Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Ekotoksikologi dan Keamanan Lingkungan 194 (2020) 110383

Daftar isi tersedia diScienceDirect

Ekotoksikologi dan Keamanan Lingkungan

halaman utama jurnal:www.elsevier.com/locate/ecoenv

Lipid, protein, dan metabolit ekstraseluler dariTrichoderma harzianum modifikasi yang

disebabkan oleh asam 2,4-diklorofenoksiasetat sebagai stimulator pertumbuhan tanaman

Julia MironenkaA, Sylwia RóżalskaA, Adrian SobońB, Przemysław BernatA,∗

AUniversitas Lodz, Fakultas Biologi dan Perlindungan Lingkungan, Institut Mikrobiologi, Bioteknologi dan Imunologi, Departemen Mikrobiologi Industri dan
Bioteknologi, Banacha Street 12/16, 90-237, Lodz, Polandia
BUniversitas Lodz, Fakultas Biologi dan Perlindungan Lingkungan, Institut Mikrobiologi, Bioteknologi dan Imunologi, Departemen Genetika Mikroba,

Banacha Street 12/16, 90-237, Lodz, Polandia

INFO ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Strain dariTrichoderma harzianumadalah produsen metabolit sekunder bioaktif yang terkenal dan memiliki efek
2,4-D menguntungkan pada tanaman. Namun, sepengetahuan kami, efek pestisida yang biasa digunakan terhadap
Toksisitas aktivitas jamur ini belum diselidiki. Oleh karena itu, dalam penelitian ini, efek herbisida asam 2,4-
Fosfolipid diklorofenoksiasetat (2,4-D) pada lipidom dan senyawa ekstraseluler terpilih yang disintesis olehT.harzianumIM
Lipidomik
0961 diperiksa. Diamati bahwa herbisida 2,4-D menyebabkan perubahan komposisi lipid miselium dan herbisida
Proteomik
menunjukkan sifat lipofilik. Selain itu, herbisida mengganggu rasio fosfatidilkolin (PC)/fosfatidiletanolamin (PE) dan
Metabolomik
meningkatkan permeabilitas membran. Jumlah CL kardiolipin yang lebih tinggi 72:7 dan jumlah CL 72:8 yang lebih
rendah dapat dikaitkan dengan penurunan rasio asam lemak 18:2 dan 18:1 dalam sampel yang diberi perlakuan
herbisida. Selain itu, dengan adanya 2,4-D, peningkatan peroksidasi lipid (dua kali lipat), serta kandungan oxylipin
(9-HODE dan 13-HODE) dan asam fosfatidat (PA) yang lebih tinggi, dicatat, mengkonfirmasikan bahwa 2 ,4-D
menginduksi peroksidasi lipid dalam miselium. Herbisida juga memberikan efek toksiknya pada produksi peptaibol
14-asam amino dan dua senyawa, asam harzianic dan t22-azaphilone, menunjukkan aktivitas pendorong
pertumbuhan antibiotik dan tanaman. Selama analisis proteomik, sintesis beberapa protein, seperti calcineurin-like
phosphoesterase metallophosphatases (MPPs), yang memodulasi sifat dinding sel, ditemukan dihambat oleh
herbisida. Temuan yang disajikan ini mungkin memiliki nilai yang signifikan dalam memahami pengaruh 2,4-D pada
aktivitasdari T.harzianum.

1. Perkenalan dihasilkan oleh mikroorganisme tersebut (Lee et al., 2016). Beberapa

Trichodermaadalah salah satu genus jamur yang paling banyak dipelajari.
Alasan ketertarikan pada genus jamur ini adalah signifikansi praktis dan
ekologisnya. Ini banyak digunakan untuk melindungi tanaman dari patogen dan
meningkatkan ketahanannya terhadap cekaman abiotik (Ortega-Garcia et al., 2015
). Sejak tahun 1930-an,Trichodermatelah digunakan untuk mengendalikan
penyakit tanaman (Saba et al., 2012). Karena kemampuannya untuk memparasiti
jamur fitopatogenik dan meningkatkan kekebalan,Trichodermadigunakan sebagai
biofungisida komersial di bidang pertanian (Zeilinger et al., 2016).
Diantara berbagai kegiatan dariTrichoderma, yang paling banyak
dipelajari adalah kemampuan genus jamur ini untuk menghasilkan
banyak metabolit molekul kecil ekstraseluler. Saat ini, sekitar 390
senyawa nonvolatile (Li et al., 2019) dan 140 metabolit volatil, juga
dikenal sebagai senyawa organik volatil (VOC), telah diidentifikasi
metabolit terpilih dariTrichodermajuga telah ditemukan untuk memperoleh
resistensi sistemik pada tanaman (Contreras-Cornejo et al., 2016).
Dalam penelitian kami sebelumnya, kami menjelaskan bahwa a
Trichoderma harzianum strain mampu sebagian mengurangi efek racun
dari asam herbisida 2,4-dichlorophenoxyacetic (2,4-D) pada bibit gandum (
Bernat et al., 2018a). Strain ini juga terkenal karena efeknya yang
menguntungkan pada tanaman dan terbukti meningkatkan produktivitas
Arabidopsis thaliana, Brassica oleracea, DanBrassica napus(Poveda et al.,
2019), serta mengarah ke perkecambahan akar awalRhizoctonia solani(
Manganiello et al., 2018).
Namun, sepengetahuan kami, pengaruh pestisida yang umum
digunakan terhadap aktivitasT.harzianumbelum dijelaskan. Baru-baru ini,
sebuah penelitian menggambarkan mekanisme toleransi yang ditunjukkan
oleh Trichoderma asperellumTJ01 terhadap pestisida organofosfor

∗Penulis
yang sesuai.
Alamat email:przemyslaw.bernat@biol.uni.lodz.pl (P. Bernat).

