lPhytochemistry 154 (2018) 39–46

Daftar isi tersedia di ​ScienceDirect

Phytochemistry
homepage jurnal: ​www.elsevier.com/locate/phytochem Diterpenoid

anti-inflamasi dan antiproliferatif dari Plectranthus ​T

scutellarioides
Sylvian Cretton​a​, Noémie Saraux​a​, Aymeric Monteillier​a​, Davide Righi​a​, Laurence Marcourt​a​,
Grégory Genta-Jouve​b​, Jean-Luc Wolfender​a​, Muriel Cuendet​a​, Philippe Christen​a​,​∗
Sekolah ​ b​
Ilmu Farmasi, Universitas Jenewa, University of Lausanne, Rue Michel-Servet 1, 1211 Geneva 4, Swiss ​ C-TAC, UMR 8638 CNRS, Université
Paris Descartes, Sorbonne Paris Cité, Faculté de Pharmacie de Paris, Avenue de l'Observatoire 4, 75006 Paris, Prancis

INFO ARTIKEL

Kata kunci:
Plectranthus scutellarioides
Lamiaceae
Abietane diterpene
Cembrane diterpene
NF-κB aktivitas penghambatan
MM-CSCs aktivitas antiproliferatif ​1. Pendahuluan

Namun, sampai saat ini belum ada konstituen psikoaktif yang ditemukan.
Dalam penelitian ini, isolasi yang dipandu bioaktivitas menggunakan
NF-κB
The genus Plectranthus L'Hér. (Lamiaceae) terdiri dari sekitar 300
spesies yang tersebar di Afrika Tropis, Asia dan Australia. Beberapa
ABSTRAK spesies seperti Plectranthus amboinicus, P. laxiflorus dan P. barbatus
telah terdokumentasi dengan baik untuk penggunaan
Penyelidikan kimiawi ekstrak diklorometana dari bagian udara Plectranthus
etnomedisinalnya (​Brito et al., 2018​; ​Lukhoba et al., 2006​). Studi
scutellarioides isolasi dan karakterisasi 10 diterpenoid dengan kerangka abietane
fitokimia pada genus ini melaporkan terutama adanya diterpenoid
dan satu diterpenoid tipe cembrane. Di antara mereka, enam belum dijelaskan
dalam literatur. Strukturnya ditentukan oleh 1D dan 2D NMR, spektroskopi UV dengan kerangka abietane atau labdane. Mono terpenoid,
dan IR, dan HRESIMS. Konfigurasi relatif ditentukan oleh perhitungan pergeseran seskuiterpenoid dan fenolat juga telah dijelaskan pada spesies
kimiawi Gauge-Independent Orbital Atomic NMR yang didukung oleh metode Plectranthus yang berbeda (​Lukhoba et al., 2006​). Namun, sangat
statistik lanjutan DP4 plus dan selanjutnya dikonfirmasi oleh dikroisme sirkuler sedikit investigasi fitokimia yang dilakukan pada P. scutellarioides (L.)
elektronik. Konstituen yang diisolasi dievaluasi untuk aktivitas penghambatan in R.Br. (sin. Coleus pumilus atau Coleus blumei) (​www.theplantlist.org​,
vitro NF κB, serta untuk efek sitotoksiknya pada sel induk kanker multiple
2018). Terlepas dari penggunaan tradisionalnya untuk pengobatan
myeloma manusia dan sel tumor RPMI 8226. Coleon O, coleon G, lanugone K
dan 6-acetylfredericone B menunjukkan efek penghambatan tertinggi terhadap berbagai(​penyakitBourdy dan Walter, 1992​; ​Roosita et al., 2008​;
NF-κB, menampilkan IC​50 masing-masing ​dari 11,2, 11,0, 4,5 dan 9,7 μM. Coleon O Waruruai et al., 2011​) hanya asam rosmarinic (​Razzaque dan Ellis,
juga menunjukkan aktivitas yang signifikan terhadap sel induk kanker multiple 1977​), quercetin (​Moektiwardoyo et al. ., 2011​), lima turunan
myeloma manusia dan sel RPMI 8226 dengan IC​50 masing-masing
​ sebesar 9,2 diterpenes abietan co leon O (​Devriese et al., 1988​), turunan
dan 8,4 μM. 2,16-diacetyl dari 2,6,11,12,14,16,17-heptahydroxy-5,8,11,
13-abietatetraen-7-one
(​Ragasa et al., 2001​) dan spiroscutelones AC (​Ito et al., 2018​)
teridentifikasi di tanaman ini. Selain penggunaan etnomedisinalnya
sebagai pengobatan terhadap beberapa gangguan inflamasi, P.
scutellarioides digunakan sebagai halusinogen di wilayah Oaxaca,
Meksiko (​Schultes, 1984​).

∗​
Penulis yang sesuai.
Alamat email: ​philippe.christen@unige.ch ​(P. Christen).

