Naskah Skripsi

IR - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI
DETEKSI BRUCELLOSIS PADA SAPI PERAH

BETINA DI KECAMATAN TUREN KABUPATEN
MALANG DENGAN METODE ROSE BENGAL TEST
(RBT) DAN COMPLEMENT FIXATION TEST (CFT)
Oleh :
IMBI KUSUMASTUTI
NIM 061611535024
PRODI KEDOKTERAN HEWAN KAMPUS BANYUWANGI

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
UNIVERSITAS AIRLANGGA
BANYUWANGI
2020
SKRIPSI DETEKSI BRUCELLOSIS PADA... IMBI KUSUMASTUTI

DETEKSI BRUCELLOSIS PADA SAPI PERAH BETINA

DI KECAMATAN TUREN KABUPATEN MALANG
DENGAN METODE ROSE BENGAL TEST (RBT)
DAN COMPLEMENT FIXATION TEST (CFT)
Skripsi
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Kedokteran Hewan
pada
Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga
Oleh :
IMBI KUSUMASTUTI
061611535024
Menyetujui
Komisi pembimbing,
(Dr. Wiwiek Tyasningsih, drh.,M.Kes) (Ratih Novita Praja, drh., M.Si.)

Pembimbing Utama Pembimbing Serta
ii
iii
Telah dinilai pada Seminar Hasil Penelitian

Tanggal : 14 April 2020
KOMISI PENILAI SEMINAR HASIL PENELITIAN
Ketua : Prof. Dr. Suwarno, drh., M.Si.

Sekretaris : Maya Nurwartanti Yunita, drh., M.Si.
Anggota : Aditya Yudhana, drh., M.Si.
Pembimbing Utama : Dr. Wiwiek Tyasningsih, drh., M.Kes.
Pembimbing Serta : Ratih Novita Praja, drh., M.Si.
iv
Telah diuji pada sidang skripsi

Tanggal : 14 Mei 2020
KOMISI PENGUJI SKRIPSI
Ketua : Prof. Dr. Suwarno, drh., M.Si.

Anggota : Maya Nurwartanti Yunita, drh., M.Si.
Aditya Yudhana, drh., M.Si.
Dr. Wiwiek Tyasningsih, drh., M.Kes.
Ratih Novita Praja, drh., M.Si.
Surabaya, 23 Mei 2020

Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Airlangga
Dekan,
v
RINGKASAN
Penelitian mengenai “Deteksi Brucellosis pada Sapi Perah Betina di
Kecamatan Turen Kabupaten Malang dengan metode Rose Bengal Test (RBT)
dan Complement Fixation Test (CFT) telah dilakukan selama bulan November –
Desember 2019 dengan prosedur sesuai pedoman OIE tahun 2018 pada uji RBT
dan prosedur BBVet Denpasar pada uji CFT yang dibimbing oleh Dr. Wiwiek
Tyasningsih, drh., M.Kes. dan Ratih Novita Praja, drh., M.Si. Brucellosis
merupakan penyakit infeksius yang disebabkan oleh bakteri Gram negatif genus
Brucella yang bersifat patogen pada berbagai spesies hewan dan mudah ditularkan
ke manusia atau zoonosis. Brucellosis merupakan salah satu penyakit yang masih
menjadi kendala utama dalam usaha pengembangan sektor peternakan di
Indonesia.
Data BBVet Wates tahun 2018 yang meneliti Brucellosis di Provinsi DIY,
Jawa Tengah dan Jawa Timur ditemukan hasil positif 285 ekor dan terbanyak di
Provinsi Jawa Timur yaitu sebesar 231 ekor positif. Kabupaten Malang menjadi
Kabupaten dengan positif terbanyak yaitu sebesar 158 ekor. Positif Brucellosis
ditemukan pada beberapa Kecamatan, salah satu Kecamatan yang sampai saat ini
belum ada data mengenai pengujian terhadap Brucellosis yaitu Kecamatan Turen.
Diagnosis klinis Brucellosis sendiri dapat dilakukan dengan beberapa metode
salah satunya dengan uji serologis. Metode uji serologi utama yang digunakan
pada deteksi Brucellosis di Indonesia adalah metode RBT dan CFT.
Penelitian ini bertujuan untuk mendeteksi adanya antibodi Brucella pada
Kecamatan di Kabupaten Malang yang belum pernah dilaporkan ditemukan
vi
positif Brucella yaitu Kecamatan Turen. Uji dilakukan menggunakan metode RBT
sebagai screening test dan uji konfirmasi menggunakan metode CFT untuk
menentukan diagnosis akhir atau besar persentase infeksi Brucellosis. Rancangan
dalam penelitian ini yaitu menggunakan metode deskriptif dengan pendekatan
kuantitatif yang bertujuan menjelaskan situasi yang hendak diteliti dengan
dukungan kepustakaan.
Besar sampel yang digunakan sebesar 78 sampel dari total 351 ekor sapi
perah betina di Kecamatan Turen, Kabupaten Malang. Sampel yang telah diambil
kemudian dilakukan screening test menggunakan metode RBT dengan melihat
hasil positif uji yang ditunjukkan dengan terjadinya aglutinasi. Hasil uji RBT
menunjukkan 10 sampel positif dan dilanjut uji konfirmasi menggunakan metode
CFT dengan prinsip pengikatan komplemen yang digunakan untuk mengetahui
keberadaan antibodi dengan mengukur titer antibodi. Hasil uji CFT menunjukkan
9 sampel positif dengan ditandai adanya endapan eritrosit di dasar sumur plate uji
dan tidak terjadi hemolisis, sebaliknya jika terjadi hemolisis hasil uji negatif.
Kesimpulan hasil penelitian ini adalah ditemukannya antibodi Brucella
pada 10 sampel yang diuji menggunakan metode RBT. Besar persentase
Brucellosis pada sapi perah betina di Kecamatan Turen, Kabupaten Malang yang
telah diuji dengan metode RBT dan CFT sebagai diagnosis akhir Brucella yaitu
sebesar 11,5% atau sembilan sampel positif dari total 78 sampel uji. Diharapkan
hasil penelitian ini dapat menjadi acuan pemberantasan dan pengendalian
Brucellosis di Kecamatan Turen Kabupaten Malang serta dapat dilakukan uji
spesifik lebih lanjut.
vii
Detection of Brucellosis in female dairy cattle in Turen District

Malang Regency using Rose Bengal Test (RBT) and
Complement Fixation Test (CFT) methods
Imbi Kusumastuti
ABSTRACT
The purpose of this research is to detect Brucellosis in female dairy cattle

in Turen District, Malang Regency. A total of 78 samples were used in this
research taken from 351 total population of female dairy cattle that have been
calculated based on the slovin formula. The methods used in this research were
Rose Bengal Test (RBT) for the screening test and continued with Complement
Fixation Test (CFT) for the confirmation test. The results RBT of this research
clearly showed that positive results from 10 samples were confirmed as a final
diagnostic test of Brucellosis using CFT. CFT showed a positive result from 9
samples and negative in 1 sample. The percentage of Brucellosis occurrence in the
Turen District was recorded at 11.5%. Moreover, Turen District also became an
area with a high Brucellosis occurrence (>2%). This research also suggests that
prevention program such as detection and routine vaccination by the government
or local agencies is needed to control Brucellosis transmission.
Keywords : Brucellosis, Complement Fixation Test, Dairy cattle, Malang, Rose

Bengal Test.
viii
UCAPAN TERIMA KASIH
Puji syukur kepada Allah SWT atas rahmat dan hidayahnya sehingga
peneliti dapat menyelesaikan penelitian yang berjudul Deteksi Brucellosis pada
Sapi Perah Betina di Kecamatan Turen, Kabupaten Malang dengan Metode
Rose Bengal Test (RBT) dan Complement Fixation Test (CFT). Pada
kesempatan ini penulis ingin menyampaikan terima kasih kepada :
Dekan Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Prof. Dr. Pudji
Srianto, drh., M.Kes. atas kesempatan mengikuti pendidikan di Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.
Dr. Wiwiek Tyasningsih. drh., M.Kes. selaku pembimbing utama, Ratih
Novita Praja. drh., M.Si. selaku pembimbing serta yang dengan sepenuh hati
membimbing, memotivasi dan membantu peneliti dalam melaksanakan penelitian
dan menyelesaikan tulisannya. Semoga beliau-beliau selalu diberikan kesehatan
dan limpahan rahmat atas kebaikannya.
Prof. Dr. Suwarno. drh. M.Si. selaku ketua penguji, Maya Nurwartanti
Yunita. drh,. M.Si. selaku sekertaris penguji dan dosen wali, Aditya Yudhana.
drh., M.Si. selaku anggota penguji. Terima kasih banyak atas waktu, bimbingan
dan masukan keilmuan untuk kebaikan penelitian ini.
Seluruh staf pengajar Fakultas Kedokteran Hewan PSDKU Universitas
Airlangga di Banyuwangi atas wawasan keilmuan selama mengikuti pendidikan
di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.
Segenap peternak sapi perah di Kecamatan Turen, drh. Wahyu dan
seluruh staf Dinas Peternakan dan Kesehatan Hewan Kabupaten Malang yang
ix
telah membantu memperlancar pendapatan data lapangan. Seluruh staf Balai
Besar Veteriner Denpasar yang telah membantu dan banyak memberikan ilmu.
Orang tua tercinta, Bapak Jatmika dan Ibu Puji Astutik yang selalu
senantiasa mendukung, memberikan semangat dan mendoakan penulis semoga
selalu diberikan kesehatan sehingga dapat mendampingi hingga nanti. Bupuh Lilis
Sulistyowati serta keluarga besar yang tidak dapat ditulis satu per satu.
Terima kasih yang mendalam untuk rekan satu penelitian sapi sukses
Estiary Wilujeng dan Agung Jati Kusuma yang telah banyak membantu baik
waktu, tenaga maupun masukan atas terselesaikannya penelitian ini. Teman dekat
Erlyn Qurota Aini, Winda Kusuma Dewi, Cahaya Cristina, Indah Puspitaningrum
dan Brillia Zulianti yang selalu menjadi pendengar dan teman bertukar pikiran.
Serta teman-teman Elephas angkatan 2016 FKH PSDKU UNAIR di Banyuwangi
terima kasih atas waktu kebersamaan, dukungan dan motivasi selama ini.
Penulis menyadari bahwa masih terdapat kesalahan dan kekurangan pada
skripsi ini, untuk itu mohon kritik dan saran yang membangun demi perbaikan di
masa mendatang. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi kemajuan dan
perkembangan ilmu pengetahuan di bidang kedokteran hewan.
Banyuwangi, 14 Februari 2020
Penulis
x
DAFTAR ISI
HALAMAN SAMPUL DEPAN...............................................................................i

HALAMAN JUDUL...............................................................................................ii
HALAMAN PERNYATAAN................................................................................iii
HALAMAN IDENTITAS......................................................................................iv
RINGKASAN.........................................................................................................vi
ABSTRACT..........................................................................................................viii
UCAPAN TERIMA KASIH...................................................................................ix
DAFTAR ISI...........................................................................................................xi
DAFTAR TABEL.................................................................................................xiii
DAFTAR GAMBAR............................................................................................xiv
DAFTAR LAMPIRAN..........................................................................................xv
DAFTAR SINGKATAN......................................................................................xvi
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Penelitian......................................................................1
1.2 Rumusan Masalah..................................................................................4
1.3 Landasan Teori.......................................................................................4
1.4 Tujuan Penelitian...................................................................................6
1.4.1 Tujuan Umum..............................................................................6
1.4.2 Tujuan Khusus..............................................................................6
1.5 Manfaat Penelitian..................................................................................6
1.5.1 Manfaat Teoritis...........................................................................6
1.5.2 Manfaat Praktis............................................................................6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Brucellosis..............................................................................................7
2.1.1 Taksonomi Brucella spp...............................................................7
2.1.2 Morfologi Brucella spp................................................................7
2.2 Epidemologi Brucellosis di Indonesia...................................................9
2.2.1 Epidemologi Brucellosis di Kabupaten Malang ........................10
2.3 Patogenesis Brucellosis........................................................................11
2.4 Gejala Klinis Brucellosis......................................................................14
2.5 Diagnosis Brucellosis...........................................................................15
2.6 Pencegahan, Pengendalian dan Pemberantasan...................................19
BAB III METODE PENELITIAN

3.1 Rancangan Penelitian...........................................................................21
3.2 Sampel dan Besar Sampel....................................................................21
3.3 Definisi Operasional Variabel..............................................................22
3.4 Tempat dan Waktu Penelitian..............................................................23
3.5 Bahan dan Alat Penelitian....................................................................23
3.6 Prosedur Penelitian...............................................................................24
xi
3.6.1 Cara Pengambilan Sampel.........................................................24

3.6.2 Metode Rose Bengal Test (RBT) ..............................................24
3.6.3 Metode Complement Fixation Test (CFT) ................................25
3.6.4 Diagram Alir Penelitian.............................................................27
3.7 Pengumpulan Data...............................................................................27
3.8 Analisa Data.........................................................................................28
BAB IV HASIL PENELITIAN.............................................................................29

4.1 Hasil uji Rose Bengan Test (RBT).......................................................30
4.2 Hasil uji Complement Fixation Test (CFT)..........................................31
4.3 Persentase Brucellosis..........................................................................32
BAB V PEMBAHASAN.......................................................................................33
BAB VI KESIMPULAN........................................................................................37
DAFTAR PUSTAKA............................................................................................38
xii
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
2.1 Cara penularan beberapa strain Brucella dan hospesnya. ............................... 13
4.1 Hasil positif Brucellosis di Kecaamatan Turen, Kabupaten Malang. ............. 29
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
2.1 Hasil streak bakteri Brucella spp. .....................................................................8
2.2 Peta prevalensi Brucellosis di Indonesia pada tahun 2014..............................10
2.3 Peta Potensi sapi perah di Jawa Timur.............................................................10
2.4 Gambar (1) fetus abortus

