Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Phytomedicine Plus 1 (2001) 100105

Daftar isi tersedia di SainsLangsung

Fitomedicine Plus

beranda jurnal: www.sciencedirect.com/journal/phytomedicine-plus

Pengaruh kombinasi hibrida dari Eritroksilum revolutum Pasar. ekstrak etanol daun atau
fraksi yang diperkaya alkaloid dengan obat antibiotik terhadap strain bakteri yang
resistan terhadap banyak obat

Maisa FS Barbosa A,*, Paulo HO Miranda A, Carlos A. Souza A, Cl´écio S. Ramos B, Andr´é L. Melo A
, Janaína E. Rocha C, Camila F. Bezerra C, Maria S. Costa C, Helenicy NH Veras D, Henrique DM
Coutinho C, Irwin RA Menezes C, Rog´ério A. Saraiva A,*
A Unit Akademik Serra Talhada, Universitas Pedesaan Federal Pernambuco, Serra Talhada, Negara Bagian Pernambuco 56903-000, Brasil
B Departemen Kimia, Universitas Pedesaan Federal Pernambuco, Recife, Negara Bagian Pernambuco 52171-900, Brasil
C Departemen Kimia Biologi, Universitas Regional Cariri, Crato, Ceará State 63105-000, Brasil
D Kampus Ilmu Kesehatan, Pusat Universitas Leão Sampaio, Juazeiro do Norte, Negara Bagian Ceará 63040-005, Brasil

INFO ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Latar belakang Kombinasi antara obat antibiotik dan ekstrak yang berasal dari tanaman obat merupakan salah
Produk alami satu strategi yang menjanjikan melawan strain bakteri multidrug-resistant (MDR) untuk mengalahkan resistensi
sinergisme
antimikroba.
Erythroxylaceae
Hipotesis/Tujuan Kami bertujuan untuk mengevaluasi efek antibakteri dari kombinasi hibrida ekstrak etanol
Tanaman obat
(EREE) atau fraksi yang diperkaya alkaloid (ERAF) yang diperoleh dari Eritroksilum revolutum daun dan obat
Resistensi mikroba
antibiotik konvensional.
Metode Kami menguji aktivitas antimikroba EREE dan ERAF in vitro terhadap gram positif (Stafilokokus aureus)
dan gram negatif (Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa) strain standar dan MDR. Selain itu, kami
melakukan studi fitokimia menggunakan GC/MS,1H, 13spektrum C NMR, dan teknik dua dimensi.
Hasil Meskipun nilai konsentrasi hambat minimum (MIC) dari EREE atau ERAF saja terhadap pertumbuhan bakteri adalah ≥
1024 μg/ml, kami menunjukkan efek sinergisme total dalam kombinasi hibrida ERAF + gentamisin, ERAF + norfloxacin, dan
ERAF + eritromisin terhadap MDR S. aureus regangan, dengan pengurangan MIC yang signifikan dari
84,7%, 75,0%, dan 89,85%, masing-masing. Meskipun EREE menunjukkan efek sinergisme total dalam kombinasi
hibrida gentamisin + EREE (dengan penurunan MIC yang signifikan sebesar 68,8%), sebaliknya, EREE juga
menimbulkan efek antagonis yang kuat dalam beberapa kombinasi hibrida terhadap strain bakteri MDR yang diuji.
Studi fitokimia mengungkapkan dalam ERAF adanya dua alkaloid tropane yang dijelaskan untuk pertama kalinya
dalam keluarga Erythroxylaceae: 6-(2'-methylbutyryloxy)-3-hydroxytropane (87,07%) dan 6-butyryloxy-3-
hydroxytropane (12,93%).
Kesimpulan Bersama-sama, data ini dapat menyoroti bukti pertama dari fraksi alkaloid yang diperkaya dari E. revolusi
dalam kombinasi hibrida dengan antibiotik, dan mengusulkan alkaloid tropane dari E. revolusi sebagai kandidat potensial
baru dalam kombinasi obat untuk pengobatan infeksi yang disebabkan oleh MDR S. aureus, yang merupakan salah satu agen
utama penyebab infeksi dengan kematian di seluruh dunia.

Singkatan: ABC, Kaset Pengikat ATP; ANOVA, analisis varians; ATCC, Koleksi Budaya Tipe Amerika; BHI, Infus jantung otak; EC05, strain multidrugresistantEscherichia
coli 05; ERAF,Eritroksilum revolutum fraksi yang diperkaya alkaloid daun; EREE,Eritroksilum revolutum ekstrak etanol daun; Eri, eritromisin; FICI, indeks konsentrasi
penghambatan fraksional; GC/MS, kromatografi gas digabungkan dengan spektrometri massa; Gen, gentamisin; gHMBC, koherensi ikatan ganda heteronuklear
berbantuan gradien; HESBRA, Herbarium Semiarid Brasil (Serra Talhada, Brasil); HIA, Agar infus jantung; MDR, tahan multi-obat; MIC, konsentrasi hambat minimum;
MICdrug, MIC dari obat saja; MICExt, MIC dari ekstrak saja; MICdrug/ext, MIC obat dalam kombinasi dengan ekstrak; NMR, resonansi magnetik nuklir; Juga, norfloksasin;
PA24, strain regangan yang resistan terhadap berbagai obatPseudomonas aeruginosa 24; SA10, strain strain yang resistan terhadap berbagai obat
Stafilokokus aureus 10; WHO, Organisasi Kesehatan Dunia.
* Penulis yang sesuai.
Alamat email: maisafernanda_@hotmail.com (MFS Barbosa), rogerioaqsaraiva@hotmail.com (RA Saraiva).