https://doi.org/10.1016/j.phytochem.2018.06.012
Diterima 22 Maret 2018; Diterima dalam bentuk revisi 14 Juni 2018; Diterima 18 Juni 2018
0031-9422 / © 2018 Elsevier Ltd. Semua hak dilindungi undang-undang.
 pengujian dilakukan untuk mendukung penggunaan tradisionalnya
sebagai tanaman anti-inflamasi dan untuk mendapatkan pengetahuan
tentang komposisi fitokimia tanaman ini. Sebelas terpenoid diisolasi
dan dikarakterisasi dari bagian udara P. scutellarioides. Di antara ini,
enam senyawa (1-6) adalah fitokimia yang belum dijelaskan (​Gbr. 1​).
Aktivitas penghambatan NF-κB dari senyawa yang diisolasi serta efek
sitotoksiknya pada sel induk kanker multiple myeloma manusia
(MM-CSCs) dan sel plasma multiple myeloma RPMI 8226 ditentukan.
2. Hasil dan pembahasan
Ekstrak diklorometana kasar dari bagian udara P. scu tellarioides
S. Cretton et al. ​Phytochemistry 154 (2018) 39-46 ​Gambar. 1. Struktur senyawa yang diisolasi dari Plectranthus scutellarioides.
disebabkan oleh gugus hidroksi (3349 dan 2931 cm​-1​) dan keton (1703
cm​−1​). Analisis data 1D NMR (​Tabel 1 dan 2​), HSQC dan spektrum
HMBC 1 mengungkapkan 20 sinyal karbon yang sesuai dengan empat
metil C-17 sampai C-20 (δ​C 23.3, 22.9, 29.1 dan 21.8, masing-masing),
​
three me thylenes C-1, C-2 dan C-15 (δ​C 37.1,
​ 34.7 dan 33.3,
masing-masing), empat metina C-5 sampai C-7 dan C-16 (δ​C 48.5, ​ dan H-5 (1,5 Hz) dan H-6 dan H-7 (2,8 Hz) menunjukkan bahwa H-6
69.4, 67.1 dan 67.8, masing-masing ), dan sembilan karbon kuaterner,
C-3, C-4 dan C-8 sampai C-14 (δ​C ​220.4, 48.0, 141.4, 147.4, 38.8,
184.7, 156.0, 118.5 dan 188.9, masing-masing). Mempertimbangkan
data ini dan diterpenoid fredericone B (10) yang diisolasi dari tanaman
yang sama, senyawa 1 dapat ditetapkan sebagai diterpenoid kuinon
abietan dengan kerangka abieta-8,12-dien 3,11,14-trione. Puncak
silang antara H-15 / H-16 dan H-16 / H-17 dalam percobaan COZY,
dan korelasi HMBC kunci antara H-15 (δ​H ​2.55 dan 2.67) dan C-16,
C-17, C-12 , C-13 dan C-14 memungkinkan penempatan sidechain 2-
hidroksipropil di C-13 (​Gbr. 2​). Pergeseran kimiawi dari dua metina C-6
difraksinasi menggunakan flash chromatography. Fraksi yang
dihasilkan diuji aktivitas penghambatan NF-κB mereka (​Gbr. S1​).
Fraksi F11 dan yang memiliki penghambatan lebih dari 40%
dimurnikan dengan HPLC semi-preparatif yang menghasilkan enam
senyawa yang sebelumnya tidak dilaporkan (1-6) dan lima (7-11).
Senyawa 1 diperoleh sebagai minyak kecoklatan, dan rumus
molekulnya C​20​H​26​O​7 ditentukan
​ oleh HRESIMS dari ion m / z
379.1753 [M + H]​+​. Spektrum IR menunjukkan pita serapan
dan C-7 (δ​C ​69.4 dan 67.1, masing-masing) menunjukkan adanya dua
gugus hidroksi pada posisi ini. Korelasi ROESY dari H-5 ke Me-19,
H-1α, dan H-2α di bawah bidang molekul dan dari Me-20 ke H-1β dan
Me-18 di atas bidang molekul memungkinkan penentuan posisi proton
ini dalam orientasi α dan β, masing-masing (​Gbr. 3​). Korelasi ROESY
dari H-6 ke Me-18 dan Me 19 serta konstanta kopling kecil antara H-6
berada dalam posisi pseudo-ekuator dan karenanya dalam orientasi α.
Kurangnya korelasi antara H-7 dan H-5 menunjukkan bahwa H-7
berorientasi β sehingga gugus hidroksi yang terikat pada C-7
berorientasi α (​Gbr. 3​). Selain itu, data NMR mengenai posisi tersebut
sesuai dengan yang dari lanugone K (9) (​Schmid et al., 1982​).
Konfigurasi relatif di C-16 ditentukan oleh perhitungan Smith dan
Goodman DP4 probabilitas
 (​Smith dan Goodman, 2010​). Perbandingan pergeseran kimia
eksperimental dan teoritis menunjukkan konfigurasi 16S * dengan
probabilitas 95,8% (lihat ​informasi pendukung​). Konfigurasi absolut 1
ditetapkan dengan perbandingan spektra ECD eksperimental dan
terhitung. Sebuah kesepakatan yang baik diamati antara spektrum
ECD eksperimental dan teoritis (​Gbr. 4​). Senyawa 1 dengan demikian
diidentifikasi sebagai turunan 13-isopropanol dari (5R, 10S) -6S, 7S,
12-trihydroxy-8,12- abietadien-3,11,14-trione dan dinamai
scutellarioidone A.
HRESIMS dari senyawa 2 dipamerkan sebuah ion pada m / z
449,2170 [M + H]​+ ​(kalkd untuk C​24​H​33​O​8​, 449,2170), sesuai dengan
rumus molekul C​24​H​32​O​8​. Data yang disediakan oleh 1​​ H dan 13​
​ C NMR
dibandingkan dengan lophanthoidin B (​Yunlong et al., 1989​) dan
perbedaan antara kedua senyawa tersebut adalah gugus asetoksi di
C-6 untuk 2 bukan C-7 di lophanthoidin B. Ini dikonfirmasi oleh korelasi
HMBC dari H-6 (δ​H ​5,48) dan proton metil pada δ​H ​2,02 dengan karbon
ester karbonil pada δ​C ​171,9. Korelasi ROESY dari H-5 hingga H-1α, H
3α dan Me-19, dan dari H-6 hingga Me-19 memungkinkan pemosisian
semua proton ini dalam orientasi α. Stereokimia dalam C-15 tidak
ditentukan sebelumnya. Oleh karena itu, perbandinganeksperimental
13​
pergeseran kimiaC NMRdilakukan. Menurut probabilitas DP4,
konfigurasi 15S * dibuat (85,4%). Konfigurasi absolut ditentukan
dengan perbandingan spektrum ECD eksperimental dengan spektrum
ECD terhitung (​Gbr. 4​). Senyawa 2 dengan demikian diidentifikasi
sebagai turunan 13-propil asetat dari (5R, 10S) -6S-asetoksi, 7S,
12-dihy droxy-8,12-abietadien-11,14-dione dan dinamai
scutellarioidone B.Data
NMR dari senyawa 3 sangat mirip dengan senyawa 11. Berat
molekul yang disimpulkan dari ion HRESIMS pada m / z 461.1808 [M
+ H]​+ ​(calcd untuk C​24​H​29​O​9​, 461.1806) menunjukkan perbedaan 18
Da . Ini bisa dijelaskan dengan siklisasi tambahan di
40
S. Cretton et al. ​Fitokimia 154 (2018)

39–46 S. Cretton et al. ​Fitokimia 154 (2018) 39–46

Tabel 2
13​
C Data NMR senyawa 1–6 (151 MHz, dalam CD​3​OD atau * DMSO ‑ d​6​, δ dalam ppm).
Posisi 1233 * 45 6