Gambar (2) nekrosis dan hemoragi plasenta Brucellosis.................................15
2.5 Skema reaksi Complement Fixation Test (CFT) .............................................18
3.1 Contoh kategori hasil uji Rose Bengal Test (RBT)..........................................26
3.2 Contoh uji CFT menggunakan metode mikro..................................................26
4.1 Jumlah sampel yang diambil di Kecamatan Turen..........................................30
4.2 Hasil Positif dan Negatif uji RBT di Kecamatan Turen..................................31
4.3 Hasil uji Complement Fixation Test (CFT) di Kecamatan Turen...................33
4.4 Hasil Persentase Brucellosis di Kecamatan Turen...........................................34
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Data BBVet Wates kejadian Brucellosis di Provinsi DIY,

Jawa Tengah dan Jawa Timur........................................................44
2 Data Ditjen PKH populasi sapi perah tahun 2014 - 2018..............45
3 Data populasi sapi perah triwulan I tahun 2019

di Kabupaten Malang.....................................................................47
4 Data populasi sapi perah per desa di Kecamatan Turen,

Kabupaten Malang.........................................................................48
5 Data pendukung berupa kuisoner hasil pendataan

terhadap peternak dan ternak sapi perah........................................49
6 Leaflet panduan penggunaan antigen RBT....................................53
7 Hasil positif uji Rose Bengal Test (RBT).......................................54
8 Prosedur uji Complement Fixation Test (CFT)

BBVet Denpasar.............................................................................56
9 Data hasil Pengujian Complement Fixation Test (CFT)

Brucellosis, Balai Besar Veteriner Denpasar.................................60
10 Dokumentasi Kegiatan Pengambilan Sampel................................61
11 Dokumentasi Kegiatan Uji Rose Bengal Test (RBT).....................62
12 Dokumentasi Kegiatan Uji Complement Fixation Test (CFT)......63
xv
DAFTAR SINGKATAN
BAB = Brucella Agar Base
BBLitvet = Balai Besar Penelitian Veteriner
BBVet = Balai Besar Veteriner
CFT = Complemen Fixation Test
Ditjen PKH = Direktorat Jendral Peternakan dan Kesehatan Hewan
EDTA = Etilen Diamin Tetra Asetat
H2O2 = Hidrogen Peroksida
IgG = Imunnoglobulin G
IgM = Imunnoglobulin M
OIE = Organitation International of Epizootic
O2 = Oksigen
PCR = Polymerase Chain Reaction
pH = power of Hidrogen
PHMS = Penyakit Hewan Menular Strategis
Pustvetma = Pusat Veterinaria Farma
PZ = Phisiological zouth
RBT = Rose Bengal Test
SIM = Sulfida indole motility
Spp. = Spesies
TSIA = Triple Sugar Iron agar
xvi
BAB 1 PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Brucellosis merupakan penyakit infeksius yang disebabkan oleh bakteri
Gram negatif genus Brucella yang bersifat patogen pada berbagai spesies hewan
bersifat mudah ditularkan ke manusia atau zoonosis (BB Litvet, 2016). Menurut
keputusan Menteri Pertanian nomor 4026/Kpts./OT.140/3/2013 penyakit
Brucellosis termasuk Penyakit Hewan Menular Strategis (PHMS) (Kepmentan,
2013). Penyakit Brucellosis merupakan salah satu penyakit yang masih menjadi
kendala utama dalam usaha pengembangan sektor peternakan di Indonesia.
Kerugian ekonomi yang diakibatkan pada ternak ruminansia besar di Indonesia
diperkirakan mencapai Rp. 3,6 trilyun per tahun atau bernilai 1,8% dari nilai total
aset ternak di Indonesia (Basri dan Sumiarto, 2017).
Bakteri Brucella penyebab Brucellosis memiliki beberapa spesies yang
menginfeksi pada hewan sebagai induk semang spesifiknya, salah satunya adalah
spesies Brucella abortus pada sapi (Kartini dkk., 2017). Bakteri Brucella abortus
yang menginfeksi pada sapi memiliki predileksi pada jaringan tubuh tertentu
seperti ambing, uterus, kelenjar getah bening, testis dan kelenjar aksesori. Akibat
adanya keterkaitan dengan uterus gejala yang sering muncul adalah abortus pada
trimester terakhir kebuntingan yaitu 6-9 bulan (Parthiban et al., 2015). Abortus
terjadi akibat bakteri Brucella abortus berkembang cepat dalam uterus yang
mengakibatkan endometritis dan placentitis sehingga mengganggu bahan
makanan yang berasal dari induk untuk embrio atau fetusnya (Sudibyo, 1995)
1
2
Brucellosis pada sapi utamanya menular saat hewan yang terinfeksi
mengalami partus atau abortus. Fetus abortus, membran plasenta, cairan plasenta,
dan mucus vagina yang dikeluarkan dari hewan terinfeksi dapat bertahan di
lingkungan dan menjadi sumber penularan (Parthiban et al., 2015). Pada manusia
penularan sering terjadi saat konsumsi daging dari hewan yang terinfeksi,
konsumsi produk susu yang tidak dipasteurisasi dan kontak langsung dengan
sekresi atau karkas hewan terinfeksi (Zhen et al., 2013). Pekerja rumah potong
hewan, dokter hewan, peternak dan pekerja laboratorium yang bersentuhan
langsung dengan bakteri Brucella menjadi individu yang paling berpotensi
terinfeksi (Poester et al., 2010).
Gejala yang ditunjukkan penyakit Brucellosis baik yang menginfeksi pada
hewan atau manusia memiliki perbedaan. Gejala yang menjadi karakteristik akibat
Brucella abortus pada hewan adalah adanya abortus, retensi plasenta, orchitis,
epididimitis dan tidak jarang juga terjadi artritis (OIE, 2018). Pada manusia gejala
Brucellosis dapat dicirikan dengan adanya kelemahan, demam intermiten,
menggigil, berkeringat, sakit pada persendian, sakit kepala, dan sakit pada seluruh
tubuh (Priadi 1992; Kartini dkk., 2017).
Data BBVet Wates pada tahun 2018 menyebutkan bahwa sampel sapi
yang diteliti Brucellosis dari Provinsi DIY, Jawa Tengah dan Jawa Timur
menunjukkan hasil positif sebanyak 285 ekor sapi. Hasil positif terbanyak
ditemukan di Provinsi Jawa Timur yaitu 231 ekor. Provinsi Jawa Timur pada
tahun 2018 memiliki populasi sapi perah terbanyak di Indonesia dengan total
283.311 ekor (Ditjen PKH, 2018). Salah satu daerah di Jawa Timur yang memiliki

3
populasi sapi perah terbesar dan menjadi kawasan potensial unggulan adalah
Kabupaten Malang, dengan total populasi 85.529 ekor (Disnak dan Keswan Kab.
Malang, 2019).
Kabupaten Malang pernah dilaporkan menjadi daerah ditemukannya kasus
penyakit Brucellosis pertama kali di Jawa Timur, yang terjadi di KUD SAE Pujon
dan menginfeksi 6 ekor sapi perah (Disnak Jatim, 2008). Tahun 2018 pada bulan
Oktober di Kecamatan Jabung, Kabupaten Malang di temukan hasil positif
Brucellosis pada 6 ekor sapi, sedangkan di Kecamatan Pakis pada bulan Juli
sebanyak 34 ekor sapi dan November sebanyak 112 ekor sapi (BBVet Wates,
2018). Kecamatan yang belum pernah dilaporkan ditemukan penyakit Brucellosis
salah satunya adalah Kecamatan Turen. Kecamatan Turen merupakan daerah di
Kabupaten Malang yang menjadi sentra peternakan sapi perah yang mulai
berkembang dan berpotensi dengan populasi mencapai 413 ekor yang meliputi
jantan 62 ekor dan betina 351 ekor (Disnak dan Keswan Kab. Malang, 2019).
Berdasarkan kondisi dan fakta tersebut maka perlu dilakukan deteksi
apakah terjadi penyebaran pada daerah yang belum pernah dilaporkan positif
Brucellosis. Langkah yang dilakukan yaitu dengan mendeteksi apakah ditemukan
antibodi Brucella abortus menggunakan metode Rose Bengal Test (RBT). Metode
RBT merupakan test screening cepat dan mudah yang direkomendasikan untuk
mendeteksi sebagian besar hewan yang terinfeksi Brucella. Uji positif RBT perlu
dilakukan uji konfirmasi lebih spesifik untuk menentukan diagnosis akhir yang
akan dibuat. Uji konfirmasi dilakukan dengan metode Complement Fixation Test
(CFT) yaitu melihat reaksi ikatan komplemen (Corbel, 2006).

4
1.2 Rumusan Masalah
1. Apakah terdapat antibodi Brucella pada sapi perah betina di Kecamatan
Turen Kabupaten Malang dengan metode Rose Bengal Test (RBT)?
2. Berapa persentase ternak sapi perah betina Brucellosis di Kecamatan Turen
Kabupaten Malang yang di uji menggunakan metode Rose Bengal Test
(RBT) sebagai screening test dan Complement Fixation Test (CFT)
sebagai uji konfirmasi?
1.3 Landasan Teori
Diagnosis klinis Brucellosis yang dapat dilakukan untuk mengidentifikasi
dan mengkonfirmasi kebenarannya yaitu dengan isolasi dan identifikasi bakteri
Brucella. Namun isolasi dan identifikasi membutuhkan sarana keamanan
laboratorium yang tinggi yaitu dengan biosecurity level (BSL) 3, tenaga terampil,
waktu pelaksanaan yang lama dan melakukan tata kerja yang berbahaya. Oleh
karena itu selain isolasi dan identifikasi metode diagnosis juga dapat dilakukan
dengan uji serologi menggunakan sampel serum atau cairan tubuh hewan yang
dideteksi (Poester et al., 2010).
Penggunaan satu metode uji serologi tidak dapat menjadi penentu status
epidemologis semua spesies hewan. Setiap metode uji memiliki keterbatasan dan
utamanya digunakan sebagai test screening pada kawanan hewan yang terinfeksi
atau untuk memastikan tidak adanya infeksi pada kawanan yang bebas Brucellosis
(OIE, 2018). Karena uji serologi tidak ada yang 100% akurat, umumnya diagnosis
berasal dari hasil dua test atau lebih. Pengujian awal biasanya dilakukan dengan
test screening dan apabila ditemukan reaksi positif dilanjut test konfirmasi. Test

5
screening lebih mudah dan cepat dilakukan, memiliki tingkat sensitifitas yang
tinggi tetapi tingkat spesifisitasnya masih rendah. Oleh sebab itu apabila hasil uji
positif pada test screening perlu dilanjutkan test konfirmasi (Poester et al., 2010).
Metode uji serologi utama yang digunakan pada deteksi Brucellosis di Indonesia
adalah metode RBT dan CFT (Astarina dkk., 2016).
Metode RBT merupakan uji aglutinasi sederhana yang digunakan sebagai
test screening untuk mengetahui adanya antibodi Brucella. Prinsip uji metode ini
adalah dengan mereaksikan antara serum sampel dengan antigen RBT yang akan
diamati reaksinya untuk menentukan hasil uji positif atau negatif (OIE, 2018).
Hasil uji positif akan ditunjukkan dengan adanya gumpalan atau aglutinasi,
sedangkan apabila tidak ditemukan pengumpalan atau aglutinasi yang pasti maka
dianggap sebagai reaksi negatif (Albert et al., 2018).
Metode CFT menjadi test konfirmasi terhadap Brucellosis yang banyak
digunakan karena memiliki tingkat spesifisitas yang tinggi (OIE, 2018). Prinsip
dasar uji ini adalah mereaksikan antigen Brucella, antibodi serum sampel dan
komplemen. Hasil uji akan dilihat setelah penambahan indikator eritrosit domba
dan hemolisin (hemolitik sistem). Apabila komplemen telah terikat pada
kompleks antigen dan antibodi maka pada penambahan eritrosit domba dan
hemolisin (hemolitik sistem) tidak akan menimbulkan reaksi (Poester et al.,
2010). Interpretasi hasil uji CFT didasarkan pada hasil pengenceran tertinggi
sumur plate uji yang masih menunjukkan hasil positif dan dibandingkan dengan
kontrol serum positif dan negatif (Ghurafa et al., 2019).

6
1.4 Tujuan Penelitian
1.4.1 Tujuan Umum
Tujuan umum penelitian ini adalah mendeteksi adanya antibodi Brucella
pada sapi perah betina di Kecamatan Turen, Kabupaten Malang menggunakan
metode RBT dan dikonfirmasi dengan CFT.
1.4.2 Tujuan Khusus
Tujuan khusus penelitian ini adalah memahami dan melakukan langkah uji
serologi dengan metode RBT sebagai screening test dan CFT sebagai test
konfirmasi sehingga dapat mengetahui hasil uji positif dan negatif untuk
menyimpulkan diagnosis akhir atau besar persentase infeksi Brucellosis pada sapi
perah betina di Kecamatan Turen Kabupaten Malang.
1.5 Manfaat Penelitian
1.5.1 Manfaat Teoritis
Manfaat dari penelitian ini diharapkan dapat memberikan data hasil
penelitian yang bisa dimanfaatkan sebagai ilmu pengetahuan dan pengambil
tindakan penanganan terjadinya penyakit Brucellosis pada sapi perah betina di
Kecamatan Turen, Kabupaten Malang.
1.5.2 Manfaat Praktis
Memberikan informasi data hasil penelitian kepada Pemerintah Kabupaten
Malang dan dinas terkait agar dapat melakukan tindakan lebih lanjut mengenai
pencegahan dan pengendalian Brucellosis pada sapi perah betina di Kecamatan
Turen, Kabupaten Malang.