https://doi.org/10.1016/j.phyplu.2021.100105
Diterima 24 Mei 2021; Diterima dalam bentuk revisi 2 Agustus 2021; Diterima 8 Agustus 2021
Tersedia online 10 Agustus 2021
2667-0313/© 2021 Para Penulis. Diterbitkan oleh Elsevier BV Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY-NC-ND
(http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).
MFS Barbosa dkk.
pengantar
Peningkatan resistensi antibiotik yang stabil dan mengkhawatirkan
merupakan salah satu tantangan terbesar bagi kesehatan masyarakat di seluruh
dunia, terutama karena penggunaan antimikroba yang berlebihan.Munguia dan
Nizet, 2017). Bahkan ada negara di mana pengobatan antibakteri menjadi tidak
efektif pada lebih dari setengah pasien (WHO, 2014).
Sebuah pemodelan baru-baru ini oleh Independent Review on
Antimicrobial Resistance telah memperkirakan bahwa superbug akan
menyebabkan tambahan 10 juta kematian per tahun dan kerugian hingga
US$ 100 triliun dari produk domestik bruto (PDB) global pada tahun 2050
jika solusi tidak tersedia (Sugden et al., 2016). Namun, dengan kemajuan
pandemi COVID-19 di awal 2020-an, yang menyebabkan peningkatan
signifikan dalam konsumsi antibiotik, skenario ini, sayangnya, dapat
menjadi lebih buruk (Rawson dkk., 2020).
Kombinasi obat antibiotik atau obat sintetik/antibiotik dengan
ekstrak atau senyawa yang berasal dari tumbuhan obat (Lahmar dkk.,
2017), baru-baru ini disebut sebagai terapi "kombinasi hibrida", telah
ditunjukkan sebagai salah satu strategi yang layak untuk mengatasi
resistensi antimikroba (Wagner dan Effert, 2017). Kombinasi hibrida
herbal dan obat-obatan dapat memberikan peningkatan aktivitas
farmakologis (yang dapat mempengaruhi tidak hanya satu tetapi
berbagai target) dan secara bersamaan meminimalkan efek samping
toksik obat sintetis (Wagner dan Effert, 2017). genusEritroksilum (
Erythroxylaceae) secara luas dikenal memiliki beberapa alkaloid
tropane (yang merupakan senyawa penanda dari spesies tanaman ini)
selain senyawa bioaktif lainnya seperti flavonoid, tanin, terpen, dan
fenilpropanoid.Zuanazzi dkk., 2001).
Eritroksilum revolutum Mart., yang dikenal di Brasil sebagai “araçá-bravo”,
merupakan tumbuhan endemik dari Brazil Timur Laut (Loiola dkk., 2007)
digunakan dalam pengobatan tradisional sebagai afrodisiak dan herbal
tonik (Agra et al., 2008). Selain itu, penelitian sebelumnya telah mengaitkan
sifat antimikroba tanaman dari genusEritroksilum (Aguiar dkk., 2012;
Basah, 2011), tetapi tidak ada penelitian yang berfokus pada sifat antimikroba dari
E. revolusi tersedia sejak saat itu.
Studi tentang kombinasi hibrida ekstrak dari Eritroksilum spesies dan
obat antibiotik juga langka. Dengan pemikiran ini, kami mengusulkan untuk
mengevaluasi efek kombinasi hibrida ekstrak etanol atau fraksi yang
diperkaya alkaloid dariE. revolusi daun dan beberapa obat antibiotik
konvensional terhadap multidrug-resistant (MDR) Gram positif (Stafilokokus
aureus) atau gram negatif (Escherichia coli dan
Pseudomonas aeruginosa) sebagai strategi alternatif baru untuk
mengatasi resistensi antimikroba.
Bagian eksperimental
Strain bakteri
Strain bakteri standar berikut digunakan: S. aureus ATCC
6538, E. coli ATCC 25922, P. aeruginosa ATCC 9027, dan strain bakteri yang
diisolasi secara klinis S. aureus 10 (SA10), E. coli 06 (EC06) dan P. aeruginosa
24 (PA24) (Tabel 1). Profil resistensi strain SA10, EC06 dan PA24 sebelumnya
dievaluasi dengan metode difusi cakram agar, menurutSaraiva dkk. (2011).
Semua strain dipertahankan pada agar infus jantung miring (HIA, Difco
Laboratories Ltd., Franklin Lakes, NJ, USA). Sebelum pengujian, sel-sel
ditumbuhkan semalaman pada suhu 37◦C dalam infus jantung otak (HIA,
Difco Laboratories Ltd., Franklin Lakes, NJ, USA).
Narkoba
Aminoglikosida gentamisin (Gen), fluoroquinolone norfloxacin (Nor)
dan makrolida eritromisin (Ery) dibeli dari Sigma-Aldrich (Burlington,
Massachusetts, USA). Semua obat dilarutkan dalam air steril.
2
Phytomedicine Plus 1 (2001) 100105
bahan tanaman
Daun dari E. revolusi dikumpulkan dalam Caatinga (Daerah semak xeric Brasil)
terletak di Mata da Pimenteira Taman Negara, kota Serra Talhada, Negara Bagian
Pernambuco, Brasil (S 7 ◦4'29.8” L 38 ◦18'07.2") pada bulan Maret
2017. Spesimen voucher disimpan di Brazilian Semiarid Herbarium
(HESBRA) dari Federal Rural University of Pernambuco, dengan nomor
3711.
Pembuatan Ekstrak Etanol Daun E. revolutum (EREE) dan Fraksi
Diperkaya Alkaloid (ERAF)
E. revolusi daun dikeringkan dalam kompor pada suhu 40 ◦C selama 72 jam dan
digiling menjadi bubuk homogen. Bahan tanaman bubuk (770 g)
diekstraksi dengan 6 l etanol 96% selama 72 jam (prosedur ekstraksi ini
diulang tiga kali setelah penyaringan). Pelarut yang diekstraksi setelah
penyaringan dipekatkan di bawah tekanan tereduksi pada 40◦C untuk
menghasilkan 98 g EREE.
ERAF diperoleh sesuai dengan prosedur yang dijelaskan oleh Da Rocha
dkk. (2009), dengan substitusi kloroform dengan etil asetat sebagai pelarut.
40 g EREE diencerkan dalam 400 ml etanol 96% kemudian diasamkan
dengan asam klorida 3% hingga mencapai pH 2. Larutan ekstrak
difraksinasi menggunakan etil asetat dan air (1:1), dan fasa organik dibuang
sedangkan fasa airnya disesuaikan dengan pH 9 dengan amonium
hidroksida pekat. Fasa berair basa difraksinasi dengan etil asetat dan fasa
organik setelah penyaringan, diikuti dengan pengeringan di atas natrium
sulfat anhidrat untuk memekatkannya pada suhu 40◦C untuk menghasilkan
9 g ERAF. Semua fase diajukan ke uji Dragendorff dan hanya ERAF yang
positif mengandung alkaloid.
Efek antimikroba: penentuan konsentrasi hambat minimum (MIC)
ekstrak saja dan obat antibiotik saja
KHM ekstrak (EREE dan ERAF) atau antibiotik (gentamisin, norfloksasin,
dan eritromisin) terhadap strain bakteri ditentukan dalam BHI dengan uji
mikrodilusi menggunakan suspensi 105 CFU / ml dan rentang konsentrasi
obat atau ekstrak 1024-1 μg/ml (pengenceran serial dua kali lipat) dalam 96
pelat sumur. Kontrol negatif terdiri dari media kultur dan pembawa (larutan
DMSO 5%) yang digunakan dalam pengenceran ekstrak. 96 well-plate
diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 .◦C. MIC didefinisikan sebagai
konsentrasi terendah di mana tidak ada pertumbuhan yang diamati, seperti
yang diungkapkan oleh reagen resazurin (Merck, Darmstadt, Jerman) dari
perubahan warna (biru menjadi ungu atau merah muda). Setiap percobaan
dilakukan dalam rangkap tiga (Saraiva et al., 2011).
Efek antimikroba: penentuan MIC kombinasi hibrida (obat
+ ekstrak)
MIC kombinasi ekstrak hibrida (EREE atau ERAF) dan
Tabel 1
Profil resistensi terhadap antibiotik dari strain bakteri terisolasi klinis yang digunakan.
Tekanan Sumber Profil resistensi
Escherichia coli 06 Air seni Ca, Cef, Cf, Cro, Cpm.
(EC06) budaya
Pseudomonas aeruginosa Sengau Ami, Cip, Cpm, Ctz, Imi, Lev, Mer, Ptz.
24 (PA24) sekresi
Stafilokokus aureus dubur Amox, Amc, Amp, Asb, Azi, Ca, Cef, Cf,
