An F Is Kim 161501195

PENETAPAN KADAR TOTAL FENOL DAN TOTAL
FLAVONOID DARI EKSTRAK ETANOL DAUN SIBO (Leea

indica F.)
SKRIPSI
OLEH:
SOMATHY KRISHNAN
NIM 161501195
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2020
i
PENETAPAN KADAR TOTAL FENOL DAN TOTAL
FLAVONOID DARI EKSTRAK ETANOL DAUN SIBO (Leea
indica F.)
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
OLEH:
SOMATHY KRISHNAN
NIM 161501195
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
MEDAN
2020
i
iv
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah melimpahkan
rahmat dan karunia, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul
“Penetapan Kadar Total Fenol dan Total Flavonoid dari Ekstrak Etanol Daun Sibo
(Leea indica F.)”. Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh
gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Penulis menyampaikan rasa terima kasih kepada kepada Bapak Drs.
Nahitma Ginting, M.Si., Apt., dan Ibu Dr. Marline Nainggolan, M.S., Apt., sebagai
dosen pembimbing skripsi yang telah membimbing dan mengajarkan dengan baik,
tulus, ikhlas serta penuh kesabaran dalam proses penelitian dan penulisan skripsi.
Ucapan terima kasih juga penulis sampaikan kepada kepada Bapak Prof. Dr. Ginda
Haro, M.Sc., Apt., selaku ketua penguji, Ibu Dra. Tuty Roida Pardede., M.Si., Apt.,
selaku anggota penguji yang telah memberikan saran untuk penyempurnaan skripsi
ini, dan kepada Ibu Dr. Sumaiyah, S.Si., M.Si., Apt., selaku dosen penasehat
akademik serta Bapak dan Ibu staf pengajar Fakultas Farmasi USU yang telah
banyak membimbung penulis selama masa perkuliahan. Penulis juga mengucapkan
terima kasih kepada Ibu Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt., selaku Dekan Fakultas
Farmasi yang telah menyediakan fasilitas kepada penulis selama perkuliahan di
Fakultas Farmasi.
Skripsi ini penulis hadiahkan kepada kedua orang tua, Ayahanda Krishnan
Alagri dan Ibunda Jaya Munusamy tercinta sebagai rasa terima kasih dan
penghargaan yang tulus atas doa, dorongan dan pengorbanan, baik moril dan materil
yang tak pernah pudar saat proses penyelesaian skripsi ini maupun dalam kehidupan
sehari-hari sejak penulis dilahirkan.
iv
v
vi
PENETAPAN KADAR TOTAL FENOL DAN TOTAL FLAVONOID DARI
EKSTRAK ETANOL DAUN SIBO (Leea indica F.)
ABSTRAK
Latar belakang: Sibo (Leea indica F.) termasuk familia vitaceae yang mengandung
senyawa metabolit sekunder. Hasil penelitian menyebutkan bahwa daun sibo
digunakan sebagai obat antinflamasi, antibakteri, antidiare, disentri, vertigo,
antidiabetes juga penyakit kulit.
Tujuan: Tujuan penelitian ini untuk mengetahui kadar total fenol dan total flavonoid
dari ekstrak etanol daun sibo menggunakan pereaksi Folin-Ciocalteu dan aluminium
klorida secara spektrofotometer Ultraviolet-Visible (Uv-Vis).
Metode: Simplisia diekstraksi dengan cara maserasi menggunakan etanol 96% dan
filtrat yang diperoleh diuapkan dengan bantuan rotary evaporator. Selanjutnya
serbuk simplisia dan ekstrak etano daun sibo dilakukan skrining fitokima. Ekstrak
etanol daun sibo dianalisis kadar total fenol dan total flavonoid dengan pereaksi
Folin-Ciocalteu dan aluminium klorida menggunakan spektrofotometri UV-Vis pada
rentangan 200 nm-800 nm.
Hasil: Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak etanol daun sibo
diperoleh senyawa triterpenoid/steroid, glikosida, flavonoid, saponin dan tannin.
Hasil penetapan kadar total fenol ekstrak etanol daun sibo diperoleh panjang
gelombang 766 nm dengan kadar 14,5352 mg GAE/g ekstrak etanol daun sibo dan
kadar total flavonoid pada panjang gelombang 434 nm dengan kadar 20,3621 mg
QE/g.
Kesimpulan: Ekstrak etanol daun sibo mengandung senyawa fenol dengan kadar
14,5352 mg GAE/g ekstrak etanol daun sibo dan flavonoid pada kadar 20,3621 mg
QE/g.
Kata kunci: Sibo, ekstrak etanol, total fenol, total flavonoid
vii
DETERMINATION OF TOTAL PHENOL AND TOTAL FLAVONOID
LEVELS FROM ETHANOL EXTRACT OF SIBO LEAF (Leea indica F.)
ABSTRACT
Background: Sibo (Leea indica F.) is a family of vitaceae that contains secondary
metabolite compounds. The results of the study indicates that sibo leaves are used as
an anti-inflammatory, antibacterial, antidiarrheal, dysentery, vertigo, antidiabetic as
well as skin diseases.
Purpose: The purpose of this study was to determine the total levels of phenol and
total flavonoids from ethanol extracts of sibo leaves using Folin-Ciocalteu and
aluminum chloride reagents by Ultraviolet-Visible (Uv-Vis) spectrophotometer.
Methods: Simplisia is extracted by maceration using 96% ethanol and the filtrate
obtained is evaporated with the help of a rotary evaporator. Furthermore,
phytochemical screening was done towards simplicia powder and ethanol extract of
sibo leaf. Ethanol extract of sibo leaf was analyzed for total phenol and total
flavonoid levels by Folin-Ciocalteu and aluminum chloride reagents using UV-Vis
spectrophotometry at a range of 200 nm-800 nm.
Results: Phytochemical screening results of simplicia powder and ethanol extract of
sibo leaf obtained triterpenoid/steroid compounds, glycosides, flavonoids, saponins
and tannins. The results of determining the total phenol content of ethanol extract of
sibo leaf obtained wavelength of 766 nm with levels of 14.5352 mg GAE / g of
ethanol extract of sibo leaves and total flavonoid levels at wavelength of 434 nm
with levels of 20.3621 mg QE / g.
Conclusion: Ethanol extract of sibo leaf contains phenol compound with a level of
14.5352 mg GAE / g ethanol extract of sibo leaf and flavonoids at a level of 20.3631
mg QE / g.
Keywords: Sibo, ethanol extract, total phenol, total flavonoids
viii
DAFTAR ISI
Judul Halaman
HALAMAN JUDUL ................................................................................. …………...i
LEMBAR PENGESAHAN ...................................................................... .................iii
KATA PENGANTAR .............................................................................. ………….iv
SURAT PERNYATAAN.......................................................................... ………….vi
ABSTRAK ................................................................................................ …………vii
ABSTRACT .............................................................................................. ………...viii
DAFTAR ISI ............................................................................................. ………….ix
DAFTAR TABEL ..................................................................................... …………xii
DAFTAR GAMBAR ................................................................................ ………...xiii
DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN........................................... ………...xiv
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................. …………xv
BAB I PENDAHULUAN ......................................................................... …………..1
1.1 Latar Belakang ............................................................................... …………..1
1.2 Perumusan Masalah ....................................................................... …………..2
1.3 Hipotesis Penelitian ........................................................................ …………..3
1.4 Tujuan Penelitian ........................................................................... …………..3
1.5 Manfaat Penelitian ......................................................................... …………..4
1.6 Kerangka Pikir Penelitian .............................................................. …………..4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA............................................................... …………..5
2.1 Uraian Tumbuhan........................................................................... …………..5
2.1.1 Taksonomi Tumbuhan ................................................................... …………..5
2.1.2 Morfologi Tumbuhan ..................................................................... …………..5
2.1.3 Manfaat Tumbuhan……………………………………………….…………..6
2.1.4 Kandungan Kimia .......................................................................... …………..6
2.2 Senyawa Fenol ............................................................................... …………..6
2.3 Senyawa Flavonoid. ....................................................................... …………..7
2.4 Metode Ekstraksi ............................................................................ …………..8
2.5. Spektrofotometer UV-Vis .............................................................. …………10
2.6 Penetapan Kadar Total Fenol ......................................................... …………11
2.7 Penetapan Kadar Total Flavonoid .................................................. …………12
BAB III METODE PENELITIAN............................................................ …………13
3.1 Lokasi Penelitian ............................................................................ …………13
3.2 Alat dan Bahan ............................................................................... …………13
3.2.1 Alat ................................................................................................. …………13
3.2.2 Bahan ............................................................................................. …………13
3.2.3 Sampel ............................................................................................ …………14
3.3 Pembuatan Pereaksi ....................................................................... …………14
3.3.1 Pereaksi Bouchardat ....................................................................... …………14
3.3.2 Pereaksi Mayer ............................................................................... …………14
3.3.3 Larutan Asam Klorida 2N .............................................................. …………14
3.3.4 Larutan Asam Sulfat 2N ................................................................ …………14
3.3.5 Pereaksi Dregendroff ..................................................................... …………14
3.3.6 Larutan Penyemprot Lieberman Bouchardat ................................. …………15
3.3.7 Larutan Asam Nitrat 0,5 N ............................................................. …………15
3.3.8 Larutan Timbal (II) Asetat 0,4 M ................................................... …………15
ix
3.3.9 Larutan Besi (III) Klorida1% ......................................................... …………15
3.310 Larutan Pereaksi Kloralhidrat ........................................................ …………15
3.3.11 Pereaksi Molish .............................................................................. …………15
3.3.12 Larutan Aluminium Klorida 10% .................................................. …………15
3.3.13 Larutan Natrium Asetat 1 M .......................................................... …………15
3.3.14 Larutan Natrium Karbonat ............................................................. …………16
3.3.15 Larutan Folin-Ciocalteu 10% ......................................................... …………16
3.4 Pengumpulan dan Pengolahan Tumbuhan ..................................... …………16
3.4.1 Pengumpulan Bahan Tumbuhan .................................................... …………16
3.4.2 Identifikasi Tumbuhan ................................................................... …………16
3.4.3 Pembuatan Simplisia ...................................................................... …………16
3.5 Skrining Fitokimia ......................................................................... …………16
3.5.1 Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid .................................................. …………17
3.5.2 Pemeriksaan Flavonoid .................................................................. …………17
3.5.3 Pemeriksaan Saponin ..................................................................... …………17
3.5.4 Pemeriksaan Alkaloid .................................................................... …………17
3.5.5 Pemeriksaan Glikosida ................................................................... …………18
3.5.6 Pemeriksaan Tanin. ........................................................................ …………18
3.6 Pembuatan Ekstrak ......................................................................... …………19
3.7 Penentuan Kadar Total Fenol dan Total Flavonoid dari Ekstrak Daun
Sibo ................................................................................................ …………19
3.7.1 Penentuan Kadar Total Fenol ........................................................ …………19
3.7.1.1Penentuan Panjang Gelombang Absorbansi Maksimum Asam Galat………19
3.7.1.2Penentuan Waktu Kerja (operating time) ...................................... …………20
3.7.1.3Penentuan Kurva Kalibrasi Asam Galat ........................................ …………20
3.7.1.4Penetapan Kadar Total Fenol pada Ekstrak Etanol Daun Sibo ...... …………20
3.7.2 Penentuan Kadar Total Flavonoid .................................................. …………21
3.7.2.1Penentuan Panjang Gelombang Absorbansi Maksimum Kuersetin................21
3.7.2.2Penentuan Waktu Kerja (operating time) ...................................... …………21
3.7.2.3Penentuan Kurva Kalibrasi Kuersetin ............................................ …………22
3.7.2.4Penetapan Kadar Total Flavonoid pada Ekstrak Etanol Daun
Sibo ................................................................................................ …………22
3..8 Perhitungan Kadar Total Fenol dan Total Flavonoid..................... …………23
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN…………………………………………...24
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan………………………………………………...24
4.2 Hasil Ekstraksi Daun Sibo…………………………………………………...24
4.3 Hasil Skrining Daun Sibo…………………………………………………....24
4.4 Hasil Penetapan Kadar Total Fenol................................................ …………25
4.4.1 Hasil Penetapan Panjang Gelombang Absorbansi Maksimum Asam Galat...25
4.4.2 Hasil Penentuan Waktu Kerja (operating time) ............................. …………26
4.4.3 Hasil Penetapan Kurva Kalibrasi Asam Galat………………………………26
4.4.4 Hasil Penetapan Kadar Total Fenol Dalam Ekstrak Etanol Daun Sibo
(Leaa Indica F.)……………………...……………………………………....27
4.5 Hasil Penetapan Kadar Total Flavonoid……………………………………..28
4.5.1 Hasil Penetapan Panjang Gelombang Absorbansi Maksimum Kuersetin…...28
4.5.2 Hasil Penentuan Waktu Kerja (operating time) ............................. …………29
4.5.3 Hasil Penetapan Kurva Kalibrasi Kuersetin………………………………....30
4.5.4 Hasil Penetapan Kadar Total Flavonoid Dalam Ekstrak Etanol Daun Sibo
x
(Leaa indica F.)………………………………………………………….......31
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN…………………………………………….33
5.1 Kesimpulan…………………………………………………………………..33
5.2 Saran............................................................................................... ………….33
DAFTAR PUSTAKA……………………………………………………………….34
LAMPIRAN .............................................................................................. …………36
xi
DAFTAR TABEL
Tabel .......................................................................................................... Halaman