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Brucellosis
Brucellosis merupakan penyakit zoonosis akibat infeksi bakteri Brucella,
yang menular dari hewan ke manusia secara langsung maupun melalui konsumsi
produk asal hewan (Kusumawati dkk, 2018). Brucellosis sering dikenal sebagai
Undulant Fever, Mediterranean Fever atau Malta Fever yang pada dasarnya
adalah penyakit yang menginfeksi hewan dengan manusia sebagai inang
accidental (Corbel, 2006). Bakteri genus Brucella memiliki beberapa spesies yang
dapat menyebabkan penyakit pada induk semang spesifiknya, seperti Brucella
abortus (sapi), Brucella canis (anjing), Brucella melitensis (kambing), Brucella
neomatae (rodensia), Brucella ovis (domba), dan Brucella suis (babi) (Kartini
dkk, 2017).
2.1.1 Taksonomi Brucella spp.
Taksonomi bakteri genus Brucella menurut Ficht (2010) dan Priyanka et
al., (2019) adalah sebagai berikut :
Kingdom : Bacteria
Fylum : Proteobacteria
Class : Alphaproteobacteria
Ordo : Rhizobiales
Famili : Brucellaceae
Genus : Brucella
Spesies : Brucella spp.
2.1.2 Morfologi Brucella spp.
Bakteri Brucella spp. memiliki koloni berbentuk bulat, halus, licin,
permukaan convex dan seperti tetesan madu (Gambar 2.1). Pewarnaan Gram
menunjukkan bakteri Gram negatif, coccobacillus dan memiliki kecenderungan
7
8
sendiri-sendiri ataupun berpasangan (Handayani dkk., 2018). Brucella spp.
bersifat intraseluler, non motile, non sporulasi, non toxigenic dan non fermentatif
(Golshani and Buozari, 2017). Bakteri Brucella spp. memiliki ukuran 0,5-0,7 x
0,6-1,5 mikron (Banai and Corbel, 2010). Gambar hasil streak bakteri Brucella
spp. pada media Brucella agar base (BAB).
Gambar 2.1 Streak koloni bakteri Brucella spp. pada media Brucella agar base
(BAB) (Ratnasari et al., 2014).
Uji biokimia katalase dan oksidase menunjukkan hasil positif, sedangkan
uji sitrat negatif (Handayani dkk., 2018). Uji katalase positif ditandai dengan
gelembung udara sebagai reaksi pemecahan H2O2 oleh enzim katalase menjadi
H2O dan O2, sedangkan uji sitrat menunjukkan hasil negatif ditandai dengan tidak
ada perubahan warna pada media. Uji biokimia lain seperti urease, SIM dan uji
TSIA juga dapat dilakukan untuk peneguhan diagnosis. Uji urease menunjukkan
hasil positif ditandai dengan perubahan warna media dari kuning menjadi
kemerahan. Pada SIM uji indol menunjukkan hasil negatif ditandai dengan tidak
terbentuknya cincin berwarna merah muda pada ujung tabung. Pada media TSIA
menunjukkan hasil butt dan slant bersifat alkali ditandai dengan warna merah
pada bagian atas dan bawah media serta tidak membentuk gas (Praja dkk., 2017).
Kondisi lingkungan dengan kelembaban tinggi, suhu rendah, dan tidak ada sinar

9
matahari membuat bakteri Brucella dapat bertahan hidup selama beberapa bulan
dalam air, fetus abortus, wol, jerami, lumpur, peralatan dan pakaian. Brucella juga
mampu bertahan pada kondisi kering, terutama bila ada bahan organik dan dapat
bertahan hidup dalam debu dan tanah. Kemampuan daya tahan hidup bakteri
Brucella pada tanah kering selama 4 hari di luar suhu kamar, selama 66 hari pada
tanah yang lembab, pada tanah yang becek 151-185 hari dan 180 hari pada fetus
yang diabortuskan (Azzahrawani dkk, 2018).
2.2 Epidemologi Brucellosis di Indonesia
Brucellosis di Indonesia sudah dikenal sejak tahun 1925 dan telah
ditemukan adanya antibodi bakteri Brucella di DKI Jakarta sebesar 13,5%
(Sudibyo, 1995). Laporan surveilans sejak tahun 2000 menunjukkan hasil bahwa
kejadian penyakit Brucellosis telah menyebar di seluruh wilayah di Indonesia dan
beberapa telah menjadi daerah endemik. Angka prevalensi kejadian Brucellosis di
Provinsi Indonesia berkisar antara 1% hingga 40% kecuali di Pulau Bali dan
Lombok yang telah dinyatakan bebas sejak tahun 2002 (Putra, 2013).
Mulai dari tahun 1996 hingga 1997 pemerintah telah mencanangkan
program pemberantasan penyakit Brucellosis. Program tersebut memberikan hasil
dengan 14 Provinsi di Indonesia yang mempunyai prevalensi rendah sudah dapat
dibebaskan. Namun Provinsi Nanggro Aceh Darussalam, Jawa Timur, Nusa
Tenggara Timur, Sulawesi Barat dan Sulawesi Selatan masih memiliki prevalensi
yang cukup tinggi >2 % (Samkhan, 2014). Provinsi Jawa Timur, Nusa Tenggara
Timur dan Sulawesi dikatakan menjadi daerah dengan endemis penyakit
Brucellosis (BBLitvet, 2016). Peta kejadian Brucellosis di Indonesia pada tahun

10
2014 dapat dilihat pada gambar 2.2.
Gambar 2.2 Peta prevalensi Brucellosis di Indonesia pada tahun 2014 (Samkhan,
2014).
2.2.1 Epidemologi Brucellosis di Kabupaten Malang
Kabupaten Malang merupakan daerah kawasan potensial unggulan sapi
perah di Jawa Timur yang memiliki populasi mencapai 85.529 ekor. Sapi perah di
Kabupaten Malang sendiri tersebar di 31 Kecamatan, dengan beberapa Kecamatan
menjadi daerah basis dengan populasi terbesar (Dinas Peternakan dan Kesehatan
Hewan Kab. Malang, 2019). Pada gambar 2.3 dapat diihat peta potensi sapi perah
di Jawa Timur yang menunjukkan Kabupaten Malang sebagai daerah potensial
unggulan.
Gambar 2.3 Peta Potensi sapi perah di Jawa Timur (Disnak Jatim, 2019).

11
Daerah dengan potensi sapi perah unggulan tidak menjadikan Kabupaten
Malang terbebas dari Brucellosis yang menjadi kendala dan masalah dalam
industri peternakan sapi perah di Indonesia. Terbukti dengan masih adanya
laporan dan survey yang memberikan hasil positif Brucellosis. Kabupaten Malang
sendiri dari riwayat yang pernah dilaporkan menjadi daerah ditemukannya kasus
penyakit Brucellosis pertama kali di Jawa Timur yang terjadi di KUD SAE Pujon
dan menginfeksi 6 ekor sapi perah (Disnak Jatim, 2008). Data BBVet Wates
terbaru tahun 2018 yang melakukan survey Brucellosis di 3 Provinsi yaitu DIY,
Jawa Tengah dan Jawa Timur menunjukkan hasil positif terbanyak ditemukan di
Kabupaten Malang. Pada bulan Oktober di Kecamatan Jabung ditemukan hasil
positif Brucellosis pada 6 ekor sapi, sedangkan di Kecamatan Pakis pada bulan
Juli sebanyak 34 ekor sapi dan November sebanyak 112 ekor sapi (BBVet Wates,
2018).
2.3 Patogenesis Brucellosis
Bakteri Brucella spp. dapat menginfeksi host melalui pernapasan,
pencernaan dan menginfeksi sel epitel inang sehingga memungkinkan infeksi
permukaan mukosa sel M di usus yang telah diidentifikasi sebagai portal of entry
(Poester et al., 2013). Sumber utama infeksi Brucella pada sapi adalah cairan
fetus, sisa-sisa kelahiran, cairan vagina dan jaringan membran plasenta
(Azzahwari dkk, 2018). Patogenesis Brucellosis utamanya diakibatkan
kemampuan bakteri Brucella untuk menginvasi sel fagosit dan non fagosit (Neta
et al., 2010). Predileksi bakteri Brucella memiliki kecenderungan pada makrofag,
sel dendritik (DC) dan tropoblast. Sel tropoblast yang berada di plasenta

12
merupakan salah satu tempat predileksi Brucella yang menjadi target infeksi saat
sapi bunting. Hal ini terjadi karena plasenta sapi bunting memproduksi eritritol
yang disukai bakteri Brucella untuk hidup (Priyanka et al., 2019).
Bakteri Brucella yang menginfeksi pada hewan akan berpredileksi pada
jaringan tubuh tertentu seperti ambing, uterus, kelenjar getah bening, testis dan
kelenjar aksesori (Parthiban et al., 2015). Masa inkubasi bakteri Brucella sangat
bervariasi, utamanya dipengaruhi oleh faktor kebuntingan, dosis infeksi, usia, dan
vaksinasi pada hewan. Pada sebuah percobaan paparan infeksi bakteri Brucella
pada sapi betina bunting, menunjukkan adanya abortus pada 56 hari masa
inkubasi. Percobaan lain juga menunjukkan hasil periode inkubasi bakteri antara
53-251 hari (Megid et al., 2010).
Abortus akibat infeksi bakteri Brucella pada sapi sering ditemui pada
trimester terakhir kebuntingan 6-9 bulan (Partiban et al., 2015). Abortus
disebabkan akibat adanya produksi eritritol dalam jumlah banyak saat sapi sedang
bunting, sehingga bakteri Brucella abortus akan lebih cepat berkembang dalam
uterus sapi bunting tersebut. Akibatnya akan terjadi radang pada dinding uterus
dan radang plasenta, yang mengakibatkan terganggunya pengiriman bahan
makanan dari induk ke embrio atau fetusnya (Sudibyo, 1995). Pemberian
kolostrum pada sapi yang terinfeksi ke anak sapi yang baru lahir juga dapat
menularkan infeksi (Corbel, 2006). Sapi yang dikawinkan secara tidak alami atau
melalui inseminasi buatan (ib) straw dapat menjadi faktor penyebar infeksi,
apabila semen yang digunakan berasal dari hewan yang tidak bebas Brucellosis
(Panus dkk, 2018).

13
Pada Tabel 2.1 menunjukkan beberapa strain bakteri Brucella, hospes yang
diserang dan cara penularannya.
Tabel 2.1 Cara penularan beberapa strain Brucella dan hospesnya (Noor, 2006).
Strain Hospes utama Hospes lain Cara penularan
Domba, kambing, babi,

Ingesti, beberapa
B. abortus Sapi kuda, anjing, manusia,
venereal
ungulata liar
Sapi, babi,
Domba,
B. anjing,
Kambing, Ingesti
melitensis manusia,
Kerbau
unta
Ingesti dan
B. ovis Domba -
venereal
Sapi, kuda,
B. suis Babi anjing, reinder, Venereal
caribou
B. canis Anjing Manusia Venereal
Bakteri Brucella yang menginfeksi pada manusia akan terlokalisir pada
berbagai sistem organ seperti hati, saluran pencernaan, sistem saraf, paru-paru,
pembuluh darah, hati, kulit, mata dan persendian (Eini et al., 2012). Penularan
Brucellosis pada manusia dapat melalui pekerjaan atau occupational diseases
(Novita dkk., 2017). Individu yang rentan terhadap infeksi Bakteri Brucella
adalah individu yang mengkonsumsi produk susu yang tidak di pasteurisasi,
pekerja rumah potong hewan, dokter hewan, peternak dan penyakit juga dapat
menginfeksi pekerja laboratorium yang bersentuhan langsung dengan bakteri
(Poester et al., 2010). Pada manusia masa inkubasi Brucellosis berkisar antara 1−2
bulan, kemudian penyakit dapat bersifat akut atau kronis (Khairiyah, 2011).

14
2.4 Gejala klinis Brucellosis
Gejala klinis yang ditimbulkan penyakit Brucellosis pada hewan dan
manusia memiliki perbedaan yang sangat jelas. Pada hewan penyakit ini dapat
menyebabkan gangguan reproduksi seperti infertilitas, abortus, retensi placenta,
orchitis, radang sendi dan epididymitis. Gejala klinis yang menjadi ciri khusus
adalah adanya abortus pada trimester terakhir kebuntingan 6-9 bulan (Poester et
al., 2010). Brucellosis juga menggangu pada pertumbuhan anak sapi, yang
mengakibatkan pedet mati dini, lahir lemah, atau cacat (Sudibyo, 1995). Pada
uterus sapi yang terinfeksi Brucella menunjukkan terjadinya nekrosis dan
hemogari plasenta setelah terjadinya abortus (Poester et al., 2013). Pada gambar
2.4 di bawah ini dapat dilihat gambar fetus abortus serta nekrosis dan hemoragi
plasenta Brucellosis.
1) 2)
Gambar 2.4 Gambar (1) fetus abortus (Megid et al., 2010). Gambar (2) nekrosis
dan hemoragi plasenta Brucellosis (Poester et al., 2013).
Pada manusia infeksi Brucellosis menunjukkan gejala khusus yaitu
ditandai dengan adanya demam undulan atau intermiten (Novita dkk, 2017).
Gejala lain yang ditunjukkan adalah adanya kelemahan, mengigil, berkeringat,
sakit pada persendian, sakit kepala dan sakit pada seluruh tubuh (Priadi 1992 ;
Kartini dkk, 2017). Gejala klinis Brucellosis pada manusia dapat dikelompokkan

15
berdasarkan sifat penyakit yaitu akut dan kronis, hal ini dapat terjadi setelah
Brucellosis mengalami masa inkubasi. Brucellosis yang bersifat akut akan
menunjukkan gejala klinis berupa demam undulan atau intermiten, sakit kepala,
depresi, kelemahan, arthralgia, myalgia dan orchitis. Gejala yang timbul pada
Brucellosis kronis dapat berupa sacroilitis, hepatitis, endocarditis, colitis dan
meningitis (Noor, 2006).
2.5 Diagnosis Brucellosis
Diagnosis terhadap penyakit Brucellosis yang disebebkan oleh bakteri
Brucella saat ini sudah banyak metode yang dikembangkan. Gold standart
diagnosis penyakit ini adalah dengan isolasi dan identifikasi bakteri Brucella.
Namun karena memiliki banyak alasan untuk sulit dilakukan, maka banyak
metode lain yang digunakan sebagai alternatif. Metode alternatif ini memiliki
teknik mengidentifikasi nucleic acid dari bakteri Brucella dengan teknologi
biologi molekuler atau test serologi (Poester et al., 2010). Diagnosis Brucellosis
pada manusia dapat dilakukan secara bakteriologis, serologi, diagnosis Brucella
pada meningitis dan meningoencephalitis serta intradermal test. Diagnosis
Brucella pada hewan pada dasarnya hampir sama dengan manusia yaitu diagnosis
secara bakteriologis, serologi dan test suplementary (Corbel, 2006). Diagnosis lain
yang dapat menjadi peneguh diagnosis yaitu menggunakan molekuler test dengan
PCR (Assad and Alqahtani, 2012).
Spesimen yang dapat digunakan dalam diagnosis Brucellosis pada hewan
yang paling infektif adalah plasenta karena menggandung konsentrasi bakteri
tertinggi, kelenjar getah bening dan susu. Isi lambung, limpa, paru-paru dari fetus