10 (SA10) mengusap Cip, Cla, Clin, Ery, Lev, Mox, Oxa, Pena.
Amc-Amoksisilin + Asam Klavulanat; Ami- Amikasin; Amox- Amoksisilin; Amp-
Ampicillin; Asb-Ampicillin + Sulbactam; Azi-Azitromisin; Ca- Cefadroxil; Cef-
Sefaleksin; Cf-Sefalotin; Cip- Ciprofloxacin; Cpm- cefepime; Klaritromisin; Klin-
Klindamisin; Cro-Ceftriakson; Ctz - seftazidim; Eri- Eritromisin; Gen-Gentamisin;
Imi- imipenem; Lev-levofloxacin; Mermeropenem; Mox- Moksifloksasin; Oksasilin;
Pen-Penisilin; Ptz-Piperasilin + Tazobactam.
MFS Barbosa dkk.
antibiotik terhadap strain bakteri ditentukan dalam BHI dengan uji
mikrodilusi menggunakan suspensi 105 CFU/ml dan masing-masing
antibiotik (gentamisin, norfloksasin, atau eritromisin) pada kisaran
konsentrasi 1024-1 μg/ml (pengenceran serial dua kali lipat), dikombinasikan
dengan EREE atau ERAF pada konsentrasi tetap 64 μg/ml (MIC ekstrak saja/
16). Pelat diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37◦C. Pertumbuhan bakteri
dievaluasi menggunakan prosedur yang sama yang dijelaskan sebelumnya.
Setiap percobaan dilakukan dalam rangkap tiga (Saraiva et al., 2011).
Penentuan indeks konsentrasi penghambatan fraksional (FICI) dalam kombinasi
hibrida
Kami juga menghitung FICI dengan metode yang dilaporkan oleh Van
Dijk dkk. (2018), yang mempertimbangkan nilai MIC dan sesuai dengan
rumus berikut:
obat MIC/ext MICdrug/ext
FICI = +
MICdrug MICExt
dimana: MICdrug = MIC dari obat saja; MICExt = MIC dari ekstrak saja;
dan MICdrug/ext adalah MIC obat dalam kombinasi dengan ekstrak
(EREE atau ERAF) atau MIC ekstrak dalam kombinasi dengan obat.
Sinergi total (FICI .)≤ 0,5), sinergi parsial (0,5 < FICI ≤
0,75), tidak ada efek (0,75 < FICI ≤ 2) atau antagonisme (FICI > 2) antara
dua senyawa disimpulkan dari nilai FICI.
Skrining fitokimia kualitatif: indikasi metabolit sekunder
Skrining fitokimia kualitatif untuk EREE dan ERAF dilakukan
menurut: Matos (1997) dan Trease dan Evans (2002), dengan adaptasi.
Tes ini didasarkan pada penambahan reagen spesifik ke alikuot
ekstrak dan mengamati perubahan warna larutan atau pembentukan
endapan. Kami menyiapkan larutan stok dengan mengencerkan 0,1 g
ekstrak (EREE dan ERAF) dalam 10 ml metanol (dengan konsentrasi
akhir 10 mg/ml) untuk menganalisis keberadaan kelas molekul berikut:
(a) Alkaloid: 150 l sampel dan 50 l reagen Dragendorff. Munculnya
warna oranye dengan endapan menunjukkan adanya alkaloid.
(b) Senyawa fenolik: Satu tetes sampel diikuti oleh satu tetes FeCl .
2%3 ditambahkan pada selembar kertas saring. Adanya senyawa
fenolik dilambangkan dengan terbentuknya noda biru tua.
(c) Flavonoid: Setetes sampel ditambahkan ke strip kertas saring,
diikuti dengan setetes AlCl 5%3. Munculnya warna fluorescent
kuning pada pengembangan di bawah sinar UV menunjukkan
adanya senyawa.
(d) Flavanon: Beberapa potongan logam magnesium ditempatkan dalam
sumur dan kemudian 150 l sampel dan setetes HCl pekat
ditambahkan. Tes ini dianggap positif untuk flavanon ketika warna
kemerahan muncul.
(e) Kumarin: Sampel diteteskan pada kertas saring, diikuti dengan
larutan KOH 10%. Kumarin dideteksi dengan munculnya warna
fluoresen biru di bawah sinar UV pada 365 nm.
(f) Antrakuinon: 150 l sampel dan 50 l NaOH 0,5 mol/l ditambahkan
ke dalam sumur. Hasilnya positif ketika muncul warna merah.
(g) Tanin: 1 ml sampel ditambahkan ke dalam tabung reaksi di
samping setetes larutan gelatin 2,5%. Endapan putih
menunjukkan adanya tanin.
(h) Anthocyanidins dan chalcones: Tiga tabung reaksi menerima 1 ml
sampel. Tabung 1 diasamkan dengan HCl 0,5 mol/l (pH 3), tabung 2
dan 3 diasamkan dengan NaOH 0,5 mol/l (pH 8 dan 11). Munculnya
warna merah, ungu dan biru pada tabung 1, 2, dan 3 menunjukkan
3
Phytomedicine Plus 1 (2001) 100105
adanya antosianidin. Munculnya warna merah pada tabung 1
dan 3 menunjukkan adanya kalkon.
(i) Leucoanthocyanidins dan catechin: 1 ml sampel ditambahkan ke
dalam tabung reaksi dan diasamkan dengan HCl 0,5 mol/l (pH 3).
Setelah tabung dipanaskan, munculnya warna merah menunjukkan
leucoanthocyanidins dan warna kuning menunjukkan adanya
katekin.
(j) Triterpenoid dan steroid: 150 l sampel ditambahkan ke dalam
sumur, diikuti dengan penambahan satu tetes larutan anhidrida
asetat dan dua tetes larutan asam sulfat. Adanya warna hijau
biru menunjukkan adanya steroid dan triterpenoid warna
merah.
Identifikasi alkaloid tropan
Fraksi yang diperkaya alkaloid yang diencerkan dalam etil asetat (1 mg/ml)
dianalisis dengan kromatografi gas yang digabungkan dengan spektrometri
massa (GC/MS) pada peralatan Thermo Scientific TRACE 1300 yang digabungkan
dengan empat kali lipat ISQ yang beroperasi dalam mode EI pada 70 eV. Kolom
kapiler DB-5 dari silika cair (30 m× 0,25 mm × 0,25 μm) digunakan. Suhu oven
adalah 60–300◦C, pemberontakan 20 ◦C/menit (selama 14 menit). Panas awal
adalah 60◦C selama 3 menit, pemberontakan 40 ◦C/menit sampai 100 ◦C, dan
kemudian 20 ◦C/menit sampai 300 ◦C, ditahan selama 2 menit. Suhu injektor dan
detektor adalah 250◦C dan 280 ◦C, masing-masing. Helium digunakan sebagai gas
pembawa yang mengalir dengan kecepatan 1 ml/menit. Alkaloid yang
teridentifikasi dikonfirmasi dengan membandingkan data terukur dengan
literatur.1H (400 MHz) dan 13Data C NMR (100 MHz) direkam pada peralatan
spektrometer Varian UNMRS, menggunakan aseton-D6. Nilai pergeseran kimia (δ)
dilaporkan dalam ppm terkait dengan tetrametilsilan yang digunakan sebagai
standar internal dan konstanta kopling (J) dalam Hertz (Hz).
Analisis statistik
Nilai MIC dan FICI adalah sebagai sarana ± simpangan baku tiga
ulangan. Pada uji antimikroba, perbandingan nilai KHM antara
perlakuan dan galur dinilai dengan analisis varians dua arah (ANOVA)
dilanjutkan dengan uji Tukey. Kami menerima nilaip < 0,05 sebagai
signifikan secara statistik.
Hasil
Efek antibakteri
Nilai MIC untuk EREE dan ERAF saja terhadap semua strain bakteri
standar dan multiresisten adalah ≥ 1024 μg/ml, kecuali untuk ERAF
terhadap S. aureus ATCC 6538, dengan MIC 512 μg/ml (Meja 2). Dengan
demikian, konsentrasi yang diuji untuk EREE dan ERAF dalam kombinasi
hibrida dengan antibiotik (pada kisaran konsentrasi 1024-1 μg/ml –
pengenceran serial dua kali lipat) didefinisikan sebagai konsentrasi tetap 64
g/ml, yang setara dengan MIC/16. Namun, ketika kami menganalisis hibrida
Meja 2
Konsentrasi Hambatan Minimum (MIC) sebesar Eritroksilum revolutum ekstrak etanol
kasar daun (EREE) dan E. revolusi fraksi yang diperkaya alkaloid daun (ERAF) terhadap
Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa strain standar dan
multidrug-resistant (MDR). Data adalah rata-rata nilai MIC dari
tiga ulangan.
Strain bakteri mikrofon (μg/ml)
EREE ERAF
S. aureus ATCC 6538 ≥ 1024 512
S. aureus 10 (SA10)* ≥ 1024 ≥ 1024
E. coli ATCC 25922 ≥ 1024 ≥ 1024
E. coli 06 (EC06)* ≥ 1024 ≥ 1024
P. aeruginosa ATCC 9027 ≥ 1024 ≥ 1024
P. aeruginosa 24 (PA24)* ≥ 1024 ≥ 1024
Keterangan: * Strain MDR.
MFS Barbosa dkk. Phytomedicine Plus 1 (2001) 100105