4.1 Hasil skrining fitokimia simplisa dan ekstrak etanol daun sibo……………..24
4.2 Hasil absorbansi standar Asam Galat………………………………………..26
4.3 Hasil kadar total fenol pada ekstrak daun sibo (Leea indica F.)………….....28
4.4 Hasil absorbansi standar kuersetin ................................................. …………30
4.5 Hasil kadar total flavonoid pada ekstrak daun sibo (Leea indica F.)........…..31
xii
DAFTAR GAMBAR
Gambar ...................................................................................................... Halaman

1.1 Kerangka Pikir Penelitian……………………………………………………..4
2.1 Struktur kimia Fenol ...................................................................... …………..7
2.2 Sktruktur kimia-kimia Flavonoid ................................................... …………..8
2.3 Diagram skematis spektrofotometer UV-Vis ................................. …………10
4.1 Kurva panjang gelombang maksimum Asam Galat....................... …………25
4.2 Kurva kalibrasi larutan standar Asam Galat .................................. …………27
4.3 Kurva panjang gelombang maksimum Kuersetin .......................... …………29
4.4 Kurva kalibrasi larutan standar Kuersetin ...................................... …………30
xiii
DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN
Gambar ...................................................................................................... Halaman

1. Tumbuhan Sibo .............................................................................. …………39
2. Daun Sibo ....................................................................................... …………39
3. Simplisia daun Sibo ....................................................................... …………40
4. Serbuk daun Sibo ........................................................................... …………40
5. Alat spektrofotometer UV-Visible ................................................. …………41
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1. Hasil identifikasi tumbuhan.............................................................………...36
2. Bagan kerja penelitian …………………………………………….…...……37
3. Bagan pembuatan ekstrak etanol daun sibo…………………………………38
4. Gambar tumbuhan dan daun sibo……………………………………………39
5. Gambar simplisia dan serbuk simplisia daun sibo..........................................40
6. Gambar Alat Spektrofotometer Uv-Visibel (Shimadzu)…………………….41
7. Data pengukuran waktu kerja operating time larutan Asam Galat
dengan reageni Folin Ciocalteu dan Natrium Karbonat 7,5%.........................42
8. Perhitungan persamaan regresi dari kurva kalibrasi Asam Galat……………45
9. Hasil penetapan kadar total Fenol pada ekstrak etanol daun Sibo
(Leea indica F.)……………………………………………………………...46
10. Contoh perhitungan penetapan kadar total Fenol pada ekstrak etanol
daun Sibo (Leea indica F.)…………………………………………..............47
11. Data pengukuran waktu kerja (operating time) larutan Kuersetin
dengan reagen aluminium klorida 10% dan natrium asetat………………….48
12. Perhitungan persamaan regresi dari kurva kalibrasi Kuersetin……………...50
13. Hasil penetapan kadar total Flavonoid pada ekstrak etanol daun
Sibo (Leea indica F.)………………………………………………………...51
14. Contoh perhitungan kadar total Flavonoid pada ekstrak etanol daun
Sibo (Leea indica F.)………………………………………………………...52
xv
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Herbal telah menempati tempat yang berbeda dalam kehidupan sejak
zaman primitif hingga saat ini, dalam beberapa waktu terakhir telah terjadi
perubahan yang nyata ke arah penyembuhan penyakit menggunakan herbal. Saat
ini, minat terhadap obat-obat yang berasal dari tumbuhan telah bangkit kembali
terutama disebabkan oleh kepercayaan bahwa obat herbal lebih aman dan lebih
dapat diandalkan daripada obat-obatan sintetis yang mahal, banyak di antaranya
memiliki efek samping yang merugikan (Mishra, 2016).
Di Indonesia terutama di Sumatera Utara, Leea indica umumnya dikenal
sebagai mali-mali dan di Kabupaten Karo Sumatera Utara tumbuhan ini umumnya
dikenal sebagai sibo yang termasuk golongan perdu, yang terdapat di Asia tropis,
Australia, Bangladesh, India, China, Bhutan dan Malaysia. Daun sibo tersebar
luas di hutan tropis dan seluruh bagian tumbuhan digunakan secara tradisional
untuk sakit kepala dan keluhan sakit kulit. Daun dan akarnya digunakan untuk
obat diabetes, jantung, demam, diare, disentri dan daunnya untuk mengobati
keputihan, kanker usus, dan kanker rahim (Bais, 2013).
Penelitian sebelumnya menyebutkan daun sibo memiliki kadar air 9,33%,
kadar sari larut air 11,32%, kadar sari larut etanol 6,92%, kadar abu total 8,1%
dan kadar abu tidak larut dalam asam 0,88% (Roy Indrianti Bangar, 2019). Hasil
karakterisasi ini tergantung dari bahan tanaman, hal ini dapat memeberikan hasil
yang berbeda terkait dengan tempat tumbuh. Perbedaan ini dapat meluas ke
varietas yang berbeda atau sama ditanam di lokasi yang berbeda. Bagian tanaman
yang berbeda seperti daun, kulit kayu, biji-bijian, akar dan bunga dan juga dapat
1
memiliki konstituen aktif yang berbeda (Kiranmayee, 2016).
Fenolik adalah kelompok fitokimia terbesar yang paling banyak dan
bertindak sebagai aktivitas antioksidan dalam tanaman. Lebih dari 4000 polifenol
ditemukan pada tanaman vaskular. Senyawa fenolik seperti kuersetin, rutin,
naringin, katechin, asam kaffeic, asam galat dan asam klorogenik adalah
konstituen tanaman yang sangat penting (Rao dkk., 2016).
Flavonoid adalah kelompok terbesar senyawa fenolik yang terdapat secara
alami, yang terjadi pada bagian tanaman yang berbeda dan sebagai berupa
glikosida. Mereka ditemukan memiliki banyak aktivitas biologis termasuk
antimikroba, antiulcer, antiarthritic, antiangiogenik, antikanker, penghambatan
protein kinase (Rao dkk., 2016), (Tungmunnithum, 2018). Senyawa flavon dan
flavonol adalah yang paling banyak didistribusikan dari semua fenolik (Rao dkk.,
2016).
Fenolik dan flavonoid umumnya dikenal sebagai molekul fitokimia
terbesar dengan sifat antioksidan dari tanaman (Tungmunnithum, 2018), (Rao
dkk., 2016). Menurut Tungmunnithum (2018), ekstrak rimpang Polygonatum
verticillatum (L.), juga menunjukkan aktivitas antioksidan yang terkait dengan
tingkat komposisi fenolik.
Berdasarkan hal di atas, yang menyebutkan senyawa fenol dan flavonoid
sangat bermanfaat dalam pengobatan sehingga pada penelitian ini dilakukan
pengujian terhadap kadar total fenol dan total flavonoid dari ekstrak daun sibo
secara spektrofotometri UV-Vis.
1.2 Perumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang di atas, maka permasalan pada penelitian ini
2
dapat dirumuskan sebagai berikut:
a. Apakah kadar total fenol ekstrak etanol daun sibo dapat ditentukan dengan
pereaksi Folin-Ciocalteu menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis?
b. Apakah kadar total flavonoid ekstrak etanol daun sibo dapat ditentukan
dengan pereaksi aluminium klorida menggunakan metode
spektrofotometri UV-Vis?
1.3 Hipotesis Penelitian
Berdasarkan perumusan masalah diatas, maka hipotesis pada penelitian ini
adalah:
a) Kadar total fenol ekstrak etanol daun sibo yang ditentukan dengan
pereaksi Folin-Ciocalteu menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis.
b) Kadar total flavonoid ekstrak etanol daun sibo yang ditentukan dengan
pereaksi aluminium klorida menggunakan metode spektrofotometri UV-
Vis.
1.4 Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini adalah:
a. Untuk menetapkan kadar total fenol ekstrak etanol daun sibo dengan
pereaksi Folin-Ciocalteu menggunakan metode spektrofotometri UV-
Vis.
b. Untuk menetapkan kadar total flavonoid ekstrak etanol daun sibo
dengan pereaksi aluminium klorida menggunakan metode
spektrofotometri UV-Vis.
3
1.5 Manfaat Penelitian
Manfaat penelitian ini adalah untuk menambah informasi dan
pengetahuan tentang total fenol dan total flavonoid dari daun sibo.
1.6 Kerangka Pikir Penelitian
Kerangka pikir penelitian untuk analisis kadar total fenol dan total
flavonoid ekstrak etanol daun sibo adalah sebagai berikut:
Variabel Bebas Variabel Terikat Parameter
Simplisia
Daun Sibo 1. Alkaloid
2. Glikosida
Skrining 3. Flavonoid
Fitokimia 4. Triterpenoid/steroid
Ekstrak
5. Saponin
Etanol Daun 6. Tanin
Sibo
Kadar Total Fenol:

Konsentrasi Absorbansi 250ppm
Ekstrak Etanol Ekstrak Etanol
Kadar Total
Daun Sibo Daun Sibo
Flavonoid: 250ppm
(μg/ml)
Gambar 1.1 Kerangka Penelitian
4
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Tumbuhan
Daun sibo (Leea indica) adalah tanaman obat yang tersebar luas di tempat-
tempat tropis seperti Cina, India, Malaysia, Thailand, dan Indonesia. Semak besar
yang selalu hijau, tumbuh setinggi 8 meter. Daun besar, majemuk, selebaran
lonjong atau berbentuk bulat panjang.Tumbuhan ini memiliki namalain seperti
Bandicoot berry (Inggris); Memali (Melayu); huo tong shu (Cina); katangbai
(Thailand); Hastipalash (India) (Valkenburg dkk, 2002).
2.1.1 Taksonomi Tumbuhan
Menurut Catalogue of Life., (2015)., daun sibo (Leea indica) berada di
bawah klasifikasi ilmiah sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Dicotyledoneae
Ordo : Vitales
Famili : Vitaceae
Genus : Leea
Species : Leea Indica (Burm. F.) Merr
2.1.2 Morfologi Tumbuhan
Morfologi tumbuhan ini biasanya berupa semak, pohon kecil, setinggi 2-
16 m dan dapat bertangkai tunggal atau bertangkai banyak dan kasar. Daun dari
spesies ini selebaran dengan tangkai sepanjang 7-20 cm. Selebaran tersebut
berbentuk ovatelanceolate, panjang 5-23,5 cm dengan lebar 3-9 cm dan dengan
tangkai daun hingga 3 cm. Panjang perbungaannya adalah 5–25 cm (Bais, 2013).
5
2.1.3 Manfaat Tumbuhan
Seluruh tumbuhan digunakan secara tradisional untuk sakit kepala, nyeri
tubuh dan keluhan kulit. Daun dan akar sibo digunakan untuk mengobati diabetes,
jantung, dan berbagai penyakit seperti demam, sakit kepala, pusing, pegal, eksim,
keseleo, kusta, patah tulang, sakit tubuh, kejang otot, diare, dan disentri (Bais,
2013).
Akarnya digunakan sebagai sudorifik, antidiare, antidisenterik,
antispasmodik dan penyakit jantung serta kulit. Ekstrak metanol dari sibo
dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan yang kuat (Bais, 2013).
2.1.4 Kandungan Kimia
Berdasarkan pada Kekuda (2018), daun sibo mengandung asam ftalat,
asam palmitat, 1-eicosanol, solanesol, farnesol, tiga ester asam ftalat, asam galat,
lupeol,-sitosterol, asam ursolat, glikosida, terpenoid, flavonoid, steroid, tanin,
glikosida triterpenoid, asam mollat arabinoside dan asam mollat xyloside
sedangkan batang dan akar mengandung saponin, steroid, terpenoid, tanin, dan
flavonoid.
2.2 Senyawa Fenol
Istilah senyawa fenolik mencakup berbagai zat tanaman yang memiliki
kesamaan cincin aromatik yang mengandung satu atau lebih substituen hidroksil
(Harborne, 1973). Zat-zat ini diklasifikasikan sebagai senyawa fenolik. Fenolik
tumbuhan bersifat heterogen secara kimia senyawa, beberapa hanya larut dalam
pelarut organik dan ada yang larut dalam air, sementara yang lain adalah polimer
tidak larut (Anulika dkk., 2016).
Fenol adalah senyawa yang mempunyai gugus OH berikat pada cincin aro-
6
matik. Fenol bersifat lebih asam bila dibandingkan dengan alkohol, tetapi lebih
basa daripada asam karbonat karena fenol dapat melepaskan ion 𝐻 + dari gugus
hidroksilnya. Lepasnya ion 𝐻 + menjadikan anion fenoksida 𝐶6 𝐻5 𝑂 dapat melarut
dalam air (Fessenden dan Fessenden, 1986).
Fenolik tersebar luas di tanaman vaskular dan tampaknya berfungsi
dikapasitas yang berbeda (Anulika dkk., 2016). Struktur kimia fenol dapat terlihat
pada Gambar 2.2 di bawah (Fessenden dan Fessenden, 1986):
Gambar 2.1 Struktur Kimia Fenol
2.3 Senyawa Flavonoid
Flavonoid adalah kelas penting dari produk alami yang termasuk dalam
kelas metabolit sekunder. Menurut Robinson. T (1995), flavonoid mencakup
banyak pigmen yang paling umum dan terdapat pada seluruh dunia tumbuhan
mulai fungus sampai angiospermae. Menurut Markham dan Anderson (2006),
tidak ada kelas lain dari produk sekunder yang dikreditkan dengan begitu banyak.
Flavonoid merupakan kelompok polifenol dan diklasifikasikan
berdasarkan struktur kimia serta biosintesisnya. Struktur dasar flavonoid terdiri
dari dua gugus aromatik yang digabungkan oleh jembatan karbon (C6-C3-C6)
(Alfaridz dan Amalia, 2018).
Flavonoid dapat dibagi lagi menjadi beberapa subkelompok yang berbeda
7
tergantung pada karbon dari cincin C di mana cincin B terpasang dan tingkat
ketidakjenuhan dan oksidasi cincin. Flavonoid di cincin B dihubungkan pada
posisi 3 cincin C disebut isoflavon. Cincin B yang dihubungkan pada posisi 4
disebut neoflavonoid, sedangkan cincin B yang dihubungkan di posisi 2 dapat
dibagi lagi menjadi beberapa subkelompok berdasarkan bentuk struktural cincin C
(Panche dkk., 2016). Flavonoid diklasifikasikan sebagai flavon, flavanone,
flavonol, katekin, flavanol, kalkon dan antosianin (Alfaridz dan Amalia, 2018).
Struktur kimia-kimia tipe flavonoid dapat terlihat pada Gambar 2.1 di bawah
(Panche dkk., 2016):
Gambar 2.2 Struktur Kimia-Kimia Tipe Flavonoid.
2.4 Metode Ekstraksi
Ekstrak adalah material hasil penarikan oleh pelarut air atau pelarut
organik dari bahan kering (dikeringkan). Hasil penyarian tersebut kemudian
pelarutnya diuapkan dengan cara penguapan dengan alat evaporator sehingga
diperoleh ekstrak kental jika pelarutnya pelarut organik. Metanol, etanol 70 %,
dan etanol 96% adalah pelarut pilihan utama untuk mengekstraksi metabolit
8
sekunder yang belum diketahui strukturnya dan untuk tujuan skrining (Saifudin,
2014).
Pemilihan teknik ekstraksi bergantung pada bagian tanaman yang akan
diekstraksi dan bahan aktif yang diinginkan. Tujuan dari suatu proses ekstraksi
adalah untuk memperoleh metabolit sekunder dari suatu bagian tanaman dengan
spesies tertentu dan mengidentifikasi metabolit sekunder yang terdapat dalam
tumbuhan sebagai penanda kimia atau kajian metabolisme (Endarini, 2016).
Menurut Endarini (2016), teknik-teknik ekstraksi adalah:
1. Maserasi. Maserasi dilakukan dengan melakukan perendaman bagian
tanaman yang sudah digiling kasar dengan pelarut dalam bejana tertutup
pada suhu kamar selama sekurang-kurangnya 3 hari dengan pengadukan
berkali-kali sampai semua bagian tanaman yang dapat larut melarut dalam
cairan pelarut.
2. Infusi. Infusi dibuat dengan maserasi bagian tanaman dengan air dingin
atau air mendidih dalam jangka waktu yang pendek. Pemilihan suhu infus
tergantung pada ketahanan senyawa bahan aktif yang selanjutnya segera
digunakan sebagai obat cair.
4. Dekoksi. Pada proses dekoksi, bagian tanaman yang berupa batang,
kulit kayu, cabang, ranting, rimpang atau akar direbus dalam air mendidih
dengan volume dan selama waktu tertentu kemudian didinginkan dan
disaring untuk memisahkan cairan ekstrak dari ampasnya. Proses ini sesuai
untuk mengekstrak bahan bioaktif yang dapat larut dalam air dan tahan
terhadap panas.
5. Perkolasi. Perkolasi merupakan teknik yang digunakan untuk
mengekstrak bahan aktif dari tanaman dalam penyediaan ekstrak cair.
9
6. Sokhletasi. Pada teknik ekstraksi ini, bagian tanaman yang sudah
digiling halus dimasukkan ke dalam kantong berpori (thimble) yang
terbuat dari kertas saring yang kuat dan dimasukkan ke dalam alat sokhlet
untuk dilakukan ekstraksi. Pelarut yang ada dalam labu akan dipanaskan
dan uapnya akan mengembun pada kondenser.
2.5. Spektrofotometer UV-Vis
Spektrofotometri umumnya lebih disukai terutama oleh industri skala kecil
karena biaya peralatan lebih sedikit dan masalah perawatannya minimal. Metode
analisis didasarkan pada pengukuran penyerapan cahaya monokromatik oleh
senyawa tidak berwarna di jalur spektrum ultraviolet (200-380nm) (Shah dkk.,
2015).
Spektrofotometer yang sesuai untuk pengukuran di daerah spektrum
ultraviolet dan sinar tampak terdiri atas suatu sistem optik dengan kemampuan
menghasilkan sinar monokromatis dalam jangkauan panjang gelombang 200-
800nm. Diagram skematis spektrofotometer UV-Vis dapat dilihat pada Gambar
2.3 di bawah (Rohman, 2007):
Gambar 2.3 Diagram skematis spektrofotometer UV-vis (Rohman, 20017).
Menurut Rohman (2007), komponen- komponen spektrofotometer
meliputi:
10
a) Sumber-sumber lampu: lampu deuterium untuk daerah UV pada panjang
gelombang 190-350nm, sementara lampu halogen kuarsa atau lampu
tungsten digunakan untuk daerah visible pada panjang antara 350-900nm.
b) Monokromator: digunakan untuk mendispersikan sinar ke dalam
komponen-komponen panjang gelombang dimana akan dipilih oleh celah
(slit). Monokromator berputar sedemikian rupa hingga kisaran panjang
gelombang dilewatkan pada sampel sebagai scan instrument melewati
spektrum.
c) Optik-optik; dapat didesain untuk memecah sumber sinar sehingga sumber
sinar melewati 2 kompartmen dan sebagaimana dalam spektrofotometer
berkas ganda (double beam), suatu larutan blanko dapat digunakan dalam
satu kompartmen untuk mengkoreksi pembacaan atau spektrum sampel.
Hukum Lambert-Beer adalah prinsip spektroskopi absorbansi. Untuk panjang
gelombang tunggal, A adalah absorbansi, a adalah absorptivitas molar senyawa
atau molekul dalam larutan, b adalah panjang jalur kuvet atau pemegang sampel
dan c adalah konsentrasi larutan (Shah dkk., 2015). Persamaan hukum Lambert-
Beer adalah sebagai berikut:

A = a.b.c
Di mana, A = Absorbansi,
a = absorptivitas,
b = panjang jalur,
c = konsentrasi.
2.6 Penetapan Kadar Total Fenol
Fenol biasanya lebih baik dideteksi dengan menggunakan pereaksi yang
lebih spesifik dan terbaik adalah Folin-Ciocalteu (Harborne, 1973). Senyawa
11
fenol bereaksi dengan reagen Folin-Ciocalteu dalam suasana basa agar terjadi
disosiasi proton pada senyawa fenol menjadi ion fenolat. Reagen Folin-Ciocalteau
digunakan karena senyawa fenolik dapat bereaksi dengan Folin membentuk
larutan berwarna yang dapat diukur absorbansinya (Alfian dan Susanti, 2012).
Prinsip dari metode Folin-Ciocalteau adalah terbentuknya senyawa
kompleks berwarna biru yang dapat diukur pada panjang gelombang
maksimumnya. Gugus hidroksil fenol mereduksi asam heteropoli (fosfomolibdat-
fosfotungsat) yang terdapat dalam reagen Folin-Ciocalteu menjadi suatu kompleks
molybdenum-tungsten yang berwarna biru (Alfian dan Susanti, 2012).
Berdasarkan Sam dkk (2016), larutan asam galat atau asam 3,4,5-
trihidroksibenzoat ( C6 H2 (OH)3 CO2 H ) digunakan sebagai standar karena asam
galat merupakan turunan dari asam hidroksibenzoat yang tergolong asam fenolik
sederhana dan sebagai standar yang ketersediaan substansi yang stabil dan murni.
2.7 Penetapan Kadar Total Flavonoid
Penentuan jumlah flavonoid dilakukan dengan kolorimetri komplementer
yang mempunyai prinsip pengukuran berdasarkan pembentukan warna. Prinsip
penetapan kadar flavonoid dengan metode aluminium klorida adalah terjadinya
pembentukan kompleks antara aluminium klorida dengan gugus keto pada atom
C-4 dan gugus hidroksi pada atom C-3 atau C-5 yang bertetangga dari golongan
flavon dan flavonol (Azizah dkk., 2014).
Senyawa yang digunakan sebagai standar pada penetapan kadar flavonoid
adalah kuersetin, karena kuersetin merupakan flavonoid golongan flavonol yang
memiliki gugus keto pada atom C-4 dan juga gugus hidroksil pada atom C-3 dan
C-5 yang bertetangga (Aminah dkk., 2017).
12
BAB III
METODE PENELITIAN
Dalam penelitian ini, metode yang digunakan adalah metode
eksperimental meliputi pengumpulan dan pengolahan tumbuhan, skrining
fitokimia, pembuatan ekstrak, dan kadar total fenol dan flavonoid menggunakan
spektrofotometer UV-Visible.
3.1 Lokasi Penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Biologi Farmasi dan Laboratorium
Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
3.2 Alat dan Bahan

