Hidup 2015, 5, 269-293; doi: 10,3390 / life5010269

kehidupan
ISSN 2075-1729
www.mdpi.com/journal/life
Ulasan
Terpenoid dan Biosintesis mereka di Cyanobacteria
Bagmi Pattanaik dan Pia Lindberg *
Departemen Kimia-angstrom, Uppsala University, Box 523, SE-751 20 Uppsala,
Swedia;
E-Mail: bagmi.pattanaik@kemi.uu.se
* Penulis untuk siapa korespondensi harus ditangani; E-Mail: pi
a.lindberg@kemi.uu.se;
Tel .: + 46-18-471-6587.
Editor Akademik: John C. M eeks dan Robert Haselkorn
Menerima: 20 Desember 2014 / Diterima: 14 Januari 2015 / Diterbitkan: 21 Januari
2015

Abstrak: Terpenoid, atau isoprenoidnya, adalah keluarga dari senyawa dengan

struktur yang besar keragaman yang penting bagi semua organisme hidup. Di
cyanobacteria, mereka disintesis dari jalur metilerithritol-fosfat (MEP),
menggunakan gliseraldehida 3-fosfat dan piruvat yang dihasilkan oleh fotosintesis
sebagai substrat. Produk-produk dari jalur MEP adalah isomer lima karbon senyawa
isopentenyl difosfat dan dimethylallyl difosfat, yang pada gilirannya membentuk
blok bangunan dasar untuk pembentukan semua terpenoid. Banyak senyawa
terpenoid memiliki sifat yang berguna dan menarik di bidang obat-obatan dan gizi,
dan bahkan biofuel berpotensi sebagai masa depan. jalur MEP, fungsi dan regulasi,
dan berikutnya dari terpenoid belum sepenuhnya dijelaskan di cyanobacteria,
meskipun relevansi aplikasi bioteknologi. Di dalam review, kami merangkum
pengetahuan tentang biosintesis cyanobacterial terpenoid, baik mengenai
metabolisme asli dan mengenai rekayasa metabolik cyanobacteria untuk produksi
heterolog dari terpenoid bukan aslinya.
Kata kunci: terpenoid; isoprenoidnya; cyanobacteria; MEP jalur; rekayasa genetika

1. Perkenalan
Terpenoid, atau isoprenoid, adalah keluarga besar senyawa termasuk karotenoid,
tokoferol, fitol, sterol dan hormon. Ada puluhan ribu senyawa terpenoid dikenal, dan
kemungkinan banyak lagi yang belum dijelaskan. Dalam semua organisme hidup,
terpenoid berperan dalam respirasi transportasi rantai elektron (ubiquinone dan
menaquinone) serta di dinding sel dan membrane biosintesis dan stabilitas
(bactoprenol, hopanoid pada bakteri dan sterol pada tanaman). Tanaman adalah
salah satu sumber utama keanekaragaman terpenoid. Terpenoid sangat penting
untuk pertumbuhan dan kelangsungan hidup fotosintesis organisme, karena mereka
memainkan peran penting dalam konversi cahaya menjadi energi kimia dan untuk
perakitan dan fungsi pusat reaksi fotosintesis (chlorophylls, bacteriochlorophylls,
rhodopsins dan karotenoid). Fungsi lain yang dikenal dari terpenoid tanaman
termasuk peran penting dalam respon atau di mekanisme pertahanan [1,2].
Dengan berbagai fungsi biologis, terpenoid memiliki aplikasi yang luas dalam
bidang farmasi, kosmetik, pewarna, desinfektan, wewangian, perasa dan
agrichemicals. Beberapa terpenoid juga telah digunakan sebagai obat untuk
memperoleh manfaat kesehatan manusia, seperti artemisinin digunakan sebagai
obat antimalaria [3]. Paclitaxel, dikenal sebagai taxol, merupakan agen anti-kanker
yang efektif [4]. Avicins [5] dan parthenolide [6] telah terbukti mengurangi
pertumbuhan sel tumor. Asam Betulinic ditemukan menunjukkan aktivitas anti-HIV-1
[7]. Karotenoid, seperti lycopene dan astaxanthin, yang menjadi fokus penelitian
manfaat potensi mereka untuk manusia dan pengobatan penyakit [8,9].