1 37.1, CH​2 ​39.5, CH​2 ​35.1, CH​2 ​33.5, CH​2 ​35.5, CH​2 ​34.2, CH​2 ​127.1, C 2 34.7, CH​2 ​20.0, CH​2 ​69.7, CH 67.4, CH 31.1, CH​2 ​29.7, CH​2 ​32.1, CH​2​ ​3 220.4, C 43.5, CH​2
43.4, CH​2 41.7,
​ CH​2 128.8,
​ C 39.5, CH 137.5, CH 4 48,0 CH 34.6, C 37.0, C 35.6, C 124.6, C 153.4, C 127.9, C 5 48.5 , C 48.6, CH 143.1, C 142.9, C 48.3, CH 47.5, CH
36.8, CH​2​ ​6 69.4, CH 72.0, CH ​aa ​68.2, CH 65.5, CH 82.3, CH 7 67.1, CH 64.6, CH ​a ​183.4, C 32.1, CH​2 35.8, ​ CH​2 152.1,
​ CH 8 141.4, C 140.6, C ​a ​107.1, C 141.4, C 142.2,
C 134.0, C 9 147.4, C 148.9, C a​ ​138.9, C 146.4, C 146.5, C 25.5, CH​2​ ​10 38.8, C 40.2, C 42.2, C 40.7, C 37.7, C 40.2, C 24.4, CH​2​ ​11 184.7, C 184.5, C aa ​ ​184.1, C a​
135.4, CH 12 156.0, C 155.0, C 158.2, C a​ ​155.3, C 155.1, C 135.4, C 13 118.5, C 121.1, C 112.1, C 111.1, C 119.7, C 119.6, C 76.2, CH 14188.9, C 188.0, C a​ ​153.1, C
188.8, C 189.5, C 38.1, CH​2​ ​15 33.3, CH​2 30.5,
​ CH 41.6, CH 39.7, CH 20.1, CH​2 20.2, ​ CH​2 130.9,
​ C 16 67.8, CH 67.6, CH​2 65.3,
​ CH​2 63.5,
​ CH​2 28.1,
​ CH​2 28.2,
​ CH​2 20.8
​ ,
CH​3​ ​17 23.3, CH​3 15.3,
​ CH​3 77.5,
​ CH​2 75.7,
​ CH​2 65.5,
​ CH​2 65.5,
​ CH​2 21.2,
​ CH​3​ ​18 22.9, CH​3 23.9,
​ CH​3 28.9,
​ CH​3 28.2,
​ CH​3 14.9,
​ CH​3 109.2,
​ CH​2 63.8,
​ CH​2​ ​19 29.1, CH​3
33.8, CH​3 ​29.9, CH​3 ​29.1, CH​3 ​19.2, CH​3 ​21.1, CH​3 ​175.9, C 20 21.8, CH​3 ​22.2, CH​3 ​24.9, CH​3 ​24.2, CH​3 ​19.9, CH​3 ​20.5 , CH​3 ​60.2, CH​2
Ac-2 21.3, CH​3​ ​172.5, C 170.1, C
Ac-6 21.3, CH​3 21.2, CH​3
171.9, C 172.3, C
21.2, CH​3
Ac-13 172.1, C 21.1, CH​3
Ac-16 20.7, CH​3​ ​172.9, C
Ac-17 20.8, CH​3
20.8, CH​3
173.0, C 173.0, C
20.8, CH​3 20.9, CH​3​ ​173.1, C
170.7, C
Ac-18 172.8, C 20.8, CH​3​ ​AC-20172.5, C 20.8, CH​3