https://doi.org/10.1016/j.ecoenv.2020.110383
Diterima 29 November 2019; Diterima dalam bentuk revisi 21 Februari 2020; Diterima 25 Februari 2020 0147-6513/ ©
2020 The Authors. Diterbitkan oleh Elsevier Inc. Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY (http://
creativecommons.org/licenses/BY/4.0/).
J.Mironenka, dkk.
diklorvo (Wu et al., 2018), tetapi belum ada penelitian yang menyelidiki bagaimana
salah satu herbisida paling populer, 2,4-D, memengaruhi aktivitasT.harzianum
sejauh ini.
Oleh karena itu, tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi
pengaruh 2,4-D padaT.harzianum. Liposolubility dari 2,4-D diyakini
mempengaruhi fungsi membran sel (Viegas et al., 2005) dan karena itu
memainkan peran penting dalam mekanisme toksisitasnya.
Mempertimbangkan fakta ini, kami menganalisis komposisi lipid dari
T.harzianummenggunakan kromatografi cair–spektrometri massa (LC–MS/
MS). Selain itu, kandungan oxylipin (metabolit lipid bioaktif dariT.harzianum)
diperkirakan, dan permeabilitas membran sel dan produksi spesies oksigen
reaktif (ROS) dipelajari. Hasil ini dilengkapi dengan analisis proteomik dari
protein ekstraselulerT.harzianum, dan investigasi hubungan antara profil
lipid, stres oksidatif, dan profil protein spesies.Trichoderma harzianum
diketahui menghasilkan senyawa dengan sifat antibiotik dan meningkatkan
pertumbuhan tanaman. Oleh karena itu, pada bagian selanjutnya dari
penelitian kami, kami mengidentifikasi beberapa senyawa ini dan
mengamati dampak 2,4-D pada produksinya menggunakan LC-MS/MS dan
waktu penerbangan laser desorpsi/ionisasi berbantuan matriks (MALDI
-TOF) teknik.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Reagen
Herbisida 2,4-D dan 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate (H2
DCFDA) dibeli dari Sigma-Aldrich (Jerman). Standar fosfolipid diperoleh
dari Avanti Polar Lipids (AS), dan standar oxylipin dari Cayman Chemical
(AS). Semua bahan yang digunakan dalam analisis proteomik dibeli dari
Bio-Rad, Promega (tripsin), dan Sigma-Aldrich (penanda massa 6500
hingga 200.000 Da). Pelarut lain diperoleh dari Avantor Performance
Materials (Polandia). Larutan stok 2,4-D disiapkan dengan konsentrasi 5
mg/mL dalam etanol.
2.2. Ketegangan dan kondisi pertumbuhan
Strain jamurT.harzianumIM 0961 diperoleh dari Departemen
Mikrobiologi Industri dan Bioteknologi, University of Lodz. Spora
diisolasi dari biakan 7 hari yang ditanam pada agar miring ZT (g/L:
glukosa, 4; ekstrak ragi Difco, 4; agar, 25; ekstrak malt 6° Balling (BLG)
hingga 1 L [1° BLG = 1 g zat terlarut yang diekstraksi dari biji-bijian per
100 mL ekstrak malt]; pH 7,0) digunakan dalam penelitian ini.
Spora jamur yang diperoleh diinokulasi dalam 20 mL media Sabouraud
dextrose broth (Difco) ditambahkan dalam 100 mL labu Erlenmeyer (Bernat
et al., 2018b). Spora dikultur pada rotary shaker (160 rpm) selama 48 jam
pada suhu 28 °C. Kemudian, 2 mL prakultur dimasukkan ke dalam media
Sabouraud yang ditambah dengan 100 mg/L 2,4-D atau media kontrol tanpa
herbisida. Semua kultur diinkubasi pada rotary shaker (160 rpm) pada suhu
28 °C. Setelah 24 jam dan 96 jam inkubasi, biomassa dieksudasi
menggunakan kertas saring dan dihitung dengan metode yang dijelaskan
olehBernat dkk. (2013).
Semua percobaan dilakukan dalam fase pertumbuhan eksponensial (24 jam)
dan stasioner awal (96 jam) dalam kasus kontrol dan sampel yang diberi perlakuan
2,4-D.
2.3. Analisis 2,4-D
Aktivitas 2,4-D dalam sampel ditentukan dengan menggunakan metode yang
dijelaskan dalam pekerjaan kami sebelumnya (Nykiel-Szymańska et al., 2018).
2.4. Penentuan fosfolipid
Fosfolipid dariT.harzianumdiekstraksi mengikuti metode kami
sebelumnya (Bernat et al., 2018b) tetapi dengan beberapa modifikasi.
2
Ekotoksikologi dan Keamanan Lingkungan 194 (2020) 110383
Secara singkat, 50 mg biomassa jamur yang dipisahkan pada kertas saring
dicuci dengan air suling dan dipindahkan ke dalam tabung Eppendorf 2 mL
yang berisi manik-manik kaca, 0,66 mL metanol, dan 0,33 mL kloroform.
Biomassa dihomogenisasi selama 1 menit (setiap siklus selama 20 detik)
dengan homogenizer (FastPrep-24, MP Biomedicals). Campuran
dipindahkan ke tabung Eppendorf lain, dan ditambahkan 0,2 mL saline 0,9%.
Kemudian, sampel divorteks dan disentrifugasi pada 2000xGselama 5 menit.
Setelah sentrifugasi, lapisan bawah organik dikumpulkan, diuapkan dengan
tekanan rendah, dan disimpan pada suhu -20 °C hingga digunakan untuk
analisis fosfolipid dengan LC–MS/MS (sistem Agilent 1200 HPLC (Agilent,
USA) dengan 4500 Q-TRAP spektrometer massa (Sciex, AS)).
Ekstrak lipid yang diperoleh terlebih dahulu difraksinasi menggunakan
sistem Agilent 1200 HPLC (USA). Untuk ini, 10 μL ekstrak disuntikkan ke
dalam kolom Kinetex C18 (50 mm × 2,1 mm, ukuran partikel: 5 μm;
Phenomenex, USA) dengan laju aliran 500 μL min-−1. Temperatur kolom
dipertahankan pada 40 °C. Fase gerak yang digunakan adalah air (A) dan
metanol (B), yang keduanya terdiri dari 5 mM amonium format. Elusi pelarut
dimulai dari 70% B dan kemudian meningkat menjadi 95% B selama 1,25
menit dan dipertahankan pada 95% B selama 6 menit sebelum kembali ke
komposisi pelarut awal selama 3 menit. Analisis spektrometri massa
dilakukan dengan menggunakan spektrometer massa 4500 Q-TRAP (Sciex,
USA), dilengkapi dengan sumber ionisasi elektrospray (ESI), dengan kondisi
berikut: tegangan semprot −4500 V, gas tirai 25 psi, gas nebulizer 50 psi, gas
turbo 60 psi, dan suhu sumber ion 600 °C. Analisis data dilakukan dengan
menggunakan perangkat lunak Analyst™ v1.6.2 (Sciex, USA). Analisis
kualitatif dan kuantitatif dilakukan sesuai dengan metode yang dijelaskan
dalam karya kami sebelumnya (Bernat et al., 2014,Bernat et al., 2018b).
2.5. penentuan lipid lainnya
Ekstrak lipid yang diperoleh (dipersiapkan dengan cara yang sama
seperti ekstraksi fosfolipid) digunakan untuk penentuan ergosterol,
triasilgiserol (TAG) dan sphingolipid. Analisis lipid ini dilakukan sesuai
dengan prosedur yang dijelaskan dalam makalah kami sebelumnya (Bernat
et al., 2018b).
2.6. Analisis oksilipin
Untuk analisis oxylipin, 50 mg biomassa basah dipanen, dipindahkan ke
tabung Eppendorf 2 mL yang berisi manik-manik kaca, dan dibekukan dalam
nitrogen cair. Kemudian, sampel dihomogenkan menggunakan instrumen
FastPrep-24 (MP Biomedicals) pada 5 ms−1selama 20 detik (total waktu 1
menit). Oxylipin diekstraksi dari sampel sesuai dengan metodeSalem dkk.
(2016)dengan beberapa modifikasi. Secara singkat, 1 mL campuran metil
tert-butil eter dengan metanol (3:1, v/v) ditambahkan ke sampel yang
dihomogenkan dan sampel divorteks selama 1 menit. Kemudian, 650 μL
campuran air dan metanol (3:1, v/v) ditambahkan, dan tabung divorteks lagi
dan disentrifugasi pada 5000xGselama 5 menit pada suhu 10°C. Setelah
sentrifugasi, fase atas dikumpulkan, diuapkan, dan disimpan pada suhu -20
°C sampai analisis.
Peralatan, kolom, dan pelarut LC-MS/MS yang sama seperti yang
disebutkan di atas digunakan untuk penentuan oksilipin. Elusi pelarut
dilakukan pada laju alir 0,5 mL min-1−1dan dimulai dengan 70% A, turun
menjadi 5% A selama 2 menit, dan dipertahankan pada 95% B selama 5
menit sebelum kembali ke komposisi pelarut awal selama 2 menit.
Analisis spektrometri massa dilakukan pada kondisi berikut: tegangan
semprot −4500 V, gas tirai 25 psi, gas nebulizer 50 psi, gas turbo 50 psi,
dan suhu sumber ion 500 °C. Analisis kuantitatif oksilipin dilakukan
dengan menggunakan pasangan multiple reaction monitoring (MRM) (
Bernat et al., 2018a).
2.7. Identifikasi metabolit ekstraseluler
Kultur jamur disaring menggunakan unit filter 115 mL (Thermo
Scientific), kemudian 10 mL supernatan dipindahkan ke 50-
J.Mironenka, dkk.
mL tabung Falcon. Metabolit diekstraksi dari supernatan menggunakan
prosedur QuEChERS (Cepat, Mudah, Murah, Efektif, Kasar, dan Aman) yang
dimodifikasi (Paraszkiewicz et al., 2017). Singkatnya, garam yang dibutuhkan
(2 g MgSO4, 0,5 g NaCl, 0,5 g C6H5Na3HAI7⋅2H2O, 0,25 gC6H6Na2HAI7⋅1,5 jam2
O, dan 10 mL asetonitril) ditambahkan ke supernatan, dan sampel divorteks
untuk melarutkannya sepenuhnya. Selanjutnya sampel disentrifugasi
dengan kecepatan 4000xGselama 10 menit pada suhu 4°C. Fase atas
dikumpulkan dan disimpan pada suhu -20 °C sampai analisis.
Peralatan LC-MS/MS yang sama seperti yang disebutkan di atas
digunakan untuk penentuan metabolit ekstraseluler. Pemisahan
kromatografi dilakukan menggunakan kolom Kinetex C18 (50 mm × 2,1
mm, ukuran partikel: 5 μm; Phenomenex, USA; suhu kolom 40 °C,
volume injeksi 10 μL). Eluen yang digunakan adalah air (A) dan metanol
(B) yang mengandung 5 mM amonium format. Elusi pelarut dilakukan
pada laju aliran konstan 500 μL min-−1
dan dimulai dengan 80% eluen A selama 0,25 menit, kemudian diturunkan
menjadi 10% eluen A, yang dipertahankan selama 4 menit. Kondisi awal
dipulihkan selama 2 menit berikutnya. Deteksi MS/MS dilakukan dalam
mode MRM ionisasi positif. Parameter sumber ion ESI yang dioptimalkan
adalah sebagai berikut: CUR 25, IS 5500 V, suhu 500 °C, GS1 50, dan GS2 50.
Pasangan MRM yang dipantau adalah m/z 366 > 320, 366 > 224 untuk asam
harzianat dan 345 > 259, 345 > 241 untuk t22- azaphilone.
2.8. Investigasi permeabilitas membran
Permeabilitas membran mikroba ditentukan sesuai dengan metode
yang dijelaskan dalam makalah kami sebelumnya (Stolarek et al., 2019).
Secara singkat, 1 mL kultur jamur dipindahkan ke tabung Eppendorf
dan disentrifugasi selama 5 menit pada 6000xG. Kemudian, 2 μL
larutan propidium iodida (PrI) (1 mg/mL dalam H2O) ditambahkan ke
sampel miselium yang disuspensi dalam 1 mL saline buffer fosfat (PBS,
pH 7) dan diinkubasi selama 5 menit pada suhu kamar dalam gelap.
Setelah inkubasi, sampel miselium dariT.harzianumdisentrifugasi
selama 5 menit pada 8000xGdan supernatan dibuang. Pelet yang
terkumpul dicuci tiga kali dengan PBS. Kemudian, miselium disuspensi
dalam 0,5 mL PBS dan dipindahkan ke piring kultur sel 24 lubang.
Intensitas fluoresensi diukur pada pelat menggunakan
spektrofluorometer FLUOstar Omega (BMG Labtech) dengan
parameter kerja sebagai berikut: λex 540 nm dan λem 630 nm.
2.9. Peroksidasi lipid
Peroksidasi lipid ditentukan dalam sampel sesuai dengan metode
Gajewska dkk. (2012), dengan beberapa modifikasi. Setelah
menyelesaikan seluruh prosedur, sampel dibiarkan selama 10 menit
sebelum digunakan untuk analisis spektrofotometri.
2.9.1. H2HAI2deteksi
Sampel untuk H2HAI2deteksi disiapkan sesuai dengan metode oleh
Siewiera et al. (2017). 1 mL kultur jamur dipindahkan ke tabung
Eppendorf dan disentrifugasi selama 2 menit pada 5000xG. Kemudian,
1 mg/ml DAB yang disuspensi dalam 1 mL saline buffer fosfat (pH 3,8)
ditambahkan dan sampel diwarnai pada suhu kamar selama 30 menit.
2.9.2. HAI
2 −deteksi
Sampel disiapkan untuk pengujian Nitroblue tetrazolium (NBT), sesuai
dengan metode yang dimodifikasi olehSiewiera et al. (2017). 1 mL kultur
jamur dipindahkan ke tabung Eppendorf dan disentrifugasi selama 2 menit
pada 5000xG. Kemudian, 0,1% NBT dengan 10 mM NaN3ditambahkan ke
sampel miselium yang disuspensi dalam 1 mL saline buffer fosfat (pH 7,8)
dan sampel diwarnai pada suhu kamar dalam gelap selama 15 menit.
2.9.3. NO•· deteksi
Sampel disiapkan sesuai dengan metode yang dimodifikasi oleh
3
Ekotoksikologi dan Keamanan Lingkungan 194 (2020) 110383