Meskipun keragaman mereka dalam struktur dan fungsi, semua terpenoid terbuat
dari lima karbon yang sama, isopentenyl diphosphate (IDP) dan dimethylallyl
diphoshate (DMADP). IDP dan DMADP pada gilirannya berasal dari dua jalur .
mevalonat (MEV) menggunakan jalur asetil-CoA sebagai substrat dan mengkonversi
ini dalam enam langkah, di mana mevalonate adalah salah satu perantara, untuk
IDP, yang dapat interconverted untuk DMADP oleh isomerase. jalur ini beroperasi
pada eukariota, archaea dan beberapa bakteri, dan telah lama dianggap sebagai
rute khusus untuk pembentukan terpenoid dalam semua organisme. Pada tahun
1993, paradigma dibalik penemuan ini sebuah alternatif rute untuk terpenoid
biosintesis di bacter, yang menggunakan piruvat dan gliseraldehida-3-fosfat sebagai
substrat untuk membentuk baik IDP dan DMADP [11,12]. Jalur baru sekarang sering
disebut sebagai MEP jalur, untuk metil menengah erythritol-4-fosfat. MEP jalur itu
kemudian ditemukan menjadi rute yang paling umum untuk informasi dari
terpenoid di Eubacteria serta yang digunakan dalam plastida tanaman dan alga
[13,14] secara paralel dengan MEV jalur sitosol.
Di cyanobacteria, hanya beberapa studi memiliki alamat d jalur MEP dan dasar
untuk terpenoid biosintesis. Ada, Namun, keragaman besar senyawa terpenoid
dihasilkan oleh cyanobacteria, terutama pigmen dengan fungsi yang berbeda dan
karakteristik tetapi juga senyawa lain dengan berbagai struktur dan fungsi. Dalam
ulasan ini, kami akan menjelaskan pengetahuan tentang biosintesis terpenoid di
cyanobacteria secara umum, sehingga menggambarkan jalur dikenal dan fungsi
untuk senyawa terpenoid tertentu, baik yang terjadi secara alami dan yang telah
dihasilkan heterologously di cyanobacteria.
2. Enzim spesifik Terlibat dalam Jalur MEP
MEP jalur, seperti yang dijelaskan untuk Escherichia coli [12], dimulai dengan
kondensasi gliseraldehida 3-fosfat (GAP) dan piruvat untuk membentuk 1-deoksi-D-
xylulose 5-fosfat (DXP). Pembentukan DXP adalah reaksi ireversibel dikatalisasi oleh
enzim 1-deoxy- D-xylulose 5-fosfat sintase (DXS) dengan pelepasan satu molekul
CO2 (Gambar 1). Keterlibatan DXS di jalur itu fungsional dianalisis untuk pertama
kalinya dalam E. coli [15] dan juga diteliti diciptakan di cyanobacterium
Synechococcus Hidup 2015, 5 271 leopoliensis SAUG 1402-1 [16]. Pada tumbuhan,
DXS memainkan peran utama dalam jalur regulasi keseluruhan [17].

Gambar 1. Usulan terpenoid bios ynthesis melalui methyler ythritol-4-fosfat (MEP)

jalur di cyanobacteria. Singkatan: Pyr: Piruvat; GAP: gliseraldehida 3-fosfat; DXP: 1-
deoxy- D-xylulose 5-fosfat; MEP: metilerithritol-4-fosfat; CDP-ME: 4- (cytidine 5'-
diphospho) -2-C-metil D-erythritol; CDP-MEP: 2-phospho-4- (cytidine 5'-diphospho)
-2- C-metil D-erythritol; MEcDP: 2- C-metil D-erythritol 2,4-cyclodiphosphate;
HMBDP: 4-hydroxy-3-methylbut-2-enyldiphosphate synthase; IDP: difosfat
isopentenyl; DMADP: dimethyl allyl difosfat; GDP: difosfat geranyl; FDP: farnesyl
difosfat; GGDP: geranylgeranyl difosfat; DXS: 1-deoxy- D-xylulose synthase 5-fosfat;
DXR: 1-deoksi-D-xylulose 5-fosfat reductoisomerase; MCT: 2- C-metil-D-erythritol 4-
fosfat cytidylyltransferase; CMK: 4- (cytidine 5'-diphospho) -2-C-metil D-erythritol
kinase; MDS: 2- C-metil D-erythritol 2,4-cyclodiphosphate synthase: HDS: 4-hydroxy-
3-methylbut-2-enil difosfat synthase; HDR: 4-hydroxy-3-methylbut-2-
enyldiphosphate reduktase; IDI: isopentenyl difosfat isomerase; PDB: geranyl
difosfat synthase; FDP: farnesyl di fosfat sintase; GGDP S: geranylgeranyl difosfat
synthase; TPS: terpene synthase; CP450: sitokrom P450 monooksigenase.