3.2.1 Alat
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah alat-alat gelas
laboratorium, blender (Panasonic), seperangkat alat destilasi, oven listrik (Stork),
neraca analitik (Vibra AJ), neraca kasar (Saherand), penangas air (Yenaco), lemari
pengering, vortex (Boeco Germany), vial dan spektrofotometer UV-Visible
(Shimadzu).
3.2.2 Bahan
Semua bahan yang digunakan adalah asam galat, kuersetin, methanol pro
analysis, reagen Folin-Ciocalteu, akuades, alfa naftol, aluminium (III) klorida,
amil alkohol, amil asetat anhidrat, asam klorida pekat, asam nitrat pekat, asam
sulfat pekat, besi (III) klorida, bismuth nitrat, etanol 96%, etil asetat, ioduim,
isopropanol, kalium iodide, kloralhidrat, kloroform, n-heksan, natrium karbonat,
13
natrium hidroksida, natrium asestat, natrium klorida, serbuk magnesium, timbal
(II) asetat dan toluen.
3.2.3 Sampel
Sampel yang telah digunakan pada penelitian ini adalah daun sibo (Leea
indica F.).
3.3 Pembuatan Pereaksi

3.3.1 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 g kalium iodida P dilarutkan dalam 20 ml air secukupnya, lalu
ditambahkan 2 g iodium P kemudian ditambahkan air hingga 100 ml (Marjoni,
2016).
3.3.2 Pereaksi Mayer
Pereaksi Mayer dapat dibuat degan cara menambahkan 5 g kalium iodida
dalam 10 ml aquades, kemudian ditambahkan larutan 1,36 g merkuri (II) klorida
dalam 60 ml air suling. Larutan kemudian dikocok dan ditambahkan aquadest
sampai 100 ml (Marjoni, 2016).
3.3.3 Larutan Asam Klorida 2 N
Larutan asam klorida pekat sebanyak 17 ml diencerkan dengan air suling
sampai 100 ml (Marjoni 2016).
3.3.4 Larutan Asam Sulfat 2 N
Larutan asam sulfat pekat sebanyak 5,8 ml ditambah dengan air suling
sampai 100 ml (Depkes, 1995).
3.3.5 Pereaksi Dragendorff
Bismut nitrat sebanyak 8 g dilarutkan dalam asam nitrat sebanyak 20 ml.
Kemudian dicampurkan dengan 27,2 g kalium iodida dalam 50 ml air suling,
didiamkan sampai memisah sempurna. Kemudian diambil lapisan jernih dan dien-
14
cerkan dengan air secukupnya hingga 100 ml (Marjoni, 2016).
3.3.6 Larutan Penyemprot Liebermann-Burchard
Asam sulfat pekat sebanyak 5 ml dicampur dalam 50 ml etanol 96%, lalu
ditambahkan hati-hati dengan 5 ml asam asetat anhidrida ke dalam campuran
tersebut (Depkes, 1995).
3.3.7 Larutan Asam Nitrat 0,5 N
Asam nitrat pekat sebanyak 3,4 ml diencerkan dengan air suling hingga
100 ml (Depkes, 1995).
3.3.8 Larutan Timbal (II) Asetat 0,4 M
Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat P dilarutkan dalam air bebas karbon
dioksida hingga 100 ml (Depkes, 1995).
3.3.9 Larutan Besi (III) Klorida 1% (b/v)
Sebanyak 1 g besi (III) klorida dilarutkan dalam air secukupnya hingga
100 ml (Depkes, 1995).
3.3.10 Larutan Pereaksi Kloralhidrat
Sebanyak 50 g kristal kloralhidrat ditimbang lalu dilarutkan dalam 20 ml
air (Depkes, 1995).
3.3.11 Pereaksi Molish
Sebanyak 3 g α-naftol, dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N hingga
diperoleh larutan 100 ml (Marjoni, 2016).
3.3.12 Larutan Aluminium Klorida 10% (b/v)
Sebanyak 1 g aluminium klorida ditimbang kemudian dilarutkan dalam
akuades hingga 10 ml.
3.3.13 Larutan Natrium Asetat 1 M
Sebanyak 0,83 g natrium asetat ditimbang kemudian dilarutkan dalam aku-
15
ades hingga 10 ml.
3.3.14 Larutan Natrim Karbonat
Sebanyak 4 g natrium karbonat ditimbang kemudian dilarutkan dalam
akuades hingga 20 ml.
3.3.15 Larutan Folin-Ciocalteu 10% (v/v)
Diambil 5 ml larutan pereaksi Folin-Ciocalteu lalu diencerkan dengan
akuades sampai 50 ml.
3.4 Pengumpulan dan Pengolahan Tumbuhan

3.4.1 Pengumpulan Bahan Tumbuhan
Pengumpulan bahan tumbuhan dilakukan secara purposif, yaitu tanpa
membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Bahan yang
digunakan adalah daun sibo (Leea Indica F.).
3.4.2 Identifikasi Tumbuhan
Identifikasi tumbuhan sibo dilakukan di Herbarium Medanense (MEDAN)
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam USU.
3.4.3 Pembuatan Simplisia
Daun sibo dibersihkan lalu dikeringkan di dalam lemari pengering pada
suhu 40℃-50℃. Tumbuhan dianggap kering apabila sudah rapuh, selanjutnya
tumbuhan diserbukkan dengan menggunakan blender.
3.5 Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak meliputi pemeriksaan
senyawa golongan triterpenoid/steroid, flavonoid, saponin, alkaloid, glikosida dan
tannin.
16
3.5.1 Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid
Sejumlah 1 g serbuk direndam dengan 20 ml n-heksan selama 2 jam.
Disaring, filtrat diuapkan dicawan penguap, sisanya ditambahkan 2 tetes asam
asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat (pereaksi Lieberman-Burchard).
Apabila terbentuk warna biru hijau menunjukkan adanya triterpenoid, manakala
warna merah, merah muda atau ungu menunjukkan adanya steroid (Marjoni,
2016).
3.5.2 Pemeriksaan Flavonoid
Sebanyak 10 g serbuk simplisia ditambahkan 100 ml air panas, dididihkan
selama 5 menit dan disaring ketika panas. Kedalam 5 ml filtrat ditambahkan 0,1 g
serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil alkohol, dikocok
dan dibiarkan memisah. Jika terjadi warna merah, kuning, jingga pada lapisan
amil alcohol berarti flavonoida positif (Marjoni, 2016).
3.5.3 Pemeriksaan Saponin
Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia, dimasukkan ke dalam tabung reaksi lalu
ditambahkan dengan 10 ml air panas, didinginkan kemudian dikocok kuat–kuat
selama 10 detik. Jika terbentuk buih yang mantap setinggi 1–10 cm yang tidak
kurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes HCl 2 N
menunjukkan adanya saponin (Marjoni, 2016).
3.5.4 Pemeriksaan Alkaloid
Serbuk simplisia 0,5 g ditambah 1 ml HCl 2 N dan 9 ml air suling,
Dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit lalu didinginkan dan disaring.
Filtratnya dipakai untuk uji alkaloida sebagai berikut:
a. Filtrat 3 tetes ditambahkan dengan 2 tetes larutan pereaksi Mayer,
terbentuk endapan berwarna putih atau kuning.
17
b. Filtrat 3 tetes ditambahkan dengan 2 tetes larutan pereaksi Bouchardat,
terbentuk endapan coklat sampai hitam
c. .Filtrat 3 tetes ditambahkan dengan 2 tetes larutan pereaksi Dragendorff
terbentuk warna merah atau jingga.
Alkaloida disebut positif jika endapan atau kekeruhan paling sedikit dua
dari tiga tabung reaksi dari percobaan di atas (Marjoni, 2016).
3.5.5 Pemeriksaan Glikosida
Sebanyak 3 g serbuk simplisia disari dengan 30 ml campuran etanol 95%
dengan air suling (7:3), direfluks selama 10 menit, didinginkan dan disaring. Pada
20 ml filtrat ditambahkan 25 ml air dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4N, dikocok,
didiamkan 5 menit lalu disaring. Filtrat disari sebanyak 3 kali, tiap kali dengan 20
ml campuran isopropanol P dan kloroform P (2:3).
Kumpulan sari air diuapkan pada suhu tidak lebih dari 50℃ dan sisanya
dilarutkan dalam 2 ml methanol P. Larutan sisa dimasukkan dalam tabung reaksi
selanjutnya diuapkan di atas penangas air, pada sisa ditambahkan 2 ml air dan 5
tetes larutan pereaksi Molish. Tambahkan hati-hati 2 ml asam sulfat P melalui
dinding tabung, terbentuk cincin ungu pada batas kedua cairan menunjukkan
adanya glikosida (Depkes, 1995).
3.5.6 Pemeriksaan Tanin
Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia disari dengan 10 ml air suling, lalu
dipanaskan, disaring. Filtratnya diencerkan dengan akuades sampai tidak
berwarna. Larutan diambil sebanyak 2 ml dan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi
(III) klorida, jika terjadi warna biru atau hijau kehitaman menunjukkan adanya
tanin (Marjoni, 2016).
18
3.6 Pembuatan Ekstraksi
Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi menggunakan pelarut
etanol 96%. Serbuk simplisia daun sibo sebanyak 800 g dimasukkan ke dalam
bejana, kemudian dimaserasi dengan etanol 96% sebanyak 75 bagian, dibiarkan
selama 5 hari, terlindung dari cahaya sambil diaduk sekali-kali setiap hari.
Setelah 5 hari disaring dan ampas dicuci dengan pelarut secukupnya, diaduk
dan disaring sehingga diperoleh 100 bagian. Tampung maserat ke dalam
bejana tertutup, dibiarkan sejuk terlindung dari cahaya selama 2 hari. Selanjutnya
pelarut diuapkan dengan rotary evaporator pada suhu 40-50°C, kemudian
dipekatkan di atas penangas air sampai diperoleh ekstrak kental (Ditjen POM RI,
1979).
3.7 Penentuan Kadar Total Fenol dan Total Flavonoid dari Ekstrak Etanol
Daun Sibo
Penetapan kadar fenolik total dilakukan dengan menggunakan reagen
Folin-Ciocalteau yang dapat diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-
Vis (Alfian dan Susanti, 2012). Penentuan jumlah flavonoid dilakukan dengan
kolorimetri komplementer yang mempunyai prinsip pengukuran berdasarkan
pembentukan warna dengan metode kolorimetri AlCl3 (Desmiaty dkk., 2009).
3.7.1 Penentuan Kadar Total Fenol