Siewiera et al. (2017). 1 mL kultur jamur dipindahkan ke tabung
Eppendorf dan disentrifugasi selama 2 menit pada 5000xG. Kemudian,
50 μM H2DCFDA tersuspensi dalam 1 mL saline buffer fosfat
ditambahkan ke sampel miselium dan sampel diwarnai pada suhu
kamar dalam gelap selama 10 menit. Miselium dibilas 3 kali dengan
buffer PBS.
2.9.4. Penentuan Peptaibol
Sampel untuk penentuan peptaibol disiapkan menurut metode
yang sama seperti yang dijelaskan untuk isolasi fosfolipid (Bernat et al.,
2018b). Identifikasi peptaibol dilakukan sesuai dengan makalah yang
disensorTrichodermaspp. peptaibol (Naher et al., 2014). Sampel yang
diuapkan diencerkan dengan 2% asetonitril/0,1% asam trifluoroasetat.
Pada langkah selanjutnya, 0,5 μL matriks (matriks asam siano-4-
hidroksisinamat, larutan 10 mg/mL) dan 0,5 μL sampel yang diperiksa
diaplikasikan pada pelat 384 MALDI Opti-TOF 123 mm × 81 mm. Analisis
MALDI-TOF/TOF dilakukan dalam mode ionisasi dan reflektor positif
dalam rentang m/z 900–2500 pada intensitas laser tetap 3500 (unit
khusus instrumen). Kemudian, sinyal terpilih dipilih untuk analisis MS/
MS pada intensitas laser tetap 5000 (unit khusus instrumen).
2.9.5. Analisis protein ekstraseluler
Kultur disaring dengan unit filter 115 mL (Thermo Scientific), dan
kemudian 10 mL filtrat dialirkan ke dalam lima tabung (50 mL). Kemudian,
40 mL aseton dingin ditambahkan, dan campuran didiamkan semalaman (
−20 °C). Tabung disentrifugasi pada 8000xGselama 10 menit pada suhu 4°C.
Setelah menuang supernatan, endapan dipindahkan ke tabung protein
LoBind (Eppendorf) dan 500 μL aseton dingin ditambahkan. Kemudian
semua sampel dihomogenkan menggunakan homogenizer FastPrep-24
pada frekuensi getaran 5 ms−1selama 30 detik dan disentrifugasi pada
13.500xGselama 5 menit pada suhu 4°C. Langkah pemurnian diulang 3 kali,
dan langkah sentrifugasi terakhir diperpanjang 10 menit. Endapan
dikeringkan di bawah tekanan tereduksi selama 10 menit pada suhu 30 °C
dan dilarutkan dalam buffer SB (7 M urea, 2 M tiourea, 4% CHAPS, 0,01 M
DTT)Soboń et al., 2019. Jumlah protein dalam sampel ditentukan dengan
menggunakan metode Bradford.
Menurut metode yang dijelaskan olehSzewczyk et al., 2014, kandungan
protein dalam sampel awalnya dianalisis dengan elektroforesis gel, dengan
masing-masing sampel diencerkan dengan kandungan protein yang sama.
Penanda massa molekul 6500 hingga 200.000 Da (Sigma-Aldrich) digunakan
sebagai kalibrator gel. Pencernaan protein dilakukan menggunakan trypsin,
dan urutan peptida ditentukan menggunakan MALDI-TOF/TOF (Ab Sciex
5800 TOF/TOF system, USA) seperti yang dijelaskan olehBernat dkk. (2014).
Perangkat lunak Protein Pilot v4.5 (Sciex) dengan mesin pencari Mascot v2.4
digunakan untuk identifikasi protein. Data MS yang diperoleh dianalisis
menggunakan database NCBInr dengan filter taksonomi untukTrichoderma
(jumlah total urutan = 278.324).
Untuk mendapatkan informasi tentang fungsi protein, khususnya
untuk protein hipotetis, algoritma BLASTp dalam database protein
BLAST nonredundant (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi 2019)
dilakukan.
2.9.6. Analisis statistik
Tiga ulangan disiapkan untuk pengujian. Standar deviasi (SD)
ditentukan pada setiap sampel. Analisis statistik dilakukan dengan
menggunakan analisis varians dua faktor dan multifaktorial dengan uji
post hoc Tukey dalam perangkat lunak STATISTICA v.13.3. Perubahan
signifikan secara statistik diterima sementarap < 0,05.
3. Hasil
3.1. 2,4-D sedikit menghambat pertumbuhan jamur dan tidak terdegradasi oleh T.
harzianum. Dalam studi pendahuluan kami, kami memeriksa bagaimana
perbedaan konsentrasi 2,4-D (10-200 mg/L) memengaruhi pertumbuhan
jamur. Konsentrasi 100 mg/L tidak menghambatT.harzianumpertumbuhan,
tetapi terlihat bahwa warna media kultur berubah, dibandingkan
J.Mironenka, dkk.
Gambar 1.Perbandingan massa keringT.harzianumdalam kultur kontrol dan kultur yang
terpapar 2,4-D (100 mg/L) yang ditanam pada media Sabouraud.
ke kontrol. Selain itu, konsentrasi ini digunakan dalam studi peneliti
lain tentang degradasi 2,4-D oleh jamur tanah (Vroumsia et al., 2005;
Itoh et al., 2013).
Setelah paparan 2,4-D (100 mg/L) selama 5 hari, massa kering miselia
diperkirakan. Efek penghambatan herbisida yang diaplikasikan pada laju
pertumbuhan jamur sedikit terlihat (Gambar 1). Setelah 5 hari inkubasi
dalam media Sabouraud, massa kering biomassa kontrol dan biomassa yang
dipapar 2,4-D berturut-turut adalah 6,42 dan 6,15 g/L. Dengan
menggunakan teknik LC-MS/MS, jumlah herbisida juga diukur dalam sampel
jamur. Namun, tidak ada perubahan yang signifikan secara statistik dalam
jumlah pestisida yang ditambahkan dibandingkan dengan kontrol abiotik
yang diamati (92 ± 3,7, 96 ± 2,5, masing-masing untuk sampel jamur dan
kontrol) dan tidak ada metabolit potensial dari degradasinya yang terdeteksi
dalam medium.
Mempertimbangkan hasil yang diperoleh, semua percobaan lebih lanjut
dilakukan selama fase pertumbuhan eksponensial (24 jam) dan stasioner awal (96
jam).T.harzianum. Tidak ada perubahan signifikan secara statistik pada kultur
yang diberi perlakuan herbisida, dibandingkan dengan kontrol, yang terdeteksi.
Selama kultur jamur, pengukuran pH media kultur dilakukan. Pada
fase pertumbuhan eksponensial pH masing-masing adalah 5,29 untuk
media kontrol dan 4,81 untuk media dengan herbisida. Pada fase
pertumbuhan konstan pH untuk media kontrol mencapai pH 4,09
sedangkan pada kehadiran 2,4-D adalah 4,01.
3.2. Phosphatidylcholines dan cardiolipin CL 72:8 menurunkan T.
miselium harzianum yang terpapar herbisida. Fosfolipid milik kelas
fosfatidilkolin (PC), fosfatidiletanolamin (PE), fosfatidilinositol (PI), asam
fosfatidat (PA), dan fosfatidilserin ditentukan dengan menggunakan
teknik LC-MS/MS. Analisis kuantitatif fosfolipid dariT.harzianum
mengungkapkan bahwa kelas PC dan PE mendominasi, yang
merupakan sekitar 90% dari total komposisi fosfolipid dalam jamur (
Gambar 2). Ditemukan juga bahwa biomassa jamur yang terpapar
herbisida memiliki tingkat PE yang lebih tinggi secara signifikan dan
tingkat PC yang lebih rendah pada kedua fase pertumbuhan yang
diperiksa; namun, selama fase pertumbuhan eksponensial, perbedaan
kadar fosfolipid lebih terlihat. Selain itu, kehadiran 2,4-D menginduksi
peningkatan kadar PA dan PI. Fosfolipid dariT.harzianumditemukan
terutama terdiri dari asam lemak 16- dan 18-karbon, di antaranya
spesies PC 18:2/18:2 dan PE 16:0/18:2 mendominasi (Tambahan
Gambar. 1).
Kelas fosfolipid penting lainnya adalah kardiolipin. Tiga spesies
kardiolipin—CL 72:6, CL 72:7, dan CL 72:8—terutama diidentifikasi dari
miselium jamur yang diperiksa. Kandungan spesies CL 72:8 ditemukan
menurun dengan adanya herbisida, sementara tren sebaliknya diamati
dalam kasus CL 72:7 (Gambar 3).
3.3. Sintesis ergosterol, sphingosine dan dihydrosphingosine terpengaruh
oleh 2,4-D. Penurunan tingkat ergosterol diamati pada
4
Ekotoksikologi dan Keamanan Lingkungan 194 (2020) 110383
sampel dengan penambahan 2,4-D terhadap kontrol. Pada fase
pertumbuhan eksponensial, jumlah sterol adalah 2,56 ± 0,17 dan 1,87 ±
0,15 μg/mg berat kering, untuk kontrol dan
2,4-D, masing-masing. Selain itu, selama hari-hari inkubasi berikutnya,
perbedaan antara jumlah sterol pada kedua jenis kultur juga diamati
(masing-masing 4,6 ± 0,42 dan 3,3 ± 0,14 μg/mg berat kering, untuk
kontrol dan 2,4-D). .
T.harzianummenghasilkan berbagai spesies ceramide dan dihy-
droceramides, yang terdiri sekitar 70% dari sphingolipid yang terdeteksi.
Sphingolipid lain, seperti sphingosine, sphingosine-1P, dihydrosphingosine
dan dihydrosphingosine-1P juga ditentukan. Kandungan ceramide dan
dihydroceramides ditemukan lebih tinggi pada sampel yang diberi
perlakuan 2,4-D dibandingkan dengan kontrol sementara tingkat
dihydrosphingosine menurun (Tambahan Gambar. 4).
3.4. Jumlah triasilgliserol dengan asam lemak tak jenuh menurun
adanya herbisida. 18 spesies TAG telah diidentifikasi (Tambahan
Gambar. 3). Di antaranya, NH+jumlah TAG 54:6 4 dan 52:4 didominasi di
T.harzianum(masing-masing sekitar 20%) pada fase pertumbuhan
eksponensial, diikuti oleh 52:3, 52:5, dan 54:4 (masing-masing sekitar
10%). Analisis distribusi rantai hidrokarbon pada fase pertumbuhan
eksponensial menunjukkan bahwa miselium yang terpapar 2,4-D
memiliki persentase spesies tak jenuh yang lebih rendah dibandingkan
dengan sampel kontrol (Tambahan Gambar. 3).
3.5. 2,4-D menginduksi peroksidasi lipid dalam miselium. Untuk mengidentifikasi jika
2,4-D menyebabkan peroksidasi lipid pada galur yang diperiksa, jumlah
produk peroksidasi ditentukan pada kedua periode waktu. Pada setiap
fase pertumbuhan, jumlah zat reaktif asam thiobarbituric (TBARS) lebih
tinggi pada sampel yang diberi perlakuan herbisida. Pada fase
pertumbuhan eksponensial adalah 1,20 μM/mg (±0,03) pada sampel
kontrol, sedangkan pada sampel 2,4-D mencapai 1,45 (±0,1) μM/mg.
Pada fase pertumbuhan konstan adalah 1,13 μM/mg (±0,03) pada
sampel kontrol dan 1,89 μM/mg (±0,16) dengan adanya 2,4-D. Juga,
tingkat asam lemak teroksigenasi, disebut oxylipins, ditentukan (
Gambar 4), yang menunjukkan perbedaan signifikan pada kandungan
13-HODE dan 9-HODE. Selain itu, perbedaan yang signifikan secara
statistik diamati pada kandungan 9-oxoODE, 13-oxoODE, dan 13-
HPODE. Tingkat lipid 13-HODE, yang ditemukan mendominasi dalam
biomassa yang terpapar 2,4-D, dua kali lipat lebih tinggi pada kedua
interval waktu, dibandingkan dengan sampel kontrol. Di sisi lain,
tingkat 9-HODE dalam sampel yang diberi pestisida menurun secara
eksponensial dan meningkat pada fase pertumbuhan stasioner.
Menariknya, jumlah 13-HPODE ditemukan menurun drastis pada
biomassa jamur yang dipanen pada fase pertumbuhan stasioner.
3.6. Paparan 2,4-D menyebabkan pelepasan spesies oksigen reaktif
(ROS). Selama budidayaT.harzianumdengan 2,4D, di sana
diamati perubahan keseimbangan redoks. Menggunakan NBT, H2DCFDA dan
Uji DAB tingkat O− 2, NO•, dan H2HAI2diukur dan
persentase warna tertentu dari suatu gambar dianalisis (Tambahan
Gambar. 5). Jumlah H lebih tinggi2HAI28,66% (±1,77) diamati pada
sampel yang diberi perlakuan herbisida, dibandingkan dengan kontrol
0,37% (±0,26) (statistik H2HAI2: p = 0,0003). Juga, peningkatan kadar
anion superoksida intraseluler dalam kultur dengan herbisida 14,61%
(±5,57) dan NO• 14,24% (±4,7) selama fase pertumbuhan eksponensial
diperhatikan, dalam sampel kontrol keberadaan ROS ini tidak
ditentukan (statistik O− 2: p = 0,010; TIDAK•: p = 0,0001).
3.7. Herbisida menghambat produksi peptaibols, asam harzianic
dan t22-azaphilone, yang memiliki aktivitas pendorong pertumbuhan
antibiotik dan tanaman. Efek 2,4-D pada metabolit ekstraseluler terpilih dari
T.harzianumdianalisis menggunakan prosedur QuEChERS. Dua
senyawa — asam harzianic dan t22-azaphilone — diidentifikasi dalam
filtrat kultur. Spektrum massa kedua senyawa ini dicatat, dan hasil yang
diperoleh dibandingkan dengan literatur (Vinale et al., 2006,2014).
Perbedaan yang signifikan dalam tingkat senyawa ini diamati antara
sampel yang terpapar 2,4-D dan sampel kontrol (Gambar 5). Selama
fase eksponensial pertumbuhan, jumlah asam harzianic dan t22-
azaphilone empat kali lipat lebih rendah
J.Mironenka, dkk. Ekotoksikologi dan Keamanan Lingkungan 194 (2020) 110383

