ABSTRAK
Mekanisme pertahanan tubuh dapat ditingkatkan dengan senyawa tertentu yang bersifat
imunostimulan. Imunostimulan secara umum didefenisikan sebagai senyawa yang dapat
meningkatkan mekanisme pertahanan tubuh baik secara spesifik maupun non spesifik baik
mekanisme pertahanan seluler maupun humoral. Titer antibodi adalah pengukuran tingkat
kekebalan tubuh terhadap suatu penyakit yang beredar dalam darah. Titer biasanya dinyatakan
dalam rasio, yang berapa kali bisa mencairkan darah sampai tidak bisa menemukan antibodi
lagi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas dari ekstrak daun sambung nyawa
(Gynura Procumbens (Lour.) Merr.) terhadap titer antibodi, jumlah dan persentase sel leukosit
mencit putih jantan. Mencit sebanyak 25 ekor dibagi atas 5 kelompok yang terdiri dari kontrol
negatif, kontrol positif, kelompok dosis 75 mg/kg BB, 150 mg/kg BB, 300 mg/kg BB. Ekstrak
diberikan selama 7 hari secara oral. Hasil penelitian menunjukkan pemberian ekstrak daun
sambung nyawa dapat meningkatkan titer antibodi dan semakin meningkat seiring dengan
peningkatan dosis. Ekstrak daun sambung nyawa meningkatkan titer antibodi, jumlah total dan
persentase sel leukosit secara signifikan (P<0,05).
Artikel History
Diterima : 23 November 2020 Disetujui : 20 Maret 2021
Diterbitkan : April 2021
Aktivitas Ekstrak Etanol Daun Sambung Nyawa (Gynura Procumbens (Lour.) Merr.)
Terhadap Titer Antibodi, Jumlah Dan Persentase Sel Leukosit Mencit Putih Jantan Uthia R
Hewan yang digunakan adalah mencit putih (Lour.) Merr.), dosis 75 mg/kg BB
jantan umur 2-3 bulan dengan berat antara secara oral 1 kali sehari selama 7 hari.
20-30 gram sebanyak 25 ekor, Kelompok IV yaitu kelompok mencit
dikelompokkan secara acak menjadi 5 yang diberikan suspensi ekstrak daun
kelompok terdiri dari 5 ekor mencit. sambung nyawa (Gynura procumbens
Sebelum diperlakukan mencit di (Lour.) Merr.), dosis 150 mg/kg BB
aklimatisasi selama 7 hari dengan diberi secara oral 1 kali sehari selama 7 hari.
makan dan minum yang cukup. Mencit Kelompok V yaitu kelompok mencit
yang akan digunakan adalah mencit yang yang diberikan suspensi ekstrak daun
sehat dan tidak menunjukan penurunan sambung nyawa (Gynura procumbens
berat badan berarti (deviasi maksimal 10 (Lour.) Merr.), dosis 300 mg/kg BB
%) serta secara visual menunjukan secara oral 1 kali sehari selama 7 hari.
perlakuan yang normal (Vogel, 2002). Pembuatan Larutan Uji
Dosis Ekstrak Suspensi Na CMC 0,5% dibuat dengan cara
Dosis ekstrak daun sambung nyawa Na CMC ditimbang 500 mg dikembangkan
(Gynura procumbens (Lour.) Merr.) yang dengan air panas 20 kalinya, setelah
digunakan adalah 75 mg/kg BB, 150 mg/kg mengembang digerus kemudian
BB dan 300 mg/kg BB. ditambahkan ekstrak etanol daun sambung
Perlakuan Pada Hewan Percobaan nyawa (Gynura procumbens (Lour.) Merr.)
Hewan dibagi atas lima kelompok dengan sesuai konsentrasi ekstrak yang telah
masing-masing kelompok terdiri dari lima direncanakan, kemudian digerus homogen
ekor, yaitu: dan dicukupkan dengan aquadest sampai
Kelompok 1 yaitu kelompok mencit volume 100 mL. Konsentrasi ekstrak daun
kontrol negatif hanya diberi larutan sambung nyawa (Gynura procumbens
NaCl fisiologis. (Lour.) Merr.) yang dibuat adalah 0,75 % ,
Kelompok II yaitu kelompok kontrol 1,5 % dan 3 %.