kombinasi EREE atau ERAF dengan obat antibiotik, efek yang berbeda pada strain Tabel 3
MDR dapat dilambangkan. Indeks konsentrasi penghambatan fraksional (FICI) dari kombinasi hibrida yang
ERAF mampu mencapai penurunan nilai MIC yang signifikan terhadap berbeda dari antibiotik gentamisin (Gen), norfloksasin (Nor), atau eritromisin (Ery)
SA10 bila dikombinasikan dengan gentamisin (42,67 ± 18.48 μg/ml melawan dan 64 g/ml (konsentrasi tetap) dari Eritroksilum revolutum ekstrak etanol kasar
daun (EREE) atau E. revolusi fraksi yang diperkaya alkaloid daun (ERAF) terhadap
6.67 ± 18.48 μg/ml, pengurangan 84,7%, P < 0,01), norfloksasin (341,33
Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa
± 147.80 μg/ml melawan 85.33 ± 36.95 μg/ml, pengurangan 75,0%, p <
strain multidrug-resistant (MDR). Datanya kejam± simpangan baku FICI
0,001), dan eritromisin (170,67 ± 73.90 μg/ml melawan 17.33 ± 14.05
nilai dari tiga ulangan.
μg/ml, reduksi 89,85%, p < 0,0001), seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1-A, B,
FICI
dan C. Selanjutnya, menurut nilai FICI untuk SA10 (Tabel 3), kami menunjukkan
Hibrida MDR S. aureus MDR E. coli MDR P. aeruginosa
efek sinergisme total dalam kombinasi hibrida gentamisin + ERAF (FICI = 0,16 ±
kombinasi (SA10) (EC06) (PA24)
0,06), norfloksasin + ERAF (FICI = 0,33 ± 0,14), dan eritromisin + ERAF (FICI = 0,15 ± Gen + EREE 0.33 ± 0,11 (a) 1.72 ± 0,60 2.69 ± 1.16 (d)
0,12). Bersama-sama, data ini dapat menarik perhatian pada aktivitas antimikroba (C)
yang relevan dari ERAF terhadapS. aureus Gen + ERAF 0.16 ± 0,06 (a) 1.03 ± 0,00 1.01 ± 0,00 (c)
(C)
Strain MDR bila dikaitkan dengan antibiotik yang terlibat dalam penelitian ini.
Atau + EREE 0,67 ± 0,29 (c) 27.55 ± 0.00 9.73 ± 0,00 (d)
Selain itu, kami mengamati efek sinergisme parsial dalam (D)
kombinasi hibrida norfloxacin + ERAF (FICI = 0,51 ± 0,18, Tabel 3) dan Juga + ERAF 0.33 ± 0,14 (a) 1.00 ± 0,66 0,51 ± 0,18 (b)
eritromisin + ERAF (FICI = 0,66 ± 0.00, Tabel 3) terhadap regangan (C)
Ery + EREE 7,00 ± 0,00 (d) 2.00 ± 0.00 10.60 ± 0,00 (d)
PA24. Namun demikian, perbandingan antara nilai MIC dari kedua
(C)
antibiotik saja dan dalam kombinasi hibrida dengan ERAF tidak Ery + ERAF 0.12 ± 0,10 (a) 1.67 ± 0,58 0,66 ± 0,00 (b)
signifikan secara statistik (p > 0,05, Gambar 1-B dan C). (C)
Selanjutnya, EREE juga menunjukkan penurunan nilai MIC yang signifikan
Keterangan: (a): Sinergi total; (b): sinergisme parsial; (c): acuh tak acuh atau (d)
terhadap SA10 ketika dikombinasikan dengan gentamisin (42,67 ± 18.48
efek antagonisme.
μg / ml versus 13,33 ± 4.62 μg/ml, pengurangan 68,8%, p < 0,01) dan norfloksasin
(341,33 ± 147.80 μg/ml versus 170,67 ± 36.95 μg/ml, pengurangan 50,0%, p <
Profil kimia dan karakterisasi dengan skrining fitokimia, data
0,01), seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1-A dan B. Namun, mengingat nilai
spektra GC/MS, 1D dan 2D NMR
FICI untuk SA10 (Tabel 3), kami menunjukkan efek sinergisme total hanya dalam
kombinasi hibrida gentamisin + EREE (FICI = 0,33
Tabel 4 menunjukkan metabolit sekunder yang terdeteksi di EREE
± 0,11, Tabel 3). Kombinasi norfloxacin + EREE ditunjukkan sebagai efek
dan ERAF. Di EREE, skrining fitokimia kualitatif menunjukkan adanya
acuh tak acuh (FICI = 0,67± 0,29, Tabel 3).
steroid, flavonoid, flavanon, antrakuinon, tanin dan alkaloid dan tidak
Sebaliknya, EREE menimbulkan efek antagonis yang kuat seperti yang
adanya (atau non-deteksi) triterpenoid, kumarin, katekin dan
ditunjukkan oleh nilai FICI > 2.00 (Tabel 3), dan peningkatan nilai MIC
anthocyanidins. Seperti yang diharapkan, skrining fitokimia kualitatif
terhadap EC06 bila dikombinasikan dengan norfloxacin (4,67 ± 3.06 μg/ml
untuk ERAF diuji positif hanya untuk alkaloid (seperti yang
versus 128.00 ± 0.00 μg/ml, persentase peningkatan 2.640,9%, p < 0,05,
diungkapkan oleh reagen Draggendorf).
Gambar 3-B), PA24 bila dikombinasikan dengan norfloxacin (13,33 ± 4.62 μg/
Selain itu, data GC/MS dari ERAF (Gambar 2.) mengungkapkan adanya
ml versus 128.00 ± 0.00 μg/ml, persentase peningkatan 860,2%, p < 0,05,
dua puncak pada waktu retensi 10,5 menit (87,07%, senyawa 1) dan 9,9
Gambar 1-B) atau eritromisin (106,67 ± 36.95 μg/ml versus 1024.00 ± 0.00
menit (12,93%, senyawa 2). Berdasarkan interpretasi massa dan
μg/ml, persentase peningkatan 760,0%, p < 0,0001, Gambar 1-C), dan SA10
spektrum NMR, struktur kimia senyawa 1 telah dijelaskan sebagai
bila dikombinasikan dengan eritromisin (170,67 ± 73.90 μg/ml versus
alkaloid (Gambar 2.) sebagai 6-(2'-metilbutiriloksi)-3-hidroksitropana
1024.00 ± 0.00 μg/ml, persentase peningkatan 500,0%, p < 0,0001,
(1). Senyawa 1 sebelumnya telah dilaporkan untukDatura ceratocaula
Gambar 1-C).
dan Datura innoxia jenis (Berkov, 2003; Witte dkk., 1987)

