. 125-138.