16
abortus, swab vagina, semen dan arthitis atau cairan higroma dari hewan dewasa
juga dapat menjadi spesimen diagnosis Brucellosis. Jaringan karkas hewan yang
banyak digunakan sebagai spesimen diagnosis adalah jaringan mammae, iliaca
medial dan internal, retropharyngeal, parotid dan kelenjar getah bening
prescapular serta limpa. Setiap spesimen harus dikemas secara terpisah dan segera
dibawa ke laboratorium untuk dilakukan kultur. Pada manusia dapat
menggunakan darah sebagai spesimen. (Poester et al., 2010).
Peneguhan diagnosis terhadap penyakit Brucelosis sendiri dapat diketahui
lebih awal dengan uji Rose Bengal Test (RBT), kemudian dilanjutkan dengan uji
pengikatan komplemen atau Complement Fixation Test (CFT) (Ghurafa dkk.,
2019). Kedua uji tersebut merupakan uji serologi dan menjadi metode uji utama
pada deteksi Brucellosis di Indonesia (Astarina dkk., 2016). Rose Bengal Test
(RBT) merupakan uji screening terhadap penyakit Brucellosis secara sederhana
yang tidak membutuhkan biaya mahal, waktu yang cepat dan memiliki tingkat
sensitifitas yang tinggi. Namun uji ini masih memiliki tigkat spesifisitas yang
rendah, sehingga membutuhkan uji konfirmasi sebagai peneguh diagnosis lebih
lanjut (Kaltungo et al., 2014).
Rose Bengal Test (RBT) memiliki prinsip uji aglutinasi sederhana, dengan
menggunakan antigen Rose Bengal dan larutan penyangga dengan pH rendah 3,65
yang direaksikan dengan sampel serum (OIE, 2018). Kadar pH 3,65 dapat
mencegah aglutinasi dengan IgM dan hanya mengukur IgG1 (Kaltungo et al.,
2014). pH 3,65 dari antigen RBT dapat menginaktivasi sementara IgM dan
meninggalkan antibodi Brucella utuh IgG1, sehingga pada pengujian RBT hanya

17
mereaksikan antara titer antibodi dari IgG1 dengan antigen dari RBT yang dapat
menimbulkan reaksi aglutinasi (Klien, 1991 ; Dwi dkk., 2018). Interpretasi hasil
uji RBT dinilai dari terbentuknya aglutinasi berupa bintik pasir pada sampel
positif, sedangkan sampel yang tidak menunjukkan bentukan aglutinasi dikatakan
negatif (Albert et al., 2018). Hasil uji positif RBT dikategorikan menjadi 3 yaitu
positif 3 (+++) yang menandakan aglutinasi sempurna cairan jernih dan tampak
jelas. Positif 2 (++) yang menandakan aglutinasi berupa pasir halus dengan cairan
agak jernih dan batas jelas. Positif 1 (+) yang menandakan aglutinasi berupa pasir
halus cairan tidak jernih dan batas tidak jelas (OIE, 2009).
Uji Complement Fixation Test sering digunakan secara luas sebagai uji
konfirmasi Brucellosis. Meskipun uji ini rumit untuk dilakukan, membutuhkan
fasilitas laboratorium yang baik dan tenaga yang terampil tetapi masih menjadi
pilihan dalam uji Brucellosis karena memiliki tingkat spesifisitas yang sangat
tinggi. Uji ini memiliki prinsip perhitungan nilai titrasi tertinggi yang masih
menunjukkan hasil positif (OIE, 2018). Uji CFT digunakan untuk mengetahui
antibodi spesifik serum sampel dengan antigen tertentu yang akan diinkubasi
bersama komplemen dan hemolitik sistem sebagai faktor pengaktif. Jika hasil
CFT positif akan menunjukkan ikatan komplemen dengan kompleks antibodi dan
antigen sehingga komplemen tidak terikat dengan kompleks hemolisin yang telah
disensitisasi dengan sel darah merah domba (hemolitik sistem) (Gambar 2.5)
(Actor, 2014).

18
Gambar 2.5 Skema reaksi Complement Fixation Test (CFT) (Actor, 2014).
Hasil positif CFT ditunjukkan dengan terjadinya endapan sel darah merah
domba di dasar sumur plate uji. Pada hasil uji negatif, komplemen tetap bebas
berikatan dengan kompleks hemolisin yang telah disensitisasi dengan sel darah
merah domba, sehingga menyebabkan lisisnya sel darah merah domba (Actor,
2014). Interpretasi hasil dilihat apabila terjadi 50% hemolisis pada pengenceran
serum tertinggi yaitu pada titer ¼, dan pengenceran selanjutnya yang masih
menunjukan tidak terjadinya hemolisis sempurna (Kartini dkk, 2017). Standart
tingkat hemolisis uji CFT dikategorikan menjadi 0%, 25%, 50% dan 100%.
Hemolisis sebagian yang menunjukkan nilai 75%, 50% dan 25% tetap dianggap
sebagai reaksi positif (Adone and Ciuchini, 2008). Hasil uji juga dapat
dikategorikan menjadi negatif dengan terjadinya hemolisis sempurna, cairan
dalam lubang cawan berwarna merah dan tidak ada endapan eritrosit di dasar
cawan (Mukmin, 1997).

19
2.6 Pencegahan, pengendalian dan pemberantasan Brucellosis
Pencegahan Brucellosis pada hewan dapat dilakukan dengan melakukan
seleksi hewan yang akan diternakkan bebas Brucellosis. Isolasi hewan selama
kurang lebih 30 hari dan dilakukan test serologi sebelum digabungkan dengan
hewan lain. Pencegahan melalui kontak dengan jenis hewan lain dalam satu
peternakan yang tidak diketahui status infeksi Brucellosis. Uji laboratorium jika
memungkinkan apabila ditemui gejala klinis adanya Brucellosis, uji screening
seperti RBT perlu dilakukan pada ternak yang akan disembelih. Penanganan pada
ternak apabila terjadi abortus yaitu dengan (penguburan atau pembakaran)
plasenta dan fetus kemudian dilakukan desinfeksi area yang terkontaminasi
(Corbel, 2006).
Pengendalian Brucellosis pada hewan dapat dilakukan dengan langkah
vaksinasi Brucella hewan yang merupakan induk semang Brucellosis. Vaksin
yang digunakan pada Brucellosis di Indonesia saat ini adalah vaksin B. abortus
strain 19 (S19) dan RB51 (Handayani, 2013). Test and slaughter hewan yang
positif Brucella serta kontrol transportasi hewan ternak antar daerah untuk
mencegah penyebaran Brucella antar wilayah (Novita dkk, 2017). Vaksinasi
dilakukan pada daerah tertular dengan (prevalensi > 2%) sedangkan teknik potong
bersyarat atau test and slaughter dilakukan pada daerah tertular rendah (prevalensi
<2%) (Samkhan, 2014). Pemberantasan penyakit Brucellosis pada hewan
mengacu pada pengeliminasian agen penyebab dalam suatu wilayah agar tidak
terjadi penularan pada populasi hewan atau manusia yang berada di sekitarnya
(Corbel, 2006)

20
Pencegahan dan pengendalian Brucellosis pada manusia dapat dilakukan
dengan menjaga kebersihan peternakan sebagai lingkungan kerja, melindungi dan
menjaga kebersihan diri apabila akan atau setelah bersentuhan dengan hewan
yang menderita atau diduga menderita Brucellosis. Melakukan sanitasi kandang
yang baik, pengawasan transportasi terhadap ternak pembawa Brucellosis,
kebersihan tempat pengolahan daging, keamanan pekerja laboratorium yang
bersentuhan langsung dengan bakteri Brucella, penanganan produk asal hewan
dan tingkat edukasi Brucellosis kepada masyarakat merupakan hal yang penting
dilakukan dalam upaya pencegahan Brucellosis pada manusia. Pemberantasan
Brucellosis pada manusia dapat dilakukan dengan pengobatan utamanya dengan
penggunaan antibiotika (Corbel,2016).

BAB 3 MATERI DAN METODE
3.1 Rancangan Penelitian
Rancangan penelitian ini menggunakan metode deskriptif dengan
pendekatan kuantitatif yang bertujuan menjelaskan situasi yang hendak diteliti
dengan dukungan kepustakaan sehingga lebih memperkuat analisa peneliti dalam
membuat kesimpulan ada tidaknya antibodi Brucella abortus menggunakan
metode Rose Bengal Test (RBT) dan uji konfirmasi yang lebih spesifik dengan
menggunakan metode Complement Fixation Test (CFT). Hasil penelitian akan
disajikan secara tertulis dan merupakan hasil perhitugan indikator-indikator
variabel penelitian (Margareta, 2013)
3.2 Sampel dan Besar sampel
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini berupa serum darah sapi
perah betina yang di ambil dari peternakan di Kecamatan Turen, Kabupaten
Malang. Besar sampel yang akan digunakan dihitung menggunakan rumus dari
Slovin dan sampel akan di ambil secara random/acak sederhana pada populasi
sapi perah betina di Kecamatan Turen dengan total populasi 351 ekor. Data
mengenai sampel di peroleh dari Dinas Peternakan dan Kesehatan Hewan
Kabupaten Malang serta peternak sapi perah di Kecamatan Turen. Perhitungan
besar sampel dengan rumus dari Slovin (Sujarweni dan Endrayanto, 2012)
dibawah ini :
n= N
1 + N (e)2
Keterangan:
n = Ukuran sampel/jumlah responden
21
22
N = Ukuran populasi
e = Persentase kesalahan (error) sebesar 10% = 0,1
n= 351
1 + 351 (0,1)2
n = 351
4,51
n = 77,8 / 78
Jadi total sampel yang digunakan adalah 78 sampel serum darah sapi perah
betina di Kecamatan Turen, Kabupaten Malang. Proporsi jumlah pengambilan
sampel pada tiap desa dihitung menggunakan rumus perbandingan, yaitu :
Total sampel tiap desa x Ukuran sampel

Ukuran populasi
3.3 Definisi Operasional Variabel
1. Serum darah sampel dalam penelitian ini berasal dari sapi perah betina di
2. Keberadaan antibodi Brucella abortus dapat diketahui dengan melakukan
uji screening test menggunakan metode Rose Bengal Test (RBT) (Kartini
dkk, 2017)
3. Prinsip uji RBT adalah mereaksikan antibodi dalam serum darah dengan
antigen RBT (PUSVETMA) D.06121530 yang akan dilihat apakah
menimbulkan reaksi aglutinasi (Albert et al., 2018).
4. Uji konfirmasi yang lebih spesifik dilakukan dengan metode Complement
Fixation Test (CFT) dengan melihat reaksi ikatan komplemen, sehingga
hasil uji dapat menjadi diagnosis akhir Brucellosis (Corbel, 2006).

23
3.4 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian dilakukan di peternakan sapi perah di Kecamatan Turen,
Kabupaten Malang sebagai tempat pengambilan sampel darah. Uji serologi
dengan metode Rose Bengal Test (RBT) sebagai screening test adanya antibodi
Brucella abortus pada sampel darah sapi perah betina dilakukan di UPTD Pusat
Kesehatan Hewan Turen (Puskeswan Turen). Hasil uji RBT yang menunjukkan
positif selanjutnya dilakukan uji konfirmasi dengan metode Complement Fixation
Test (CFT) yang dilakukan di Balai Besar Veteriner Denpasar. Penelitian ini
dilaksanakan pada bulan November hingga Desember 2019.
3.5 Bahan dan Alat Penelitian
Alat yang digunakan untuk uji metode Rose Bengal Test (RBT) adalah
tabung vakutainer non EDTA 5 ml (sebagai tempat penampungan sampel darah),
jarum venoject 21 G, disposable syringe 1 ml, Rose Bengal Test Plate, mikropipet,
yellow tip, mikrotube, kertas label, board marker, cool box, ice gell. Uji
Complement Fixation Test (CFT) membutuhkan alat inkubator, refrigerator, bak
pemanas, microshaker, erlenmeyer, plate WHO 80 lubang, plate mikrotiter
bentuk U 96 lubang, multichenel pipet, single pipet dan tip.
Bahan yang digunakan pada uji Rose Bengal Test (RBT) adalah sampel
serum darah sapi perah betina, kapas, alkohol, antigen RBT (PUSVETMA)
D.06121530, serum kontrol positif dan kontrol negatif (PUSVETMA). Uji
Complement Fixation Test (CFT) membutuhkan serum positif hasil uji RBT,
serum kontrol positif dan kontrol negatif, CFT buffer, antigen (Ag), komplemen,
hemolisin, eritrosit domba 3%.