3.7.1.1 Penentuan Panjang Gelombang Absorbansi Maksimum Asam Galat
Ditimbang 10 mg asam galat, kemudian dilarutkan dengan metanol hingga
100 ml (konsentrasi 100 μg/ml). Sebanyak 5 ml larutan dipipet ke dalam labu 10
ml dan ditambahkan dengan metanol sehingga batas tanda (konsentrasi 500
μg/ml). Sebanyak 2 ml larutan dipipet dan dimasukkan ke dalam vial. Larutan
ditambahkan dengan 7,9 ml akuades, 1,5 ml reagen Folin-Ciocalteu 10% dan
19
larutan divortex selama 1 menit, lalu didiamkan selama 5 menit. Ditambahkan 1,5
ml larutan Na2 CO3 7.5%. Absorbansi larutan diukur terhadap reagen yang
digunakan sebagai blanko secara spektrofototmeteri UV-Vis pada rentang 200 nm
– 800 nm. Diperoleh panjang gelombang serapan maksimum asam galat.
3.7.1.2 Penentuan Waktu Kerja (operating time)

Dipipet larutan asam galat konsentrasi 500 μg/ml sebanyak 2 ml dan
dimasukkan ke dalam vial. Larutan ditambahkan dengan 7,9 ml akuades, 1,5 ml
reagen Folin-Ciocalteu 10% dan larutan divortex selama 1 menit, lalu didiamkan
selama 5 menit. Ditambahkan 1,5 ml larutan Na2 CO3 7.5%. Diukur absorbansi
larutan pada panjang gelombang 766 nm setiap 1 menit dan diamati waktu larutan
tersebut mulai menghasilkan absorbansi yang stabil, yang akan digunakan sebagai
operating time.
3.7.1.3 Penentuan Kurva Kalibrasi Asam Galat
Dipipet larutan asam galat konsentrasi 500 μg/ml sebanyak 0 ml, 0,6 ml,
1,0 ml, 1,4 ml dan 1,8 ml ke dalam labu 10 ml dan ditambahkan dengan metanol
sehingga batas tanda (konsentrasi 0 μg/ml, 6 μg/ml, 10 μg/ml, 14 μg/ml dan 18
μg/ml). Masing-masing konsentrasi dipipet 3,0 ml dan dimasukkan ke dalam vial.
Larutan ditambahkan dengan 7,9 ml akuades, 1,5 ml reagen Folin-Ciocalteu 10%
dan larutan divortex selama 1 menit, lalu didiamkan selama 5 menit. Ditambahkan
1,5 ml larutan Na2 CO3 7,5%. Diinkubasi pada suhu kamar pada rentang operating
time. Diukur absorbansi larutan standar asam galat pada masing-masing
konsentrasi pada panjang gelombang maksimum 766 nm secara spektrofotometri
UV-Vis. Dihasilkan kurva kalibrasi serta persamaan garis linear y = ax + b.
3.7.1.4 Penetapan Kadar Total Fenol pada Ekstrak Etanol Daun Sibo
Ditimbang 25 mg ekstrak etanol daun sibo dan dilarutkan dengan metanol
20
hingga 100 ml (konsentrasi 250 μg/ml). Dipipet 2 ml larutan kedalam labu 10 ml
dan ditambahkan metanol hingga batas tanda (konsentrasi 200 μg/ml). Larutan uji
dipipet sebanyak 0,1 ml, kemudian ditambahakan 7,9 ml akuades, 1,5 ml reagen
Folin-Ciocalteu. Larutan divortex selama ± 1 menit lalu didiamkan 4-8 menit,
selanjutnya ditambahkan 1,5 ml larutan natrium karbonat (Na2 CO3 ) 20%. Larutan
diinkubasi pada suhu kamar pada rentang operating time. Absorbansi larutan uji
diukur terhadap kalibrasi asam galat pada panjang gelombang 766 nm secara
spektrofotometri UV-Vis. Konsentrasi fenol dalam larutan uji dihitung dari plot
kalibrasi dan kadar total fenol dinyatakan dalam GAE (gallic acid equivalent)
yaitu jumlah kesetaraan milligram asam galat dalam 1 gram sampel.
3.7.2 Penentuan Kadar Total Flavonoid

3.7.2.1 Penentuan Panjang Gelombang Absorbansi Maksimum Kuersetin
Sebanyak 10 mg kuersetin ditimbang lalu dilarutkan dengan metanol
hingga 100 ml (konsentrasi 100 μg/ml ). Sebanyak 1,4 ml larutan dipipet ke
dalam labu 10 ml dan ditambahkan dengan metanol sehingga batas tanda
(konsentrasi 140 μg/ml). Sebanyak 2 ml larutan dipipet ke dalam vial kemudian
ditambahkan dengan 0,1 ml aluminium klorida 10% (AlCl3 ), 0,1 ml natrium asetat
( CH3 COONa ) serta 2,8 ml akuades Diinkubasi pada suhu kamar. Absorbansi
larutan diukur terhadap reagen yang digunakan sebagai blanko secara
spektrofotometeri UV-Vis pada rentang 200 nm – 800 nm. Diperoleh panjang
gelombang serapan maksimum kuersetin.
3.7.2.2 Penentuan Waktu Kerja (operating time)
Dipipet larutan kuersetin konsentrasi 140 μg/ml sebanyak 2 ml larutam
dipipet ke dalam vial kemudian ditambahkan dengan 0,1 ml aluminium klorida
10% (AlCl3 ), 0,1 ml natrium asetat (CH3 COONa) serta 2,8 ml akuades. Diukur
21
absorbansi larutan pada panjang gelombang 434 nm setiap 1 menit dan diamati
waktu larutan tersebut mulai menghasilkan absorbansi yang stabil, yang akan
digunakan sebagai operating time.
3.7.2.3 Penentuan Kurva Kalibrasi Kuersetin
Dipipet larutan kuersetin konsentrasi 140 μg/ml sebanyak 0 ml, 0,6 ml,
1,0 ml, 1,4 ml dan 1,8 ml ke dalam labu 10 ml dan ditambahkan dengan metanol
sehingga batas tanda (konsentrasi 0 μg/ml, 6μg/ml, 10 μg/ml, 14 μg/ml dan 18
μg/ml). Masing-masing konsentrasi dipipet 2 ml dan dimasukkan ke dalam vial.
Larutan ditambahkan dengan 0,1 ml aluminium klorida 10% ( AlCl3 ), 0,1 ml
natrium asetat (CH3 COONa) serta 2,8 ml akuades. Diinkubasi pada suhu kamar
pada rentang operating time. Diukur absorbansi larutan standar kuersetin pada
masing-masing konsentrasi pada panjang gelombang maksimum 434 nm terhadap
reagen yang digunakan sebagai blanko secara spektrofotometri UV-Vis.
Dihasilkan kurva kalibrasi serta persamaan garis linear y = ax + b terhadap
kuersetin.
3.7.2.4 Penetapan Kadar Total Flavonoid pada Ekstrak Etanol Daun Sibo
Ditimbang 25 mg ekstrak etanol daun sibo dan dilarutkan dengan metanol
hingga 100 ml (konsentrasi 250 μg/ml). Dipipet 2 ml ke dalam labu 10 ml dan
ditambahkan metanol sehingga batas tanda (konsentrasi 200 μg/ml). Dipipet 2 ml
larutan lalu ditambahkan dengan 0,1 ml aluminium klorida 10% (AlCl3 ), 0,1 ml
natrium asetat (CH3 COONa) serta 2,8 ml akuades. Diinkubasi pada suhu kamar
pada rentang operating time. Absorbansi larutan uji diukur terhadap standar
kalibrasi kuersetin pada panjang gelombang 434 nm secara spektrofotometri UV-
Vis. Konsentrasi flavonoid dalam sampel uji yang dihitung dari plot kalibrasi dan
dinyatakan dalam QE ( quercetin equivalent ) yaitu jumlah keseteraan milligram
22
kuersetin dalam 1 gram sampel.
3.8 Perhitungan Kadar Total Fenol dan Total Flavonoid
Konsentrasi total fenol dan total flavonoid dapat dihitung dengan
mensubstitusikan nilai absorbansi sampel ke dalam persamaan regresi linear yang
didapat pada kurva kalibrasi. Nilai konsentrasi sampel dapat disubstitusikan lagi
ke dalam rumus perhitungan sebagai berikut:
C x V x Fp
Kadar (μg/ml) =
W
Keterangan:
C = Konsentrasi senyawa dalam larutan sampel (μg/ml)

V = Volume larutan sampel (ml)
Fp = Faktor pengenceran
W = Berat sampel (g)
23
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan
Hasil Identifikasi tumbuhan yang digunakan dilakukan di Herbarium
Medanese, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam (FMIPA)
Universitas Sumatera Utara Medan, menyebutkan bahwa tumbuhan yang diteliti
adalah tumbuhan sibo (Leea Indica F.), familia Leeaceae. Hasil identifikasi
tumbuhan dapat dilihat pada Lampiran 1, halaman 39.
4.2 Hasil Ekstraksi Daun Sibo
Hasil ekstraksi simplisia daun sibo dari 800 g dengan cara maserasi
menggunakan pelarut etanol 96% diperoleh ektrak etanol daun sibo sebanyak 50,5
g dengan nilai rendemen 6,31%.
4.3 Hasil Skrining Daun Sibo
Skrining fitokimia terhadap simplisia dan ekstrak etanol daun sibo
dilakukan untuk mendapatkan informasi golongan senyawa metabolit sekunder
yang terdapat didalamnya. Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia, ekstrak
etanol dari daun sibo dapat dilihat pada Tabel 4.1 dibawah ini.
Tabel 4.1 Hasil skrining fitokimia simplisia dan ekstrak etanol daun sibo
No Pemeriksaan Simplisia Ekstrak
1 Flavonoid + +
2 Alkaloid - -
3 Saponin + +
4 Tanin + +
5 Glikosida + +
6 Steroid/Triterpenoid + +
Keterangan: (+) positif: mengandung golongan senyawa
(-) negatif: tidak mengandung golongan senyawa
24
Hasil yang diperoleh pada Tabel 4.1 menunjukkan bahwa daun sibo
mengandung golongan senyawa flavonoid, saponin, tanin, steroid/triterpenoid dan
glikosida.
4.4 Hasil Penetapan Kadar Total Fenol

