Efficient Targeted Genome Modification in

Maize Using CRISPR/Cas9 System

Modifikasi Genom Target yang Efisien pada Jagung
Menggunakan Sistem CRISPR / Cas9

Pengantar
Sistem CRIPSR / Cas9 untuk melakukan modifikasi
genom yang ditargetkan dalam jagung.
Gen penanda Zmzb7 berhasil dimutasi, dan tanaman
mutan menunjukkan fenotipe yang diharapkan
diperoleh.
Kami memberikan bukti bahwa sistem CRISPR / Cas9
penargetan gen yang dimediasi di daerah
heterokromatik tidak memiliki perbedaan yang jelas
dibandingkan dengan di daerah ekromatik.

Latar Belakang
Memperbaiki sifat tanaman dengan mengedit gen
penyebab sifat tersebut secara spesifik
Genome editing, "Modifikasi bertarget", prinsip
dasarnya adalah mendesain nuclease yang secara
khusus dapat menargetkan lokus genomik,
menghasilkan DSB (pemutusan untai ganda) di situs
(Puchta dan Fauser, 2013).

TAHAPAN METODE
Konstruksi vektor
LANGKAH
ekspresi sgRNA-Cas9
-plasmid
- - --- - - - - - -
dihasilkan dengan
- 01
gen penanda Zmzb7.

Transformasi
LANGKAH protoplas jagung
02 - - - --- - - - - - - -
Transformasi protoplas jagung
dilakukan dengan fusi
protoplas untuk efisiensi
mutasi.

Transformasi jagung
LANGKAH

03
yang dimediasi oleh
Agrobacterium
- - - --- - - - - - - -
Penginfeksian embrio (zigotik
F2) dengan Agrobacterium Analisis mutasi protoplas,
kalus dan semai yang
LANGKAH
ditransformasikan
04 - - - --- - - - - - - -
Untuk mendeteksi efisiensi
mutasi pada protoplas, kalus
dan bibit dengan PCR.