Enzim 1-deoxy- D-xylulose 5-fosfat reductoisomeras e (DXR) mengkatalisis reaksi

mana DXP berkurang untuk membentuk MEP antara kedua. Pembentukan MEP
berlangsung oleh penataan ulang intramolekuler dari kbone karbon bac dan
pengurangan NADPH-dependent dari Hidup 2015, 5272 menengah 2-C-metil-
erythrose 4-fosfat [18]. DXP adalah al sehingga ditemukan untuk terlibat dalam
tiamin dan sintesis pyridoxol pada bakteri dan Chlo tanaman roplasts [15,19,20].
The thir d antara dari jalur, 4- (cytidine 5'-diphospho) -2- C-metil D-erythritol (CDP-
ME) terbentuk dari MEP dalam CTP-dependent reaksi (cytidylation) dikatalisis oleh 2-
C-metil-D-erythritol 4-fosfat cytidylyltransferase (MCT). Gugus hidroksil di e posisi
C2 th CDP-ME adalah lebih terfosforilasi secara ATP-dependent oleh 4- (cytidine 5'-
diphospho) -2-C-metil D-erythritol kinase (CMK) ke bentuk 2-phospho-4- (cytidine 5'-
diphospho) -2- C-metil D-erythritol (CDP-MEP), th e keempat menengah. CDP-MEP
selanjutnya dikonversi menjadi 2- C-metil D-erythritol 2,4-cyclodipho sphate
(MEcDP), kelima menengah jalur, dalam reaksi dikatalisis oleh 2- C-metil D-erythritol
2,4-cyclodiphosphate synthase (MDS). Ini baru ditemukan bahwa MEcDP adalah
metabolit kunci dan memiliki peran penting dalam regulati pada satu jalur [21], dan
referensi di dalamnya). MEcDP dikurangi dengan 4-hydroxy-3-methylbut-2-enil
difosfat synthase (HDS) untuk membentuk 4-hydroxy-3-methylbut-2-
enyldiphosphate (HMBDP). Pada tumbuhan, langkah ini tergantung pada berkurang
ferredoxin [22], dan electron transfer dari ferredoxin ke HDS juga telah de
monstrated untuk enzim dari cyanobacterium yang Thermosynechococcus
elongatus BP-1 [23]. HMBDP diubah oleh HMBDP reduktase (HDR) menjadi
campuran IDP dan DMADP. Fungsi HDR dan pentingnya dalam jalur terpenoid
pertama kali dijelaskan dalam sebuah penelitian di cyanobacterium yang
Synechocystis sp. PCC 6803 (hereaft er disebut sebagai Synechocystis) [24]. Para
peneliti mengamati bahwa sel Synechocystis dengan mutasi pada gen lytB,
encoding HDR, tumbuh perlahan dengan menipisnya pigmen fotosintesis dan lisis
lambat dari sel, tetapi pertumbuhan budaya dapat dipulihkan oleh suplementasi
dengan isopentenol dan dimethylallyl alkohol, rekan-rekan alkohol
nonphosphorylated IDP dan DMADP masing-masing. Para penulis juga menyarankan
bahwa synthase IDP / DMADP bisa berpotensi mengatur konsentrasi in vivo dan
partisi dari ID P dan DMADP [24]. Ketersediaan dan isomerisasi baik IDP dan DMADP
adalah stringen tly dikendalikan oleh isopentenyl enzim kunci difosfat isomerase
(IDP isomerase / IDI) dalam proses isomerisasi reversibel. IDP isomerase adalah
diklasifikasikan dalam dua subfamilies: tipe I dan tipe II dengan karakteristik jelas
berbeda (untuk struktur detail, fitur, biosintesis dan enzyma aktivitas tic melihat
ulasan [25].
Biosintesis semua terpenoid dimulai dengan satu atau kedua C5 blok bangunan, IDP
dan DMADP [26] yang merupakan produk dari jalur MEP (Gambar 1). monomer ini
digabungkan enzimatik untuk menghasilkan polimer melalui reaksi berantai
perpanjangan. Dengan satu molekul dari masing-masing IDP dan DMADP, sintase
enzim geranyl difosfat (PDB) menghasilkan PDB, alilik 10-karbon senyawa difosfat.