4.4.1 Hasil Penetapan Panjang Gelombang Absorbansi Maksimum Asam
Galat
Panjang gelombang yang digunakan untuk analisis kuantitatif adalah
panjang gelombang yang mempunyai absorbansi maksimal. Panjang gelombang
maksimal dipilih dengan membuat kurva hubungan antara absorbansi dengan
panjang gelombang dari suatu larutan baku pada konsentrasi tertentu (Rohman,
2007).
Pengukuran panjang gelombang maksimum larutan baku konsentrasi 500
ppm, dilakukan setelah penambahan reagen Folin-Ciocalteu 10% dan larutan
natrium karbonat 7,5%. Hasilnya diperoleh menghasilkan panjang gelombang
maksimum 766 nm yang diukur dengan cara spektrofotometeri UV-Vis seperti
yang dapat dilihat pada Gambar 4.1.
Gambar 4.1 Kurva panjang gelombang maksimum Asam Galat
25
4.4.2 Hasil Penentuan Waktu Kerja (operating time)
Operating time bertujuan untuk mengetahui waktu pengukuran yang
stabil. Waktu operasional ditentukan dengan mengukur hubungan antara waktu
pengukuran dengan absorbansi larutan (Rohman, 2007). Penentuan kadar total
fenol dimulai dengan melakukan operating time larutan baku asam galat segera
setelah penambahan reagen Folin- Ciocalteu dan larutan natrium karbonat 7.5%
pada panjang gelombang 766 nm. Berdasarkan Sari (2017), hasil yang diperoleh
adalah menit ke-90 karena larutan mulai menghasilkan nilai absorban yang stabil.
4.4.3 Hasil Penetapan Kurva Kalibrasi Asam Galat
Kurva kalibrasi dibuat dengan mengukur absorbansi larutan dengan
konsentrasi 0 µg/ml , 6 µg/ml, 10 µg/ml, 14 µg/ml , 18 µg/ml pada panjang
gelombang 766 nm. Penentuan kadar total fenol dilakukan menggunakan reagen
Folin-Ciocalteu secara spektrofotometri UV-Vis. Kadar total fenol dapat
ditentukan menggunakan asam galat sebagai standar. Kosentrasi total fenol
diperoleh berdasarkan perhitungan persamaan regresi yang diperoleh dengan cara
memplot konsentrasi dan absorbansi larutan standar. Nilai absorban setiap
konsentrasi dan gambar kurva kalibrasi asam galat dapat dilihat pada Tabel 4.2
dan Gambar 4.2.
Tabel 4.2. Hasil absorbansi standar Asam Galat

Sampel Konsentrasi Absorbansi Persamaan
(µg/ml) (Y) regresi
0 0,0000
6 0,2596 Y = 0,0445x
Asam galat 10 0,4153 – 0,0097
14 0,6021
18 0,8106
26
Gambar 4.2 Kurva kalibrasi larutan standar asam galat
Gambar di atas menunjukkan kurva serapan asam galat diperoleh nilai r =
0,9988 dengan persamaan regresi Y = 0,0445x – 0,0097, dimana perhitungan
kurva kalibrasi telah dilampirkan pada Lampiran 8, halaman 45. Koefisien
korelasi, r, adalah indeks standar yang nilainya tidak tergantung pada skala
pengukuran variabel. Nilainya terletak dalam kisaran (−1, 1) dan nilai kuadratnya
menggambarkan pengurangan proporsional dalam variabilitas satu variabel ketika
yang lain dipertahankan konstan. Oleh karena itu, meskipun koefisien korelasi
dengan sendirinya merupakan ukuran penting hubungan antara variable itu adalah
R kuadrat yang memungkinkan perbandingan kekuatan hubungannya (Asuero dan
Gonz´alez, 2016).
4.4.4 Hasil Penetapan Kadar Total Fenol Dalam Ekstrak Etanol Daun
Sibo (Leea indica F.)
Nilai absorbansi dari ekstrak etanol daun sibo yang diukur dengan
spektrofotometer UV-Vis diperoleh pada menit ke-30. Larutan sampel
direaksikan dengan reagen Folin-Ciocalteu menghasilkan warna biru. Hasil
penentuan kadar total fenol pada ekstak daun sibo dapat dilihat pada Tabel 4.3.
27
Tabel 4.3 Hasil kadar total fenol pada ekstrak daun sibo (Leea indica
F.)
Sampel Kadar Total Fenol Rata-rata Kadar Total
(mg GAE/g Fenol (mg GAE/g
sampel) sampel)
Ekstrak Etanol 14,6647
96% Daun Sibo 15,2588 14,5352
13,6823
Hasil penentuan kadar total fenol dari ekstrak etanol daun sibo yang
diperoleh yaitu 14,5352 mg GAE/g sampel. Perhitungan kadar total fenol telah
dilampirkan pada Lampiran 9 dan 10, halaman 46 dan 47.
Asam galat sebagai standar dipilih karena merupakan substansi yang
murni dan stabil. Pengukuran total fenol digunakan dengan metode Folin-
Ciocalteu yang berdasarkan kekuatan mereduksi dari gugus hidroksi fenol dengan
menggunakan standar asam galat. Semua senyawa fenolik termasuk fenol
sederhana dapat bereaksi dengan reagen Folin-Ciocalteu walaupun bukan
penangkap radikal efektif. Inti aromatis pada senyawa fenolik dapat mereduksi
fosfomolibdat-fosfotungstat menjadi molybdenum-tungsten. Senyawa fenolik
hanya bereaksi dengan reagen Folin-Ciocalteu dalam suasana basa agar terjadi
disosiasi proton pada senyawa fenolik menjadi ion fenolat. Reaksi fenol dan
Folin-Ciocalteu akan terlihat dari adanya warna kuning dan dengan menambahkan
natrium karbonat akan memberikan warna biru. Semakin biru larutan
menunjukkan semakin tingginya absorbansi (Senet dkk., 2018).
4.5 Hasil Penetapan Kadar Total Flavonoid

4.5.1 Hasil Penetapan Panjang Gelombang Absorbansi Maksimum Kuersetin
Panjang gelombang yang digunakan untuk analisis kuantitatif adalah
panjang gelombang yang mempunyai absorbansi maksimal. Panjang gelombang
28
maksimal dipilih dengan membuat kurva hubungan antara absorbansi dengan
panjang gelombang dari suatu larutan baku pada konsentrasi tertentu (Rohman,
2007).
Pengukuran panjang gelombang maksimum menggunakan larutan baku
konsentrasi 140 ppm, dilakukan setelah penambahan reagen aluminium klorida
dan natrium asetat 1 M serta akuades. Hasilnya diperoleh menghasilkan panjang
gelombang maksimum 434 nm yang diukur dengan cara spektrofotometer UV-
Vis, seperti yang dapat dilihat pada Gambar 4.3.
Gambar 4.3 Kurva panjang gelombang maksimum Kuersetin
4.5.2 Hasil Penentuan Waktu Kerja (operating time)

Operating time bertujuan untuk mengetahui waktu pengukuran yang stabil.
Waktu operasional ditentukan dengan mengukur hubungan antara waktu
pengukuran dengan absorbansi larutan (Rohman, 2007). Penentuan kadar total
flavonoid dimulai dengan melakukan operating time larutan baku kuersetin segera
setelah penambahan reagen aluminium klorida dan natrium asetat 1 M serta
akuades pada panjang gelombang 434 nm. Berdasarkan Sari (2017), hasil yang
diperoleh adalah menit ke -30 karena larutan mulai menghasilkan nilai absorban
larutan mulai menghasilkan nilai absorban yang stabil.
29
4.5.3 Hasil Penetapan Kurva Kalibrasi Kuersetin
Kurva kalibrasi dibuat dengan mengukur absorbansi larutan dengan
konsentrasi 0 µg/ml, 6 µg/ml, 10 µg/ml, 14 µg/ml, 18 µg/ml pada panjang
gelombang 434 nm. Penentuan kadar total flavonoid dilakukan menggunakan
reagen aluminium klorida 10% secara spektrofotometri UV-Vis. Kadar total
flavonoid dapat ditentukan menggunakan kuersetin sebagai standar. Kosentrasi
total flavonoid diperoleh berdasarkan perhitungan persamaan regresi yang
diperoleh dengan cara memplot konsentrasi dan absorbansi larutan standar. Nilai
absorban setiap konsentrasi dangambar kurva kalibrasi larutan standar kuersetin
dapat dilihat pada Tabel 4.4 dan Gambar 4.4.
Tabel 4.4 Hasil absorbansi standar kuersetin

Sampel Konsentrasi Absorbansi Persamaan
(µg/ml) (Y) regresi
0 0,0000
6 0,2606 Y = 0,04441x
Kuersetin 10 0,4259 – 0,00694
14 0,6031
18 0,8076
Gambar 4.4 Kurva kalibrasi larutan standar kuersetin
Gambar di atas menunjukkan kurva serapan kuersetin diperoleh nilai r =
30
0,9994 dengan persamaan regresi y = 0,0441x – 0,00694, dimana perhitungan
kurva kalibrasi telah dilampirkan pada Lampiran 12, halaman 50. Koefisien
korelasi, r, adalah indeks standar yang nilainya tidak tergantung pada skala
pengukuran variabel. Nilainya terletak dalam kisaran (−1, 1), dan nilai kuadratnya
menggambarkan pengurangan proporsional dalam variabilitas satu variabel ketika
yang lain dipertahankan konstan. Oleh karena itu, meskipun koefisien korelasi
dengan sendirinya merupakan ukuran penting hubungan antara variabel, itu adalah
R kuadrat yang memungkinkan perbandingan kekuatan hubungannya (Asuero dan
Gonz´alez, 2016).
4.5.4 Hasil Penetapan Kadar Total Flavonoid Dalam Ekstrak Etanol