positif, mencit diimunisasi dengan Pembuatan Larutan Antigen
eritrosit kambing dan pada hari ke 8 Darah kambing diambil dan dicuci dengan
diberi larutan NaCl fisiologis NaCl fisiologis (1:1) masing-masing
Kelompok III yaitu kelompok mencit sebanyak 5 mL aduk homogen. Kemudian
yang diberikan suspensi ekstrak daun disentrifus dengan kecepatan 2000 rpm
sambung nyawa (Gynura procumbens selama 15 menit, buang supernatannya,
ulangi 3 kali dengan menambahkan NaCl
monosit pada perbesaran 1000x dengan pemberian ekstrak etanol daun sambung
menggunakan minyak emersi. nyawa selama 7 hari dan diimunisasi
Analisa Data eritrosit kambing sebagai antigen:
Data hasil penelitian diolah dengan statistik Hasil penentuan titer antibodi dari
menggunkan uji ANOVA satu arah dan serum mencit putih jantan setelah diinduksi
dilanjutkan dengan uji Duncan. dengan eritrosit kambing 5 % dan
HASIL DAN PEMBAHASAN pemberian ekstrak daun sambung nyawa
Setelah dilakukan penelitian tentang uji (Gynura procumbens (Lour.) Merr.) pada
aktivitas ekstrak etanol daun sambung dosis 75 mg/kg BB, 150 mg/kg BB, 300
nyawa (Gynura procumbens (Lour.) Merr.) mg/kg BB secara berurutan adalah: 4,0 ; 5,4
terhadap titer antibodi, jumlah dan ; dan 6,2. Untuk kontrol negatif dan kontrol
persentase sel leukosit mencit putih jantan positif adalah 1,8 dan 3,6.
diperoleh hasil sebagai berikut: Hasil perhitungan jumlah total sel
Hasil pengamatan organoleptis leukosit darah mencit putih jantan setelah
menunjukan bahwa ekstrak berwarna diinduksi dengan eritrosit kambing 5 % dan
coklat, rasa agak pahit, baunya khas, dan pemberian ekstrak daun sambung nyawa
konsistensi berupa ekstrak kental. Dari (Gynura procumbens (Lour.) Merr.) pada
maserasi sebanyak 298,9 g serbuk kering dosis 75 mg/kg BB, 150 mg/kg BB, 300
daun sambung nyawa (Gynura Procumbens mg/kg BB secara berurutan adalah: 15.810
(Lour.) Merr.) dengan etanol 70% didapat ; 16.960 ; 18.240. Untuk kontrol negatif dan
ekstrak kental sebanyak 36,0444 g dengan kontrol positif adalah 14.050 dan 15.580.
rendemen 12,06%. Hasil perhitungan persentase sel
Berdasarkan hasil uji susut pengeringan leukosit darah mencit putih jantan setelah
dari ekstrak diperoleh 7,58%. Ekstrak daun diinduksi dengan eritrosit kambing 5 % dan
sambung nyawa juga positif bereaksi pemberian ekstrak daun sambung nyawa
dengan pereaksi alkaloid, saponin, tanin, (Gynura procumbens (Lour.) Merr.) untuk
flavonoid, steroid dan terpenoid. sel eusinofil, neutrofil batang, neutrofil
Pengamatan aktivitas titer antibodi segmen, limfosit dan monosit secara
jumlah dan persentase sel leukosit setelah berurutan dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Persentase Sel Leukosit darah mencit setelah diinduksi eritrosit kambing 5%
Kel. Dosis 75 Kel. Dosis 150 Kel. Dosis 300 Kel. Kontrol Kel. Kontrol
mg/kg BB (%) mg/kg BB (%) mg/kg BB (%) negatif (%) positif (%)
4,2 5,2 5,6 2,0 3,6
8,6 9,2 10,4 7,0 7,8
19,8 15,8 11,4 28,02 23,2
57,6 58,8 60,2 55,0 56,4
9,8 11 12,4 7,8 9,0
Hasil pengamatan terhadap uji aktivitas ekstrak etanol daun sambung nyawa dengan
ekstrak daun sambung nyawa (Gynura variasi dosis telah dilakukan uji analisis
Procumbens (Lour.) Merr.) terhadap titer statistik yang dapat dilihat pada gambar 1,
antibodi, jumlah dan persentase sel leukosit 2 dan gambar 3.
mencit putih jantan dengan perlakuan
Gambar 1. Diagram batang angka titer antibodi terhadap kelompok perlakuan setelah
diinduksi dengan eritrosit kambing 5 % dan pemberian ekstrak daun
sambung nyawa (Gynura procumbens (Lour.) Merr.)
Gambar 2. Diagram batang jumlah sel leukosit terhadap kelompok perlakuan setelah
diinduksi dengan eritrosit kambing 5 % dan pemberian ekstrak daun
sambung nyawa (Gynura procumbens (Lour.) Merr.)