PDB pada gilirannya berfungsi sebagai prekursor untuk pembentukan berbagai
monoterpenoid, dan dapat mengalami penambahan molekul lain dari IDP untuk
membentuk farnesyl difosfat (FDP, C15) melalui aksi FDP synthase (FDP). FDP
adalah rsor precu pusat untuk sterol, triterpenoid, seskuiterpenoid dan untuk
kelompok prenyl digunakan untuk dekorasi C15 terprenilasi protein. Selain dari
molekul lain IDP untuk FDP menghasilkan geranylg eranyl difosfat (GGDP, C20),
reaksi dikatalisis oleh enzim GGDP synthase (GGDPS). GGDP adalah titik cabang
utama untuk diterpenoid, lorophylls ch, karotenoid dan kelompok prenyl dari C20
terprenilasi protein. Dengan demikian, PDB, FDP, dan GGDP adalah titik awal untuk
sintesis berikutnya akhir terpenoid produk. penataan struktural dari kerangka
karbon terjadi melalui rantai perpanjangan, siklisasi, isomerisasi dan bercabang,
dengan melipat dari trate kapal selam dan perubahan dalam ikatan kimia, untuk
membentuk setiap terpenoid individu st ructure [27]. Struktur spesifik rpenoids te
ditemukan di sebuah organisme mendefinisikanperan fungsional mereka untuk
pertumbuhan dan perkembangan organisme, atau untuk peran ekologi penting
terkait untuk keberadaan mereka di natura l habitat [28,29]. Pembentukan
terpenoid ecific sp membutuhkan terpene Sintase (TPS) menggunakan DMADP,
GDP, FDP, atau GGDP sebagai substrat. Sebuah ulang persen review oleh Davies,
Jinkerson dan Posewitz [30] telah membahas pembentukan produk oleh TPS secara
rinci, and khususnya implikasi untuk pertumbuhan fotoautotropik. Sebagian TPS
mengkatalisis pembentukan karbokation intermediet dengan beberapa possi
penyusunan ulang ble dari tulang punggung karbon yang mengarah ke beberapa
produk dari substrat tunggal. Seringkali, terpenoid tertentu tidak dapat dibentuk
dalam satu langkah tunggal, dan modifikasi khusus untuk penyusunan ulang
struktur ar e biasanya diperlukan. Sebagian besar modifikasi ini di terpenoid
biosintesis yang performe d oleh kelas enzim heme yang mengandung disebut
sitokrom P450 monooxygenases (CP450) [31]. Beberapa CP450s dari tanaman dan
cyanobacteria telah diidentifikasi sebagai terlibat dalam biosintesis terpenoid [32-
34]. Gen, regulasi genetik, struktur enzim dan aktivitas enzim dalam jalur MEP telah
dijelaskan dalam tumbuhan tingkat tinggi, ganggang hijau, bakteri dan
cyanobacteria [10,17,35-37]. regulasi metabolism dari jalur MEP input, includi ng
karbon, ATP, dan kekuasaan mengurangi digambarkan dalam baru-baru ini
meninjau oleh Banerjee dan Sharkey [21]. Pada tumbuhan, MEP jalur terlokalisir ke
plastida [38]. Sebagai plastida tanaman berasal dari cyanobacteria (lihat [39]),
beberapa s gen dari jalur MEP adalah diyakini telah dibawa ke dalam sel eukariotik
oleh simbion cyanobacterial pada asal kloroplas [40].
3. Terpenoid Diproduksi di Cyanobacteria
Cyanobacteria merupakan salah satu kelompok tertua organisme di bumi, dengan
catatan fo SSIL dari organisme cyanobacterial-seperti peregangan kembali 3,3-
3500000000 tahun yang lalu [41]. cyanobacteria adalah prokariota fotoautotropik
Gram-negatif dan mampu melakukan fotosintesis oksigenik. Mereka adalah satu-
satunya kelompok organisme yang mampu menghasilkan oksigen, mengurangi
karbon dioksida dan nitrogen dalam kondisi aerobik, dan dengan demikian mereka
memainkan peran penting dalam nitrogen dan karbon siklus [42]. Disebabkan oleh
terjadinya mana-mana mereka dalam beragam ts Habita alami, cyanobacteria
mampu menghasilkan berbagai metabolit sekunder untuk beradaptasi dengan
kondisi l environmenta yang mungkin mereka hadapi. Terpenoid adalah Kelompok
utama dari metabolit sekunder di banyak organisme termasuk cyanobacteria. Gen
yang mengkode setiap enzim yang terlibat dalam jalur MEP dapat ditemukan di
lengkap genom urutan Synechocystis [43] (Tabel 1), dan juga dalam genom
sequencing dari lainnya cyanobacteria. Keberadaan jalur terpenoid biosintesis juga
dikonfirmasi di Synechocystis sp. PCC 6714 melalui Studi C-label [44], w engan hasil
yang menunjukkan bahwa terpenoid secara eksklusif dibentuk oleh MEP jalur dalam
organisme ini. Identifikasi semua gen yang diperlukan untuk jalur MEP di
cyanobacteria mengarah ke prediksi bahwa jalur bekerja mirip dengan yang di E.