Gambar 2.Perbandingan kandungan fosfolipid dalamT.harzianumKultur yang terpapar 2,4-D (100 mg/L) dan pada kultur kontrol ditumbuhkan pada media Sabouraud. PA
—asam fosfatidat, PC—fosfatidilkolin, PE—fosfatidiletanolamin, PS—fosfatidilserin, dan PI—fosfatidilinositol.

dalam miselium jamur yang terpajan herbisida dibandingkan dengan
sampel kontrol. Namun, selama hari-hari inkubasi berikutnya, jumlah
asam harzianic tiga kali lebih rendah dan t22-azaphilone lebih dari 100
kali lebih tinggi pada kedua jenis kultur.
Untuk menyelidiki keberadaan peptaibol dalam ekstrak, spektrum
MALDI-TOF/TOF dikumpulkan. Sampel yang dianalisis dalam mode MS
reflektor mengungkapkan keberadaan banyak ion berbeda, dan yang
paling menonjol adalah sekitar m/z 1380–1454. Menganalisis spektrum
massa ion yang paling dominan pada m/z 1424,7 (M + K)+, perbedaan
18 Da diamati, yang terkait dengan hilangnya molekul air (Tambahan
Gambar. 6). Hasilnya menunjukkan adanya peptaibol urutan pendek
(14 asam amino) dengan urutan parsial asam amino, Ac-Aib-Gln, di N-
terminus.
3.8. 2,4-D mempengaruhi permeabilitas membran. Setelah 1 dan 4 hari
inkubasi pada media Sabouraud, kultur jamur diwarnai
dengan PrI, yang mampu melewati membran sel yang rusak dan berikatan
dengan DNA dan dapat dideteksi menggunakan mikroskop fluoresensi.
Pada sampel yang diperlakukan dengan herbisida, peningkatan
permeabilitas membran diamati pada latar belakang kontrol pada semua
periode pertumbuhan yang diperiksa (Gambar 6).
3.9. Analisis respon proteomik ekstraseluler T. harzianum terhadap
herbisida. Analisis protein ekstraseluler dariT.harzianum
(menggunakan uji Bradford) mengungkapkan bahwa keberadaan
herbisida sedikit memengaruhi ekskresi protein selama fase
pertumbuhan eksponensial (masing-masing 1,2 ± 0,03 dan 1,45 ± 0,15
mg/mL pada kontrol dan kultur yang diberi perlakuan 2,4). Namun,
selama hari-hari inkubasi berikutnya, perbedaan yang teramati antara
jumlah protein sangat tinggi pada kedua jenis kultur (P<0,05) (masing-
masing 1,13 ± 0,03 dan 1,89 ± 0,16 mg/mL pada kontrol dan kultur
yang diberi perlakuan 2,4-D). Selanjutnya, natrium dodesil sulfat-

Gambar 3.Kandungan kardiolipin dalamT.harzianumKultur yang terpapar 2,4-D (100 mg/L) dan pada kultur kontrol ditumbuhkan pada media Sabouraud.

5
J.Mironenka, dkk.
Gambar 4.Perbandingan oxylipin dalamT.harzianumKultur yang terpapar 2,4-D (100 mg/L) dan pada kultur kontrol ditumbuhkan pada media Sabouraud.
Gambar 5.Kandungan metabolit sekunder dalamT.harzianumKultur yang terpapar 2,4-D
(100 mg/L) dan pada kultur kontrol ditumbuhkan pada media Sabouraud.
Gambar 6.Permeabilitas membran sel padaT.harzianumKultur yang terpapar 2,4-
D (100 mg/L) dan pada kultur kontrol ditumbuhkan pada media Sabouraud.
elektroforesis gel poliakrilamida mengungkapkan 17 pita utama (
Tambahan Gambar. 2), yang ditemukan dimodifikasi dengan adanya
herbisida (Tabel 1). Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa protein
mirip fosfolipase B (PLB) dan ceratoplatanin hanya ditemukan pada
sampel yang diberi perlakuan herbisida. Di sisi lain, fosfoesterase,
dehidrogenase yang mengandung FAD/FMN, transpeptidase, dan asam
fosfatase diidentifikasi hanya dalam media di mana sampel kontrol
ditumbuhkan.
6
Ekotoksikologi dan Keamanan Lingkungan 194 (2020) 110383
4. Diskusi
Karena kapasitasnya yang sangat besar untuk menghasilkan metabolit
sekunder, Trichodermaadalah salah satu genus jamur yang paling banyak
dipelajari. Jamur ini telah diaplikasikan sebagai agen biokontrol, karena
dapat melindungi tanaman dari cekaman patogen. Namun, perlu dicatat
bahwa aktivitas metabolismeTrichodermadalam tanah dapat dipengaruhi
oleh berbagai faktor cekaman biotik dan abiotik, termasuk adanya pestisida.
Diantaranya, 2,4-D banyak ditemukan di lingkungan dan diterapkan di
seluruh dunia untuk mencegah pertumbuhan gulma.
Untuk menentukan efek toksik herbisida pada sel jamur dan untuk
melacak perubahan yang terjadi pada tingkat individu (proteom,
lipidom, metabolom), diperlukan analisis yang dilakukan. Ini termasuk
penentuan mekanisme pertahanan yang ditunjukkan oleh strain
terpilih di hadapan herbisida yang dilakukan dengan menganalisis
sintesis senyawa ekstraseluler, serta perubahan perkembangan jamur.
Herbisida 2,4-D diaplikasikan dengan konsentrasi 100 mg/L pada
tanamanT.harzianumkultur menunjukkan efek penghambatan ringan pada
perkembangan jamur. Setiap fase pertumbuhan diamati dimulai dengan
sedikit keterlambatan pada kultur jamur yang diberi perlakuan 2,4
dibandingkan dengan kultur kontrol. Tampaknya pada konsentrasi yang
diterapkan, 2,4-D sedikit mempengaruhi pertumbuhan jamur sampai batas
tertentu. Temuan ini dibandingkan dengan studi lain yang mengungkapkan
bahwa strain IM 0961 sensitif terhadap metolachlor dan resisten terhadap
alachlor pada konsentrasi awal chloroacetanilide 50 mg/L (Nykiel-Szymańska
et al., 2019).
Auksin seperti 2,4-D menunjukkan sifat lipofilik dan mengganggu
pengaturan spasial membran jamur dan fungsinya (Viegas et al., 2005;
Bernat et al., 2018b). Karena pH media kultur lebih tinggi daripada pKa
2,4-D (pKa 2,73), herbisida kehilangan proton dan sebagian besar
dalam bentuk anionik yang tidak menyerap lebih kuat ke bahan
organik daripada rekan netralnya.Ramos de Andrade dkk., 2014;
Onthong et al., 2007). Untuk memverifikasi bagaimana herbisida
mempengaruhi membran biologis sel jamur, profil fosfolipid, yang
merupakan komponen utama membran sel, diselidiki (Słaba et al., 2013
). Hasil menunjukkan bahwa PC dan PE mendominasi di antara
fosfolipid, membenarkan hasil yang dilaporkan oleh penelitian lain
Trichoderma(Gryz et al., 2019;Nykiel-Szymańska et al., 2019). Kedua
kelas fosfolipid menunjukkan sifat yang berbeda: PC membentuk
struktur bilayer, sedangkan PE membuat membran lebih kaku (Bernat
et al., 2014). Dengan demikian, perlakuan biomassa jamur dengan 2,4-
D menghasilkan sedikit penurunan rasio PC/PE, kemungkinan
menyebabkan penurunan membran.
 J.Mironenka, dkk.