24
3.6 Prosedur Penelitian
3.6.1 Cara Pengambilan Sampel
Pengambilan sampel darah dilakukan selama tiga hari dengan besaran 78
sampel serum darah sapi perah betina yang diambil dari peternakan di Kecamatan
Turen, Kabupaten Malang. Sampel darah diambil dari vena coccygealis dengan
menggunakan jarum venoject 21 G sebanyak 3 ml dan ditampung dalam tabung
vakutainer non EDTA 5 ml. Apabila serum darah sudah keluar langsung dapat
diambil untuk dilakukan uji Rose Bengal Test (RBT). Pengoleksian serum sampel
dapat dilakukan dengan pendiaman selama satu malam pada suhu ruang agar
terjadi proses koagulasi atau pembekuan darah. Pada hari berikutnya serum di
koleksi dari bekuan darah untuk dipindahkan pada mikrotube dan disimpan dalam
suhu -20°C hingga digunakan (Wassie, 2019).
3.6.2 Metode Rose Bengal Test (RBT)
Prinsip langkah uji Rose Bengal Test adalah dengan mereaksikan antara
sampel serum, dengan antigen RBT yang berasal dari antigen Brucella yang
memiliki koloni smooth diwarnai dengan Rose Bengal dilarutkan dalam larutan
penyangga pH rendah 3,65. Langkah pertama ambil 25 μl sampel serum
menggunakan mikropipet dan letakkan pada Rose Bengal Plate. Kocok terlebih
dahulu botol antigen RBT sebelum digunakan, lalu ambil 25 μl dan letakkan pada
titik serum. Homogenkan campuran serum dan antigen dengan cara
mengoyangkan Rose Bengal Plate selama 4 menit, kemudian baca hasil test
apakah menunjukkan aglutinasi atau tidak (OIE, 2018).

25
Hasil uji positif RBT dikategorikan menjadi 3 yaitu positif 3 (+++) yang
menandakan aglutinasi sempurna cairan jernih dan tampak jelas. Positif 2 (++)
yang menandakan aglutinasi berupa pasir halus dengan cairan agak jernih dan
batas jelas. Positif 1 (+) yang menandakan aglutinasi berupa pasir halus cairan
tidak jernih dan batas tidak jelas (OIE, 2009). Hasil uji yang menunjukkan positif
1 (+), 2 (++) maupun 3 (+++) akan dilanjut uji konfirmasi menggunakan metode
Complement Fixation Test (CFT). Kategori positif uji RBT dapat dilihat pada
gambar 3.1
1. 2. 3. 4.
Gambar 3.1 Contoh kategori hasil uji Rose Bengal Test (RBT). (1) hasil negatif
(2) hasil positif (+), (3) hasil positif (++) dan (4) hasil positif (+++)
(Corbel, 2006).
3.6.3 Metode Complement Fixation Test (CFT)
Prinsip uji Complement Fixation Test (CFT) adalah dengan melihat reaksi
ikatan komplemen (Corbel, 2006). Uji CFT sendiri menjadi test konfirmasi
terhadap Brucellosis yang banyak digunakan karena memiliki tingkat spesifisitas
yang tinggi (OIE, 2018). Sebelum pelaksanaan uji CFT terlebih dahulu dilakukan
persiapan seperti mempersiapkan suspensi sel darah domba, melakukan titrasi
hemolisin, pembuatan suspensi sel darah domba 3 %, pembuatan Hemolitik
Sistem dan titrasi Komplemen. Titrasi hemolisin dan titrasi komplemen dilakukan
untuk mengetahui titer dari kedua bahan tersebut. Selain itu juga dilakukan uji
komplementer untuk mengkonfirmasi daya antikomplemen yang ditimbulkan

26
antigen atau antibodi yang nanti dapat mempengaruhi hasil CFT (Ernawati dkk.,
2017). Uji CFT dapat dilakukan dengan dua metode yaitu metode tabung atau
metode mikro. Pada penelitian ini uji CFT dilakukan dengan metode mikro
(Gambar 3.2).
Kontrol Kontrol Sampel
positif negatif serum
Anti Complement
1/4
1/8
1/16
Titer
1/32
antibodi
1/64
1/128
Gambar 3.2 Contoh uji CFT menggunakan metode mikro (Handayani, 2013)
Uji CFT dilakukan dengan dua tahap, pertama antigen Brucella dan
sampel serum dicampur bersama komplemen. Jika sampel serum mengandung
antibodi terhadap Brucella maka komplemen akan mengikat antigen-antibodi
tersebut, sehingga pada reaksi selanjutnya (tahap kedua) komplemen tidak dapat
mengikat indikator sel darah domba yang telah direaksikan dengan hemolisin
(hemolitik sistem). Jika seluruh komplemen telah terikat pada tahap pertama maka
tidak akan terjadi hemolisis. Hal ini menunjukkan bahwa serum mengandung atau
positif antibodi Brucella. Sebaliknya jika terjadi hemolisis berarti serum tersebut
tidak mengandung atau negatif antibodi Brucella.

27
3.6.4 Diagram Alir Penelitian
78 sampel serum darah sapi

perah betina
Data pendukung (kuisoner)

Uji Rose bengal Test (RBT) berisi keterangan desa dan
identitas sapi
Hasil positif Hasil negatif
Uji Complement Fixation

Test (CFT) Analisa Data
3.7 Pengumpulan Data
Pengumpulan data dalam penelitian ini merupakan hasil pemeriksaan ada
tidaknya antibodi Brucella pada sapi perah betina di Kecamatan Turen, Kabupaten
Malang dengan metode Rose Bengal Test (RBT) dan uji konfirmasi yang lebih
spesifik dengan menggunakan metode Complement Fixation Test (CFT). Data
yang disajikan berupa hasil uji positif dan negatif dari sampel yang di teliti.
Informasi data juga di dukung dengan kuisoner berisi keterangan desa serta
identitas sapi (asal sapi, kode sapi, umur, riwayat penyakit, riwayat vaksinasi)

28
3.8 Analisis Data
Penyajian data dalam penelitian ini dilakukan secara diskriptif dengan
menghitung jumlah positif hasil akhir uji RBT dan CFT dari total sampel yang
diteliti kemudian dikalikan 100%. Data hasil penelitian disajikan dalam bentuk
kolom bagan, tabel dan grafik lingkaran yang menunjukkan jumlah dan persentase
hasil positif Brucellosis (Wahyuni, 2015).

BAB 4 HASIL PENELITIAN
Hasil uji Brucellosis pada 78 sampel serum darah sapi perah betina di
Kecamatan Turen, Kabupaten Malang yang diuji menggunakan metode Rose
Bengal Test (RBT) sebagai screening test dan dikonfirmasi menggunakan metode
Complement Fixation Test (CFT) menunjukkan hasil positif Brucellosis pada 9
sampel uji (Tabel 4.1).
Tabel 4.1 Hasil positif Brucellosis di Kecaamatan Turen, Kabupaten Malang.

No. Desa Nomor Kode Sampel
1. Kemulan 40, 41, 43
2. Sawahan 2, 4, 15, 18, 19
3. Tanggung 24
Sampel uji diambil dari 10 desa di 11 peternakan, yang tiap desanya
mendapatkan proporsi pengambilan sampel berbeda tergantung pada total sampel
di masing-masing desa. Data total sampel yang diambil di Kecamatan Turen,
Kabupaten Malang dapat dilihat pada gambar 4.1
Jumlah Sampel di Kecamatan Turen

25 22
21
19
20
15
10
3 4
5 2 1 2 1 2 2 1 2 1
1 1 1 1 1 1
0
Jumlah sampel tiap desa Jumlah peternakan tiap desa
Gambar 4.1 Jumlah sampel yang diambil dari 10 desa di 11 peternakan di

Kecamatan Turen, Kabupaten Malang
29
30
Pada 78 sampel yang di uji RBT menunjukkan hasil positif pada 10
sampel yang ditandai dengan terjadinya aglutinasi. Hasil positif uji RBT
kemudian di uji konfirmasi menggunakan metode CFT dan menunjukkan hasil
positif pada 9 sampel yang dicirikan dengan tidak terjadinya hemolisis atau terjadi
hemolisis tidak sempurna dengan adanya endapan eritrosit di dasar sumur (Kartini
dkk., 2017). Hasil uji konfirmasi dengan metode CFT ini menjadi penentu
diagnosis akhir Brucellosis (Corbel, 2006). Persentase kejadian Brucellosis pada
sapi perah betina di Kecamatan Turen, Kabupaten Malang yaitu sebesar 11,5%.
4.1 Hasil uji Rose Bengal Test (RBT)
Hasil uji RBT positif ditemukan di desa Kemulan sebanyak tiga sampel
kode nomor 40, 41 dan 43. Desa Sawahan lima sampel positif kode nomor 2, 4,
15, 18 dan 19 serta Desa Tanggung dua sampel positif kode nomor 24 dan 35.
Pada gambar 4.2 dapat dilihat hasil positif dan negatif uji RBT.
Hasil Positif dan Negatif uji RBT

20
20
18 16 16
16
Jumlah Sampel
14
12
10
8
5
6 4
3 3
4 2 2 2 2 2
1
2 0 0 0 0 0 0 0
0
Kemul Sawah Undaa Gedok Gedok Tangg Jeru Tump Sanan Paged
an an n Kulon Wetan ung ukrent Rejo angan
eng
Negatif 16 16 2 3 2 20 1 4 2 2
Positif 3 5 0 0 0 2 0 0 0 0
Gambar 4.2 Hasil positif dan negatif uji RBT pada sapi perah betina di

31
Penetapan hasil positif Brucella didasarkan pada hasil uji sampel yang
menunjukkan terjadinya aglutinasi yang jelas (OIE, 2018). Hasil sampel positif
pada penelitian ini menunjukkan 7 sampel positif 3 (+++) yang ditandai dengan
adanya aglutinasi sempurna cairan jernih dan tampak jelas, dan 3 sampel positif 2
(++) yang ditunjukkan dengan adanya aglutinasi berupa pasir halus dengan cairan
agak jernih dan batas jelas.
4.2 Hasil uji Complement Fixation Test (CFT)
Hasil positif uji RBT kemudian dilakukan uji lanjutan berupa uji
konfirmasi menggunakan metode CFT di Balai Besar Veteriner Denpasar (BBVet
Denpasar). Hasil uji CFT menunjukkan hasil satu sampel negatif yaitu kode
sampel nomor 35 dan sembilan sampel lainnya kode sampel nomor 2, 4, 15, 18,
19, 24, 40, 41 dan 43 positif. Pada gambar 4.3 dapat dilihat hasil uji CFT.
Sampel serum
Anti complement
1/4
1/8
1/16
1/32
1/64
1/128
Titer
antibodi
Kontrol
Negatif dan Positif
2 4 15 18 19 24 35 40 41 43 -
Gambar 4.3 Hasil uji CFT pada sapi perah betina di Kecamatan Turen,
Kabupaten Malang.
Hasil titrasi CFT dibaca mulai dari lubang baris ketiga atau titer ¼ hingga
sampai lubang keberapa masih menunjukkan tidak terjadinya hemolisis sempurna
atau reaksi negatif. Pada sampel uji negatif kode sampel nomor 35 tidak
menunjukkan hasil titer sedangkan pada sampel uji positif kode sampel nomor 2,

32
4, 15, 18, 24, 40 dan 41 menunjukkan titer 1/128, kode sampel nomor 19
menunjukkan titer 1/32 dan kode sampel nomor 43 menunjukkan titer 1/64.
4.3 Persentase Brucellosis
Persentase Brucellosis pada sapi perah betina di Kecamatan Turen,
Kabupaten Malang yang telah diteliti menggunakan metode RBT sebagai
screening test dan uji konfirmasi menggunakan metode CFT mendapatkan hasil
persentase Brucellosis 11,5% atau sembilan sampel positif dari total 78 sampel
yang telah diambil. Dibawah ini dapat dilihat hasil persentase Brucellosis pada
sapi perah betina di Kecamatan Turen, Kabupaten Malang (Gambar 4.4)
Hasil Persentase Brucellosis
11,5%
Negatif
Positif
89,5%
Gambar 4.4 Hasil Persentase Brucellosis pada sapi perah betina di Kecamatan
Turen, Kabupaten Malang.

BAB 5 PEMBAHASAN
Uji Rose Bengal Test (RBT) dan uji Complement Fixation Test (CFT)
merupakan uji resmi yang saat ini digunakan untuk diagnosis serologis
Brucellosis (Gurbilek et al., 2016). Rose Bengal Test (RBT) merupakan pengujian
awal Brucellosis yang memiliki prinsip aglutinasi antara antigen dan antibodi
(Kartini dkk., 2017). Pada uji RBT digunakan suspensi antigen Brucella yang
memiliki koloni smooth diwarnai dengan Rose Bengal dan larutan penyangga pH
3,65. Pada pH netral, test ini dapat menggukur persentase IgM, IgG1 dan IgG2,
namun pada pH rendah 3,65 Rose Bengal Test (RBT) akan mencegah terjadinya
aglutinasi dengan IgM dan hanya mengukur IgG1 (Kaltungo et al., 2014).
Hasil uji positif RBT ditunjukkan dengan adanya aglutinasi berupa
bentukan pasir dan apabila tidak ditemukan aglutinasi yang jelas maka dianggap
sebagai hasil negatif (Albert et al., 2018). Uji RBT memiliki sensitifitas uji yang
tinggi (Kaltungo et al., 2014) atau merupakan uji yang dapat mendeteksi adanya
positif Brucellosis (Ghurafa dkk., 2019). Hasil positif uji RBT kemudian
dilakukan uji CFT yang merupakan test konfirmasi Brucellosis yang memiliki
tingkat spesifisitas uji tinggi (OIE, 2018). Spesifisitas merupakan kemampuan uji
untuk mendeteksi adanya negatif Brucellosis. Penggunaan uji RBT yang memiliki
sensitifitas tinggi dengan uji CFT yang memiliki spesifisitas tinggi cukup ideal
sebagai diagnosis Brucelosis (Ghurafa dkk., 2019).
Uji CFT memiliki prinsip uji pengikatan komplemen yang digunakan
untuk mengetahui keberadaan antibodi dengan mengukur titer antibodi (OIE,
2018). Metode uji CFT ini melihat reaksi ikatan komplemen dengan antigen dan
33
34
antibodi yang hasilnya dapat diketahui dengan penambahan eritrosit domba dan
hemolisin (hemolitik sistem) (Poester et al., 2010). Pada uji CFT IgM akan
mengalami inaktivasi pada suhu 56-580C selama 30 menit (Kaltungo et al., 2014)
sehingga hanya IgG1 yang diukur dan membuat spesifisitas uji sangat tinggi
(Nielsen and Yu, 2010). Hasil penelitian Brucellosis pada sapi perah betina di
Kecamatan Turen dengan uji CFT menunjukkan satu sampel negatif dan sembilan
sampel positif. Menurut Kartini dkk., (2017) reaksi negatif uji CFT ditunjukkan
dengan terjadinya hemolisis dan reaksi positif dengan adanya endapan eritrosit di
dasar sumur plate uji. Hasil uji konfirmasi dengan metode CFT ini menjadi
penentu diagnosis akhir Brucellosis (Corbel, 2006).
Persentase Brucellosis pada sapi perah betina di Kecamatan Turen,
Kabupaten Malang yaitu sebesar 11,5% atau 9 sampel positif dari 78 sampel uji.
Menurut SK Menteri Pertanian No 828 tahun 1998 mengenai pelaksanaan
operasional pemberantasan Brucellosis, pada daerah tertular (>2%) yaitu dengan
dilakukannya program vaksinasi Brucella (Samkahn, 2014). Vaksin yang
digunakan untuk pemberantasan Brucellosis di Indonesia adalah vaksin B. abortus
strain 19 (S19) dan RB51 (Handayani, 2013). Pemerintah saat ini memfokuskan
pemakaian vaksin RB51, hal ini dikarenakan penggunaan vaksin B.abortus S19
dapat menimbulkan infeksi laten dan titer antibodi berkepanjangan sehingga dapat
mengacaukan diagnosis serologis terhadap Brucellosis (Azizah, 2014). Kesalahan
respon serologi ini terjadi karena vaksin S19 yang merupakan strain halus
mengekspresikan rantai sisi O sehingga dapat menginduksi terbentuknya antibodi
terhadap antigen pada rantai sisi O. Berbeda dengan vaksin RB51 yang