daun Sibo (Leea indica F.)
Nilai absorbansi dari ekstrak etanol daun sibo yang diukur dengan
spektrofotometer UV-Vis diperoleh pada menit ke-30. Larutan sampel direaksikan
dengan reagen AlCl3 menghasilkan warna kekuningan. Hal ini menunjukkan
bahwa pada sampel mengandung senyawa flavonoid yang bereaksi dengan AlCl3
tetapi tidak menghasilkan warna kuning intensif seperti pada kuersetin. Hasil
penentuan kadar total flavonoid pada ekstak daun sibo dapat dilihat pada Tabel
4.5.
Tabel 4.5 Hasil kadar total flavonoid pada ekstrak daun sibo (Leea indica
F.)
Sampel Kadar Total Rata-rata Kadar Total
Flavonoid (mg Flavonoid (mg QE/g
QE/g sampel) sampel)
Ekstrak Etanol 20,4292
96% Daun Sibo 19,4445 20,3621
21,2126
Hasil penentuan kadar total flavonoid dari ekstrak etanol daun sibo
diperoleh 20,3621 mg QE/g ekstrak etanol daun sibo. Perhitungan kadar total
flavonoid dapat dilihat pada Lampiran 13 dan 14, halaman 51 dan 52.
31
Total kandungan flavonoid ditentukan menggunakan reagen aluminium
klorida. Aluminium klorida akan membentuk kompleks stabil dengan karbonil
kelompok pada C4 dan hidroksil pada C3 (flavonol) dan C5 dalam flavonol dan
flavon (Sembiring dkk., 2018).
Prinsip dari metode aluminium klorida yaitu pembentukan kompleks yang
stabil dengan C-4 gugus keto, serta pada C-3 atau C-5 gugus hidroksil dari flavon
dan flavonol. Dalam penambahannya, aluminium klorida membentuk kompleks
asam yang stabil dengan gugus ortohiroksil pada cincin A- atau B- dari senyawa-
senyawa flavonoid. Kuersetin dipilih sebagai larutan pembanding karena
merupakan salah satu senyawa golongan flavonoid yang dapat bereaksi dengan
aluminium klorida membentuk kompleks (Haeria, 2016).
32
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Hasil penelitian yang dilakukan terhadap ekstrak etanol daun sibo (Leea
indica F.) diperoleh kesimpulan:
a) Kadar total fenol dari ekstrak daun sibo menggunakan reagen Folin-
Ciocalteu dengan metode spektrofotometri UV-Vis adalah sebesar 14,5352
mg GAE/g sampel.
b) Kadar total flavonoid dari ekstrak daun sibo menggunakan reagen
aluminium klorida dengan metode spektrofotometri UV-Vis adalah
sebesar 20,3621 mg QE/g sampel.
5.2 Saran
Disarankan kepada peneliti selanjutnya untuk melakukan penentuan kadar
total fenol dan total flavonoid dengan ekstrak daun sibo menggunakan pelarut lain
seperti butanol atau etil asetat.
33
DAFTAR PUSTAKA
Alfaridz, F., dan Amalia, R., (2018). Review Jurnal: Klasifikasi dan Aktivitas
Farmakologi dan Senyawa Aktif Flavonoid. 16(3); 2-3.
Alfian, R., dan Susanti, H., (2012). Penetapan Kadar Total Fenolik dari Ekstrak
Metanol Kelopak Bunga Rosella Merah (Hibiscus Sabdariffa Linn) dengan
Variasi Tempat Tumbuh secara Spektrofotometri. Jurnal Ilmiah
Kefarmasian. 2(1); 77-79.
Aminah., Tomayahu. N., dan Abidin. Z., (2017). Penetapan Kadar Flavonoid
Total Ekstak Etanol Kulit Buah Alpukat (Persea americana Mill.) dengan
Metode Spektrofotometri Uv-Vis. Jurnal Fitokimia Indonesia. 4(2); 228.
Anulika, N.P., Ignatius, E. O., Raymond. E. S. dkk., (2016). The Chemistry Of
Natural Product: Plant Secondary Metabolites. International Journal of
Technology Enhancements and Emerging Engineering Research. 4(8); 2.
Asuero, A.G., Sayago. A., dan Gozalez. A. G., (2006). The Correlation
Coefficient: An Overview; 49.
Azizah, D.N., Kumolowati, E., dan Faramayuda, F., (2014). Penetapan Kadar
Flavonoid Metode AlCl3 pada Ekstrak Metanol Kulit Buah Kakao
(Theobroma Cacao L.). Jurnal Ilmiah Farmasi 2(2); 48.
Bais, S. (2013). A Phytochemical Review on an Important Medicinal Plat: Leea
Indica. 2013(1); 1-3.
Catalogue of Life., (2015). Indexing the World's Known Species.[online].
https://www.catalogueoflife.org/col/details/species/id/3f288e5c534335e66
c405b9922884901. [diakses: 09 Desember 2019].
Depkes. (1995). Materi Medika Indonesia Jilid VI. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia; Halaman 300, 302, 303, 306, 321, 325 dan
334.
DitjenPOM RI, 1995. Farmakope Indonesia. Edisi Keempat. Jakarta: Direktorat
Jenderal Pengawasan obat dan Makanan Departemen Kesehatan; Halaman
81-82.
Endarini, L.H. (2016). Farmakognisi dan Fitokimia. Jakarta: Pusdik SDM
Kesehatan; Halaman 145-147.
Fessenden, R.J dan Fessenden, J.S. (1986). Kimia Organik. Penerjemah: Aloysius
Hadyana Pudjaatmaka. Edisi Ketiga. Jilid Pertama. Jakarta: Penerbit
Erlangga; Halaman 279-280.
Haeria, Hermawati, Dg.Pine, A.T.U., (2016). Penentuan Kadar Flavonoid Total
dan Aktivitas Antioksidan Etanol Daun Bidara (Ziziphus spina-christi
L.).Journal of Pharmaceutical and Medicinal Science.1(2);60.
Hapsari. A.M., (2017). Pengujian KAndungan Total Fenol dan Flavonoid serta
Antioksidan Ekstrak Etanol Tempuyung (Sonchus arvenis L.); 68.
Harbrone, J.B. (1973). Phytochemical Methods. A Guide to Modern Techniques of
Plant Analysis. London: Chapman and Hall;Halaman 1 dan 15.
Kekuda, T.R.P., Raghavendra, H.L., Bharadway, N.A., dan Akhilesha, S., (2018).
Traditional Uses Chemistry and Pharmacological Activites of Leea Indica
(Burm. F. ) Merr. (Vitacea): A Comprehensive Review. International
Journal of Green Pharmacy. 12(1).; 71 dan 72.
Kiranmayee, P., Anitha, K., dan Usha, R., (2016). Isolation ans Identification of
Steroid Triterpenoid from the Polar and Non-polar Fractions of Caralluma
34
Attenvate (Wight) Roots. International Journal of Pharmacognosy and
Phytochemical Research. 8(6).; 1.
Marjoni, M. R. (2016). Dasar-dasar Fitokimia untuk Diploma III Farmasi.
Jakarta: CV Trans Info Medan; Halaman 6-10, 12 dan 13.
Markham, K.R., dan Andersen, O.M., (2006). Flavonoids. Chemistry,
Biochemistry and Applications. United States of America. CRC Press
Book; Halaman 397-398.
Mishra, G., Khosa, R.L., Singh, P., dan Tahseen, M.A., (2014). Ethnobotany and
Phytopharmacology of Lea Indica: An Overview . Journal of Coastal Life
Medicine. 4(1); 69-70.
Panche.,A.N., Dwan, A.D., dan Chandra, S.R., (2016). Flavonoids: An Overview .
Journal of Nutritional Science. 5(47); 1-3.
Rao, U.S.M., Abdurrazak, M., dan Mohd, K. S., (2016). Phytochemical Screening
Total Flavonoid and Phenolic Content Assays of Various Solvent Extracts
of Tepal of Musa Paradisiaca. Malaysian Journal of Analytical Science.
20(5); 1182-1183.
Robinson, T., (1995). Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Bandung. Penerbit
ITB; Halaman 191.
Rohman, A., (2007). Kimia Farmasi Analisis . Yogyakarta : Pustaka Pelajar;
Halaman 254, 261 dan 262.
Roy Indrianti Bangar S (2019). Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi n-Heksana dan
Frkasi Etil Asetat Daun Sibo (Leea indica F.) terhadap Staphylcoccus
aureus dan Escherichia coli. Skripsi; 46.
Saifudin. A., (2014). Senyawa Alam Metabolit Sekunder. Teori, Konsep dan
Teknik Permuniaan. Edisi Pertama. Yogyakarta : Penerbit Deepublish;
Halaman 46
Sam, S., Malik, A., dan Handayani (2016). Penetapan Kadar Fenolik Total dari
Ekstrak Etanol Bunga Rosella Berwarna Merah (Hibiscus Sabdariffa L.)
dengan Menggunakan Spektrofotometri UV-Vis . Jurnal Fitofarmako
Indonesia. 3(2); 1865.
Sari, N., (2017). Penentuan Kadar Total Fenol dan Total Flavonoid dari Ekstrak
Buah Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.). Skripsi; 43 dan 48.
Sembiring, E.N., Elya, B., dan Sauriasari, R., (2018). Phytochemical Screening.
Total Flavonoid and Total Phenolic Content and Antioxidant Activity of
Different Parts of Caesalpinia Bonduk (L.) Roxb. Pharmacognosy
Journal. 10(1); 123.
Senet, M.R.M., Raharja, IG.M.A.P., Darma, IK.T., dkk (2018). Penentuan
Kandungan Total Flavonoid dan Total Fenol dari Akar Kersen (Mutingia
Calabura) serta Aktivitasnya sebagai Antioksidan. Jurnal Kimia 2(1); 16
dan 17.
Shah, R.S., Pawar, R.B., Shah, R.R., dkk., (2015). Uv-Visible Spectroscopy. A
Review. International Journal of Institutional Pharmacy and Life Science.
5(5)., Halaman 490-493.
Tungmunnithum, D., Thongboonyou, A., Pholboon, A., dan Yangsabai, A.,
(2018). Flavonoids and Other Phenolic Compunds from Medicinal Plants
for Pharmaceutical and Medical Aspects: An Overview. 5(93); 2.
Valkenburg, J.L.C.H dan Bunyapraphatsara, N., (2002). Plant Resources of
South-East Asia No 12(2). Medicinal and Poisonous Plants 2. Bogor.
Prosea Foundation; Halaman 330.
35
Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan
36
Lampiran 2. Bagan kerja penelitian
Daun Sibo (1,2 kg)

dicuci dari pengotor sampai bersih
ditiriskan
ditimbang berat basahnya (1,08 kg)
dikeringkan pada lemari pengering

dengan suhu 40-50°
ditimbang berat keringnya
Simplisia (1,00 kg)
diperiksa secara organoleptis
dihaluskan dengan blender
disimpan dalam wadah yang tertutup

rapat sebelum digunakan
Serbuk simplisia (0,8) kg)
Skrining fitokimia Ekstrak
Dimaserasi
Senyawa golongan: dengan
1. Alkaloid etanol 96 %
2. Glikosida Ekstrak etanol
3. Saponin
4. Tanin
Skrining
5. Flavonoida fitokimia
6. Steroid/Triterpeoid. Ditentukan kadar
total fenol dan
total flavonoid
dengan
spektrofotometer
UV-Visible
37
Lampiran 3. Bagan pembuatan ekstrak etanol daun sibo (Leea indica)
800 g serbuk simplisia

dimasukkan ke dalam wadah
dituangi dengan 75 bagian etanol 96 % dan
ditutup rapat
dibiarkan selama 5 hari terlindung dari
cahaya, sambil sering diaduk
diserkai
Maserat Ampas
ditambahkan 25 bagian etanol

96% hingga diperoleh 100
bagian
diserkai
Maserat Ampas
1
digabung filtrat I dengan filtrat II
dipekatkan dengan rotary evaporator
Ekstrak kental (50,5 g)
38
Lampiran 4. Gambar tumbuhan dan daun sibo
Gambar tumbuhan Sibo
Gambar daun Sibo
39
Lampiran 5. Simplisia dan serbuk daun sibo
Gambar simplisia daun sibo
Gambar serbuk simplisia daun sibo
40
Lampiran 6. Gambar alat spektrofotometer UV-Visibel (Shimadzu).
Gambar alat Spektrofotometer UV-Visibel (Shimadzu).
41
Lampiran 7. Data pengukuran waktu kerja (operating time) larutan Asam Galat
dengan reagen Folin-Ciocalteu dan Natrium Karbonat 7,5%
No. Menit ke- Absorbansi
1 0 0,3354
2 1 0,3626
3 2 0,3710
4 3 0.,3744
5 4 0,3779
6 5 0,3801
7 6 0,3844
8 7 0,3844
9 8 0,3858
10 9 0,3897
11 10 0,3921
12 11 0,3948
13 12 0,3974
14 13 0,4003
15 14 0,4026
16 15 0,4076
17 16 0,4080
18 17 0,4109
19 18 0,4135
20 19 0,4163
21 20 0,4188
22 21 0,4214
23 22 0,4240
24 23 0,4251
25 24 0,4289
26 25 0,4306
27 26 0,4333
28 27 0,4353
29 28 0,4377
30 29 0,4397
31 30 0,4417
32 31 0,4442
33 32 0,4456
34 33 0,4476
35 34 0,4495
36 35 0,4512
37 36 0,4529
38 37 0,4549
39 38 0,4563
40 39 0,4578
41 40 0,4597
42 41 0,4610
43 42 0,4625
42
44 43 0,4640
45 44 0,4655
46 45 0,4669
47 46 0,4677
48 47 0,4696
49 48 0,4708
50 49 0,4716
51 50 0,4730
52 51 0,4743
53 52 0,4757
54 53 0,4767
55 54 0,4776
56 55 0,4790
57 56 0,4801
58 57 0,4812
59 58 0,4831
60 59 0,4840
61 60 0,4850
62 61 0,4861
63 62 0,4869
64 63 0,4878
65 64 0,4887
66 65 0,4896
67 66 0,4906
68 67 0,4913
69 68 0,4923
70 69 0,4931
71 70 0,4939
72 71 0,4947
73 72 0,4954
74 73 0,4963
75 74 0,4970
76 75 0,4980
77 76 0,4884
78 77 0,4996
79 78 0,5000
80 79 0,5008
81 80 0,5011
82 81 0,5022
83 82 0,5030
84 83 0,5033
85 84 0,5042
86 85 0,5050
87 86 0,5055
88 87 0,5062
89 88 0,5070
90 89 0,5072
43
91 90 0,5078
92 91 0,5087
93 92 0,5093
94 93 0,5097
95 94 0,5104
96 95 0,5110
97 96 0,5116
98 97 0,5123
99 98 0,5126
100 99 0,5132
101 100 0,5140
44
Lampiran 8. Perhitungan persamaan regresi dari kurva kalibrasi Asam Galat
X Y XY 𝑋2 𝑌2
0 0,0000 0,0000 0 0,0000
6 0,2596 1,5576 36 0,0674
10 0,4153 4,1530 100 0,1724
14 0,6021 8,4294 196 0,3625
18 0,8106 14,5908 324 0,6571
ΣX = 48 ΣY = ΣXY = Σ𝑋 2 = 656 Σ𝑌 2 =
2,0876 28,7308 1,2594
X̄ = 9,6 Ȳ = 0,4175
(ΣXY)−(ΣX)(ΣY)/n
a= b = Ȳ - aX̄
(ΣX2 )−(ΣX)2 /n
b = 0,4175 – (0,0445)(9,6)
28,708 – (48)(2,0876)/5
a = (656)−(48)2 /5 b = - 0,0097
8,6898
a=
195,2
a = 0,0445
Jadi, persamaan regresi adalah Y = 0,0445x – 0,0106
Koefisien korelasi (r)
r=
2 2
√[(ΣX2 )−((ΣX) )][(ΣY2 )−((ΣY) )]
n n
28,7308 – (48)(2,0876)/5
r=
2 2
√[(656)−((48) )][(1,2594)−((2,0876) )]
5 5
8,6898
r=
√(195,2)(0,3878)
r = 0,9988
45
Lampiran 9. Hasil penetapan kadar total Fenol pada ekstrak daun Sibo (Leea
Indica F.)
Berat Volume FP Absorbansi Rata-rata Konsentrasi Kadar