Gambar 1. Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) obat antibiotik: (A) gentamisin (Gen), (B) norfloxacin (Nor) dan (C) eritromisin (Ery) sendiri atau dikombinasikan dengan
Eritroksilum revolutum ekstrak etanol kasar daun (EREE) atau E. revolusi fraksi yang diperkaya alkaloid daun (ERAF) terhadap strain bakteri resisten multidrug
Stafilokokus aureus (SA10), Escherichia coli (EC06), dan Pseudomonas aeruginosa (PA24). Bar itu jahat± simpangan baku tiga ulangan. Nilai batang yang diikuti oleh huruf
yang sama pada strain yang sama tidak berbeda nyata (P < 0,05) dengan Two-Way ANOVA dan uji Tukey.

4
MFS Barbosa dkk. Phytomedicine Plus 1 (2001) 100105

Tabel 4 sinyal pada 2,64 ppm (CH3-N), menunjukkan adanya hidrogen dari gugus metil
Analisis fitokimia kualitatif metabolit sekunder ditemukan di Eritroksilum yang difiksasi ke nitrogen. Tanda-tanda lain dari1H NMR dari cincin tropane
revolutum ekstrak etanol kasar daun (EREE) dan E. revolusi fraksi yang diperkaya adalah δH 3.52 (sl, H-1), δH 2.11 (D, H-2), δH 4.92 (T, H-3), δH 2.08 (D, H-
alkaloid daun (ERAF). 4), δH 3.56 (S, H-5), δH 4.94 (DD, H-6), δH 2.35 (DD, H-7). Gugus ester 2-
Metabolit sekunder EREE ERAF metilbutiriloksi disajikan dalam1Sinyal spektrum H NMR δH
Alkaloid + + 2.06 (sl, H-2'), δH 1.61–1.69 (M, H-3'), δH 0,88 (T, H-4') e δH 1.10 (D, H-5').
Senyawa fenol + ND
Analisis dari13C dan DEPT NMR menunjukkan tanda-tanda karakteristik jenis
Flavonoid + ND
Flavanon + ND karbon, dengan empat gugus metilen, lima gugus metin, dan tiga gugus
kumarin ND ND metil. Karbon kerangka tropane menunjukkan tanda-tanda khas dengan
Antrakuinon + ND pergeseran kimia:δC 62.8 (C-1), δC 38.9 (C-2), δC 69,7 (C-3), δC
Tanin + ND 30.5 (C-4), δC 64.4 (C-5), δC 72,48 (C-6), δC 35.0 (C-7), δC 40.8 (CH3-N), semua
Antosianidin ND ND
dengan nilai yang sangat dekat dengan yang ditemukan dalam literatur (
Chalcones ND ND
Leucoanthocyanidins ND ND San dkk., 2020; Chavez dkk., 2002; Alves dkk., 2016).
Katekin ND ND Eksperimen gHMBC mengungkapkan keberadaan cincin tropane
Triterpenoid ND ND dari korelasi sinyal di δH 2.64 (CH3-N) dengan karbon tiga cincin δC 62.8
Steroid + ND
(C-1), δC 64.4 (C-5) dan δC 72,48 (C-6) (Cretton et al., 2017;
Keterangan: + (positif, terdeteksi); ND (tidak terdeteksi). Nishiyama dkk., 2007; Queiroz dkk., 2009). Kelompok ester 2-
metilbutyryloxy ditampilkan jarak jauh1H-13Korelasi C dalam gHMBC
dan di sini kedua senyawa tersebut terkait untuk pertama kalinya mengkonfirmasi struktur rantai samping dengan tanda-tanda δH 1.10 (D,
dalam spesies dari famili Erythroxylaceae. Mereka]+ pada m/z 241 H-5') dan δC 176,5 (C=O, C-1'), δC 27.3 (C-3'), δC 41.6 (C-2'). Tanda-tanda diδH
menunjukkan intensitas 40% dan sesuai dengan rumus molekul C13H23 0,88 (H-4 ') dengan δC 27.3 (C-3kan) dan δC 41,6 (C-2 ') juga diamati (
TIDAK3. Puncak basa pada m/z 96 menegaskan adanya inti tropane Gambar 3) (Cretton et al., 2017). Meskipun penting1H-13Korelasi C tidak
dengan perlekatan gugus hidroksil bebas ke C-3 dan gugus ester pada diamati pada spektrum gHMBC H-6 dengan C-1kan untuk dapat
posisi C-6 (Christen dkk., 1993). Ion dengan intensitas lebih rendah menyatakan tentang substitusi gugus ester 2-metilbutiriloksi pada C-6,
pada m/z 113 [M+ - 128; H2C(7) HC(6)OOC5H9], puncak pada m/z 156 data tentang multiplisitas, perpindahan kimia dibandingkan dan
dengan intensitas 30% mengalami kehilangan fragmen [M+ - 85; C5H9 kopling konstan H-6 dalam literatur. Di sini, kami menemukan mereka
O], dan puncaknya pada m/z 140, intensitas 20% kehilangan [M+ - 101; sangat dekat dengan alkaloid dengan struktur serupa (Chavez dkk.,
C5H9HAI2], menunjukkan perlekatan bagian 2-metilbutiriloksi ke C-6 2002; Cretton et al., 2017; Humam et al., 2011).
dari inti tropane dan gugus hidroksil pada C-3 (El-Bazaoui dan
Bellimam, 2011). Bagian dari rantai 2-metilbutiril ester memberikan Selain itu, fragmen yang terdeteksi dari spektrum massa seperti pada m/
korespondensi dengan ion fragmen pada m/z 57 (C4H9, 62%) dari z 156 mengkonfirmasi keberadaan gugus ester 2-metilbutiriloksi yang
adalah 2-metilbutiriloksi bagian ke C-6 dari inti tropane dan gugus terkait dengan C-6 (El-Bazaoui dan Bellimam, 2011), dan dalam m/z 140 dan
hidroksil pada C-3 (El-Bazaoui dan Bellimam 2011). Fragmen lain 96 (basa puncak) adanya gugus hidroksil yang terikat pada C-3 (Christen
terdeteksi pada m/z 42 (C3H6, 53%) dan pada m/z 41 (C3H5, 73%). Dari dkk., 1993; Oliveira et al., 2011). ERAF dianalisis dengan1H, 13Spektrum C
data dari1H, 13Spektrum C NMR dan percobaan DEPT, HSQC, dan NMR, dan teknik dua dimensi, karena senyawa 2 adalah komponen kecil,
HMBC yang direkam dalam aseton-D6, kami mengamati tanda-tanda sinyal NMR, terutama dari 1H, tidak terdeteksi, membuat identifikasinya
karakteristik dan korelasi yang memungkinkan identifikasi struktur tidak mungkin dilakukan oleh spektrum NMR. Dengan demikian, senyawa 2
senyawa 1 (Tabel 5). NS1Spektrum H NMR menunjukkan singlet hanya diidentifikasi

Gambar 2. Profil kromatografi yang diperoleh dengan GC/MS menunjukkan dua puncak yang terkait dengan dua alkaloid tropane yang diidentifikasi dalam Eritroksilum revolutum
fraksi diperkaya alkaloid daun (ERAF). Senyawa 6-(2'-methylbutyryloxy)-3-hydroxytropane (1) adalah alkaloid utama, dengan kelimpahan relatif 87,07%, dan 6-butyryloxy-3-
hydroxytropane (2), dengan kelimpahan relatif 12,93%. RT: waktu retensi.