a​
Sinyal terlalu lemah untuk diukur.
Gbr. 2. Korelasi COZY (garis tebal merah) dan HMBC (panah biru) dari senyawa 1, 3, dan 6. (Untuk interpretasi referensi warna dalam legenda gambar ini,
pembaca merujuk ke versi Web artikel ini .)
3 untuk membentuk siklus keempat yang terkait dengan kerangka
abietan di C-12 dan C 13. Memang, korelasi HMBC dari H-17 (δ​H ​4,76
dan 4,62) ke C 12 (δ​C ​158,2) dan C-13 ( δ​C ​112.1), dan korelasi COZY
antara H 15 / H-17 menunjukkan sebuah cincin siklopentana (​Gbr. 2​).
Selain itu, pergeseran kimiawi C-17 (δ​C 77,5)
​ dan C-12 menunjukkan
jembatan eter antara dua karbon ini. Dalam spektrum HMBC, korelasi
antara H-2 (δ​H ​5,37) dan gugus karbonil Ac-2 (δ​C ​172,5), dan antara
H-16 (δ​H ​4.20) dan Ac-16 (δ​C ​172.9) memungkinkan untuk melokalkan
dengan tegas kedua gugus asetoksi ini pada C-2 dan C-16. Korelasi
ROESY diamati dari H-2 ke H-1β, H-3β dan Me-20 dan dari H-3β ke
Me-20 dan Me-18 al menurunkan posisi asetat di C-2 dalam orientasi
α. Karena tidak adanya korelasi ROESY antara pusat kiral di C-15 dan
bagian lain dari molekul, konfigurasi relatif ditentukan dengan
perbandingan antara pergeseran kimia teoritis dan eksperimental.
Konfigurasi 15S * diperoleh dengan probabilitas 71%. Konfigurasi
absolut dijelaskan oleh ECD. Kesepakatan yang baik antara spektra
eksperimental dan dihitung (​Gbr. 4​) menyebabkan
42
kesimpulan bahwa 3 adalah ((2S, 8S, 11bR)
-2-asetoksi-5,7,11-trihidroksi 4,4,11b-trimetil-
6-oxo-1,2,3,4,6,8,9,11b-octahydrophenanthro [3,2- b] furan-8-yl)
methyl acetate dan diberi nama scutellarioidone C.
Spektrum NMR senyawa 4 menunjukkan sangat kuat kesamaan
dengan fredericone B (10). Kedua senyawa berbagi kerangka 3,4-
dimetil, 12-hidroksi-3,8,12-abietatrien-11,14-dion yang sama dengan
bagian 13-propil asetat. Satu-satunya perbedaan terletak pada
asetilasi gugus hidroksi dalam C-6 untuk senyawa 4 yang ditunjukkan
dalam spesifikasi HMBC yang menunjukkan korelasi antara H-6 pada
δ​H 5,60
​ dan karbon karbonil pada δ​C 172,3
​ (Ac-6). HRESIMS dari 4
menunjukkan hasil adisi natrium pada m / z 453.1885 [M + Na]​+ ​(kalkd
untuk C​24​H​30​O​7​Na, 453.1889), dalam menentukan rumus molekul
sebagai C​24​H​30​O​7​, yang sesuai dengan turunan 6-asetil fredericone B
yang dijelaskan dengan spektroskopi NMR.
Senyawa 5 diisolasi sebagai minyak kecoklatan, dan molekulnya
untuk mula ditetapkan sebagai C​22​H​28​O​6 berdasarkan
​ ion HRESIMS
pada m / z 389.1954 [M + H]​+​. 1​​ H dan 13​
​ data C NMR spektroskopi dari
5
 S. Cretton et al. ​Fitokimia 154 (2018) 39–46
Gambar. 3. Struktur 3D senyawa 1, 2 dan 5 dan korelasi kunci ROESY (panah hitam).
Gambar. 4. Spektrum ECD prediksi eksperimental dan TDDFT dari 1, 2 dan 3.
(​Tabel 1 dan 2​) mirip dengan isomer fredericone B (10). Dua
perbedaan tersebut terletak pada adanya gugus eksometilen (δ​H ​5.01
dan 5.05, δ​C ​109.2) ditautkan ke C-4 di 5, bukan gugus metil di 10, dan
tidak adanya ikatan rangkap antara C-3 dan C-4 di 5. Korelasi ROESY
dari H-5 ke H-1α, Me-19 dan H-7α menunjukkan bahwa semua proton
ini berorientasi α sedangkan korelasi dipolar dari Me-20 ke H-2β dan
H-18a, dan dari H-18b ke H-3β menunjukkan bahwa semua
Tabel 3
Aktivitas penghambatan NF-κB dan aktivitas antiproliferatif pada sel MM-CSCs
dan RPMI 8226 dari senyawa yang diisolasi dari Plectranthus scutellarioides.
Senyawa NF-κB MM-CSCs RPMI 8226 IC​50 ​[μM]
1> 100> 100> 100 2 42.0 ± 4.8> 100> 100 3> 100> 100> 100 4 9.7 ± 1.0 17.6 ± 0.7
21.6 ± 0.4
5 39.0 ± 5.0 > 100> 100 6 50.3 ± 1.7> 100> 100 7 11.2 ± 3.6 9.2 ± 0.4 8.4 ± 0.3 8
11.0 ± 2.4 37.4 ± 1.1 38.4 ± 2.1 9 4.5 ± 1.7> 100> 100 10 21.5 ± 2.2> 100> 100 11>
100> 100> 100 Parthenolide 0,55 ± 0,01
proton ini berada dalam orientasi β. Adapun 1 dan untuk alasan yang
sama, H6 diposisikan dalam posisi ekuator dan dalam orientasi α (​Gbr.
3​). Oleh karena itu, senyawa 5 diidentifikasi sebagai 13-propil asetat
deri vatif dari 3α-metil, 4-eksometilen, 6β,
S. Cretton et al. ​Fitokimia 154 (2018) 39–46
12-dihidroksi-8,12-abietadien 11,14-dion dan diberi nama
scutellarioidone D.
Senyawa 6 diisolasi sebagai optik aktif ​[a]​D​2​2-42 ​(c 0,1, MeOH)
minyak merah muda. Rumus molekul C​26​H​34​O​8 dibuat
​ oleh HRESIMS
dari hasil adisi natrium pada m / z 497.2147. Selain itu, pada spektrum
massa 6, tiga ion fragmen pada m / z 415.2120 (C​24​H​31​O​6​), m / z
355.1906 (C​22​H​27​O​4​) dan m / z 295.1695 (C​20​H​23​O​2​) menyarankan
adanya tiga gugus asetoksi ke dalam molekul. Spektroskopi IR
menunjukkan adanya gugus karbonil (1732, 1649 cm-​1​) dalam
molekul. Analisis data 1​​ H, 13​
​ C dan HSQC NMR mengungkapkan sinyal
untuk lima metil (δ​H 1,61,
​ 1,73, 1,99, 2,05 dan 2,07), tujuh metilena (δ​C
24,4, 25,5, 32,1, 36,8, 38,1, 60,2 dan 63,8) , dua karbon sp3 yang
membawa atom oksigen (δ​C ​76.2 dan 82.3), tiga proton olefin (δ​H ​5.29,
5.61 dan 7.30), lima sp​2 ​kuartener karbon (δ​C 127.1,
​ 127.9, 130.9,
134.0 dan 135.4) dan empat karbonil (δ​C 172.1, ​ 172.5, 172.8 dan
175.9). Eksperimen 2D (COSY dan HMBC) memungkinkan
interkoneksi elemen yang berbeda dan mengidentifikasi diterpen
cembranoid yang memiliki bagian butenolakton tak jenuh α, β, unit
isobutilen yang terpasang di C-1, dan tiga gugus asetoksi yang terkait
dengan C-13, C-18 dan C-20 (​Gbr. 2​). Korelasi ROESY antara H-3 dan
H-5 dari satu sisi, dan menjadi tween H-2 dan H-18 dari sisi lain
menyiratkan konfigurasi Z untuk ikatan rangkap antara C-3 dan C-4.
Sebaliknya, NOE yang diamati menjadi tween H-11 dan H-13, dan
antara H-20 dan H-10 menunjukkan