Gambar 3. Diagram batang persentase sel leukosit terhadap kelompok perlakuan setelah
diinduksi dengan eritrosit kambing 5 % dan pemberian ekstrak daun
sambung nyawa (Gynura procumbens (Lour.) Merr.)
Keterangan :
I : Kelompok kontrol negatif
II : Kelompok kontrol positif
III : Dosis 75 mg/kg BB
IV : Dosis 150 mg/kg BB
V : Dosis 300 mg/kg BB
Pada penelitian ini menggunakan daun kelompok kedua adalah kelompok kontrol
sambung nyawa sebagai sampel uji positif yang diimunisasi dengan eritrosit
penelitian. Daun sambung nyawa kemudian kambing dan pada hari ke 8 diberi larutan
diekstrak dengan cara maserasi. Ekstrak NaCl fisiologis, sedangkan tiga kelompok
etanol daun sambung nyawa yang didapat lainnya adalah tiga variasi dosis yang
kemudian dibuat sediaan uji dengan berbeda yaitu 75mg/kg BB, 150mg/kg BB,
menambahkan NaCMC 0,5 % sebagai dan 300 mg/kg BB.
pensuspensi. Hewan percobaan yang Penentuan angka titer antibodi dengan
digunakan dalam penelitian ini adalah metoda hemaaglutinasi, dasar pemilihan
mencit putih jantan umur ± 2 bulan dan metoda ini selain murah, waktu yang
berat badan 20-30 g. dibutuhkan untuk mengetahui angka titer
Mencit dibagi menjadi lima kelompok, relatif singkat. Angka titer ditentukan pada
masing-masing kelompok terdiri dari lima pengenceran tertinggi dari serum mencit
ekor mencit putih jantan. Kelompok yang masih dapat beraglutinasi dengan sel
pertama adalah kelompok kontrol negatif darah merah kambing, angka titer dapat
yang hanya diberi NaCl fisiologis, dicari dengan rumus 2log pengenceran.
Pada kelompok kontrol negatif aglutinasi berdasarkan angka titer yang didapatkan
masih terlihat jelas pada 2log 2 maka angka cenderung tinggi. Peningkatan angka titer
titernya adalah 1, aglutinasi yang terjadi yang sejalan dengan peningkatan dosis,
dipengaruhi oleh komplemen, komplemen menunjukkan ekstrak daun sambung nyawa
yaitu salah satu enzim serum yang berasal memiliki kemampuan sebagai
dari sistem imun non spesifik larut dalam imunostimulan karena dapat meningkatkan
keadaan tidak aktif, tapi setiap waktu dapat produksi antibodi. Analisa dengan Duncan
diaktifkan oleh berbagai bahan seperti pada kontrol negatif dan kontrol positif
antigen, kompleks imun dan sebagainya. sangat berbeda nyata, kontrol positif dan
Sedangkan pada kontrol positif aglutinasi dosis 75 mg/kg BB tidak berbeda nyata,
terjadi pada 2log 16 maka angka titernya kontrol negatif, kontrol positif, dan dosis
adalah 4 antigen yang digunakan eritrosit 150 mg/kg BB sangat berbeda nyata, dosis
kambing 5 % yang diinjeksikan pertama 150 mg/kg BB dan dosis 300 mg/kg BB
kali secara intra peritonial dengan tujuan tidak berbeda nyata.
agar terbentuk antibodi spesifik terhadap Selain itu juga dilakukan uji jumlah
antigen tersebut pada pemaparan total leukosit menggunakan alat
berikutnya. Pada hari ke 7 dilakukan haemocytometer. Data hasil perhitungan
pembosteran dengan antigen secara jumlah total leukosit dengan anova satu
subkutan, sehingga terjadi sensitisasi dari arah, didapatkan hasil yang signifikan
sistem imun. (0,000 < 0,05). Ini berarti bahwa
Pemilihan eritrosit kambing 5 % pemberian ekstrak daun sambung nyawa
sebagai antigen terbukti dapat dapat meningkatkan jumlah total sel
meningkatkan jumlah antibodi dari serum leukosit. Analisa dengan Duncan pada
mencit. Setelah pemberian ekstrak etanol kontrol negatif dan kontrol positif berbeda
daun sambung nyawa dengan dosis 75 nyata, kontrol positif, dosis 75 mg/kg BB,
mg/kg BB, 150 mg/kg BB, 300 mg/kg BB dan 150 mg/kg BB tidak berbeda nyata,
terjadi peningkatan angka titer yaitu 4,0 ; kontrol negatif, kontrol positif, dosis 75
5,4 ; dan 6,2. Data hasil perhitungan titer mg/kg BB, 150 mg/kg BB tidak berbeda
antibodi dengan anova satu arah, nyata tetapi berbeda nyata dengan dosis 300
didapatkan hasil yang sig (0,000 < 0,05). mg/kg BB.