Tabel 1
Pengaruh kehadiran 2,4-D pada protein ekstraselulerT.harzianum.

N. Nama protein Fungsi Aksesi no. Pertumbuhan eksponensial Pertumbuhan konstan Skor MW (Da)
fase fase

Kontrol 2,4-D Kontrol 2,4-D

1. Laminin G domain Proses metabolisme karbohidrat [UniProtKB—A0A2K0U5M7] PTB57655.1 + + + + 139 72.973

2. 5′-Nukleotida Aktivitas hidrolase [UniProtKB—A0A1T3CKC5] OPB41550.1 + + – – 110 71.793
3. Fosfoesterase seperti kalsineurin; metalofosfatase (MPP); 5′-Nukleotidase, fosfoesterase seperti kalsineurin, MPP—memiliki aktivitas hidrolase KKP05350.1 + – + – 441 71.849
bifungsional 2′,3′-siklik nukleotida 2′-fosfodiesterase/ [UniProtKB—A0A2T4A3L5]
3′nukleotidase prekursor protein
4. Protein mirip fosfolipase B jamur; domain katalitik lisofosfolipase; Fosfolipase B menghidrolisis gugus asil yang menghasilkan penyimpanan PTB51325.1 – + – + 572 70.002
sitoplasma fosfolipase A2; patatin produk lisofosfolipid (Kohler et al., 2006)
Lysophospholipase menghilangkan bagian asil yang tersisa pada lysophospholipids (
Gannoum, 2000)
Ekspresi patatin menyebabkan akumulasi asam palmitat dan perubahan profil
fosfolipid. Ini diaktifkan sebagai respons terhadap stres lingkungan atau infeksi
patogen (Kohler et al., 2006)
5. Protease serin; domain aktivasi peptidase S53; domain peptidase Pengikatan serin mengarahkan serangan nukleofilik untuk menghidrolisis ikatan peptida PKK54277.1 + – + + 405 66.207
dalam keluarga S53; prekursor aorsin kovalen. Ini terlibat dalam perkembangan jamur dan proses patogenesis (Pozo et al.,

7
6. Domain transpeptidase pengikat penisilin 2004) Terkait beta-laktamase [UniProtKB—A0A2T4ABH4] PTB54425.1 – + – + 154 63.482
7. Keluarga super amidase Amidase—mengkatalisis hidrolisis ikatan amida (Kim et al., 2016) PTB50895.1 + + – + 521 62.507
8. Dehidrogenase yang mengandung FAD/FMN Pengikatan FAD [UniProtKB—A0A2T4A7H7] PTB53020.1 – – + – 456 61.929
9. Superfamili transpeptidase: beta-laktamase; domain Transpeptidase superfamili—aktivitas peptidoglikan glikosiltransferase PKK52186.1 – + – + 154 61.297
transpeptidase protein pengikat penisilin [UniProtKB—A0A2N1LS61]
10. Keluarga glikosil hidrolase; ×8 superfamili Pemanjangan dinding sel dari ikatan 1,3-beta-glukan (pembentukan rantai peptida glukan PTB51281.1 + + + + 486 57.119
dengan menempelkan molekul 1,3-beta-glukan ke molekul yang tidak tereduksi) [UniProtKB
—A0A2T4A2I6]
11. Asam fosfatase Enzim bifungsional diketahui terlibat dalam biosintesis L-metionin PTB58363.1 – – + – 86 54.041
[UniProtKB—A0A2T3ZTN5]
12. L-Galactono-1,4-lakton dehidrogenase Aktivitas oksidoreduktase [UniProtKB—A0A0F9XQ18] KKP02308.1 – – + + 101 52.269
13. Gula 1,4-lakton oksidase; dehidrogenase yang mengandung FAD/FMN; Protein berberin, gula 1,4-lakton oksidase, dehidrogenase yang mengandung FAD/FMN PTB57084.1 + + + + 306 42.302
domain pengikat FAD; domain berberine dan berberine-like memiliki aktivitas oksidoreduktase; fungsi utamanya adalah pengikatan FAD [UniProtKB—
A2BSM4]
14. Prekursor aspartil protease Endotiapepsin Aktivitas endopeptidase tipe aspartik [UniProtKB—A0A2N1LLV1] Menghidrolisis senyawa KKO97149.1 + + + + 432 42.341
15. Beta-1,3-endoglucanase O-glikosil [UniProtKB—A0A0F9ZZ66] Cerato-platanin (CPPs) yang terdapat pada dinding KKO98503.1 – + + + 139 38.678
16. Cerato-platanin sel berperan dalam pertumbuhan dan perkembangan jamur (Bacelli, 2015). CPP dari PTB54696.1 – + – + 141 14.347
jamur patogen mampu bertindak sebagai faktor virulensi dalam interaksi jamur-tanaman.
CPP dari jamur yang digunakan sebagai agen biokontrol, sepertiTrichodermaspp.,
menyebabkan reaksi defensif (Garderer et al., 2014)