35
merupakan strain kasar vaksin ini tidak dapat terdeteksi dengan uji serologi
Brucellosis dikarenakan memiliki ekspresi minimal pada rantai sisi O
lipopolysaccharida sehingga tidak dapat menginduksi respon antibodi (Olsen and
Tatum, 2010).
Respon imun humoral terhadap infeksi Brucella didominasi oleh antibodi
terhadap smooth lipopolysaccharida (S-LPS) yang berasal dari bakteri Brucella.
Respon antibodi menunjukkan perubahan IgM/IgG setelah terjadinya infeksi
(Chenais et al., 2012). Antibodi IgM muncul saat awal infeksi atau antibodi yang
tersisa setelah dilakukannya vaksinasi (Levieux, 1978). Antibodi IgG muncul
setelah infeksi awal berakhir yang dipicu oleh protein sitoplasma dari Brucella
yang tidak dapat difagosit oleh makrofag sehingga bakteri tetap berada di dalam
tubuh atau jaringan dan melakukan perkembangbiakan secara intraseluler (Elfaki
et al., 2015). Reaksi positif palsu juga dapat terjadi karena S-LPS pada bakteri
Brucella bereaksi silang dengan S-LPS bakteri lain seperti Escherichia coli 0:157
dan 0:116, Yersinia enterocolitica 0:9, Bordetella, Salmonella atau Pasteurella
(Chenais et al., 2012 ; Astarina dkk., 2016)
Kasus Brucellosis di Jawa Timur pernah diteliti ditemukan di beberapa
daerah, seperti di Kabupaten Sidoarjo ditemukan di RPH Krian sebesar 1,4 % atau
lima sampel positif dari total 360 sampel uji (Azizah, 2014). Pada tahun 2013 di
Desa Kerjen, Kecamatan Srengat, Kabupaten Blitar ditemukan sapi perah yang
diduga positif Brucellosis sebesar 10% yaitu sebanyak dua sampel dari 20 sampel
uji (Abdulghoffar, 2013). Faktor risiko yang dapat menjadi penyebab terjadinya
Brucellosis pada sapi seperti kepadatan populasi, lalu lintas ternak, cara

36
pemeliharaan dan umur sapi (Astari, 2016). Penularan antar ternak dalam satu
peternakan, penjualan ternak yang mengalami abortus akibat brucellosis juga
merupakan faktor risiko penyebaran (Kristiyanti dan Apriliana, 2018).
Faktor yang menjadi risiko penyebaran Brucellosis pada sapi perah betina
di Kecamatan Turen, Kabupaten Malang yaitu akibat kepadatan populasi dalam
peternakan, pengabungan ternak yang sedang bunting tua dengan ternak lainnya
serta pembelian ternak dari daerah yang pernah di laporkan dan ditemukan kasus
Brucellosis seperti Kecamatan Pujon. Kasus Brucellosis di Kecamatan Pujon
pernah ditemukan di KUD SAE Pujon menginfeksi 6 ekor sapi perah dan menjadi
kasus pertama kali Brucellosis di Jawa Timur (Disnak Jatim, 2008). Pada tahun
2015 pernah dilaporkan terjadinya abortus pada 3 ekor sapi di Desa Ngabab
Kecamatan Pujon (Rachmawan, 2015).
Tindakan pemberantasan selain vaksinasi dan test and slaughter juga perlu
dilakukan desinfeksi kandang tertular, edukasi dari Dinas Peternakan dan
Kesehatan Hewan Kabupaten Malang melalui sosialisasi dan workshop kepada
peternak tentang manajemen good breeding practises termasuk hygiene sanitasi
(baik keadaan kandang, kesehatan dan kebersihan ternak, kebersihan pemerah
atau peternak sapi), peningkatan biosekuriti dan biosafety serta pelaporan kasus
keguguran pada sapi sesegera mungkin. Selain itu pembelian ternak juga perlu
disertai SKKH (Kristiyanti dan Apriliana, 2018).

BAB 6 KESIMPULAN
6.1 Kesimpulan Penelitian
1. Antibodi Brucella pada sapi perah betina di Kecamatan Turen Kabupaten
Malang yang diuji dengan metode Rose Bengal Test (RBT) ditemukan 10
sampel uji positif.
2. Persentase ternak sapi perah betina Brucellosis di Kecamatan Turen
Kabupaten Malang yang diuji menggunakan metode Rose Bengal Test (RBT)
sebagai screening test dan Complement Fixation Test (CFT) sebagai uji
konfirmasi didapatkan hasil sebesar 11,5% atau 9 sampel positif dari total 78
sampel.
6.2 Saran
1. Hasil penelitian ini dapat digunakan oleh Pemerintah Kabupaten Malang dan
Dinas terkait sebagai acuan langkah pemberantasan Brucellosis di wilayah
Kabupaten Malang.
2. Lebih lanjut juga perlu dilakukan diagnosis secara pasti agen penyebab
Brucella seperti uji molekuler dengan metode Polymerase Chain Reaction
(PCR) dan uji isolasi identifikasi bakteri sesuai dengan Gold Standart uji
Brucellosis.
37
38
DAFTAR PUSTAKA
Abdulghoffar, A. 2013. Deteksi Dini Reaktor Brucellosis Pada Sapi Perah Di

Desa Kerjen Kecamatan Srengat Kabupaten Blitar Dengan Rose Bengal
Test (Doctoral Dissertation, Universitas Airlangga).
Actor, J. K. 2014. Introductory Immunology: Basic Concepts for Interdisciplinary

Applications. Chapter 12 - Assessment of Immune Parameters and
Immunodiagnostics. Academic Press. 135-152
Adone, R., Francia, M. and Ciuchini, F. 2008. Brucella melitensis B115‐based

complement fixation test to detect antibodies induced by Brucella rough
strains. Journal of applied microbiology, 105(2), 567-574.
Albert, I. P., Kato, C. D. Ikwap, K. Kakooza, S. Ngolobe, B. Ndoboli, D. and

Tumwine, G. 2018. Comparison of rose bengal plate test, serum
agglutination test, and indirect enzyme-linked immunosorbent assay in
brucellosis detection for human and goat samples. International Journal of
One Health. Vol.4/6, 35-39.
Allan, G. S., Chappel, R. J. Williamson, P. and McNaught, D. J. 1976. A

quantitative comparison of the sensitivity of serological tests for bovine
brucellosis to different antibody classes. Epidemiology & Infection, 76(2),
287-298.
Asaad, A. M. and Alqahtani, J. M. 2012. Serological and molecular diagnosis of

human brucellosis in Najran, Southwestern Saudi Arabia. Journal of
infection and public health, 5(2), 189-194.
Astari, N. K, 2016. Seroprevalensi Dan Faktor Risiko Brucellosis Pada Sapi Di

Kabupaten Pinrang Dan Enrekang, Provinsi Sulawesi Selatan (Doctoral
dissertation, Universitas Udayana).
Astarina, D. K. Pribadi, E. S. and Pasaribu, F. H. 2016. Penggunaan Imunostik

sebagai Uji Serologi untuk Deteksi Brucella abortus pada Sapi
(Application Immunostick Assay For Serological Test Brucella Abortus In
Bovine). Jurnal Veteriner, 19(2), 169-176.
Azizah, L. N. 2014. Deteksi Antibodi Brucellosis Pada Sapi Yang Dipotong Di

Rph Krian Kabupaten Sidoarjo Dengan Rose Bengal Test (Rbt) (Doctoral
Dissertation, Universitas Airlangga).
Azzahrawani, N., Martalina, E. Herman, S. and Adillah, A. 2018. AEVI-2

Investigasi Outbreak Bovine Bruselosis di Pulau Bengkalis Tahun
2018. Hemera Zoa. 390-392.

39
Balai Besar Penelitian Veteriner (BB Litvet). 2016. Laporan Bulanan September
2016. Bogor.
Balai Besar Veteriner (BBVet) Wates. 2018. Isi Peta Penyakit Hewan.
Yogyakarta.
Banai, M. and Corbel, M. 2010. Taxonomy of Brucella. The Open Veterinary

Science Journal, 4(1), 85-101.
Basri, C. and Sumiarto, B. 2017. Taksiran Kerugian Ekonomi Penyakit Kluron

Menular (Brucellosis) pada Populasi Ternak di Indonesia. Jurnal
Veteriner, 18(4), 547-556.
Chenais, E., Bagge, E. Thisted Lambertz, S., and Artursson, K. 2012. Yersinia
enterocolitica serotype O: 9 cultured from Swedish sheep showing
serologically false-positive reactions for Brucella melitensis. Infection
ecology & epidemiology, 2(1), 19027.
Corbel, M. J. 2006. Brucellosis in Human and animal. World Health Organization

Press. Geneva.
Dinas Peternakan dan Kesehatan Hewan Kabupaten Malang (Disnak and Keswan
Kab. Malang). 2019. Rekap Populasi Ternak Per Wilayah (Ekor).
Dinas Peternakan Provinsi Jawa Timur (Disnak Jatim). 2008. Jawa Timur awasi
dan kendalikan penyakit Hewan. https://disnak.jatimprov.go.id/web/berita
utama/read/66/jawa-timur-awasi-dan-kendalikan-penyakit-hewan.[28 Sept
ember 2019]
Direktorat Jenderal Peternakan dan Kesehatan Hewan (Ditjenpkh). 2018. Statistik

Peternakan dan Kesehatan Hewan. Jakarta : Kementan RI.
Dorneles, E. M., Lima, G. K., Teixeira-Carvalho, A., Araújo, M. S., Martins-

Filho, O. A., Sriranganathan, N., ... and Lage, A. P. 2015. Immune
response of calves vaccinated with Brucella abortus S19 or RB51 and
revaccinated with RB51. PloS one, 10(9).
Dwi, W. K., Tyasningsih, W., Praja, R. N., Hamid, I. S., Sarudji, S and Purnama,
M. T. E. 2018. Deteksi Antibodi Brucella pada Sapi Perah di Kecamatan
Purwoharjo Kabupaten Banyuwangi dengan Metode Rose Bengal Test
(RBT). Jurnal Medik Veteriner, 1(3), 142-147.
Eini, P., Keramat, F., and Hasanzadehhoseinabadi, M. 2012. Epidemiologic,

clinical and laboratory findings of patients with brucellosis in Hamadan,
west of Iran. Journal of research in health sciences, 12(2), 105-108.

40
Elfaki, M. G., Alaidan, A. A., and Al-Hokail, A. A. 2015. Host response to

Brucella infection: review and future perspective. The Journal of Infection
in Developing Countries, 9(07), 697-701.
Ernawati, R., Rahardjo A.P., Sianita N., Rahmahani J., Rantam F. A., Suwarno.
2017. Penuntun Praktikum Pemeriksaan Virologik Dan Serologik.
Laboratorium Virologi Dan Imunologi Departemen Mikrobiologi
Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.
Ficht, T. 2010. Brucella taxonomy and evolution. Future microbiology, 5(6), 859-
866.
Ghurafa, R., Lukman, D. W. and Latif, H. 2019. I Indirect Enzyme Linked

Immunosorbent Assay Sebagai Metode untuk Melacak Bruselosis pada
Sapi Perah (Indirect Enzyme Immunosorbent Assay (I-Elisa) As Method
For Detect Brucellosis In Dairy Cow). Jurnal Veteriner, 20(1), 30-37.
Golshani, M. and Buozari, S. 2017. A review of Brucellosis in Iran:

epidemiology, risk factors, diagnosis, control, and prevention. Iranian
biomedical journal, 21(6), 349.
Gurbilek, E. S., Tel, O. Y. and Keskin, O. 2017. Comparative evaluation of three

serological tests for the detection of Brucella antibodies from infected
cattle herds. Journal of applied animal research, 45(1), 557-559
Handayani, T. 2013. Pengembangan kandidat vaksin iradiasi Brucella abortus

isolat lapang. [Tesis]. Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.
Handayani, T., Noor, S. M. and Pasaribu, F. H. 2018. Isolasi Brucella abortus dari
cairan higroma dan susu. Arshi Veterinary Letters, 2(3), 55-56.
Kaltungo, B. Y., Saidu, S. N. A., Sackey, A. K. B. and Kazeem, H. M. 2014. A

review on diagnostic techniques for brucellosis. African Journal of
Biotechnology, 13(1).1-10.
Kartini, D., Noor, S. M. and Pasaribu, F. H. 2017. Deteksi Brucellosis pada Babi
secara Serologi dan Molekuler di Rumah Potong Hewan Kapuk, Jakarta
dan Ciroyom, Bandung. Acta Veterinaria Indonesiana, 5(2), 66-73.
Keputusan Menteri Pertanian (Kepmentan). 2013. Nomor 4026/Kpts./OT.140/3/

2013. Penetapan Jenis Penyakit Hewan Menular Strategis
Khairiyah, K. 2011. Zoonosis dan Upaya Pencegahannya (Kasus Sumatera

Utara). Jurnal Penelitian dan Pengembangan Pertanian, 30(3), 117-124.
Kusumawati, A., Wijaya, S. K., Husnaa, U., Rubiyana, Y. and Santoso, A. 2018.