Hasil ini menunjukkan bahwa dengan Pada pemeriksaan hapusan darah,
pemberian antigen eritrosit kambing 5 % dilakukan perhitungan persentase jenis sel
dan ekstrak daun sambung nyawa dapat leukosit yaitu sel eusinofil, sel neutrofil
meningkatkan produksi antibodi batang, sel neutrofil segmen, limfosit dan
37 Jurnal Akademi Farmasi Prayoga, Vol 6 No 1, 2021
Aktivitas Ekstrak Etanol Daun Sambung Nyawa (Gynura Procumbens (Lour.) Merr.)
Terhadap Titer Antibodi, Jumlah Dan Persentase Sel Leukosit Mencit Putih Jantan Uthia R
monosit setelah dilakukan pewarnaan dan kontrol negatif berbeda nyata. Untuk
dengan giemsa. Pada pewarnaan giemsa ini sel neutrofil batang dosis 150 mg/kg BB
basofil tidak ditemukan kerena sel basofil dan dosis 300 mg/kg BB tidak berbeda
bersifat basa sehingga sel tersebut larut nyata, kontrol negatif dan dosis 75 mg/kg
dalam pewarna giemsa (Aldi et al., 2014). BB tidak berbeda nyata, dosis 150 mg/kg
Dari hasil uji statistik analisa varian satu BB, kontrol positif, dan kontrol negatif
arah dilihat dari tabel homogen variabel berbeda nyata, dosis 300 mg/kg BB berbeda
data sel eusinofil, sel neutrofil batang, sel nyata dengan kontrol negatif. Untuk
neutrofil segmen, limfosit dan monosit neutrofil segmen kontrol negatif dan
menunjukkan hasil yang signifikan yaitu sel kontrol positif berbeda nyata, kontrol postif
eusinofil (sig. 0,549 > 0,05) sel neutrofil dan dosis 75 mg/kg BB berbeda tidak
batang (sig. 0,926 > 0,05),sel neutrofil berbeda nyata, dosis 75 mg/kg BB dan
segmen (sig. 0, 321 > 0,05), limfosit (sig. dosis 150 mg/kg BB tidak berbeda nyata,
0,963 > 0,05), monosit (sig. 0,824 > 0,05). dosis 150 mg/kg BB dan dosis 300 mg/kg
Sehingga dapat diteruskan dengan uji anova BB berbeda nyata, kontrol negatif dan dosis
satu arah. Pada hasil hitungan anova bahwa 300 mg/kg BB berbeda nyata. Untuk
nilai sig dari sel eusinofil, sel neutrofil limfosit kontrol negatif dan control positif
batang, sel neutrofil segmen, limfosit dan tidak berbeda nyata, dosis 75 mg/kg BB dan
monosit dengan nilai sig. (P < 0,05), maka dosis 150 mg/kg BB berbeda nyata, dosis
Ho ditolak yang berarti angka rata-rata 75 mg/kg BB, dosis 150 mg/kg BB dan
persentase leukosit masing-masing dosis 300 mg/kg BB tidak berbeda nyata.
kelompok perlakuan berbeda setelah Untuk monosit kontrol negatif, kontrol
pemberian ekstrak daun sambung nyawa positif, dosis 75 mg/kg BB tidak berbeda
sehingga berpengaruh terhadap persentase nyata, dosis 150 mg/kg BB berbeda nyata
sel leukosit. dengan dosis 300 mg/kg BB.
Analisa statistik dilanjutkan dengan uji Eusinofil berfungsi melawan infeksi
Duncan, dimana hasilnya menunjukkan parasit dan juga melawan kompleks antigen
bahwa persentase sel eusinofil untuk antibodi. Neutrofil merupakan sel yang
kontrol negatif dan kontrol positif berbeda pertama yang dikerahkan ketempat bakteri
nyata, kontrol positif dan dosis 75 mg/kg masuk dan berkembang dalam tubuh.
BB tidak berbeda nyata, dosis 75 mg/kg BB Monosit berfungsi mengenal, menyerang
dan 150 mg/kg BB berbeda nyata, dosis 150 mikroba dan sel kanker, memproduksi
mg/kg BB dan dosis 300 mg/kg BB tidak sitokin dan mengerahkan pertahanan
berbeda nyata tetapi dosis 300 mg/kg BB sebagai respon terhadap infeksi.
38 Jurnal Akademi Farmasi Prayoga, Vol 6 No 1, 2021
Aktivitas Ekstrak Etanol Daun Sambung Nyawa (Gynura Procumbens (Lour.) Merr.)