17. Rantai A, struktur kristal Sm1 Pemilih respons pertahanan tumbuhan dariTrichoderma(Viterbo et al., 2007) pdb|3M3G|A + + – + 203 12.538
Ekotoksikologi dan Keamanan Lingkungan 194 (2020) 110383
J.Mironenka, dkk.
ketidakstabilan.
Pada tanaman kacang 2,4-D meningkatkan aktivitas lipoksigenase (LOX), yang
dapat mempercepat degradasi oksidatif asam lemak yang mengandung ikatan
rangkap (Pazmiño et al., 2011). Oleh karena itu, tidak dapat dikesampingkan
bahwa peroksidasi lipid bertanggung jawab atas peningkatan kadar asam lemak
tak jenuh yang diamati dalam miselium. Di sisi lain, herbisida juga dapat
menghambat aktivitas Δ12desaturase, yang bertanggung jawab untuk konversi
asam oleat (18:1 (n-9)) menjadi asam linoleat (18:2 (n-6)). Selain itu, penurunan
kadar PC dan peningkatan kadar PE yang dicatat dalam miselium yang diberi
perlakuan dengan 2,4-D dapat dikaitkan dengan penghambatan metilasi PE
dengan S-adenozylomethionine sebagai donor metil ke PC (Selamat, 1995).
Fosfolipid lain seperti PA, biasanya ditemukan dalam jumlah kecil di kumpulan
lipid seluler, dapat meningkat secara signifikan pada tanaman sebagai respons
terhadap faktor stres (Darwish et al., 2009). Juga pada jamur yang diperiksa,
tingkat PA meningkat dengan adanya herbisida. Tidak dapat dikesampingkan
bahwa fosfolipase D mengkatalisis penguraian PC menjadi kolin dan PA.
Kardiolipin adalah kelas lain dari fosfolipid, tetapi ini jarang dipelajari
pada jamur berfilamen. Dalam penelitian ini, dua spesies kardiolipin
diidentifikasi dalam jamur yang diperiksa: CL 72:8 (diperkirakan
mengandung empat kelompok asil lemak 18:2) dan CL 72:7 (mengandung
tiga asil lemak 18:2 dan satu asam lemak 18:1). kelompok). Hasil serupa
diperoleh dalam studi tentangUstilago maydis(Lambie et al., 2017).
Perubahan kardiolipin, dengan jumlah CL 72:7 yang lebih tinggi dan tingkat
CL 72:8 yang lebih kecil, yang diamati dalam penelitian ini dapat dikaitkan
dengan penurunan rasio asam lemak 18:2 versus 18:1 dalam sampel yang
diberi herbisida. . Karena kardiolipin membentuk komponen membran
mitokondria bagian dalam, modifikasi di atas mungkin dapat memengaruhi
metabolisme energi sel (Vähäheikkilä et al., 2018).
Triasilgliserol adalah molekul penyimpanan asam lemak dalam jamur (Pan et
al., 2018). Hasil yang diperoleh untukT.harzianumlipid mengungkapkan bahwa
dengan adanya 2,4-D fraksi TAG kurang diperkaya dengan asam lemak tak jenuh
ganda. Pengamatan serupa juga telah dilakukan dalam penelitian kami
sebelumnya untukU. isabellina(Bernat et al., 2018b).
Sphingolipids adalah komponen integral dari membran sel jamur (
Heung et al., 2006). Di dalamT.harzianumsel, tingkat ceramide meningkat di
hadapan herbisida. Ini sesuai dengan beberapa penelitian yang
menunjukkan bahwa ceramide sangat penting untuk memediasi banyak
respons stres.Wells dkk. (1998)menunjukkan bahwa strain yang kekurangan
sphingolipidS.cerevisiaetidak mampu menahan sengatan panas. Selain itu,
fungsi sterol dan sphingolipid dalam sel eukariotik berkorelasi (Gulati et al.,
2010). Ergosterol bertanggung jawab atas struktur, fungsi, dan fluiditas
membran, dan tingkat yang tepat sangat penting untuk ketahanan terhadap
berbagai kondisi stres (Suchodolski et al., 2019). Pada penelitian ini,
penurunan sterol ditemukan pada miselium dari
T.harzianumdikultur dengan herbisida dibandingkan dengan sel kontrol.
Oleh karena itu, tidak dapat dikesampingkan bahwa penurunan tingkat
ergosterol yang diamati pada kehadiran 2,4-D mungkin telah dikompensasi
oleh peningkatan aktivitas sintase ceramide.
Modifikasi pada membran sel juga dapat dikaitkan dengan
permeabilitasnya (Risbo et al., 1997). Hasil penelitian kami sebelumnya pada
U. isabellina(Bernat et al., 2018b) menunjukkan bahwa 2,4-D meningkatkan
permeabilitas membran dan menurunkan fluiditas membran. Demikian
pula, dalam penelitian ini, permeabilitas membran ditemukan lebih tinggi
padaTrichodermasampel dibudidayakan dengan adanya herbisida.
Mekanisme aksi toksik 2,4-D terhadap gulma dapat dikaitkan
dengan pembentukan ROS dan peroksidasi lipid. Pada miselium jamur
yang diperiksa dengan 2,4-D, induksi stres oksidatif dikonfirmasi oleh
tingkat TBARS yang lebih tinggi, jumlah H yang lebih tinggi2HAI2dan
−
kehadiran O2 , NO•, yang jumlahnya di
kontrolnya jauh lebih rendah atau tidak sama sekali. Diketahui bahwa respon
terhadap stres oksidatif disebabkan oleh terganggunya keseimbangan produk
dan metabolit ROS (Tudzyński et al., 2012).
Selain itu, peningkatan kadar oksilipin dan turunan hidroksil dari
asam linoleat—9-HODE dan 13-HODE—yang dianggap sebagai
penanda peroksidasi lipid (Spiteller dan Spiteller, 1997)
8
Ekotoksikologi dan Keamanan Lingkungan 194 (2020) 110383
menegaskan bahwa 2,4-D menginduksi stres oksidatif padaT.harzianum.
Trichodermajamur menghasilkan banyak metabolit ekstraseluler,
yang karenanya mikroorganisme ini mempengaruhi lingkungan
sekitarnya (Sivasithamparam dan Ghisalberti, 1998;Ghisalberti dan
Sivasithamparam, 1991). Oleh karena itu, kami meneliti bagaimana
kehadiran herbisida memengaruhi sintesis senyawa ekstraseluler
terpilih yang diproduksi oleh jamur. Menggunakan teknik LC-MS/MS,
kami menentukan adanya asam harzianic dan t22-azaphilone. Kedua
senyawa tersebut sebelumnya telah diisolasi dari yang berbeda
T.harzianum galur (Vinale et al., 2006,2008,Braun et al., 2018) dan
ditemukan menunjukkan aktivitas antibiotik in vitro terhadapR.solani,
Ultima Pythium, atau Sclerotinia sclerotiorum. Selain itu, senyawa ini
terbukti menunjukkan efek pemacu pertumbuhan pada tanaman.
Dalam penelitian ini, penurunan kuantitasnya diamati pada kultur yang
diperlakukan dengan herbisida, dan 2,4-D ditemukan berdampak
negatif pada biosintesisnya. Keluarga besar senyawa lain yang
diproduksi olehTrichoderma–peptaibols—juga ditemukan
menunjukkan aktivitas antibiotik (Hermosa et al., 2014). Mereka
memiliki struktur oligopeptida linier dari 12-22 asam amino, kaya akan
alfa-aminoisobutirat, dan mengandung gugus asetil pada ujung-N dan
gugus alkohol amino pada ujung-C (Naher et al., 2014). Menggunakan
teknik MALDI-TOF/TOF, peptaibol asam amino 14 terdeteksi pada strain
yang diperiksa. Kehadiran senyawa serupa dilaporkan oleh (Rebuffat et
al. (1995). Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa sintesis peptaibol
dihambat oleh herbisida pada fase eksponensial pertumbuhan,
sedangkan pada fase stasioner penghambatan kurang terlihat.
Dalam analisis proteomik, profil protein kontrol dan kultur yang diberi
perlakuan pestisida dibandingkan dan beberapa protein diidentifikasi hanya
dalam sampel yang diberi perlakuan 2,4-D. Diantaranya, PLB hanya
ditemukan pada kultur yang diberi perlakuan herbisida pada setiap titik
waktu. Telah dilaporkan bahwa protein PLB menghidrolisis ikatan asil ester
dalam fosfolipid dan lisofosfolipid dan bertindak sebagai faktor virulensi
penting dalamkandida albikandan jamur patogen lainnya (Kohler et al., 2006
). Protein lain yang diamati dalam kultur yang diberi herbisida adalah cerato-
platanin, yang bertindak sebagai elisitor tumbuhan alami.Bacelli, 2015).
Selama analisis proteom, ditemukan bahwa herbisida menghambat
produksi beberapa protein seperti 5′-nukleotida, fosfoesterase mirip
kalsineurin, dan metallofosfatase. Siklik nukleotida fosfodiesterase
melakukan dua fungsi — ia bertindak sebagai molekul pembawa pesan
dalam represi katabolik dan memodulasi sifat dinding sel (Matange et
al., 2015). Dalam penelitian ini, protein ekstraseluler ini tidak ada dalam
sampel yang diuji pada fase pertumbuhan eksponensial. Modul
Laminin G, yang memainkan peran penting dalam menempelkan
reseptor ke sel di lingkungan ekstraseluler, terdapat pada kedua
sampel, yang menunjukkan bahwa tidak semua mekanisme diblokir
oleh herbisida.
Asam fosfatase bertanggung jawab untuk mineralisasi fosfor
organik. Ketika kandungan fosfatase terlarut rendah, sekresi enzim ini
meningkat, dan ketika kandungannya tinggi, sekresi ditekan. Selama
fase pertumbuhan eksponensial, asam fosfatase hanya ditemukan
pada sampel kontrol. Beberapa peneliti telah menyoroti bahwa
penambahan beberapa bahan kimia dapat berdampak negatif pada
produksi enzim ini (Nahas, 2015). Misalnya, sebuah penelitian
mengungkapkan bahwa keberadaan ion Ni (II) dalam medium di mana
Rhizopus delemardikulturkan menyebabkan penurunan aktivitas enzim
(Acikel dan Ersan, 2010).
Di sisi lain, semua sampel yang diperiksa ditemukan mengandung
protease aspartil. Enzim ini terlibat dalam aktivasi molekul sinyal dan
ditemukan mengaktifkan zymogen seperti alkaline phosphatase pada
jamur.Tacco et al., 2009). Selain itu, protease yang diproduksi oleh
tumbuhan dan mikroorganisme mendukung komunikasi dan ekspresi
sinyal (Li et al., 2016).
5. Kesimpulan
Studi ini menunjukkan bahwa 2,4-D secara signifikan mengganggu
J.Mironenka, dkk.
sintesis lipid dan metabolit ekstraselulerT.harzianum. Meskipun spesies
ini telah dipelajari secara luas, sepengetahuan kami, penelitian ini