41
Protein Rekombinan Outer Membrane Protein-31 dengan Superoxide

Dismutase pada Pichia Pastoris Berpotensi Sebagai Kandidat Vaksin
Brucellosis. Jurnal Veteriner, 19(3), 430-438.
Kristiyanti, F., dan Apriliana, U. I. 2018. AEVI-13 Investigasi Outbreak Bovine

Brucellosis di Desa Hargobinangun Kecamatan Pakem Kabupaten Sleman
Tahun 2017. Hemera Zoa. 426-428.
Levieux, D. 1978. Bovine Immunoglobulins and Brucellosis. 3. Activity of IgG1,

IgG2 and IgM Versus Different Commercial Batches of Rose Bengal
Antigen. Ann. Rech. Vet. 1978, 9 (3), 489-493.
Luwumba, D., Kusiluka, L. and Shirima, G. 2019. Occupational hazards

associated with human brucellosis in abattoir settings: A case study of
Dodoma abattoir in Tanzania. Vol. 11 (3), 73-80.
Margareta, S. 2013. Hubungan Pelaksanaan Sistem Kearsipan Dengan Efektivitas

Pengambilan Keputusan Pimpinan: Study deskriptif analisis kuantitatif di
Sub Bagian Kepegawaian dan Umum Lingkungan Kantor Dinas
Pendidikan Provinsi Jawa Barat (Doctoral dissertation, Universitas
Pendidikan Indonesia).
Martoenus, A. and Djatmikowati, T. F. 2015. Teknik Pengambilan Darah pada

Beberapa Hewan. Diagnosa Veteriner. Buletin Informasi Kesehatan
Hewan dan Kesehatan Masyarakat Veteriner. Vol 14 (1), 6-12.
Megid, J., Mathias, L. A. and Robles, C. 2010. Clinical manifestations of

brucellosis in domestic animals and humans. The Open Veterinary Science
Journal, 119-126.
Mukmin, Y. 1997. Diagnosa penyakit brucellosis pada sapi dengan teknik uji
pengikatan komplemen. Bogor. Balai Penelitian Veteriner. Lokakarya
Fungsional Non Peneliti. 198-202.
Nielsen,K and Yu, W. L. 2010.Serological diagnosis of brucellosis. Prilozi, 31(1),

65-89.
Neta, A. V. C., Mol, J. P., Xavier, M. N., Paixão, T. A., Lage, A. P. and Santos, R.
L. 2010. Pathogenesis of bovine brucellosis. The Veterinary
Journal, 184(2), 146-155.
Noor, S. M. 2006. Brucellosis: Penyakit Zoonosis yang belum banyak dikenal di

Indonesia. Wartazoa, 16(1), 31-39.
Novita, R., Hananto, M., Sembiring, M. M., Noor, S. M., Lilian, L. and Khairirie,
K. 2017. Seroprevalensi Dan Ancaman Brucella Abortus Pada Pekerja

42
Peternakan Sapi Perah Kecamatan Cilawu, Garut. Jurnal Kesehatan

Reproduksi, 7(3), 211-218.
Office International des Epizooties (OIE). 2009. Bovine Brucellosis. Manual of

Diagnostic Test and Vaccines for Terrestrial Animals. Paris. 4(3): 564–
567.
Office International des Epizooties (OIE). 2018. Brucellosis (Brucella abortus, B.

melitensis and B. suis) (Infection with Brucella abortus, B. melitensis and
B. suis). Chapter 3.1.4 : 355-398.
Olsen, S. and Tatum, F. 2010. Bovine brucellosis. Veterinary Clinics: Food

Animal Practice, 26(1), 15-27.
Panus, A., Eakkatat, M., Black, P., Indrayani, L., and Idris, S. 2018. FA-11
Seroprevalence and Risk Factors for Bovine Brucellosis in Daerah Khusus
Ibukota Jakarta Province, Indonesia. Hemera Zoa. 79-81.
Parthiban, S., Malmarugan, S., Murugan, M. S., Rajeswar, J. J., and Pothiappan,
P. 2015. Review on emerging and reemerging microbial causes in bovine
abortion. Int. J. Nut. and Food Sci, 4(4-1), 1-6.
Poester, P. F., Nielsen, K., Ernesto Samartino, L., and Ling Yu, W. 2010.
Diagnosis of brucellosis. The Open Veterinary Science Journal, 4(1), 46-
60
Poester, F. P., Samartino, L. E., and Santos, R. L. 2013. Pathogenesis and

pathobiology of brucellosis in livestock. Rev Sci Tech, 32(1), 105-15.
Praja, R. N., Handijatno, D., Koesdarto, S., and Yudhana, A. 2017. Karakterisasi
Protein VirB4 Brucella abortus Isolat Lokal dengan Teknik Sodium
Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis. Jurnal Veteriner,
18(3), 416-421.
Priyanka, B. N. S. and Kashyap, S. K. 2019. Bovine brucellosis: A review on

background information and perspective. Journal of Entomology and
Zoology Studies, 7(2): 607-613.
Putra, A. A. G. 2006. Situasi penyakit hewan menular strategis pada ruminansia

besar: Surveilans dan monitoring. Pros. Lokakarya Nasioanal Ketersediaan
IPTEK dalam Pengendalian Penyakit Strategis. Jakarta, 12, 31-49.
Rachmawan, W. R. 2015. Pengetahuan, sikap, dan praktik peternak sapi perah di

desa ngabab, kecamatan pujon kabupaten malang dalam pengendalian
bruselosis. [SKRIPSI]. Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian
Bogor.

43
Ratnasari, R., Handijatno, D., and Rantam, F. A. 2014. Determinan Antigen Gen
omp2a Brucella abortus Isolat Lokal. Acta Veterinaria Indonesiana , 2(1),
17-25.
Samkhan. 2014. Analisis ekonomi penyakit brucellosis dalam menyongsong

penanggulangan, pemberantasan dan pembebasan brucellosis di indonesia
tahun 2025. Balai Besar Veteriner Wates. Buletin Laboratorium Veteriner.
Artikel 1, 1-9.
Sudibyo, A. 1995. Studi Epidemiologi Brucellosis Dan Dampaknya Terhadap

Reproduksi Sapi Perah di DKI Jakarta. Bogor. Balai Penelitian Veteriner.
117-122.
Sujarweni, V. W. dan Endrayanto, P. 2012. Statistika untuk penelitian

. Yogyakarta: Graha Ilmu.
Wahyuni, S. 2015. Menyajikan Data Penelitian. Bagian Parasitologi Fakultas

Kedokteran Hewan Universitas Hasanuddin. Page 1-6.
Wassie, K. B. 2019. A Sero–Prevalence Study of Bovine Brucellosis. Ethiopia.

Internasional Journal Agriculture and Agribusiness.Vol 3(2), 219 – 226.
Zhen, Q., Lu, Y., Yuan, X., Qiu, Y., Xu, J., Li, W., and Chen, Z. 2013.
Asymptomatic brucellosis infection in humans: implications for diagnosis
and prevention. Clinical Microbiology and Infection, 19(9), E395-E397.

44
Lampiran 1. Data BBVet Wates kejadian Brucellosis di Provinsi DIY, Jawa

Tengah dan Jawa Timur

45
Lampiran 2. Data Ditjen PKH populasi sapi perah tahun 2014-2018
Populasi Sapi Perah Tahun 2014 – 2018
Dairy Cattle Population 2014 - 2018
(Ekor/Head)
Provinsi/ Tahun
No Provinces 2014 2015 2016 2017 2018
(1) (2) (3) (4) (5) (6) (7)
1 Aceh 90 62 58 50 54
2 Sumatera Utara 1.088 1.078 1.409 1.948 2.102
3 Sumatera Barat 674 849 891 830 884
4 Riau 143 140 132 92 96
5 Jambi 64 30 24 33 33
6 Sumatera Selatan 95 124 127 112 112
7 Bengkulu 190 189 114 244 324
8 Lampung 285 461 455 420 444
9 Kepulauan Bangka Belitung 147 161 193 223 223
10 Kepulauan Riau 6 7 7 8 8
11 DKI Jakarta 2.638 2.433 2.411 1.897 1.991
12 Jawa Barat 123.140 116.400 119.595 115.827 119.349
13 Jawa Tengah 122.566 134.670 137.334 138.560 134.721
14 DI. Yogyakarta 3.990 4.044 4.069 4.003 4.125
15 Jawa Timur 245.246 255.947 265.002 273.881 283.311
16 Banten 36 20 42 51 54
17 Bali 97 - - - -
18 Nusa Tenggara Barat - - - - -
19 Nusa Tenggara Timur 45 43 43 45 45
20 Kalimantan Barat 49 43 50 64 72
21 Kalimantan Tengah - - - - -

46
22 Kalimantan Selatan 232 228 221 218 224
23 Kalimantan Timur 77 79 97 107 117
24 Kalimantan Utara 2 1 1 2 2
25 Sulawesi Utara 88 77 64 62 47
26 Sulawesi Tengah 10 10 10 10 10
27 Sulawesi Selatan 1.464 1.515 1.529 1.696 1.731
28 Sulawesi Tenggara 9 12 19 35 39
29 Gorontalo 13 7 7 6 6
30 Sulawesi Barat 32 - - - -
31 Maluku - - - - -
32 Maluku Utara - - - - -
33 Papua Barat - - - - -
34 Papua - 19 16 17 17
INDONESIA 502.516 518.649 533.920 540.441 550.141

47
Lampiran 3. Data populasi sapi perah triwulan I tahun 2019 di Kabupaten

Malang

48
Lampiran 4. Data populasi sapi perah per desa di Kecamatan Turen,

Kabupaten Malang
No. Desa Jantan Betina
1. Kemulan 15 86
2. Sawahan 17 95
3. Undaan - 7
4. Tawang Rejeni - -
5. Gedok Kulon 4 13
6. Gedok Wetan 2 9
7. Talok - -
8. Sedayu - -
9. Tanggung 17 101
10. Turen - -
11. Jeru - 5
12. Kedok - -
13. Talang Suko - -
14. Tumpak Renteng 4 17
15. Sanan Kerto - -
16. Sanan Rejo 3 11
17. Pagedangan - 7
Total 62 351

49
Lampiran 5. Data pendukung berupa kuisoner hasil pendataan alamat dan

data identitas sapi perah
Identitas sapi
No. Alamat Asal Riwayat Status
Kode sapi Umur/th
/Desa sapi penyakit vaksin
K/K/1 3 th -
Kawin
K /K/2 3 th
berulang
Kawin
K /K/3 3 th
berulang
Kawin
K /K/4 3 th
berulang
K /K/5 3 th -
K /K 6 3 th -
K /K/7 2 th -
K /K/8 2 th -
K /K/9 3 th -
K /K/34 4 th -
1. Kemulan Pujon Vaksin
K /K/35 4 th -
RB 51
K /K/36 4 th -
K /K/37 5 th -
K /K/38 4 th -
K /K/39 4 th -
Kawin
K /K/40 4 th
berulang
Abortus
usia
K /K/41 4 th
kebuntingan
6 bulan
Kawin
K/K/42 3 th
berulang
Kawin
K/K/43 3 th
berulang
M/S/1 3 th -

50
Lahir umur
M /S/2 3 th
8 bulan
Kawin
M /S/3 3 th
berulang
Kawin
M /S/4 3 th
berulang
Kawin
M /S/5 4 th
berulang
M /S/6 4 th -
M /S/7 4 th -
M /S/8 2 th -
2. Sawahan Pujon Vaksin
M /S/15 3 th -
RB 51
M /S/16 3 th -
M /S/17 3 th -
M /S/18 3 th -
Lahir
M /S/19 3 th lemah, mati
usia 7 hari
Kawin
M /S/20 3 th
berulang
M /S/21 3 th -
Kawin
M /S/22 3 th
berualng
Kawin
M /S/23 3 th
berualng
Kawin
M /S/24 3 th
berualng
M /S/25 3 th -
M /S/26 3 th -
M /S/27 4 th -
3. Undaan Pujon I/U/1 4 th - Vaksin
I/U/5 4 th - RB 51
T/GK/1 5 th -
4. Gedok Pasuruan Vaksin
T/GK/2 6 th -
Kulon RB 51

51
& Pujon T/GK/3 4,5 th -

Kawin
P/GW/1 6 th
5. Gedok Pujon berulang Vaksin
Wetan Kawin RB 51
P/GW/9 6 th
berualng
S/T/1 4 th -
S /T/2 4 th -
S /T/3 4 th -
Kawin
S /T/4 2 th
berualng
Kawin
S /T/5 2 th
berulang
Kawin
S /T/6 2 th
berulang
S /T/21 3 th -
6. Tanggung Pujon Vaksin
S /T/22 3 th -
RB 51
S /T/23 3 th -
Abortus
usia
S /T/24 3 th
kebuntingan
5 bulan
S /T/31 3 th -
S /T/32 3 th -
S /T/33 4 th -
S /T/34 4 th -
S /T/35 3 th -
M/T/570 5 th -
Kawin
M/T/583 5 th
berulang
Kawin
M/T/584 3 th
berulang
Kawin
M/T/585 3 th
7. Tanggung Pujon berulang Vaksin
& Kawin RB 51
M/T/590 2,5 th
Ngantang berulang

52
Kawin
M/T/593 4 th
berulang
Kawin
M/T/594 4 th
berulang
Kawin Vaksin
8. Jeru Pujon N/J/5 4 th
berulang RB 51
N/TR/1 6 th -
9. Tumpak Pasur N/TR/5 5 th - Vaksin

Renteng uan N/TR/16 3 th - RB 51
N/TR/17 3 th -
10. Sanan Pujon M/SR/014 3,5 th - Vaksin

Rejo M/SR/001 2 th - RB 51
Kawin
M/P/1 4 th
11. Pagedang Pujon berulang Vaksin
an Kawin RB 51
M/P/2 3 th
berulang

53
Lampiran 6. Leaflet panduan penggunaan antigen RBT

54
Lampiran 7. Hasil positif uji Rose Bengal Test (RBT)

Pada gambar 1 di bawah ini dapat dilihat hasil uji positif RBT di desa
Kemulan, Kecamatan Turen.
Gambar 1. Hasil uji positif RBT Desa Kemulan, Kecamatan Turen.
Hasil uji RBT sampel serum darah sapi perah di desa Kemulan,
Kecamatan Turen ditemukan hasil positif pada kode sampel nomor 40, 41 dan 43.
Kode sampel nomor 40 dan 41 menunjukkan reaksi positif tiga dan kode sampel
nomor 43 menunjukkan reaksi positif dua. Gambar 2 dibawah ini merupakan hasil
uji positif RBT di desa Sawahan, Kecamatan Turen.
Gambar 2. Hasil uji positif RBT, Desa Sawahan, Kecamatan Turen.
Hasil uji RBT di desa Sawahan, Kecamatan Turen menunjukkan hasil
positif pada kode sampel nomor 2, 4, 15, 18 dan 19. Pada kode sampel nomor 2,
4, 15 dan 19 terjadi reaksi positif tiga, sedangkan kode sampel nomor 18
menunjukkan reaksi positif dua. Dibawah ini pada gambar 3 dapat dilihat hasil uji

55
positif RBT di desa Tanggung, Kecamatan Turen.
Gambar 3. Hasil uji positif RBT, Desa Tanggung, Kecamatan Turen.
Uji RBT pada sampel yang diambil di desa Tanggung Kecamatan Turen
menunjukkan hasil positif pada kode sampel nomor 24 dan 35. Pada kode sampel
nomor 24 terjadi reaksi positif tiga dan kode sampel nomor 35 menunjukkan
reaksi positif dua.