coli. Namun, MEP jalur di organisme fotosintetik secara langsung terkait dengan
seluler ac tivity fotosintesis karena menggunakan piruvat dan glyceraldehyde3-
fosfat sebagai substrat, dan en ergy disediakan dalam bentuk NADPH, dikurangi
ferredoxin, CTP, dan ATP, yang semuanya Turunkan d dari fotosintesis. Telah terbukti
untuk cyanobacterium T. elongatus BP-1 bahwa pembentukan HMBDP dari MEcDP
dikatalisasi oleh GcpE (HDS, enzim Fe-S cluster yang mengandung) tergantung pada
mengurangi ferredoxi n untuk aktivitasnya [23]. Hal ini umumnya diharapkan bahwa
dalam terconversion dari IDP dan DMADP membutuhkan isomerase IDP untuk lebih
membangun semua terpenoid mungkin dari cture stru dasar C5 seperti yang
dibahas sebelumnya. Dalam Synechocystis genom tidak ada frame baca terbuka
sesuai dengan jenis tahu aku IDP isomerase, sebagai salah satu hadir dalam E. coli
[45]. Mencari isomerase alternatif lain dalam ketegangan ini, Poliquin et al. [46]
menemukan sll1556 gen yang menunjukkan kesamaan urutan ke tipe II IDP
isomerase (IDP / DMADP isomerase atau IDI-2) di Salmonella enterica [47]. Oleh
studi komplementasi dengan Salmonella enterica serovar Typhimurium ketegangan
RMC29 itu menegaskan bahwa ORF sll1556 mengkodekan jenis fungsional II IDP
isomerase [48] (Gambar 1). Af ter karakterisasi IDI-2 di Synechocystis, ditemukan
bahwa semua cyanobacteria, Proteobacteria dan gram positif bakteri sequencing
memiliki enzim ini bukan Jenis saya IDP isomerase [49]. Dalam additi pada, itu
menunjukkan bahwa inaktivasi sll1556 di Synechocystis mengakibatkan
pembentukan terpenoid terganggu in vitro dan in vivo, juga mempengaruhi
pertumbuhan di bawah cahaya tinggi kondisi [46,48,50]. Dalam serangkaian
penelitian, dilaporkan bahwa dalam ekstrak sel Synechocystis tumbuh di bawah
kondisi fotosintesis, pembentukan in vitro produk dari jalur ME P tidak dirangsang
oleh piruvat dan GAP, tetapi pasokan intermediet yang berasal dari siklus pentosa
fosfat(PPC) mengakibatkan aktivitas MEP jalur yang lebih tinggi [46,51]. Selain itu,
formidomycin, penghambat DXR, terpengaruh baik pertumbuhan phototrophic dari
Synechocystis, maupun sintesis terpenoid in vitro [51]. Hasil ini diambil untuk
menunjukkan bahwa cy anobacteria mungkin memanfaatkan zat antara PPC untuk
terpenoid biosintesis, bukan tergantung pada GAP dan piruvat sebagai substrat.