konfigurasi E untuk ikatan rangkap antara C-11 dan C-12. Untuk
menentukan stereokimia relatif, dilakukan perhitungan teori fungsi
kerapatan (DFT) untuk memanfaatkan pendekatan DP4. Menurut
perhitungan, probabilitas 99,9% diperoleh untuk mendukung struktur
(3Z *, 6S *, 7Z *, 11E *, 13R *). Oleh karena itu, senyawa 6
sepenuhnya dijelaskan sebagai (3Z *, 6S *, 7Z *, 11E *, 13R *) - 1-
(2-methylprop-1-ene) - 13,18,20-triacetoxycembra-1 (15),
3,7,11-tetraene-6,19-olide dan diberi nama scutellarioidolide A.
Senyawa yang diketahui diidentifikasi berdasarkan data
spektroskopi dan dengan perbandingan dengan literatur. Coleon O (7)
(​Arihara et al., 1975​) dan coleon G (8) (​Moir et al., 1973​) sebelumnya
diisolasi dari Coleus somaliensis. Lanugone K (9) sebelumnya
diidentifikasi di P. lanuginosus (​Schmid et al., 1982​), fredericone B (10)
di Coleus fredericii (​Zhu et al., 1988​), dan turunan 2,16-diacetyl dari 2,6
, 11,12,14,16,17-heptahydroxy-5,8,11,13-abietatetraen-7-one (11) di
Coleus blumei (​Ragasa et al., 2001​).
Sebelas senyawa yang diisolasi diuji untuk daya hambatnya
terhadap aktivasi NF-κB yang diinduksi TNFα dan untuk aktivitas anti
proliferatifnya dalam sel MM-CSC dan RPMI 8226 karena abietane di
terpene sebelumnya telah menunjukkan aktivitas antiproliferatif pada
sel kanker manusia (​Gonzalez, 2015​; ​Johnson, 2011​). Data yang
diperoleh dirangkum pada ​Tabel 3​. Coleon O dan G (masing-masing 7
dan 8), la nugone K (9) dan 6-acetylfredericone B (4) menunjukkan
aktivitas hibitory tertinggi terhadap NF-κB dengan IC​50 ​mulai dari 4,5
hingga 11,2 μM. Patut dicatat bahwa senyawa 7, 8, dan 9 memiliki
kerangka 7α-asetoksi 6β, 12α-dihidroksi-8-abietaen-11,14-dion yang
sama dengan struktur spiro-siklopropana termetilasi dalam C-13.
Sejauh yang kami tahu, perancah ini belum pernah dilaporkan untuk
penghambatan NF-κB dan dapat menarik untuk pengembangan
penghambat baru. Senyawa 7 juga memberikan aktivitas terkuat pada
pertumbuhan sel MM-CSCs dan RPMI 8226 (IC​50 ​9,2 dan 8,4 μM,
masing-masing), sedangkan aktivitas 8 dan 4 sedikit lebih rendah (IC​50
17-40 μM). Mengingat ketergantungan yang kuat dari tumor MM pada
aktivasi jalur NF-κB (​Demchenko et al., 2014​; ​Demchenko dan Kuehl,
2010​), penghambatan jalur NF-κB oleh abietane diterpenes 7, 8, dan 4
dapat menjelaskan aktivitas antiproliferatif mereka dalam sel kanker
MM. Selain itu, aktivitas terhadap CSCs, yang biasanya lebih resisten
daripada sel plasma, mirip dengan aktivitas terhadap sel RPMI 8226.
3. Kesimpulan
Studi fitokimia dari bagian udara P. scutellarioides menghasilkan
isolasi satu cembranoid baru dan 10 abietane di terpene. Di antara
yang terakhir, senyawa 7, 8, 9 dan 4 menunjukkan aktivitas
penghambatan NF-κB yang signifikan, dan untuk memperpanjang efek
sitotoksik terhadap sel MM-CSC dan RPMI 8226. Meta bolites
sekunder ini dapat menjelaskan penggunaan tradisional dari preparat
P. scutellarioides untuk mengobati berbagai gangguan inflamasi.
4. Eksperimen
4.1. Prosedur eksperimental umum
Rotasi optik diukur pada polarimeter JASCO P-1030 (Easton, MD,
USA). Spektrum ECD direkam pada spektrometer CD JASCO J-815.
Spektrum UV direkam pada spektrofotometer UV-vis Perkin-Elmer
Lambda 25 (Wellesley, MA, USA). Spektrum IR diukur dengan
spektrometer Perkin-Elmer Spectrum 100. Spektrum NMR direkam
pada spektrometer Bruker Avance III HD 600 MHz NMR yang
dilengkapi dengan Cryoprobe QCI 5 mm dan pengubah sampel
otomatis SampleJet (Bruker BioSpin, Rheinstetten, Jerman).
Pergeseran kimiawi dilaporkan dalam bagian per juta (δ)
menggunakansisa CD​3​sinyalOD (δ​H ​3.31; δ​C ​49.0) atauDMSO ‑ d​6
sinyal(δ​H ​2.50; δ​C ​39.5) seperti dalam standar ternal untuk 1​​ H dan 13​
​ C
NMR, masing-masing. Spektrum HRMS diperoleh pada trometer spek
massa quadrupole-orbitrap Q Exactive Plus Hybrid (Thermo Scientific,
Waltham, MA, USA) menggunakan electrospray dalam mode positif.
S. Cretton et al. ​Fitokimia 154 (2018) 39–46
Tegangan semprotan disetel ke 3,5 kV; laju aliran gas selubung (N​2​)
menjadi 50 unit; suhu kapiler sampai 320 ° C; tingkat RF lensa S ke
50; dan suhu pemanas probe menjadi 425 ° C. UHPLC dilakukan pada
Sistem UHPLC 3000 Ultimate (Thermo Scientific). Pemisahan
dilakukan pada kolom Acquity BEH C​18 ​UPLC (100 × 2,1 mm id; 1,7
μm, Waters), menggunakan gradien (MeCN dan H​2​O keduanya
mengandung 0,1% asam format) dari 5–98% MeCN dalam 6 menit ,
diikuti dengan langkah pencucian dengan 98% MeCN selama 2 menit.
Setelah tahap pencucian, kolom diimbangi dengan 5% MeCN selama 3
menit sebelum injeksi berikutnya. Laju aliran diatur menjadi 0,4 mL /
menit, suhu menjadi 40 ° C, dan volume injeksi adalah 1 μL. Fraksinasi
dilakukan pada sistem kromatografi preparatif Puriflash 4100
(Interchim, Montluçon, Prancis) yang dilengkapi dengan pompa
kuaterner, detektor PDA, dan pengumpul fraksi. Kromatografi
semi-preparatif dilakukan pada Sistem Bintik Armen (Saint-Avé,
Prancis). Pengendalian fraksi dilakukan oleh Acquity UPLC System
(Waters) yang dilengkapi dengan detektor Acquity PDA dan
dihubungkan ke Quattro Micro triple quadrupole mass spectrometer
(Waters) dengan sumber ESI yang beroperasi dalam mode positif.
4.2. Rincian komputasi ECD
Semua perhitungan dilakukan dengan menggunakan program
Gaussian 16 (​Frisch et al., 2016​). Setelah analisis konformasi
menggunakan paket GMMX dengan medan gaya MMFF92 (ΔE <1
kcal / mol), pengaturan waktu geometri dicapai pada konformer yang
paling stabil menggunakan teori fungsi kerapatan (DFT) dengan fungsi
B3LYP dan 6-31G (d) basis yang ditetapkan dalam fase gas. Analisis
getaran diselesaikan pada level yang sama untuk mengkonfirmasi
minimum. Prediksi NMR dilakukan dengan menggunakan tingkat
mPW1PW91 / 6-311 + g (2d, p), sedangkan kekuatan rotasi dievaluasi
menggunakan metode B3LYP / 6-31g (d) untuk 30 keadaan
tereksitasi. Kurva ECD dibangun berdasarkan kecepatan dipol
kekuatan rotasi (R​vel​) menggunakan SpecDis v1.61 (​Bruhn et al.,
2013​).
4.3. Bahan tanaman
Bagian udara Plectranthus scutellarioides (L.) R.Br. (Lamiaceae)
dikumpulkan pada Juli 2015 di Kebun Raya Jenewa dan diidentifikasi
oleh Bapak Didier Roguet. Sebuah spesimen voucher (No. 37001)
disimpan di Herbarium of the Botanic Garden of Geneva.
4.4. Ekstraksi dan isolasi
Bagian udara segar (0,8 kg) direndam dengan 4 L CH​2​Cl​2 pada ​
suhu kamar selama lima menit untuk mendapatkan ekstrak yang
diperkaya terpenoid tanpa senyawa lipofilik lain seperti lilin dan klorofil
(​Siebert, 2004​). Setelah filtrasi, ekstrak diuapkan sampai kering.
Residu (0,93 g) dicampur dengan 4 g Celite 577 (Fluka, AG, Swiss)
dan dimasukkan ke dalam kartrid untuk injeksi beban kering.
Fraksinasi ekstrak dilakukan dengan menggunakan dua kolom flash
chromato graphy yang dihubungkan secara seri (PF-C​18​HQ / 120 g, 15
μm C​18​, In terchim). Fraksinasi dilakukan dengan fase gerak H​2​O dan
MeCN yang keduanya mengandung asam format 0,1% dalam mode
gradien yang dioptimalkan: 35–70% MeCN dalam 50 menit, dan
70–100% dalam 10 menit. Laju alir diatur ke 16 mL / menit dan deteksi
UV secara bersamaan dilakukan pada 220, 254, dan 360 nm.
Pemisahan menghasilkan 120 fraksi, yang dianalisis secara individual
dengan UHPLC-PDA-MS, dan dikumpulkan dalam 24 fraksi sesuai
dengan profil kromatografinya. Fraksi 11, 14-16 dan 20-24 dipilih untuk
pemurnian lebih lanjut. Tahap fraksinasi akhir dilakukan dengan HPLC
semi preparatif menggunakan kolom Kinetex Axia Core-Shell C​18 (5 ​
μm, 250 × 21.2 mm; Phenom enex Torrance, CA, USA) menggunakan
H​2​O / MeCN / 0,1% asam format sebagai ventilasi pelarut untuk elusi
isokratik. Laju aliran diatur menjadi 20 mL / menit dan absorbansi UV
pada 280 nm. Fraksi 11 (15,2 mg) menghasilkan 1 (1,4 mg) (25%
MeCN); fraksi 14 (12.0 mg) menghasilkan 7 (2.8 mg) (35% MeCN);
fraksi 15 (7,1 mg) menghasilkan 8 (0,5 mg) (35% MeCN); fraksi 16