56
Lampiran 8. Prosedur uji Complement Fixation Test (CFT) BBVet Denpasar
I. Persiapan
1. Menyiapkan suspensi sel
Darah domba diambil dari vena jugularis atau coccygeal menggunakan
jarum venoject kemudian ditampung dalam tabung yang berisi
antikoagulan. Darah domba kemudian disimpan dalam kulkas 4°c selama 5
hari atau 7 hari. Setelah itu di hari ke 5 (jangan lebih 7 hari) darah domba
dicuci dengan CFT buffer. Caranya darah yang ada di tabung bagian cairan
bening disedot, dibuang, ditambah CFT buffer disentrifuse 3000 rpm 15
menit (dicuci 3 kali). Pencucian terakhir, cairan atas atau supernatan
dibuang dan endapan sel diperoleh.
2. Titrasi hemolisin
Hemolisin yang digunakan dalam uji CFT ini yaitu 1 : 800. Langkah
pertama yang dilakukan yaitu menyederhanakan hemolisin dengan cara
titrasi :
1 : 800 (disederhanakan)
0,1 : 80
0,01 : 8 (dibuat 16 cc maka dikalikan 2)
0,02 : 16 (jadi 20 mikron + 16 cc CFT buffer)
3. Pembuatan suspensi sel 3 %
Darah domba yang sudah disentrifuse kemudian dibuat suspensi 3%
dengan larutan CFT buffer (32,3 kali endapan sel), caranya :
32,3 cc CFT : 1,5 cc sel (agar efisien sama-sama di bagi 2)

57
16,15 cc CFT : 0,75 cc sel atau 750 µl (dicampur dan dimasukkan ke dalam
erlenmeyer) kemudian ditambahkan hemolisin.
4. Pembuatan Hemolitik Sistem
Sel yang telah didapatkan (16,15 + 0,75 = 16,9 cc) sedangkan hemolisin
16 cc maka sel dikurangi 0,9 cc agar menjadi 16 cc sel + 16 cc hemolisin.
Masukkan campuran sel dan hemolisin tersebut ke dalam erlenmeyer,
inkubasi selama 30 menit 37°C dan setiap 15 menit erlenmeyer digoyang-
goyangkan.
5. Titrasi Komplemen
Titrasi komplemen (serum dari darah marmut caranya : darah dari
marmut setelah mengeluarkan serum kemudian disentrifuse) di WHO plate
80 lubang (letakan plate diatas es/harus dingin setiap kerja komplemen)
A. 1 : 5 (100 µl komplemen : 400 µl CFT buffer)
B. 1 : 10 (200 µl CFT buffer + ambil 200 µl dari A)
C. 1 : 15 (200 µl CFT buffer + ambil 100 µl dari A)
D. 1 : 20 (200 µl CFT buffer + ambil 200 µl dari B)
E. 1 : 30 (200 µl CFT buffer + ambil 200 µl dari C)
F. 1 : 40 (200 µl CFT buffer + ambil 200 µl dari D, lalu buang 200 µl)
G. 1 : 60 (200 µl CFT buffer + ambil 200 µl dari E, lalu buang 200 µl)
Hasil titrasi kemudian di pindahkan ke plate mikrotiter bentuk U 96
lubang, tiap lubang berisi = 25 µl dari 1 : 5 dilubang 1A dan 1B + 50 µl
CFT + 25 µl sel
25 µl dari 1 : 10 dilubang 2A dan 2B + 50 µl CFT + 25 µl sel

58
Kontrol sel dilubang 8A dan 8B 75 µl CFT + 25 µl sel diseker selama
45 menit. Setelah dimicroshaker diamkan 15 menit, kemudian hasil dibaca
sampai pengenceran berapa tidak ada setel (darah berbentuk titik) atau cari
darah yang lisis (bening).
II. Pengujian
1. Masukkan serum yang akan diuji keplate, isi tiap lubang 50 µl dari lubang
1A serum untuk sampel no 1 sampai lubang 10 A serum untuk sampel no
10. Lubang 11 A isi dengan serum kontrol negatif dan lubang 12 B kontrol
serum positif. Tutup dengan plester kemudian masukkan ke dalam
waterbath selama 30 menit untuk inaktifasi (semua serum termasuk
kontrol positif dan negatif).
2. Tambahkan 25 µl CFT buffer pada lubang B1-B12 sampai lubang H1-H12
(lubang A1-A12 tidak ditambah CFT buffer).
3. Encerkan serum secara berseri, diambil dari lubang A1-12 ke B1-12
sampai ke lubang H1-12 (kocok sebanyak 3x, saat mengocok scorec
jangan ditekan penuh agar tidak ada gelembung udara) setelah di kocok 3x
dilubang H1-12, ambil 25 µl dan dibuang.
4. Tambahkan antigen yang tersedia yaitu, 1 : 100 disederhanakan

59
1 : 100 0,01 : 1 (dibuat 5cc maka x 5)
0,05 antigen : 5 cc CFT
50 µl antigen : 5 cc CFT (5 cc CFT masukkan ke tempat pencampuran
kemudian kurangi 50 µl CFT baru ditambahkan 50 µl antigen)
Ambil campuran antigen ini 25 µl masukkan ke lubang C1-12 sampai
lubang H1-12.
Pada lubang A1-12 dan B1-12 ditambahkan 25 µl CFT buffer (untuk
menyamakan volume)
5. Menambahkan komplemen dengan titer komplemen yang tersedia yaitu :
1 : 20 disederhanakan 1 : 20 0,1 : 2 (dibuat 4 cc maka x 2)
0,2 cc komplemen : 4 cc CFT buffer
200 µl komplemen : 4 cc CFT (4cc CFT masukkan ke tempat
pencampuran, kurangi 200 µl CFT
baru ditambah 200 µl komplemen)
Ambil campuran ini 25 µl masukkan ke semua lubang plate dari A sampai
H, kemudian masukkan dalam inkubator selama 30 menit.
6. Tambahkan ke semua lubang plate 25 µl hemolitik sistem, lalu di
microshaker selama 45 menit.
7. Hasil di mulai dari pengenceran tertigggi yang menunjukkan adanya
endapan merah dengan cairan disekitarnya berwarna jernih, menyerupai
kancing yang menandakan hasil positif. Hasil negatif bila campuran pada
lubang plat mikrotiter terlihat warna merah muda dan homogen karena
terjadi hemolisis sempurna dari sel darah domba.

60
Lampiran 9. Data hasil Pengujian Complement Fixation Test (CFT)

Brucellosis, Balai Besar Veteriner Denpasar

61
Lampiran 10. Dokumentasi Kegiatan Pengambilan Sampel
Kapas dan Alkohol Vakutainer non EDTA Jarum venoject 21 G
Mikrotube Cool box Ice gell
Gambar 1. Alat dan bahan yang digunakan dalam pengambilan sampel
Gambar 2. Pengambilan sampel pada vena coccygeal

62
Lampiran 11. Dokumentasi Kegiatan Uji Rose Bengal Test (RBT)
Rose Bengal Test Plate Yellow tip Mikropipet
Antigen RBT Serum sampel Serum kontrol (+) dan (-)
Gambar 1. Alat dan bahan yang digunakan dalam uji RBT
Gambar 2. Proses uji RBT

63
Lampiran 12. Dokumentasi Kegiatan Uji Complement Fixation Test (CFT)
Komplemen Hemolisin CFT Buffer
Eritrosit domba Bak pemanas Microshaker
Tip Plate mikrotiter
Gambar 1. Alat dan Bahan dalam uji CFT

64
Pemasukan serum Proses inaktifasi Proses pengenceran
Proses shaker Pembacaan hasil
Gambar 2. Proses uji CFT

Naskah Skripsi

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Naskah Skripsi

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

IR - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

DETEKSI BRUCELLOSIS PADA SAPI PERAH

PRODI KEDOKTERAN HEWAN KAMPUS BANYUWANGI

SKRIPSI DETEKSI BRUCELLOSIS PADA... IMBI KUSUMASTUTI

DETEKSI BRUCELLOSIS PADA SAPI PERAH BETINA

(Dr. Wiwiek Tyasningsih, drh.,M.Kes) (Ratih Novita Praja, drh., M.Si.)

Telah dinilai pada Seminar Hasil Penelitian

KOMISI PENILAI SEMINAR HASIL PENELITIAN

Ketua : Prof. Dr. Suwarno, drh., M.Si.

Telah diuji pada sidang skripsi

KOMISI PENGUJI SKRIPSI

Ketua : Prof. Dr. Suwarno, drh., M.Si.

Surabaya, 23 Mei 2020

Penelitian mengenai “Deteksi Brucellosis pada Sapi Perah Betina di

menjadi kendala utama dalam usaha pengembangan sektor peternakan di

Diagnosis klinis Brucellosis sendiri dapat dilakukan dengan beberapa metode

pada deteksi Brucellosis di Indonesia adalah metode RBT dan CFT.

Penelitian ini bertujuan untuk mendeteksi adanya antibodi Brucella pada

Kecamatan di Kabupaten Malang yang belum pernah dilaporkan ditemukan

menentukan diagnosis akhir atau besar persentase infeksi Brucellosis. Rancangan

dalam penelitian ini yaitu menggunakan metode deskriptif dengan pendekatan

kuantitatif yang bertujuan menjelaskan situasi yang hendak diteliti dengan

kemudian dilakukan screening test menggunakan metode RBT dengan melihat

menunjukkan 10 sampel positif dan dilanjut uji konfirmasi menggunakan metode

CFT dengan prinsip pengikatan komplemen yang digunakan untuk mengetahui

Kesimpulan hasil penelitian ini adalah ditemukannya antibodi Brucella

pada 10 sampel yang diuji menggunakan metode RBT. Besar persentase

hasil penelitian ini dapat menjadi acuan pemberantasan dan pengendalian

Brucellosis di Kecamatan Turen Kabupaten Malang serta dapat dilakukan uji

spesifik lebih lanjut.

Detection of Brucellosis in female dairy cattle in Turen District

The purpose of this research is to detect Brucellosis in female dairy cattle

Keywords : Brucellosis, Complement Fixation Test, Dairy cattle, Malang, Rose

UCAPAN TERIMA KASIH

peneliti dapat menyelesaikan penelitian yang berjudul Deteksi Brucellosis pada

Sapi Perah Betina di Kecamatan Turen, Kabupaten Malang dengan Metode

kesempatan ini penulis ingin menyampaikan terima kasih kepada :

Dekan Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Prof. Dr. Pudji

Srianto, drh., M.Kes. atas kesempatan mengikuti pendidikan di Fakultas

Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.

Dr. Wiwiek Tyasningsih. drh., M.Kes. selaku pembimbing utama, Ratih

membimbing, memotivasi dan membantu peneliti dalam melaksanakan penelitian

dan menyelesaikan tulisannya. Semoga beliau-beliau selalu diberikan kesehatan

dan limpahan rahmat atas kebaikannya.

dan masukan keilmuan untuk kebaikan penelitian ini.

Seluruh staf pengajar Fakultas Kedokteran Hewan PSDKU Universitas

Airlangga di Banyuwangi atas wawasan keilmuan selama mengikuti pendidikan

di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.

Segenap peternak sapi perah di Kecamatan Turen, drh. Wahyu dan

telah membantu memperlancar pendapatan data lapangan. Seluruh staf Balai

senantiasa mendukung, memberikan semangat dan mendoakan penulis semoga

Serta teman-teman Elephas angkatan 2016 FKH PSDKU UNAIR di Banyuwangi

Penulis menyadari bahwa masih terdapat kesalahan dan kekurangan pada

perkembangan ilmu pengetahuan di bidang kedokteran hewan.

Banyuwangi, 14 Februari 2020

HALAMAN SAMPUL DEPAN...............................................................................i

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

BAB III METODE PENELITIAN

3.6.1 Cara Pengambilan Sampel.........................................................24

BAB IV HASIL PENELITIAN.............................................................................29

2.1 Cara penularan beberapa strain Brucella dan hospesnya. ............................... 13

4.1 Hasil positif Brucellosis di Kecaamatan Turen, Kabupaten Malang. ............. 29

2.1 Hasil streak bakteri Brucella spp. .....................................................................8