Namun, sebuah temuan terbaru menunjukkan bahwa sementara penambahan
berbagai senyawa PPC didukung in vitro terpenoid sintesis, senyawa PPC tidak
langsung berfungsi sebagai substrat. Dari hasil ini, penulis menyimpulkan bahwa in
vitro stimulasi oleh senyawa PPC adalah tidak langsung dan tidak terjadi melalui
MEP jalur [52]. Di cyanobacteria, alami terpenoid Fulf peran sakit yang sama
dengan yang di tanaman. Namun, jumlah terpenoid yang dapat diisolasi dari ts
rencana atau cyanobacteria biasanya rendah, dan ekstraksi senyawa energi
menuntut. Selain itu, karena kompleksitas struktural banyak terpenoid, sintesis
kimia biasanya sulit, dan mahal, jika mungkin [27]. Alternatif dan inovatif
Pendekatan untuk meningkatkan produksi terpenoid adalah mungkin melalui
metabolisme e ngineering dan sintetis biologi [53,54]. Dengan menerapkan teknik
ini, enzim dan jalur asli atau heterologously dinyatakan dapat dioptimalkan untuk
menghasilkan terpenoid yang berharga. Dalam dekade terakhir, sistem mikroba
telah menjadi focus Studi menggunakan manipulasi genetik dan optimizati pada
metabolisme mikroba untuk menghasilkan terpenoid untuk obat dan biofuel. jalur
tanaman yang diturunkan untuk biosintesis terpenoid telah diperkenalkan melalui
rekayasa genetika dalam sistem mikroba khususnya di model organisme bakteri E.
coli dan di ragi Saccharomyces cerevisiae [55-57] dan baru-baru ini dalam beberapa
cyanobacteria (dibahas di bawah). sistem mikroba memiliki keuntungan karena
kemudahan yang mereka dapat direkayasa melalui genetic manipulasi untuk
meningkatkan hasil produksi. Mereka juga kompatibel dengan fermentasi skala
besar proses, menunjukkan tingkat pertumbuhan yang cepat dan mudah ekstraksi
produk dibandingkan dengan sistem tanaman asli. Namun, fotosintesis
mikroorganisme seperti mikroalga dan cyanobacteria menawarkan lebih
berkelanjutan keuntungan dalam produksi senyawa yang berharga lebih dari
tanaman h bot dan sistem mikroba lainnya. Mereka mampu, seperti tanaman, untuk
langsung memanfaatkan CO 2 sebagai sumber karbon mereka dan cahaya sebagai
sumber energi, dan mereka melakukannya dengan lebih efektif dengan tingkat
pertumbuhan yang lebih cepat dan sola r konversi energi yang lebih baik
dibandingkan tanaman. Di saat yang sama, strain tertentu dari cyanobacteria
mikroalga nd memiliki keuntungan yang sama dengan lainnya sistem mikroba,
seperti yang mudah dimodifikasi secara genetik, dan dapat tumbuh hingga
kepadatan tinggi di photobioreactors, dan menawarkan lebih sederhana, lebih
efisien mantan traksi dan pemurnian pr ocedures untuk target molekul dari sistem
pembangkit [42,58]. Faktor lain yang penting adalah tanggung pos ekspresi
nasional func enzim dan jalur metabolisme dari sistem pembangkit di sel
cyanobacterial fotosintesis lebih dibandingkan sistem lain mikroba [59]. Salah satu
contoh adalah demonstrasi keberhasilan in vitro dan in vivo kegiatan CP450 enzy
mes dari membran retikulum endoplasma dari Sorghum bicolor di membran tilakoid
Synechococcus sp. PCC 7002 [60]. Ia telah mengemukakan bahwa enzim CP450
dapat dinyatakan dalam jumlah yang jauh lebih besar di tilakoid yang sangat
berlimpah dari cyanobacterium dibandingkan dengan retikulum endoplasma [61]
yang membuat ekspresi heterolog dalam cyanobacteria pilihan berpotensi lebih
menguntungkan daripada ekspresi di host mikroba lainnya. Fu rthermore, seperti
dijelaskan di atas, banyak enzim sintesis terpenoid tergantung pada ketersediaan
mengurangi daya dalam bentuk NADPH atau dikurangi ferredoxin, yang dapat
diharapkan untuk menjadi lebih bundant dalam berbagai cyanobacterial fotosintesis
dari dalam sistem mikroba lain. Melalui biologi sintetis mungkin sehingga
memungkinkan untuk mengembangkan banyak tions varia biosintesis cahaya
didorong terutama terpenoid berharga dalam cyanobacteria. Di sini kita akan
membahas status produksi alam dan heterolog dari terpenoid di cyanobacteria.