adalah yang pertama melaporkan efek 2,4-D pada aktivitas jamur ini.
Data yang diperoleh mengungkapkan bahwa keberadaan 2,4-D dalam
kultur jamur menginduksi stres oksidatif termasuk peningkatan
aktivitas enzim LOX, mengganggu produksi metabolit ekstraseluler,
dan meningkatkan permeabilitas membran sel jamur.
Dengan demikian, tidak dapat dikesampingkan bahwa pembentukan ROS
dalam sel jamur berkorelasi dengan peningkatan aktivitas fosfolipase D, yang
menyebabkan peningkatan konsentrasi PA dan penurunan PC. Kehadiran
herbisida juga dapat menghambat sintesis ergosterol dan di sisi lain mengaktifkan
sintase ceramide. Namun, untuk pemahaman yang tepat tentang perubahan dan
aktivitas enzim yang terjadi pada sel jamur yang diobati dengan 2,4-D, lebih
banyak studi genetika dan proteomik harus dilakukan.
Data yang disajikan mungkin memiliki nilai yang signifikan dalam
sebagianpemahaman tentang proses ini dan mempromosikan penerapan
T.harzianumdalam tanah dengan adanya pestisida ini.
Pernyataan kontribusi kepengarangan CRedit
Julia Mironenka:Konseptualisasi, Investigasi, Metodologi,
Penulisan - review & editing.Sylwia Różalska:Investigasi, Metodologi.
Adrian Soboń:Investigasi, Metodologi.
Przemysław Bernat:Investigasi, Metodologi, Akuisisi pendanaan,
Penulisan - review & editing.
Deklarasi kepentingan yang bersaing
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki kepentingan
keuangan yang bersaing atau hubungan pribadi yang dapat mempengaruhi
pekerjaan yang dilaporkan dalam makalah ini.
Terima kasih
Studi ini didukung oleh National Science Centre, Polandia (Nomor
Proyek 2015/19/B/NZ9/00167).
Lampiran A. Data tambahan
Data tambahan untuk artikel ini dapat ditemukan online dihttps://
doi.org/10.1016/j.ecoenv.2020.110383.
Referensi
Açikel, Ü., Ersan, M., 2010. Produksi asam fosfatase olehRhizopus delemar: sebuah peran
berperan dalam proses bioakumulasi Ni II. J. Hazard Mater. 184 (1–3), 632–639.
https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2010.08.083.
Bacelli, I., 2015. Protein keluarga cerato-platanin: satu fungsi untuk banyak biologis
peran. Depan. Tanaman Sci. 7, 1–4.https://doi.org/10.3389/fpls.2014.00769.
Bernat, P., Nykiel-Szymańska, J., Stolarek, P., Słaba, M., Szewczyk, R., Różalska, S.,
2018a. Stres oksidatif yang diinduksi 2, 4-dichlorophenoxyaceticacid: metabolisme dan
modifikasi membran padaUmbelopsis isabellina, pengurai herbisida. PloS Satu 13 (6), 1–18.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0199677.
Bernat, P., Nykiel-Szymańska, J., Gajewska, E., Różalska, S., Stolarek, P., Dackowa, J.,
Słaba, M., 2018b.Trichoderma harzianumberkurangnya stres oksidatif yang disebabkan oleh
asam 2,4-diklorofenoksiasetat (2,4-D) dalam gandum, dengan wawasan dari lipidomik. J.
Tumbuhan Physiol. 229, 158–163.https://doi.org/10.1016/j.jplph.2018.07.010.
Bernat, P., Gajewska, E., Szewczyk, R., Słaba, M., Długoński, J., 2014. Tributyltin (TBT)
menginduksi stres oksidatif dan memodifikasi profil lipid pada jamur berfilamen
Cunninghamella elegans. Mengepung. Sains. Polusi. Res. 21 (6), 4228–4235.https://doi.org/
10.1007/s11356-013-2375-5.
Bernat, P., Szewczyk, R., Krupiński, M., Długoński, J., 2013. Degradasi butiltin oleh
Cunninghamella elegansDanCochliobolus lunatusbudaya bersama. J. Hazard Mater.
246–247, 277–282.https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2012.12.034. Braun, H., Woitsch,
L., Hetzer, B., Geisen, R., Zange, B., Schmidr-Heydt, M., 2018.
Trichoderma harzianum: penghambatan jamur penghasil mikotoksin dan biosintesis toksin.
Int. J. Makanan Mikrobiol. 280, 10–16.https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro. 2018.04.021.
Contreras-Cornejo, HA, Macías-Rodríguez, L., del-Val, E., Larsen, J., 2016. Ekologi
fungsi dariTrichoderma spp. dan metabolit sekundernya di rizosfer: interaksi
dengan tanaman. Mikrobiol FEM. Ekol. 92 (4).https://doi.org/10.1093/femsec/
fiw036.
9
Ekotoksikologi dan Keamanan Lingkungan 194 (2020) 110383
Darwish, E., Testerink, C., Khalil, M., El-Shihy, O., Munnik, T., 2009. Tanda fosfolipid
respon naling pada daun nasi yang diberi garam. Fisiol Sel Tumbuhan. 50 (5), 986–997.
https://doi.org/10.1093/pcp/pcp051.
Gajewska, E., Bernat, P., Długoński, J., Skłodowska, M., 2012. Pengaruh nikel pada mem-
integritas bran, peroksidasi lipid dan komposisi asam lemak pada bibit gandum.
J.Agron. Tanaman Sci. 198 (4), 286–294.https://doi.org/10.1111/j.1439-037X.2012.
00514.x.
Garderer, R., Bonazza, K., Seidl-Seiboth, V., 2014. Cerato-platanins: fa- protein jamur
mily dengan properti menarik dan potensi aplikasi. Aplikasi Miekrobiol. Bioteknologi.
98, 4795–4803.https://doi.org/10.1007/s00253-014-5690-y. Ghannoum, MA, 2000.
Potensi peran fosfolipase dalam virulensi dan patogen jamur
asal. Klinik. Mikrobiol. Wahyu 13 (1), 122–143.https://doi.org/10.1128/cmr.13.1.
122-143.2000.
Ghisalberti, EL, Sivasithamparam, K., 1991. Review antibiotik antijamur yang dihasilkan
olehTrichoderma spp. Bio Tanah. Biokimia. 23 (11), 10011–11023.https://doi.org/10.
1016/0038-0717(91)90036-J.
Gooday, GW, 1995. Membran sel. Di dalam: Gow, NAR, Gadd, GM (Eds.), The Growing
Jamur. Chapman and Hall, London, Inggris Raya, hlm. 63–74.
Gryz, E., Perlińska-Lenart, U., Gawarecka, K., Jozwiak, A., Piłsyk, S., Lipko, A., Jemioła-
Rzemińska, M., Bernat, P., Muszewsla, A., Steczkiewicz, K., Ginalski, K., Dlugoński, J.,
Strzałka, K., Swiezewska, E., Kruszewska, JS, 2019. Dolichol poli-jenuh dari jamur
berfilamen memodulasi aktivitas glikosiltransferase yang bergantung pada dolichol
dan sifat fisik membran. Int. J.Mol. Sains. 20 (12), 3043.https://doi.org/10. 3390/
ijms20123043.
Gulati, S., Liu, Y., Munkacsi, AB, Wilcox, L., Sturley, SL, 2010. Sterol dan sphingoli-
pids: duo dinamis atau partner in crime? Prog. Res Lipid. 49 (4), 353–365.https://doi.
org/10.1016/j.plipres.2010.03.003.
Hermosa, R., Cardoza, RE, Rubio, MB, Gutierrez, S., Monte, E., 2014. Mekanisme sekunder
tabolisme dan metabolit antimikroba dariTrichoderma. Bioteknologi dan Biologi
Trichoderma. Elsevier BV, Oxford, UK, hlm. 125–137.https://doi.org/10.1016/B978-
0-444-59576-8.00010-2.
Heung, LJ, Luberto, C., Del Poeta, M., 2006. Peran sphingolipid dalam patogen mikroba
asal. Menulari. Imun. 74 (1), 28–39.https://doi.org/10.1128/IAI.74.1.28-39.2006. Itoh,
K., Kinoshita, M., Morishita, S., Chida, M., Suyama, K., 2013. Penokohan
Asam 2,4-diklorofenoksiasetat dan jamur pendegradasi asam 2,4,5-
triklorofenoksiasetat di tanah Vietnam. Mikrobiol FEM. Ekol. 84 (1), 124–132.https://
doi.org/10. 1111/1574-6941.12043.
Kim, MK, Oh, SJ, Lee, B.-G., Song, HK, 2016. Dasar struktural untuk spesifisitas ganda
ragi N-terminal amidase di jalur aturan N-end. Proses Natl. Acad. Sains. Satuan.
Serikat Am. 113 (44), 12438–12443.https://doi.org/10.1073/pnas.1612620113.
Kohler, GA, Brenot, A., Haas-Stapleton, E., Agabian, N., Deva, R., Nigam, S., 2006.
Fosfolipase A2dan fosfolipase B aktif pada jamur. Biochim. Biofisika. UU 1761 (11),
1391–1399.https://doi.org/10.1016/j.bbalip.2006.09.011.
Lambie, SC, Kretschmer, M., Croll, D., Haslam, TM, Kunst, L., Klose, J., Kronstad, JW,
2017. Putative phospholipase Lip2 melawan kerusakan oksidatif dan mempengaruhi
virulensiUstilago maydis. Mol. Patol Tumbuhan. 18 (2), 210–221.https://doi.org/
10.1111/mpp.12391.
Lee, S., Yap, M., Behringer, G., Hung, R., Benner, JW, 2016. Senyawa organik yang mudah menguap
dipancarkan olehTrichodermaspesies memediasi pertumbuhan tanaman. Jamur. Biol. Bioteknologi. 3
(7), 1–14.https://doi.org/10.1186/s40694-016-0025-7.
Li, MF, Li, GH, Zhang, KQ, 2019. Metabolisme non-volatil dariTrichodermaspp.
Metabolit 9 (3), 58.https://doi.org/10.3390/metabo9030058.
Li, Y., Kabbage, M., Liu, W., Dickman, MB, 2016. Pembelahan yang dimediasi protease aspartyl
BAG6 diperlukan untuk ketahanan autophagy dan jamur pada tanaman. Sel Tumbuhan
28, 233–247.https://doi.org/10.1105/tpc.15.00626.
Manganiello, G., Sacco, A., Ercolano, MR, Vinale, F., Lanzuise, S., Pascale, A.,
Napolitano, M., Lombardi, N., Lorito, M., Woo, SL, 2018. Modulasi respons tomat
terhadapRhizoctonia solaniolehTrichoderma harzianumdan asam harzianic metabolit
sekundernya. Depan. Mikrobiol. 9, 1–19.https://doi.org/10.3389/fmicb.2018. 01966.
Matange, N., Podobnik, M., Visweswariah, SS, 2015. Metalofosfoesterase: struktur
kesetiaan tural dengan pergaulan bebas fungsional. Biokimia. J.467 (2), 201–216.https://doi.
org/10.1042/BJ20150028.
Nahas, E., 2015. Kontrol ekspresi asam fosfatase dariAspergillus nigeroleh tanah
karakteristik. Braz. Lengkungan. Biol. Technol. 58 (5), 658–666.https://doi.org/10.1590/
S1516-89132015050485.
Naher, L., Yusuf, UK, Ismail, A., Hossain, K., 2014.Trichoderma spp.: agen biokontrol
untuk pengelolaan berkelanjutan penyakit tanaman. Pakistan J.Bot. 46 (4), 1489–
1493. Nykiel-Szymańska, J., Różalska, S., Bernat, P., Słaba, M., 2019. Penilaian oksidatif
