MELAKSANAKAN ISOLASI DAN INOKULASI

a. Prinsip dan tujuan Sterilisasi

Apakah anda mengeahui prinsip dan tujuan sterilisasi?

Sterilisasi dalam mikrobiologi adalah suatu proses untuk mematikan semua organisme
yang terdapat pada atau dalam suatu benda. Ketika anda pertama kalinya melakukan
pemindahan biakan secara aseptik, sesungguhnya anda telah menggunakan salah satu cara
sterilisasi , yaitu pembakaran. Namun kebanyakan peralatan dan media yang umum
dipakai di dalam pekerjaan mikrobiologis akan menjadi rusak bila dibakar.

Tujuan dari sterilisasi adalah untuk mematikan semua organisme hingga sporanya pada
suatu obyek, agar dalam penggunaan benda atau obyek pada kegiatan selanjutnya tidak
terjadi kontaminasi atau kegagalan. Suatu tindakan untuk membunuh kuman patogen dan
apatogen beserta sporanya pada peralatan perawatan dan kedokteran dengan cara
merebus, stoom, panas tinggi atau menggunakan bahan kimia.

b. Metode Sterilisasi

Saat ini informasi yang diperoleh dari bidang mikrobiologi memberikan sumbangan yang
sangat besar, khususnya dalam mengawasi penyakit menular. Selain itu, mikroorganisme
telah digunakan untuk mempelajari berbagai proses biokimia yang diketahui terjadi pula
pada bentuk kehidupan yang lebih tinggi. Banyak fakta tentang metabolisme manusia yang
diketahui sekarang mula-mula diketahui terjadi pada mikroorganisme. Demikian pula
dengan teknologi yang sekarang sedang popular, misal rekayasa genetik yang tidak lain
merupakan perkembangan genetika molekuler yang menjelaskan bagaimana gen mengatur
aktivitas sel. Semua ini berasal dari studi tentang mikroorganisme. Jadi bidang
mikrobiologi tidak hanya studi tentang penyebab penyakit tetapi merupakan studi tentang
semua aktivitas hayati mikroorganisme.

Mikroorganisme banyak dipelajari di laboratorium untuk banyak tujuan. Derajat

perinciannya untuk mempelajari itu tergantung kepada maksud pemeriksaan laboratorium
tersebut. Tersedianya pula teknik untuk menentukan ukuran, bentuk, dan struktur sel-sel
individu serta beberapa prosedur untuk menumbuhkan (membiakkan) mikroorganisme di
laboratorium.

Pada bahasan berikut ini dititikberatkan pada metode/prosedur untuk membebaskan

suatu bahan atau benda dari semua bentuk kehidupan atau yang biasanya dikenal dengan
istilah sterilisasi. Sterilisasi merupakan suatu proses untuk mematikan semua organisme
yang terdapat pada suatu benda. Proses sterilisasi dapat dibedakan menjadi 3 macam,
yaitu penggunaan panas (pemijaran dan udara panas); penyaringan; dan penggunaan
bahan kimia seperti etilena oksida, asam perasetat, formaldehida dan glutaraldehida
alkalin (Hadioetomo, 1993).

Pada prinsipnya sterilisasi dapat dilakukan dengan 3 cara yaitu secara mekanik, fisik dan
kimiawi. Berikut penjelasan akan masing-masing cara:
1) Sterilisai Secara Mekanik (filtrasi)

Sterilisasi secara mekanik (filtrasi) menggunakan suatu saringan yang berpori sangat kecil
(0.22 mikron atau 0.45 mikron) sehingga mikroba tertahan pada saringan tersebut. Proses
ini ditujukan untuk sterilisasi bahan yang peka panas, misalnya larutan enzim dan
antibiotik.
Jika terdapat beberapa bahan yang akibat pemanasan tinggi atau tekanan tinggi akan
mengalami perubahan atau penguraian, maka sterlisasi yang digunakan adalah dengan
cara mekanik, misalnya dengan saringan. Dalam mikrobiologi, penyaringan secara fisik
paling banyak digunakan adalah dalam penggunaan filter khusus misalntya filter berkefeld,
filter chamberlan, dan filter seitz. Jenis filter yang dipakai tergantung pada tujuan
penyaringan dan benda yang akan disaring.
Penyaringan dapat dilakukan dengan mengalirkan gas atau cairan melalui suatu bahan
penyaring yang memilki pori-pori cukup kecil untuk menahan mikroorganisme dengan
ukuran tertentu. Saringan akan tercemar sedangkan cairan atau gas yang melaluinya akan
steril. Alat saring tertentu juga mempergunakan bahan yang dapat mengabsorbsi
mikroorganisme. Saringan yang umum dipakai tidak dapat menahan virus. Oleh karena itu,
sehabis penyaringan medium masih harus dipanaskan dalam autoclave. Penyaringan
dilakukan untuk mensterilkan substansi yang peka tehadap panas seperti serum, enzim,
toksin kuman, ekstrak sel dan lain-lain.
 Menyaring cairan