sampel sampel absobansi (µg/ml) total
(g) (ml) fenol (mg
GAE/g
sampel)
0,3190
0,3197
10 5 0,3193 7,3910 14,6647
0,0252 0,3196
0,3194
0,3192
0,3376
0,3373
0,0255 10 5 0,3367 0,3367 7,7820 15,2588
0,3359
0,3363
0,2990
0,2996
0,0254 10 5 0,2992 0,2997 6,9506 13,6823
0,2999
0,3010
Rata-rata kadar total fenol 14,5352
Keterangan: FP = Faktor Pengenceran
46
Lampiran 10. Contoh perhitungan kadar total Fenol pada ekstrak daun Sibo
(Leea Indica F.).
Rumus perhitungan:
konsentrasi (mg/ml) x volume sampel (ml)

Kadar total fenol = x FP
berat sampel (g)
Volume sampel = 5mL
Berat sampel = 0,0252
Faktor Pengenceran = 5
Absorbansi rata-rata = 0,3193
Persamaan regresi adalah Y = 0,0445x – 0,0096

0,3193 + 0,0096 = 0.0445x
x = 7,3910µg/ml
(7,3910 ÷ 1000) x 10
Kadar Total Fenol = x5
0,0252
= 14,6647 mg GAE/g sampel
47
Lampiran 11. Data pengukuran waktu kerja (operating time) larutan Kuersetin
dengan reagen aluminium klorida 10% dan natrium asetat
No. Menit ke- Absorbansi
1 0 0,7862
2 1 0,7888
3 2 0,07879
4 3 0,7882
5 4 0,7881
6 5 0,7857
7 6 0,7865
8 7 0,7860
9 8 0,7924
10 9 0,7892
11 10 0,7936
12 11 0,7949
13 12 0,7944
14 13 0,7913
15 14 0,7943
16 15 0,7940
17 16 0,7947
18 17 0,7946
19 18 0,7939
20 19 0,7930
21 20 0,7932
22 21 0.7938
23 22 0.7931
24 23 0,7938
25 24 0.7933
26 25 0,7934
27 26 0,7935
28 27 0,7937
29 28 0,7934
30 29 0,7931
31 30 0,7933
32 31 0,7935
33 32 0,7937
34 33 0,7940
35 34 0,7942
36 35 0,7948
37 36 0,7951
38 37 0,7955
39 38 0,7957
40 39 0.7957
41 40 0.7959
42 41 0,7955
43 42 0,7954
48
44 43 0,7953
45 44 0,7957
46 45 0,7956
47 46 0,7960
48 47 0,7965
49 48 0,7962
50 49 0,7963
51 50 0,7965
52 51 0,7967
53 52 0,7970
54 53 0,7968
55 54 0,7965
56 55 0,7972
57 56 0,7975
58 57 0,7974
59 58 0,7977
60 59 0,7980
61 60 0,7978
49
Lampiran 12. Perhitungan persamaan regresi dari kurva kalibrasi Kuersetin
X Y XY 𝑋2 𝑌2
0 0,0000 0,0000 0 0,0000
6 0,2606 1.5636 36 0,0679
10 0,4259 4,259 100 0,1814
14 0,6031 8,4434 196 0,3637
18 0,8076 14,5368 324 0,6522
ΣX = 48 ΣY = ΣXY = Σ𝑋 2 = 656 Σ𝑌 2 =
2,0972 28,8028 1,2652
X̄ = 9,6 Ȳ = 0,4194
a= b = Ȳ - aX̄
(ΣX2 )−(ΣX)2 /n
b = 0,4194 – (0,04441)(9,6)
28,8028 – (48)(2,0972)/5
a = (656)−(48)2 /5 b = - 0,00694
8,6697
a =
195,2
a = 0,04441
Jadi, persamaan regresi adalah Y = 0,04441x – 0,00694
Koefisien korelasi (r)
r=
2 2
√[(ΣX2 )−((ΣX) )][(ΣY2 )−((ΣY) )]
n n
28,8028 – (48)(2,0972)/5
r=
2 2
√[(656)−((48) )][(1,2652)−((2,0972) )]
5 5
8,6697
r=
√(195,2)(0,3855)
r = 0,9994
50
Lampiran 13. Hasil Penetapan Kadar Total Flavonoid pasa Ekstrak Daun Sibo
(Leea indica F.)
Berat Volume FP Absorbansi Rata-rata Konsentra Kadar

sampel sampel absobansi si total
(g) (ml) (µg/ml) flavonoid
(mg QE/g
sampel)
0,4525
0,4549
0,0252 10 5 0,4496 0,45032 10,2963 20,4292
0,4483
0,4463
0,4305
0,4399
0,0255 10 5 0,4391 0,43346 9,9167 19,4445
0,4290
0,4288
0,4707
0,4705
0,0254 10 5 0,4713 0,47118 10,7660 21,2126
0,4716
0,4718
Rata-rata kadar total flavonoid 20,3621
Keterangan: FP = Faktor Pengenceran
51
Lampiran 14. Contoh perhitungan kadar total Flavonoid pada ekstrak daun Sibo
(Leea indica F.).
Rumus perhitungan:
konsentrasi (mg/ml) x volume sampel (ml)

Kadar total flavonoid = x FP
berat sampel (g)
Volume sampel = 5mL
Berat sampel = 0,0252
Faktor Pengenceran = 5
Absorbansi rata-rata = 0,45032
Persamaan regresi adalah Y = 0,04441x – 0,00694
0,45032 + 0.00694 = 0.04441 x
x = 10,2963 µg/ml
(10,2963 ÷ 1000) x 10
Kadar Total Fenol = x5
0,0252
= 20,4292 mg QE/g sampel
52

An F Is Kim 161501195

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

An F Is Kim 161501195

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PENETAPAN KADAR TOTAL FENOL DAN TOTAL

FLAVONOID DARI EKSTRAK ETANOL DAUN SIBO (Leea

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Penulis menyampaikan rasa terima kasih kepada kepada Bapak Drs.

banyak membimbung penulis selama masa perkuliahan. Penulis juga mengucapkan

Farmasi yang telah menyediakan fasilitas kepada penulis selama perkuliahan di

sehari-hari sejak penulis dilahirkan.

Keywords: Sibo, ethanol extract, total phenol, total flavonoids

Tabel .......................................................................................................... Halaman

Gambar ...................................................................................................... Halaman

Gambar ...................................................................................................... Halaman

1.1 Latar Belakang

Herbal telah menempati tempat yang berbeda dalam kehidupan sejak

perubahan yang nyata ke arah penyembuhan penyakit menggunakan herbal. Saat

dapat diandalkan daripada obat-obatan sintetis yang mahal, banyak di antaranya

memiliki efek samping yang merugikan (Mishra, 2016).

Di Indonesia terutama di Sumatera Utara, Leea indica umumnya dikenal

keputihan, kanker usus, dan kanker rahim (Bais, 2013).

Penelitian sebelumnya menyebutkan daun sibo memiliki kadar air 9,33%,

Fenolik adalah kelompok fitokimia terbesar yang paling banyak dan

ditemukan pada tanaman vaskular. Senyawa fenolik seperti kuersetin, rutin,

konstituen tanaman yang sangat penting (Rao dkk., 2016).

Flavonoid adalah kelompok terbesar senyawa fenolik yang terdapat secara

glikosida. Mereka ditemukan memiliki banyak aktivitas biologis termasuk

antimikroba, antiulcer, antiarthritic, antiangiogenik, antikanker, penghambatan

Fenolik dan flavonoid umumnya dikenal sebagai molekul fitokimia

terbesar dengan sifat antioksidan dari tanaman (Tungmunnithum, 2018), (Rao

dkk., 2016). Menurut Tungmunnithum (2018), ekstrak rimpang Polygonatum

verticillatum (L.), juga menunjukkan aktivitas antioksidan yang terkait dengan

tingkat komposisi fenolik.

Berdasarkan hal di atas, yang menyebutkan senyawa fenol dan flavonoid

sangat bermanfaat dalam pengobatan sehingga pada penelitian ini dilakukan

secara spektrofotometri UV-Vis.

1.2 Perumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas, maka permasalan pada penelitian ini

pereaksi Folin-Ciocalteu menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis?

dengan pereaksi aluminium klorida menggunakan metode

1.3 Hipotesis Penelitian

Berdasarkan perumusan masalah diatas, maka hipotesis pada penelitian ini

pereaksi Folin-Ciocalteu menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis.

pereaksi aluminium klorida menggunakan metode spektrofotometri UV-

1.4 Tujuan Penelitian

Tujuan penelitian ini adalah:

pereaksi Folin-Ciocalteu menggunakan metode spektrofotometri UV-

b. Untuk menetapkan kadar total flavonoid ekstrak etanol daun sibo

dengan pereaksi aluminium klorida menggunakan metode

Manfaat penelitian ini adalah untuk menambah informasi dan

1.6 Kerangka Pikir Penelitian

flavonoid ekstrak etanol daun sibo adalah sebagai berikut:

Variabel Bebas Variabel Terikat Parameter

Kadar Total Fenol:

Gambar 1.1 Kerangka Penelitian

2.1 Uraian Tumbuhan

lonjong atau berbentuk bulat panjang.Tumbuhan ini memiliki namalain seperti

(Thailand); Hastipalash (India) (Valkenburg dkk, 2002).

2.1.1 Taksonomi Tumbuhan

Menurut Catalogue of Life., (2015)., daun sibo (Leea indica) berada di

bawah klasifikasi ilmiah sebagai berikut:

Species : Leea Indica (Burm. F.) Merr

2.1.2 Morfologi Tumbuhan