5
MFS Barbosa dkk. Phytomedicine Plus 1 (2001) 100105

Tabel 5 senyawa yang berbeda pada saat yang sama tampaknya mengurangi efek
1H (400 MHz) dan 13Data spektrum C NMR (100 MHz) untuk senyawa 1 (aseton- antimikroba obat. Juga, efek antagonis yang diperhatikan dalam beberapa
D6, dalam ppm, J dalam Hz) dibandingkan dengan literatur. kombinasi dapat dikaitkan dengan pengikatan antara senyawa tersebut
Senyawa data eksperimen 1* Chavez dkk. (2002)** dengan target obat, atau pengikatan dengan obat itu sendiri, menghasilkan
Posisi δ 13C δ 1H δ 13C δ 1H efek pengkelat untuk menghindari interaksi dengan target. Sebaliknya,
1 62.78 3.52 (sl, 1H) 61.2 3,66 (saku)
ERAF (yang mengandung dua alkaloid tropane) tidak menimbulkan efek
CH
antagonis pada semua kombinasi hibrida yang diuji, yang dapat diinginkan
2 38,9 CH2 2.11 (d, J = 6.0, 2H) 36.1 2,46 kapak (M)
2.14 persamaan (dl, J = 14.5) dari sudut pandang klinis.
3 69,74 4.92 (t, J = 5.2, 1H) 62,7 4.18 (tl, J = 5.0) Aguiar dkk. (2012)menemukan aktivitas antibakteri serupa terhadap
CH studi bakteri Gram-positif dengan ekstrak metanol, fraksi dan alkaloid
4 30,5 CH2 2.08 (d, J = 4.8, 2H) 37,3 2,46 kapak (M)
terisolasi dari E. caatingae. Karena EREE dan ERAF memberikan efek positif
1,88 persamaan (dl, J = 14.6)
5 64.4 CH 3.56 (S, 1H) 68,5 3.59 (sl)
terhadapS. aureus (a Gram-positif), bila dikombinasikan dengan gentamisin,
6 72.48 4.94 (dd, J = 10,0 e 79,7 6.02 (dd, J = 7.9 e 2.7) tetapi tidak melawan bakteri Gram-negatif, seperti
CH 3.6, 1 H) E. coli dan P. aeruginosa, yang menyajikan mekanisme resistensi yang
7 35,0 CH2 2.35 (dd, J = 15.2 e 36,2 3.12 (dd, J = 14,0 e 7,9), berbeda.
4.4, 2 H) 2.62 (M)
Perhatian khusus harus dibuat dari kombinasi E. revolusi
N-CH3 40.83 2.64 (S) 40,6 2.82 (S)
1' 176,47 — — — produk yang efektif melawan MDR S. aureus, karena strain ini adalah salah
2' 41.63 2.06 (M) — — satu agen utama yang menyebabkan infeksi dengan kematian di seluruh
CH dunia (WHO, 2014). Angka kematian yang tinggi ini, serta kerugian ekonomi
3' 27.3 CH2 1,61-1,69 (M) — —
yang disebabkan oleh infeksi yang disebabkan oleh strain ini, memperkuat
4' 11.75 0,88 (t, J = 7.6, 3H) — —
CH3
perlunya strategi untuk memecahkan masalah ini (Muto dkk., 2013). Banyak
5' 16.88 1.10 (d, J = 6.8, 3H) — — interaksi antara obat konvensional dan produk alami telah dilaporkan oleh
CH3 efek multi-target sinergis atau interaksi dengan mekanisme resistensi
* Beragam: S = kaos, D = doublet, dd = doublet dari doublet, T = tiga serangkai, M =
mikroba.Wagner dan Ulrich-Merzenich, 2009). Oleh karena itu, untuk
banyak; mencoba memahami bagaimana komponen EREE dan ERAF dapat bekerja
* *1H (300 MHz) dan 13C NMR (75 MHz), CDCl3. pada strain ini, tidak cukup hanya mengetahui mekanisme kerja antibiotik,
tetapi juga mekanisme resistensi strain yang diuji dan interaksi antara
semua komponen.
Resistensi terhadap antibiotik yang disajikan oleh MDR S. aureus
terjadi melalui mekanisme yang terkait dengan protein pengikat
penisilin (PBPs), enzim yang terletak di membran sel dan mengkatalisis
tahap akhir sintesis dinding bakteri. Resistensi dapat terjadi karena
kelebihan produksi enzim ini, menyebabkan peningkatan ketebalan
dinding, atau dengan produksi enzim anomali dengan afinitas rendah
terhadap antibiotik.Wagner dan Ulrich-Merzenich, 2009). Di sisi lain,
resistensi bakteri Gram-negatif, sepertiE. coli dan P. aeruginosa,
dikaitkan dengan beberapa mekanisme lain yang berbeda, seperti
pompa penghabisan, porins, perubahan konformasi membran plasma
Gambar 3. Korelasi diamati dalam gHMBC dengan senyawa 1. dan enzim, yang mengubah struktur antibiotik dengan fosforilasi,
asetilasi atau poliadenilasi.Tafur dan Villegas, 2008).
oleh GC/MS. Menurut interpretasi analisis GC/MS, diidentifikasi senyawa 2 Alasan lain mengapa penggunaan kombinasi hibrida penting adalah
sebagai 6-butyryloxy-3-hydroxytropane (Gambar 2.). Dalam kromatogram, karena kemampuannya untuk mengurangi toksisitas antibiotik selama
senyawa 2 muncul sebagai konstituen minor dengan intensitas relatif pengobatan. Misalnya, gentamisin menimbulkan toksisitas pada dosis
12,93%. Spektrum massa menyajikan ion molekul [M]+ pada m/z 227 tinggi, menyebabkan ototoxicity, kerusakan ginjal, gagal ginjal dan
dengan intensitas 22% dan rumus molekul C12H21TIDAK3. Dibandingkan kerusakan saraf.Oliveira dkk., 2006). Oleh karena itu, pengurangan dosis
dengan senyawa 1 (mayor), alkaloid ini menunjukkan satu gugus metil lebih terapeutik gentamisin bila dikaitkan dengan ERAF dapat meningkatkan
sedikit. Namun, pola fragmentasi mirip dengan alkaloid utama dengan keberhasilan pengobatan penyakit menular.
tanda pada m/z 156 [M+-71; C4H7O] dengan intensitas 8%, pada m/z 140 [M+ Mohtar dkk., (2009) mengevaluasi 13 senyawa alkaloid yang berbeda
- 87; C4H7HAI2] dengan intensitas 11%, dan pada m/ z 96 dengan intensitas sebagai agen penghambat potensial dan menemukan bahwa kina, piperin
67%, secara bersama-sama terungkap adanya substituen OH pada C-3, dan dan harmalin (menggunakan reserpin sebagai kontrol positif) mampu
gugus ester pada C-6. (El-Bazaoui dan Bellimam, 2011; Christen, dkk., 1990; menghambat pompa penghabisan terhadap tiga methicillin-resistant S.
Cinelli dan Jones, 2021). Pada gilirannya, puncak basa senyawa 2 diamati aureus (MRSA). Di sisi lain, alkaloid tropane atropin dan skopolamin gagal
pada m/z 43 (C3H7), menunjukkan fragmentasi khas dari kelompok ester menghambatnya. Namun, satu set alkaloid tropane diisolasi dari
dengan empat atom karbon. E.rotundifolium dan E. pervellei mampu menunjukkan aktivitas melawan
protein terkait resistensi multidrug dalam sel kanker manusia melalui
Diskusi penghambatan P-glikoprotein, transporter multidrug kaset pengikat ATP
(ABC).Chavez dkk., 2002; Mi et al., 2002; Mi et al., 2003; Silva dkk., 2001).
Bersama-sama, temuan ini menarik perhatian pada potensi Transporter ABC mampu menampung beberapa situs pengikatan obat di
antimikroba ERAF dalam kombinasi hibrida dengan antibiotik melawan sel eukariotik dan prokariotik, yang kompatibel dengan spesifisitas substrat
S. aureus Strain MDR, menyoroti kemungkinan peran senyawa alkaloid yang luas dan kemampuan pengikatan multiobat (Lubelski dkk., 2007).
tropane 1 dan 2 dalam efek yang diamati. EREE juga menyajikan Karena kesamaannya, beberapa transporter pada bakteri diklasifikasikan
aktivitas antimikroba dalam kombinasi hibrida yang diuji; namun, efek sebagai anggota kluster P-glikoprotein dari superfamili transporter ABC,
antagonisnya yang terdeteksi tidak diinginkan dari sudut pandang seperti Sav1866 (ditemukan diS. aureus), MsbA (terkait dengan resistensi
klinis. Menurut karakterisasi fitokimia, EREE menyediakan banyak terhadap eritromisin pada bakteri Gram-negatif), dan MacAB-TolC dari E.
metabolit sekunder, termasuk steroid, flavonoid, flavanon, coli (mampu mengeluarkan eritromisin dan makrolida lainnya) (Beck et al.,
antrakuinon, tanin, dan alkaloid. Interaksi ganda dari sekumpulan 2013; Kumar dkk., 2013; Ramaswamy dkk.,