3.1. Hemiterpenes (C5)
The terpenoid terkecil yang dikenal sebagai hemiterpenes, yang terdiri dari
terpenoid Unit bernyanyi le dengan lima atom karbon. Satu senyawa tersebut,
volatile hydroc arbon isoprena (2-metil-1,3-butadiena) adalah sebuah blok
bangunan polimer berharga dalam industri kimia sintetis dan biofuel potensial. saat
ini, isoprena digunakan untuk memproduksi produk mulai dari karet sintetis untuk
perekat dan parfum. Produksi terpenoid dari bahan terbarukan sebagai pengganti
produk berbasis minyak bumi dianggap sebagai solusi alternatif untuk memenuhi
peningkatan permintaan global untuk bahan bakar dan kimia sintetik bahan baku,
untuk mengurangi dampak environm ental metode produksi saat ini dan
memastikan berkelanjutan ketersediaan [62]. Berbagai spesies tanaman telah
ditemukan untuk memiliki synthase enzim isoprena, yang mengkatalisis konversi
DMADP untuk menghasilkan isoprena. Induksi produksi dan re sewa isoprena ke
sekitar lingkungan dari tanaman terjadi di bawah panas-stres conditi ons [63-65].
Namun, Tanaman cocok sebagai sistem produksi untuk isoprena terbarukan karena
kesulitan dalam panen volatile senyawa dari tanaman. mikroorganisme fotosintetik
memberikan keuntungan yang berbeda, sebagai volatile senyawa seperti isoprena
dapat dipanen dari fase ga s budaya fotosintesis tumbuh di tertutup bioreaktor [66].
produksi isoprena telah dilaporkan terjadi secara alami dalam beberapa
cyanobacteria laut. Dalam Prochlorococcus dan Synechococcus, produksi isoprena
ditemukan dipengaruhi oleh cahaya intensitas dan suhu lingkungan mereka tumbuh
di [67,68]. Dalam studi lain, isoprene tingkat emisi dilaporkan dari Synechococcus
dan Trichodesmium tergantung pada intensitas cahaya, sel volume dan kandungan
karbon dari sel [69].
Ekspresi heterolog dari Hemiterpenes di Cyanobacteria
Kebanyakan cyanobacteria kekurangan gen synthase isoprena untuk pembentukan
isoprena. Dengan tujuan memproduksi isoprena untuk digunakan sebagai biofuel
terbarukan atau bahan baku dalam industri kimia sintetik, Lindberg et al. [70]
heterologously menyatakan isoprena synthase (ISP) gen dari Pueraria Montana
(Kudzu) pabrik di Synechocystis. regangan rekayasa yang dihasilkan mampu
menghasilkan isoprene terus bersama dengan pertumbuhan cyanobacterial. Selain
itu, metode yang lebih baik untuk menghasilkan, eksekusi, dan menjebak isoprena
juga dikembangkan memanfaatkan gas / air dua fase disegel fotobioreaktor
[71].Untuk lebih meningkatkan productio n dan akumulasi isoprena dari
cyanobacteria, Bentley et al. [72]diperkenalkan asam mevalonat non-pribumi (MVA)
gen jalur dari faecalis Enterococcus dan Streptococcus pneumoniae (bakteri yang
memiliki MVA jalur) di Synechocystis. para penulis melaporkan sukses heterolog
ekspresi dan accu formulasi setiap protein dari MEV jalur di dimodifikasi
Synechocystis, dan peningkatan sekitar 2.5- kali lipat dari produksi isoprena
dibandingkan dengan strain mengekspresikan gen isoprena sy nthase saja (Tabel 2).
Penelitian ini memberikan contoh pertama ekspresi heterolog dari seluruh jalur
biosynthet ic dalam foto ynthetic mikroorganisme.
3.2. Monoterpenes (C10)
Monoterpen adalah kelompok terbesar metabolit sekunder dari tanaman [73].