(6,2 mg) menghasilkan 9 (0,6 mg) (35% MeCN), fraksi 20 (16,0 mg)
menghasilkan 6 (3,1 mg) (45% MeCN), fraksi 21 (13,0 mg)
menghasilkan 10 (0.8 mg) dan 5 (1.2 mg) (45% MeCN), fraksi 22 (13.0
mg) menghasilkan 2 (1.0 mg) (45% MeCN), fraksi 23 (12.0 mg)
menghasilkan 3 (0.7 mg), fraksi 24 (20,0 mg) menghasilkan 11 (1,2
mg) dan 4 (1,5 mg) (48% MeCN).
4.4.1. Scutellarioidone A (1)
Minyak kecoklatan; ​[​a​]​D​2​2 ​+ 48 (c 0,1, MeOH); ECD (c 0,05, MeCN)
λ​maks ​nm (Δε) 210 (1.4), 224 (−1.2), 260 (5.9), 344 (−1.3); UV (MeCN)
λ​maks ​219, 270 nm; IR (CHCl​3​) ν​maks ​3349, 2931, 1703, 1263, 1021
cm​−1​; 1​​ H dan 13​
​ C NMR, lihat ​Tabel 1 dan 2​; HRESIMS m / z 379.1753
[M + H]​+​ ​(dihitung untuk C​20​H​27​O​7​, 379.1752).
4.4.2. Scutellarioidone B (2)
Minyak kecoklatan;​[​a​]​D​22 ​- 17 (c 0,1, MeOH); ECD (c 0,05, MeCN)
λ​maks (Δε)
​ 224 (−1,8), 295 (4,26), 403 (−2,01); UV (MeCN) λ​maks 225 ​ media kultur RPMI 1640 yang dilengkapi dengan 10% serum sapi
nm; IR (CHCl​3​) ν​maks 3362, 2930, 1731, 1376, 1243 cm​−1​; 1​​ H dan 13​
​ C
​ janin), 100 μg mL-​1 ​penisilin dan 250 μg mL-​1 ​streptomisin. Tes MTT
NMR, lihat ​Tabel 1 dan 2​; HRESIMS m / z 449,2170 [M + H]​+ ​(dihitung
untuk C​24​H​33​O​8​, 449,2170).
4.4.3. Scutellarioidone C (3)
minyak Violet; ECD (c 0,05, MeCN) λ​maks ​(Δε) 201 (8,74), 273
(5,07), 298 (−2,67); UV (MeCN) λ​maks 217,​ 265, 328, 388 nm; IR
(CHCl​3​) ν​maks ​2954, 1739, 1369, 1223 cm​−1​; 1​​ H dan 13​
​ C NMR, lihat
Tabel 1 dan 2​; HRESIMS m / z 461.1808 [M + H]​+ ​(dihitung untuk
C​24​H​29​O​9​, 461.1806).
4.4.4. 6-Acetylfredericone B (4)
Minyak kecoklatan; ​[​a​]​D​2​2 ​+ 83 (c 0,1, MeOH); UV (MeCN) λ​maks
224, 276 nm; IR (CHCl​3​) ν​maks ​2946, 1737, 1369, 1231, 1036 cm​−1​; 1​​ H
13​
dan ​ C NMR, lihat ​Tabel 1 dan 2​; HRESIMS m / z 453.1885 [M +
+​
Na]​ (​ dihitung untuk C​24​H​30​O​7​Na, 453.1889).
4.4.5. Scutellarioidone D (5)
Minyak kecoklatan; ​[​a​]​D​2​2 ​+ 65 (c 0,1, MeOH); UV (MeCN) λ​maks
223, 277 nm; IR (CHCl​3​) ν​maks ​3378, 2930, 1726, 1493, 1254 cm​−1​; 1​​ H
13​
dan ​ C NMR, lihat ​Tabel 1 dan 2​; HRESIMS m / z 389.1954 [M + H]​+
(dihitung untuk C​22​H​29​O​6​, 389.1959).
4.4.6. Scutellarioidolide A (6)
Minyak merah muda; ​[​a]​ ​D2​​ 2 ​- 42 (c 0,1, MeOH); UV (MeCN) λ​maks
217, 270 nm; IR (CHCl​3​) ν​maks 2927, 1732, 1649, 1436, 1371, 1231
​
cm​−1​; 1​​ H dan 13​
​ C NMR, lihat ​Tabel 1 dan 2​; HRESIMS m / z 497.2147
[M + Na]​+ ​(dihitung untuk C​26​H​34​O​8​Na, 497.2151).
4.5. Aktivitas penghambatan NF-κB Aktivitas penghambatan
NF-κB dinilai seperti yang dijelaskan sebelumnya (​Tran et al.,
2015​). Secara singkat, sel HEK293 / NF-κB-luc (Panomics, Fremont,
CA, USA) dibiakkan pada suhu 37 ° C dan 5% CO​2 ​atmosfer dalam
medium Elang yang dimodifikasi Dulbecco dengan glukosa tinggi
(Thermo Fisher scientific, Wal tham, MA, USA) dengan 10% serum
janin sapi (Biowest, Nuaillé, Prancis), 100 U / mL penisilin, 100 μg / mL
streptomisin (Thermo Fisher ilmiah) dan 100 μg / mL higromisin B
(Thermo Fisher ilmiah). Sel-sel diinkubasi selama 1 jam dalam medium
FBS bebas dilengkapi dengan 2,5 pM Cell Tracker Hijau CMFDA
(Thermo Fisher ilmiah), probe neon yang digunakan untuk
kelangsungan hidup ukuran sel, dan reseeded di 96- piring dengan
baik (1 × 10​4 ​sel / baik) dalam semalam. Sel kemudian diperlakukan
dengan sampel atau pembawa saja (0,5% DMSO dalam media kultur)
dan distiulasi dengan TNFα (20 ng / mL) selama 5 jam. Reporter lysis
buffer (Promega, Madison, WI, USA) ditambahkan untuk melisiskan sel
dan kedua fluoresensi dari Cell Tracker Green CMFDA dan
luminesensi dari kunang-kunang luci ferase dibaca di Cytation 3 plate
reader (Biotek, Winooski, VT, USA ). Sinyal luminesensi dinormalisasi
oleh sinyal fluoresensi untuk setiap sumur, dan kuantifikasi aktivitas