6
MFS Barbosa dkk.
2016). Mengambil potongan informasi ini bersama-sama, kami percaya
bahwa peningkatan efek obat antibiotik oleh ERAF dapat dikaitkan dengan
kemampuan alkaloid tropane 6-(2'-methylbutyryloxy)-3-hydroxytropane dan/
atau 6-butyryloxy-3 -hydroxytropane mungkin mengganggu transporter
multidrug ABC dari MDRS. aureus.
Kesimpulan
Bersama-sama, temuan ini mendukung bukti pertama dari E. revolusi
fraksi yang diperkaya alkaloid sebagai sumber obat baru untuk digunakan
dalam kombinasi hibrida melawan MDR S. aureus. Selanjutnya, kontribusi
signifikan terhadap fitokimia, kami melaporkan untuk pertama kalinya
keberadaan dua alkaloid tropane yang belum dijelaskan dalam keluarga
Erythroxylaceae. Meskipun kami membutuhkan penelitian lebih lanjut untuk
memperjelas mekanisme aksi kombinasi ini pada strain ini, namun, hasil
yang diperoleh di sini ekspresif karena proposal untuk mengurangi dosis
terapeutik antibiotik sangat bermanfaat bagi pasien selama perawatannya.
Pernyataan Kepentingan Bersaing
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak mengetahui adanya persaingan kepentingan
keuangan atau hubungan pribadi yang tampaknya dapat mempengaruhi pekerjaan yang
dilaporkan dalam makalah ini.
Pengakuan
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Coordenação de Aperfeiçoamento de
Pessoal de Nível Superior (CAPES), untuk Conselho Nacional de Desenvolvimento
ógico (CNPq) dan ke Fundação de Amparo Pesquisa do
Cientifico e Tecnol'
Estado de Pernambuco (FACEPE - IBPG-0988-9.25/15) untuk hibah dan
peralatan; kepada Federal Rural University of Pernambuco (UFRPE) oleh
Edital PRPPG 015/2018 (Dukungan untuk Penelitian Kelembagaan UFRPE),
dan kepada Program Pasca Kelulusan dalam Produksi Tanaman (PGPV) dan
Keanekaragaman Hayati dan Konservasi (PGBC), keduanya dari Federal
Universitas Pedesaan Pernambuco, Unit Akademik Serra Talhada. Pekerjaan
ini dilakukan dengan dukungan dari Coordenação de Aperfeiçoamento de
Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Kode Pembiayaan
001.
Referensi
Agra, M., de, F., Silva, KN, Basílio, IJLD, de Freitas, PF, Barbosa-Filho, JM, 2008.
Survei tanaman obat yang digunakan di wilayah Timur Laut Brasil. Pdt. Bras.
Farmakogni. 18, 472–508.
Aguiar, JS, Araújo, RO, Rodrigues, M., do, D., Sena, KXFR, Batista, AM, Guerra, M.
MP, Oliveira, SL, Tavares, JF, Silva, MS, Nascimento, SC, da Silva, TG, 2012. Aktivitas
antimikroba, antiproliferatif dan proapoptosis dari ekstrak, fraksi dan senyawa hasil
isolasi dari batang Erythroxylum caatingae Pembajak tanah. Int. J. Mol. Sci. 13, 4124–
4140.
Alves, RSC, Almeida, H., Fernandes, CP, Joseph-nathan, P., Rocha, L., Guimar, G.,
2016. Alkaloid tropane baru dari daun Erythroxylum subsessile diisolasi dengan
kromatografi arus balik pemurnian zona PH. J.Sep.Sci. 39, 1273–1277.
Beck, A., Aanismaa, P., Li-Blatter, X., Dawson, R., Locher, K., Seelig, A., 2013. Sav1866
dari Stafilokokus aureus dan P-Glikoprotein: Persamaan dan perbedaan dalam
aktivitas ATPase dinilai dengan deterjen sebagai alokrit. Biokimia 52, 3297–3309.
Berkov, S., 2003. Alkaloid dari Datura ceratocaula. Z. Naturforsch C 58, 455–458.
Chavez, D., Cui, B., Chai, H., Garcıa, R., Mejıa, M., Farnsworth, NR, Cordell, GA,
Pezzuto, JM, Kinghorn, AD, 2002. pembalikan resistensi multidrug oleh alkaloid
tropane dari batang Erythroxylum rotundifolium. J.Nat. Melecut. 65, 606–610.
Christen, P., Roberts, MF, Phillipson, JD, Evans, WC, 1990. Alkaloid akar berbulu
budaya dari Datura candida hibrida. Rep. Sel Tanaman 9, 101-104.
Christen, P., Roberts, MF, Phillipson, JD, Evans, WC, 1993. Alkaloid dari Eritroksilum
zambesiacum kulit batang. Fitokimia 34, 1147–1151.
Cinelli, MA, Jones, AD, 2021. Alkaloid dari genus Datura: ulasan tentang sumber daya yang kaya
untuk penemuan produk alam. Molekul 26, 1-38.
Cretton, S., Muñoz, O., Tapia, J., Marcourt, L., Maes, L., Christen, P., 2017. Dua baru
Alkaloid higrolin dan tropane diisolasi dari Schizanthus pelacur dan S. tiga warna
(Solanaceae). Nat. Melecut. komuni. 12, 19–21.
Da Rocha, LG, Aragão, CFS, Loiola, MIB, Bezerril, RA, Paiva, NRF, De
Holanda, CMCX, De Brito, MEF, 2009. Evaluasi aksi leishmanicide ekstrak etanol
Crotalaria retusa L. (Fabaceae). braz. J. Farmakognisi. 19, 51–56.
7
Phytomedicine Plus 1 (2001) 100105
El-Bazaoui, A., Bellimam, M.Ah., 2011. Sembilan alkaloid tropane baru dari Datura
stramonium L . diidentifikasi oleh GC/MS. Fitoterapia, 82, 193-197.
Humam, M., Shoul, T., Jeannerat, D., Muñoz, O., Christen, P., 2011. Kiralitas dan
penomoran alkaloid tropane tersubstitusi. Molekul 16, 7199–7209.
Kumar, S., Mukherjee, MM, Varela, MF, 2013. Modulasi Multidrug Bakteri
pompa penghabisan resistensi dari superfamili fasilitator utama. Int. J. Bakteri. 1–15, 2013.
Lahmar, A., Badui, A., Mokdad-Bzeouich, I., Dhaouifi, Z., Kalboussi, Z., Cheraif, I.,
Ghedira, K., Chekir-Ghedira, L., 2017. Pembalikan resistensi pada bakteri mendasari
efek sinergis minyak atsiri dengan antibiotik konvensional. Mikrob. Patog. 106, 50–
59.
Loiola, MIB, Agra, MDF, Baracho, GS, Queiroz, RTDe., 2007. Flora da Paraíba.
bra. Erythroxylaceae Kunth. Akta Bot. Brasilika 21, 473–487.
Lubelski, J., Konings, WN, Driessen, AJM, 2007. Distribusi dan fisiologi ABC-
jenis transporter yang berkontribusi terhadap resistensi multidrug pada bakteri. Mikrobiol. mol.
Biol. Wahyu 71, 463–476.
Matos, FJ, de, A., 1997. Pengantar Fitoquímica Eksperimental. Edes UFC,