Terhadap Titer Antibodi, Jumlah Dan Persentase Sel Leukosit Mencit Putih Jantan Uthia R
Peningkatan jumlah sel limfosit ini berarti meniran (phyllanthus niruri Linn.)
terhadap titer antibody dan jumlah sel
terjadi peningkatan pada respon imun
leukosit mencit putih jantan. ISSN,
spesifik. Sel limfosit terdiri dari sel limfosit 2339-2592.
B dan sel limfosit T. Sel limfosit B akan
Aldi, Y., Purnamasari, R., Dillasamola, D.,
mengalami proliferasi dan diferensiasi & Friardi. (2016). Test
immunodulatory effeccts of ethanol
membentuk sel plasma dan sel memori. Sel
extract skin of purple sweet potato
plasma inilah yang membentuk antibodi (ipomoea batatas (L.) Lam) with
carbon clearance method and the
yang terbentuk setelah kontak dengan
number of leukocytes. Research
antigen. Untuk membentuk antibodi, sel Journal of Pharmaceutical,
Biological and Chemical Sciences,
plasma perlu melakukan kerja sama dengan
7(3), 1192-1200.
sel limfosit T.
Aldi, Y., & Suhatri. (2011). Aktivitas
KESIMPULAN
ekstrak etanol biji jintan hitam
Berdasarkan penelitian yang telah (Nigella sativa Linn.) terhadap titer
antibodi dan jumlah sel leukosit pada
dilakukan tentang Uji Aktivitas Ekstrak
mencit putih jantan. Scienta, 1(1),
Etanol Daun Sambung Nyawa (Gynura 2087-5045.
procumbens (Lour.) Merr.) Tehadap Titer
Badan Pengawas Obat dan Makanan
Antibodi, Jumlah Dan Persentase Sel Republik Indonesia. (2008). Deputi
Bidang Pengawasan Obat tradisional,
Leukosit Mencit Putih Jantan, maka dapat
Kosmetik, dan Produk Komplemen
disimpulkan bahwa pemberian ekstrak Direktorat Obat asli Indonesia.
Taksonomi Koleksi Tanaman Obat
daun sambung nyawa (Gynura procumbens
Kebun Tanaman Obat Citeureup.
(Lour.) Merr.) selama 7 hari dapat Jakarta: Badan Pengawas Obat dan
Makanan.
meningkatkan titer antibodi, meningkatkan
jumlah total sel leukosit dan dapat Baratawidjaja, K.G. (2009). Imunologi
dasar. Edisi VIII. Jakarta: Penerbit
meningkatkan persentase sel leukosit
Universitas Indonesia.
mencit putih jantan.
Darmayani, S., Hasan, E. H., & A, E. D.,
DAFTAR PUSTAKA
(2016). Perbedaan hasil pemeriksaan
jumlah leukosit antara metode
Aldi, Y., Ogiana, N., & Handayani, D.
manual improved neubauer dengan
(2013). Uji imunomodulator
metode automatic hematology
beberapa subfraksi ekstrak etil asetat
analyzer. Jurnal Kesehatan
meniran (Phyllanthus niruri [L])
Manurang. 2(2), 2443-3861.
pada mencit putih jantan dengan
metoda Carbon Clearence. ISSN,
Departemen Kesehatan Republik
2339-2592.
Indonesia. (1985). Cara pembuatan
simplisia. Jakarta: Departemen
Aldi, Y., Farhan, I., & Handayani, D.
Kesehatan Republik Indonesia.
(2013). Uji aktivitas beberapa
subfraksi ekstrak etil asetat dari herba
39 Jurnal Akademi Farmasi Prayoga, Vol 6 No 1, 2021
Aktivitas Ekstrak Etanol Daun Sambung Nyawa (Gynura Procumbens (Lour.) Merr.)
Terhadap Titer Antibodi, Jumlah Dan Persentase Sel Leukosit Mencit Putih Jantan Uthia R
Kementrian Kesehatan Republik Indonesia. Radji, M., (2015). Imunologi dan Virologi.
(2010). Farmakope Herbal (2). Jakarta Barat: PT. ISFI
Indonesia. (Edisi 1). Jakarta: Penerbitan.
Departemen Kesehatan Republik
Indonesia. Rahman, S., Putra, B., Kosman, R., &
Mustika, R. (2012). Uji aktivitas
Kim, M. J., Lee, H. J., Wiryowidagdo, S., immunoglobulin m (IgM) ekstrak
& Kim, H. K. (2006). etanol herba rumput mutiara
Antihypertensive effects of gynura (Hedyotis corymbosa) pada mencit