Hal ini dapat dilakukan dengan berbagai filter seperti saringan seitz, yang menggunakan
saringan asbestos sebagai alat penyaringannya; saringan berkefeld yang mempergunakan
filter yang terbuat dari tanah diatom; saringan chamberland yang mempergunakan filter
yang terbuat dari porselen; dan fritted glass filter yang mempergunakan filter yang terbuat
dari serbuk gelas. Saringan asbes lebih mudah dan lebih murah daripada saringan
porselen. Saringan asbes dapat dibuang setelah dipakai, sedangkan saringan porselen
terlalu mahal bila dibuang, tetapi terlalu sulit untuk dibersihkan.
 Menyaring udara

Untuk menjaga suatu alat yang sudah steril agar tidak tercemar oleh mikroba atau untuk
menjaga agar suatu biakan kuman tidak tercemar oleh kuman yang lain, maka alat-alat
tersebut harus ditutup denagn kapas, karena kapas mudah ditembus udara tetapi dapat
menahan mikroorganisme. Harus dijaga agar kapas tidak menjadi basah, oleh karena kapas
yang basah memungkinkan kuman menembus ke dalam. Untuk mencegah pencemaran
oleh kuman-kuman udara pada waktu menuang pembenihan, dapat dipergunakan suatu
alat yang disebut laminar flow bench dimana udara yang masuk ke dalamnya disaring
terlebih dahulu dengan suatu saringan khusus. Saringan ini ada batas waktu
pemakaiannya dan harus diganti dengan yang baru apabila sudah tidak berfungsi lagi.

2) Sterilisasi Secara Fisik

Sterilisasi secara fisik dapat dilakukan dengan pemanasan & penyinaran.

 Pemanasan

- Pemijaran (dengan api langsung): membakar alat pada api secara langsung, contoh alat
: jarum inokulum, pinset, batang L dan lain-lain.
- Panas kering: sterilisasi dengan oven kira-kira 160-1800C. Sterilisasi panas kering
cocok untuk alat yang terbuat dari kaca misalnya erlenmeyer, tabung reaksi dan lain-lain.
- Uap air panas: konsep ini mirip dengan mengukus. Bahan yang mengandung air lebih
tepat menggunakan metode ini supaya tidak terjadi dehidrasi.
- Uap air panas bertekanan: menggunakan autoclave.

 Penyinaran dengan UV

Sinar Ultra Violet juga dapat digunakan untuk proses sterilisasi, misalnya untuk
membunuh mikroba yang menempel pada permukaan interior Safety Cabinet dengan
disinari lampu UV

3) Sterilisaisi Secara Kimiawi

Biasanya sterilisasi secara kimiawi menggunakan senyawa desinfektan antara lain alkohol.
Antiseptik kimia biasanya dipergunakan dan dibiarkan menguap seperti halnya alkohol.
Umumnya isopropil alkohol 70-90% adalah yang termurah namun
merupakan antiseptik yang sangat efisien dan efektif. Penambahan yodium pada alkohol
akan meningkatkan daya disinfeksinya. Dengan menggunakan iodium, isopropil tidak
efektif terhadap spora. Solusi terbaik untuk membunuh spora adalah campuran
formaldehid dengan alkohol, tetapi solusi ini terlalu toksik untuk dipakai sebagai
antiseptik.
Pemilihan antiseptik terutama tergantung pada kebutuhan dari tujuan tertentu serta efek
yang dikehendaki. Perlu juga diperhatikan bahwa beberapa senyawa bersifat iritatif dan
kepekaan kulit sangat bervariasi. Zat-zat kimia yang dapat dipakai untuk sterilisasi antara
lain yaitu halogen (senyawa klorin, iodium), alkohol, fenol, hidrogen feroksida, zat warna
ungu kristal, derivat akridin, rosanalin, detergen, logam berat (hg, Ag, As, Zn), aldehida dan
lain-lain.