stres dan perubahan fosfolipid dalam penurunan kloroasetanilida.Trichoderma spp.
Ekotoksikol. Mengepung. Aman. 184.https://doi.org/10.1016/j.ecoenv.2019.109629. Nykiel-
Szymańska, J., Stolarek, P., Bernat, P., 2018. Penghapusan dan detoksifikasi 2,4-
D olehUmbelopsis isabellinadengan keterlibatan sitokrom P450. Mengepung. Sains. Polusi.
Res. 25, 2738–2743.
Onthong, J., Gimsanguan, S., Pengnoo, A., Nilnond, C., Osaki, M., 2007. Pengaruh pH dan
beberapa kation pada aktivitas asam fosfatase yang disekresikanUstilago sp. diisolasi dari
tanah sulfat masam. J.Sci. Technol. 29 (2), 275–286.
Ortega-Garcia, JG, Montes-Belmont, R., Rodriguez-Monroy, M., Ramirez-Trujillo, JA,
Suarez-Rodriguez, R., Sepulveda-Jimenez, G., 2015. PengaruhTrichoderma asperellum
aplikasi dan pemupukan mineral terhadap pemacu pertumbuhan dan kandungan senyawa
fenolik dan flavonoid pada bawang merah. Sains. Hortik. 195, 8–16.https://doi.org/10. 1016/
j.scienta.2015.08.027.
Pan, J., Hu, C., Yu, JH, 2018. Biosintesis lipid sebagai target antijamur. J. Jamur (Basel).
20, 1–13.https://doi.org/10.3390/jof4020050.
Paraszkiewicz, K., Kuśmierska, A., Bernat, P., Chojnial Gronek, J., Płaza, GA, 2017.
Identifikasi struktural biosurfaktan lipopeptida yang diproduksi olehBacillus subtilis
J.Mironenka, dkk.
strain tumbuh pada media yang diperoleh dari sumber daya alam terbarukan. J.Lingkungan.
Kelola. 209, 65–70.https://doi.org/10.1016/j.jenvman.2017.12.033.
Pazmiño, DM, Rodríguez-Serrano, M., Romero-Puertas, MC, Archilla-Ruiz, A., Del Río,
LA, Sandalio, LM, 2011. Respon diferensial daun muda dan dewasa terhadap asam herbisida
2,4-diklorofenoksiasetat pada tanaman kacang polong: peran spesies oksigen reaktif.
Lingkungan Sel Tumbuhan. 34 (11), 1874–1889.https://doi.org/10.1111/j.1365-3040.2011.
02383.x.
Poveda, J., Hermosa, R., Monte, E., Nicolas, C., 2019.Trichoderma harzianummendukung
akses jamur mikoriza arbuskular ke non-inangBrassicaceaeakar dan meningkatkan
produktivitas tanaman. Sains. Rep.9, 1–11.https://doi.org/10.1038/s41598-019-48269-
z. Pozo, M., Baek, J.-M., Garcia, JM, Kenerley, CM, 2004. Analisis fungsional tvsp1, a
gen penyandi protease serin dalam agen biokontrolTrichoderma viren. Gen Jamur.
Biol. 41 (3), 336–348.https://doi.org/10.1016/j.fgb.2003.11.002. Ramos de Andrade, F.,
Alves de Toledo, R., Manoel Pedro Vaz, C., 2014. Elektroanalitik
metodologi untuk penentuan langsung asam 2,4-diklorofenoksiasetat dalam sampel
tanah menggunakan elektroda grafit-poliuretan. Antar. J. Elektrokimia. 1–9.https://
doi.org/10.1155/2014/308926.2014.
Rebuffat, S., Goulad, C., Bodo, B., 1995. Peptida antibiotik dariTrichoderma harzianum:
harzianins HC, peptaibol 14-residu kaya prolin. J.Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 1849–
1855.https://doi.org/10.1039/P19950001849.
Risbo, J., Jorgensen, K., Sperotto, M., Mouritsen, O., 1997. Fase perilaku dan perme-
sifat kemampuan lapisan ganda fosfolipid yang mengandung penambah permeabilitas
fosfolipid rantai pendek. Biochim. Biofisika. UU 1329 (1), 85–96.https://doi.org/10. 1016/
S0005-2736(97)00091-6.
Saba, H., Vibhash, D., Manisha, M., Prashant, KS, Farhan, H., Tauseef, A., 2012.
Trichoderma-stimulator pertumbuhan tanaman dan agen biokontrol yang menjanjikan.
Mycosphere 3, 524–531.https://doi.org/10.5943/mycosphere/3/4/14.
Salem, MA, Jüppner, J., Bajdzienko, K., Giavalisco, P., 2016. Protokol: cepat, komprehensif
metode ekstraksi satu langkah hensive dan direproduksi untuk persiapan cepat
metabolit polar dan semi-polar, lipid, protein, pati dan polimer dinding sel dari
sampel tunggal. Metode Tanam 12 (45), 1–15.https://doi.org/10.1186/s13007-016-
0146-2.
Siewiera, P., Różalska, S., Bernat, P., 2017. Perlindungan organ yang dimediasi estrogen
strain notin-degrading Metarhizium robertsii melawan stres oksidatif yang dipromosikan
oleh monobutyltin. Kemosfer 185, 96–104.https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.
2017.06.130.
Sivasithamparam, K., Ghisalberti, EL, 1998. Metabolisme sekunder padaTrichodermaDan
gliocladium. Di dalam:TrichodermaDanGliocladium. GE Harman dan CP Kubicek Taylor dan
Francis, London, hlm. 139–192.
Słaba, M., Bernat, P., Nykiel-Szymańska, J., Długoński, J., 2013. Studi banding tentang
modifikasi fosfolipid yang diinduksi logam pada jamur berfilamen toleran logam
beratPaecilomyces marquandiidan implikasi untuk integritas membran jamur. Acta
Biochem. Pol. 60 (4), 695–700.
Soboń, A., Szewczyk, R., Długoński, J., Różalska, S., 2019. Studi proteomik tentang
Cunninghamella echinulatapemulihan selama paparan tributyltin. Mengepung. Sains.
Polusi. Res. Int. 26 (31), 32545–32558.https://doi.org/10.1007/s11356-019- 06416-z.
Spiteller, P., Spiteller, G., 1997. 9-Hydroxy-10,12-octadecadienoic acid (9-HODE) dan 13-
hidroksi-9,11-octadecadienoic acid (13-HODE): penanda yang sangat baik untuk
peroksidasi lipid. kimia Fisika. Lipid 89 (2), 131–139.
Stolarek, P., Różalska, S., Bernat, P., 2019. Adaptasi lipidimik dariMetarhizium
robertsiiregangan sebagai respons terhadap keberadaan senyawa butiltin. Biochim.
Biofisika. Acta Biomembran. 1861 (1), 316–326.https://doi.org/10.1016/j.bbamem.2018.06.
007.
10
Ekotoksikologi dan Keamanan Lingkungan 194 (2020) 110383
Suchodolski, J., Muraszko, J., Bernat, P., Krasowska, A., 2019. Peran penting untuk ergo-
terol dalam komposisi membran plasma, lokalisasi, dan aktivitas Cdr1p dan H
+ - ATPase dikandida albikan. Mikroorganisme 22, 1–17.https://doi.org/10.3390/
mikroorganisme7100378.
Szewczyk, R., Soboń, A., Różalska, S., Dzitko, K., Waidelich, D., Długoński, J., 2014.
Ekspresi proteom intraseluler selama biodegradasi 4-n-nonilfenol oleh jamur
berfilamenMetarhizium robertsii. Int. Biodeterior. Biodegradasi. 93, 44–53. https://
doi.org/10.1016/j.ibiod.2014.04.026.
Tacco, B., Parente, J., Barbosa, M., Bao, S., Goes, T., Peeira, M., Soares, C., 2009.
Karakterisasi protease aspartil yang disekresikan dari patogen jamur Paracoccidioides
brasiliensis. Kedokteran Mycol. 47 (8), 845–854.https://doi.org/10.3109/ 13693780802695512.
Tudzyński, P., Heller, J., Siegmund, U., 2012. Generasi spesies oksigen reaktif di
perkembangan dan patogenesis jamur. Kur. Opin. Mikrobiol. 15 (6), 653–659.
https://doi.org/10.1016/j.mib.2012.10.002.
Vähäheikkilä, M., Peltomaa, T., Róg, T., Vazdar, M., Poyry, S., Vattulainen, I., 2018. Bagaimana
peroksidasi kardiolipin mengubah sifat-sifat membran mitokondria bagian dalam?
kimia Fisika. Lipid 214, 15–23.https://doi.org/10.1016/j.chemphyslip.2018.04. 005.
Viegas, CA, Cabral, MG, Teixeira, MC, Neumann, G., Heipieper, HJ, Sa-Correia, I.,
2005. Adaptasi ragi terhadap asam 2,4-diklorofenoksiasetat melibatkan peningkatan derajat
kejenuhan asam lemak membran dan penurunan transkripsi OLE1. Biokimia. Biofisika. Res.
Komunal. 330 (1), 271–278.https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2005.02. 158.
Vinale, F., Sivasithamparam, K., Ghisalberti, EL, Woo, SL, Nigro, M., Marra, R.,
Lombardi, N., Pascale, A., Ruocco, M., Lanzuise, S., Manganiello, G., Lorito, M., 2014.
Trichodermametabolit sekunder aktif pada tumbuhan dan jamur patogen. J.Mycol. 8,
127–139.https://doi.org/10.2174/1874437001408010127.
Vinale, F., Sivasithamparam, K., Ghisalberti, EI, Marra, R., Barbetti, MJ, Li, H., Woo,
SI, Lorito, M., 2008. Peran novel untukTrichodermametabolit sekunder dalam
interaksinya dengan tanaman. Fisik. Mol. Patol Tumbuhan. 72 (1–3), 80–86.https://
doi.org/ 10.1016/j.pmpp.2008.05.005.
Vinale, F., Marra, R., Scala, F., Ghisalberti, EL, Lorito, M., Sivasithamparam, K., 2006.
Metabolit sekunder utama diproduksi oleh dua komersialTrichodermastrain aktif
terhadap fitopatogen yang berbeda. Lett. Aplikasi Mikrobiol. 43 (2), 143–148.https://
doi. org/10.1111/j.1472-765X.2006.01939.x.
Viterbo, A., Wiest, A., Brotman, Y., Chet, I., Kenerley, C., 2007. Peptaibol 18mer
dariTrichoderma virenmenimbulkan respon pertahanan tanaman. Mol. Patol
Tumbuhan. 8 (6), 737–746.https://doi.org/10.1111/j.1364-3703.2007.00430.x.
Vroumsia, T., Steiman, R., Seigle-Murandi, F., Benoit-Guyod, JL, 2005. Groupe pour
l'Etude du Devenir des Xénobiotiques dans l'Environment(GEDEXE). Biokonversi
jamur asam 2,4-diklorofenoksiasetat (2,4-D) dan 2,4-diklorofenol (2,4- DCP).
Kemosfer 60 (10), 1471–1480.https://doi.org/10.1016/j.chemosphere. 2004.11.102.
Wells, GB, Dickson, RC, Lester, RL, 1998. Ketinggian ceramide yang diinduksi panas di
Saccharomyces cerevisiaemelalui sintesis de novo. J.Biol. kimia 27, 7235–7243.
https://doi.org/10.1074/jbc.273.13.7235.
Wu, Q., Ni, M., Wang, Q., Li, Q., Yu, M., Tang, J., 2018. Omics untuk memahami
mekanisme toleranTrichoderma asperellumTJ01 menjadi pestisida organofosfor
dichlorvos. Genom BMC. 19 (596), 1–12.https://doi.org/10.1186/s12864-018-4960-y.
Zeilinger, S., Gruber, S., Bansal, R., Mukherjee, PK, 2016. Metabolisme sekunder pada
Trichoderma-kimia memenuhi genomik. Bio jamur. Wahyu 30 (2), 74–90.https://doi.
org/10.1016/j.fbr.2016.05.001.