NF-κB relatif dilakukan dengan membandingkan sinyal luminesensi
yang dinormalisasi dari sel sampel yang dirawat dengan sel yang
dirawat kendaraan.​IC50 ​Nilai yang dihitung menggunakan regresi
nonlinear (dengan respon dosis sigmoidal) di GraphPad Prism 6.05.
Setiap senyawa diuji dalam rangkap dua dan tiga percobaan
independen dilakukan. Parthenolide digunakan sebagai kontrol positif.
4.6. Aktivitas antiproliferatif
MM-CSC manusia yang berasal dari sumsum tulang pasien
multiple myeloma diperoleh dari Celprogen (Torrance, CA, USA).
MM-CSC digunakan antara bagian 4 dan 12 untuk eksperimen. Sel
plasma tumor RPMI 8226 diperoleh dari standar LGC (Middlesex,
Inggris). Sel RPMI 8226 digunakan antara bagian 10 dan 25 untuk
percobaan. Dua baris sel dikultur pada suhu 37 ° C dan 5% CO​2 ​dalam
dan XTT digunakan untuk mengevaluasi aktivitas antiproliferatif dari 11
senyawa dalam sel MM-CSCs dan RPMI 8226, masing-masing (​Issa
dan Cuendet, 2017​). MM-CSC diunggulkan di 96 pelat sumur dengan
kepadatan 5.000 sel per sumur dan dibiarkan menempel selama 24
jam, sedangkan sel RPMI 8226 dilapisi dengan kepadatan 15.000 sel
per sumur dan segera dirawat. MM-CSCs dan RPMI 8226 diobati
dengan peningkatan konsentrasi (0–100 μM) senyawa selama 72 jam.
20 μL larutan MTT (5 mg / mL) atau 50 μL larutan XTT (1 mg / mL)
ditambahkan di setiap sumur dan diinkubasi selama 2 jam (uji MTT)
atau 4 jam (uji XTT). Media dan larutan MTT disedot dan sel yang
mengandung formazan dilarutkan dalam 100 μL DMSO. Absor bance
diukur pada 590 nm (uji MTT) atau 450 nm (uji XTT). Persentase
viabilitas sel dihitung dengan absorbansi masing-masing sumur dibagi
dengan sumur kontrol kendaraan (0,5% DMSO dalam media kultur)
dan dikalikan dengan 100. Nilai IC​50 dihitung
​ menggunakan GraphPad
Prism 6.05. Bortezomib digunakan sebagai kontrol positif.
Catatan
Para penulis menyatakan tidak ada kepentingan finansial yang
bersaing.
Ucapan Terima Kasih
JLW berterima kasih kepada SNF atas dana yang memungkinkan
perolehan instrumen 600 MHz NMR (SNF R'Equip grant no
316030_164095).
Lampiran A. Data Tambahan Data
tambahan terkait dengan artikel ini dapat dilihat di ​http: // dx.
doi.org/10.1016/j.phytochem.2018.06.012​.
Referensi
Arihara, S., Ruedi, P., Eugster, CH, 1975. Senyawa jenis baru spirosiklopropil sikloheks
enedionediterpen. Coleons M, N, P, Q, dan R dan barbatusin dari Plectranthus
caninus dan coleon O dari Coleus somaliensis. Helv. Chim. Acta 58, 343–356​.
Bourdy, G., Walter, A., 1992. Bersalin dan tanaman obat di Vanuatu I. Siklus reproduksi.
J. Ethnopharmacol. 37, 179–196​.
Brito, E., Gomes, E., Fale, PL, Borges, C., Pacheco, R., Teixeira, V., Machuqueiro, M.,
Ascensao, L., Serralheiro, MLM, 2018. Bioaktivitas decoctions dari Plectranthus
spesies yang terkait dengan penggunaan tradisionalnya pada pengobatan masalah
pencernaan dan keracunan alkohol. J. Ethnopharmacol. 220, 147–154​.
Bruhn, T., Schaumloffel, A., Hemberger, Y., Bringmann, G., 2013. SpecDis:
mengkuantifikasi perbandingan spektrum dikroisme melingkar elektronik terhitung
dan eksperimental. Chirality 25, 243–249​.
Demchenko, YN, Brents, LA, Kuehl, MW, Li, Z., McGee, LR, Bergsagel, LP, 2014.
Novel inhibitors are cytotoxic for myeloma cells with NFkB inducing kinase-depen
dent activation of NFkB. Oncotarget 5, 4554–4566​.
Demchenko, YN, Kuehl, WM, 2010. A critical role for the NFkB pathway in multiple
myeloma. Oncotarget 1, 59–68​.
Devriese, EG, Buffel, K., Geuns, JMC, 1988. Stimulation of adventitious root formation GW, Schlegel, HB, Scuseria, GE, Robb, MA, Cheeseman, JR, Scalmani, G., Barone, V.,
on mung bean cuttings by Coleon O. Phytochemistry 27, 293–294​. ​Frisch, MJ, Trucks, Petersson, GA, Nakatsuji, H., Li, X., Caricato, M.,
S. Cretton et al. ​Phytochemistry 154 (2018) 39–46