Fortaleza, edisi ke-2.
Mi, Q., Cui, B., Silva, GL, Lantvit, D., Lim, E., Chai, H., Hollingshead, MG, Mayo, JG,
Kinghorn, AD, Pezzuto, JM, 2002. Pervilleines B dan C , ester aromatik alkaloid
tropane baru yang membalikkan resistensi multi-obat dalam uji serat berongga Q.
Cancer Lett. 184, 13–20.
Mi, Q., Cui, B., Lantvit, D., Reyes-Lim, E., Chai, H., Pezzuto, JM, Kinghorn, AD, Swanson,
SM, Pervilleine, F., 2003. Alkaloid tropane baru ester aromatik yang membalikkan
resistensi multidrug. Antikanker Res. 23, 3607–3615.
Mohtar, M., Johari, SA, Li, AR, Isa, MM, Mustafa, S., Ali, AM, Basri, DF, 2009.
Potensi penghambatan dan modifikasi resistensi alkaloid nabati terhadap
resistensi methicillin Stafilokokus aureus (MRSA). Curr. Mikrobiol. 59, 181–186.
Munguia, J., Nizet, V., 2017. Penargetan farmakologis dari inang – patogen
interaksi : alternatif antibiotik klasik untuk memerangi superbug yang resistan terhadap
obat. Tren Pharmacol. Sci. 38, 473–488.
Muto, CA, Jernigan, JA, Ostrowsky, BE, Richet, HM, Jarvis, WR, Boyce, JM,
Farr, BM, Muto, CA, Jernigan, JA, Ostrowsky, BE, Richet, HM, 2013. Pedoman untuk
mencegah transmisi nosokomial dari strain resisten multidrug dari
Stafilokokus aureus dan Enterokokus. Menulari. Kontrol Rumah Sakit. Epidemiol.
24, 362–386.
Nishiyama, Y., Moriyasu, M., Ichimaru, M., Sonoda, M., Iwasa, K., Kato, A., Juma, FD,
Mathenge, SG, Mutiso, PBC, 2007. Alkaloid tropana dari Erythroxylum
emarginatum. J.Nat. Med. 61, 56–58.
Oliveira, JFP, Cipullo, JP, Burdmann, EA, 2006. Nefrotoksisitas aminoglikosida.
braz. J. Kardiovaskular. Surg. 21, 444–452.
de Oliveira, SL, Tavares, JF, Branco, MVSC, Lucena, HFS, Barbosa-Filho, JM,
Agra, M., de, F., do Nascimento, SC, Aguiar, J., dos, S., da Silva, TG, de Simone, C.
A., Araújo-Júnior, JX, da Silva, MS, 2011. Alkaloid tropana dari Erythroxylum caatingae
Pembajak tanah. catur. Keanekaragaman Hayati 8, 155–165.
Queiroz, EF, Zanolari, B., Guiletc, AMD, Burgener, E., Paulo, M., de, Q.,
Hostettmann, K., 2009. Dua alkaloid tropane baru dari kulit kayu Erythroxylum
vacciniifolium pasar. (Erythroxylaceae) Emerson. Nat. Melecut. komuni. 2, 2–5.
Ramaswamy, VK, Cacciotto, P., Malloci, G., Ruggerone, P., Vargiu, AV, 2016.
Pompa penghabisan multidrug dan penghambatnya dicirikan oleh pemodelan
komputasi. Antimikroba yang Dimediasi Efflux. Res. Bakt. 797–831.
Rawson, TM, Moore, LS, Castro-Sanchez, E., Charani, E., Davies, F., Satta, G.,
Ellington, MJ, Holmes, AH, 2020. COVID-19 dan potensi dampak jangka panjang
pada resistensi antimikroba. J. Antimikroba. Kemo. 75, 1681–1684.
San, L., Brito, DO, Pinto, CL, Odorico, M., Filho, M., De; Rocha, DD, Fernanda, M.,
Mendoza, M., Pedro, A., Pinheiro, B., Iracema, M., Loiola, B., Canuto, KM, Silveira,
ER, Deusdenia, O., Pessoa, L., 2020. Fitokimia tropane alkaloid dari kulit batang
dari Erythroxylum bezerrae. Fitokimia 178, 112458.
Saraiva, RA, Matias, EFF, Coutinho, HDM, Costa, JGM, Souza, HHF,
Fernandes, CN, Rocha, JBT, Menezes, IRA, 2011. Aksi sinergis antara
Caryocar coriaceum Kecerdasan minyak tetap dengan aminoglikosidain vitro. Eur. J. Lipid Sci.
teknologi. 113, 967–972.
Silva, GL, Cui, B., Cha, D., Anda, M., Chai, H., Rasoanaivo, P., Lynn, SM, Neill, XMJO,
Lewis, XJA, Besterman, XJM, Monks, A., Farnsworth, NR, Cordell, GA, Pezzuto, JM,
Kinghorn, AD, 2001. Modulasi fenotipe multidrug-resistance oleh ester
aromatik alkaloid tropane baru dari Erythroxylum pervillei.
J.Nat. Melecut. 64, 1514–1520.
Sugden, R., Kelly, R., Davies, S., 2016. Memerangi resistensi antimikroba secara global. Nat.
Mikrobiol. 1, 1-2.
Tafur, D., Villegas, V., 2008. Mecanismos de resistencia a los antibióticos en bakteri
Gram-negativa. Infeksi 12, 217–226.
Trease, GE, Evans, WC, 2002. Farmakognosi, Edisi ke-15. Penerbit Saunders, London.
Van Dijck, P., Sjollema, J., Cammue, BPA, Lagrou, K., Berman, J., d'Enfert, C.,
Andes, D., Arendrup, M., Brakhage, A., Calderone, R., Cantón, E., Coenye, T., Cos, P.,
Cowen, L., Edgerton, M., Espinel-Ingroff, A ., Pengisi, SG, Ghannoum, M., Gow, NA
R., Haas, H., Jabra-Rizk, MA, Johnson, EM, Lockhart, SR, Lopez-Ribot, JL, Maertens, J.,
Munro, CA, Nett, JE, Nobile, CJ, Pfaller, MA, Ramage , G., Sanglard, D., Sanguinetti,
M., Spriet, I., Verweij, PE, Warris, A., Wauters, J., Yeaman, MR, Zaat, SAJ, Thevissen,
K., 2018. Metodologi untuk in vitro dan in vivo
evaluasi kemanjuran agen antijamur dan antibiofilm dan pelapis permukaan
terhadap biofilm jamur. Mikrob. Sel 5, 300–326.
Wagner, H., Effert, T., 2017. Pendahuluan: Kombinasi hibrida baru yang mengandung
obat sintetik atau antibiotik dengan senyawa fenolik atau terpenoid yang berasal dari
tumbuhan. Fitomedika 37, 1-3.
Wagner, H., Ulrich-Merzenich, G., 2009. Riset sinergi: mendekati generasi baru
dari fitofarmaka. Fitomedika 16, 97-110.
MFS Barbosa dkk. Phytomedicine Plus 1 (2001) 100105

Wet, D., 2011. Aktivitas antibakteri dari lima spesies Erythroxylaceae afrika selatan.
J. Bioteknologi. 10, 11511–11514.
WHO, 2014. Resistensi antimikroba. laporan global tentang pengawasan. Kesehatan Dunia.
Organ. 61, 383–394.
Witte, L., Muller, K., Arfmann, H., 1987. Investigasi pola alkaloid datura
tanaman innoxia oleh kapiler Gas-cair-kromatografi-spektrometri massa. Planta
Med. 53, 192–197.
Zuanazzi, JAS, Tremea, V., Limberger, RP, Sobral, M., Henriques, AT, 2001.
Alkaloid dari Eritroksilum (Erythroxylaceae) spesies dari Brasil Selatan. Biokimia.
Sistem Ekol. 29, 819–825.