Marenich, AV, Bloino, J., Janesko, BG, Gomperts, R., Mennucci, B., Hratchian, HP, Ortiz, JV, Izmaylov, AF, Sonnenberg, JL, Williams, Ding, F., Lipparini, F.,
Egidi, F., Goings, J., Peng, B., Petrone, A., Henderson, T., Ranasinghe, D., Zakrzewski, VG, Gao, J., Rega, N., Zheng, G., Liang, W., Hada, M., Ehara, M.,
Toyota, K., Fukuda, R., Hasegawa, J., Ishida, M., Nakajima, T., Honda, Y., Kitao, O., Nakai, H., Vreven, T., Throssell, K., Montgomery Jr., JA, Peralta, JE,
Ogliaro, F., Bearpark, MJ, Heyd, JJ, Brothers, EN, Kudin, KN, Staroverov, VN, Keith, TA, Kobayashi, R., Normand, J., Raghavachari, K., Rendell, AP, Burant,
JC, Iyengar, SS, Tomasi, J., Cossi, M., Millam, JM, Klene, M., Adamo, C., Cammi, R., Ochterski, JW, Martin, RL, Morokuma, K., Farkas, O., Foresman, JB,
Fox, DJ, 2016. Gaussian 16. Rev. B.01, Wallingford, CT​.
Gonzalez, MA, 2015. Aromatic abietane diterpenoids: their biological activity and synthesis. Nat. Melecut. Rep. 32, 684–704​.
Issa, ME, Cuendet, M., 2017. Withaferin A induces cell death and differentiation in multiple myeloma cancer stem cells. Med. Chem.Comm. 8, 112–121​.
Ito, T., Rakainsa, SK, Nisa, K., Morita, H., 2018. Three new abietane-type diterpenoids from the leaves of Indonesian Plectranthus scutellarioides. Fitoterapia
127, 146–150​. ​Johnson, JJ, 2011. Carnosol: a promising anti-cancer and anti-inflammatory agent. Canc. Lett. 305, 1–7​.
Lukhoba, CW, Simmonds, MSJ, Paton, AJ, 2006. Plectranthus: a review of ethnobo tanical uses. J. Ethnopharmacol. 103, 1–24​.
Moektiwardoyo, M., Levita, J., Sidiq, SP, Ahmad, K., Mustarichie, R., Subarnas, A., Supriyatna, 2011. The determination of quercetin in Plectranthus
scutellarioides (L.) R.Br. leaves extract and its in silico study on histamine H4 receptor. Maj. Farm. Indonesia. 22, 191–196​.
Moir, M., Ruedi, P., Eugster, CH, 1973. Diterpenoids from Coleus somaliensis. Coleons G and J. Helv. Chim. Acta 56, 2539–2548​. ​Ragasa, CY, Templora, VF,
Rideout, JA, 2001. Diastereomeric diterpenes from Coleus
blumei. Chem. Pharm. Banteng. 49, 927–929​.
Razzaque, A., Ellis, BE, 1977. Rosmarinic acid production in Coleus cell cultures. Planta 137, 287–291​.
Roosita, K., Kusharto, CM, Sekiyama, M., Fachrurozi, Y., Ohtsuka, R., 2008. Medicinal plants used by the villagers of a Sundanese community in West Java,
Indonesia. J. Ethnopharmacol. 115, 72–81​.
Schmid, JM, Rueedi, P., Eugster, CH, 1982. Diterpenoid leaf-gland pigments from Labiatae: 22 novel coleons and royleanones from Plectranthus lanuginosus.
Helv. Chim. Acta 65, 2136–2163​.
Schultes, RE, 1984. Psychoactive plants in need of chemical and pharmacological study. Proceedings: Plant Sciences 93, 281–304​.
Siebert, DJ, 2004. Localization of salvinorin A and related compounds in glandular trichomes of the psychoactive sage, Salvia divinorum. Ann. Bot. 93,
763–771​. ​Smith, SG, Goodman, JM, 2010. Assigning stereochemistry to single diastereoisomers by GIAO NMR calculation: the DP4 probability. Selai. Chem.
Soc. 132, 12946–12959​.
Tran, TVA, Malainer, C., Schwaiger, S., Hung, T., Atanasov, AG, Heiss, EH, Dirsch, VM, Stuppner, H., 2015. Screening of Vietnamese medicinal plants for
NF-κB sig naling inhibitors: assessing the activity of flavonoids from the stem bark of Oroxylum indicum. J. Ethnopharmacol. 159, 36–42​.
Waruruai, J., Sipana, B., Koch, M., Barrows, LR, Matainaho, TK, Rai, PP, 2011. An ethnobotanical survey of medicinal plants used in the Siwai and Buin
districts of the Autonomous Region of Bougainville. J. Ethnopharmacol. 138, 564–577​.
Yunlong, X., Dan, W., Xiaojie, L., Jian, F., 1989. Abietane quinones from Rabdosia lo phanthoides. Phytochemistry 28, 189–191​.
Zhu, Z., Nayeshiro, H., Prewo, R., Rueedi, P., Eugster, CH, 1988. Fredericon A, B, C, and D, novel and highly functionalized abietanoids from leaf-glands of
Coleus fredericii. G. Tayl. Helv. Chim. Acta 71, 577–587​.