Mereka mengandung 10 karbon atom dan yang berasal dari kondensasi IDP dan
DMADP baik head-t o-ekor atau non-head-to-tail cara, atau melalui kondensasi dua
monomer DMADP. Senyawa ini penting komponen ekstrak tumbuhan dan minyak
esensial, memiliki keragaman yang tinggi dan secara luas digunakan dalam farmasi,
kosmetik, Agricult industri Ural dan makanan [74]. Selain itu, monoterpenes dapat
berfungsi sebagai suplemen untuk bensin, dan sepeser pun rization unit
monoterpene dapat menghasilkan bahan bakar urutan kedua molekul yang bisa
cocok untuk r suplementasi Jenis diesel bahan bakar. Monoterpen, karena berat
molekul kecil mereka, biasanya dipancarkan sebagai volatil, baik sebagai senyawa
tunggal atau dalam kombinasi komponen. Seperti isoprena, mereka dilepaskan dari
tanaman [65]. Pada tahun 2008 [75], dilaporkan bahwa ssions emi monoterpene
terjadi pada tingkat rendah dari laut yang cyanobacteria Trichodesmium IMS101 dan
Synechococcus RCC40. Fungsi emisi monoterpenes dari cyanobacteria masih belum
diketahui, dan selanjutnya bukti fisiologis dan biokimia diperlukan untuk memahami
proc ess ini. Namun, diketahui bahwa anobacteria cy melakukan banyak jenis Reaksi
yang dikenal sebagai biotransformati ons. Dalam proses ini, kultur sel atau enzim
endogen memiliki kemampuan untuk mengubah substrat eksogen menjadi produk
yang berbeda. Biotransfo knis memungkinkan memperoleh Novel atau senyawa
yang dikenal dengan hasil yang lebih tinggi, dengan biaya yang lebih rendah [76-
78]. Pembentukan monoterpenes melalui biotransformasi telah dilaporkan dari
berbagai jenis cyanobacteria [79-83] dan bisa berpotensi dimanfaatkan lebih lanjut
untuk produksi bahan bakar dan bahan baku untuk kimia sintetik, atau senyawa
yang menarik untuk industri farmasi dan co smetics, tergantung pada spesifik
pembentukan senyawa dan sifat dari produk.
Beberapa spesies cyanobacteria filamen menghasilkan vola genteng metabolit 2-
methylisaborneol (2-MIB),yang tidak memiliki fungsi biologis belum diketahui, tetapi
dikenal untuk memberikan rasa dan bau air [84]. Yang cukup menarik, semua
genom cyanobacteria seque nced sampai saat ini kurang gen homolog ke dikenal
gen 2-MIB-sintesis dari organisme lain. Namun, melalui genom berjalan dan
menggunakan PCR metode, dua gen yang diakui di Pseudanabaena sp. dan
Planktothricoids raciborskii. Itu biosintesis 2-MIB telah ditandai di strain actinomycet
es [85], dan seperti yang ditemukan pada mereka organisme, produksi 2-MIB di
cyanobacteria o ccurs melalui dua langkah r eaction oleh metilasi PDB oleh metil
transferase (GDPMT), diikuti oleh siklisasi HYL-PDB dipenuhi oleh MIB synthase
(MIBS) [86,87]. Setelah perbandingan susunan gen dan situs fungsional antara
cyanobacteria dan lainnya Organisme diusulkan bahwa rekombinasi gen dan
transfer gen mungkin terjadi selama evolusi gen 2-MIB-terkait yang memberikan cy
anobacteria garis keturunan evolusi yang unik untuk transformasi dari PDB untuk
menghasilkan 2- MIB [87]. Cahaya, suhu dan tingkat gizi telah diidentifikasi sebagai
faktor utama yang mempengaruhi tingkat 2-MIB produksi tion [88,89]; Namun,
faktor lingkungan lainnya mungkin juga penting untuk memahami mekanisme
ekspresi 2- MIB di cyanobacteria. Sebuah peraturan photopigment-dependent
sintesis MIB dan akumulasi dengan peningkatan sel metabolisme disarankan untuk
Pseudanabaena mengartikulasikan dan Oscillatoria perornata Skuja [90]. Sangat
Baru-baru ini, percobaan yang menarik menyimpulkan bahwa perubahan tingkat
produksi 2-MIB tergantung pada suhu dipengaruhi oleh gen-tingkat regulasi tion,
perubahan jalur metabolisme sentral, dan peningkatan pertumbuhan sel [91].
Ekspresi heterolog dari monoterpen di Cyanobacteria
Banyak enzim yang dibutuhkan untuk pembentukan monoterpen yang berbeda
pada tanaman yang absen di cyanobacteria. Limonene adalah ple ujian dari
monoterpene tanaman yang ma y berfungsi sebagai prekursor untuk rentang dari
komersial wi produk berharga th beragam aplikasi [92], dan yang tidak diproduksi
native di cyanobacteria. Baru-baru ini, ekspresi heterolog dari limonene synthase
(LIMS), enzim yang mengkatalisis transformasi akhir dari PDB untuk limonene,
ditunjukkan di cyanobacteria dan produksi limonene diamati. Sekarang ada
beberapa penelitian pada produksi limonene di cyanobacteria, memanfaatkan LIMS
-Genes dari beberapa sumber tanaman yang berbeda (Schizonepeta tenuifolia,
Sitka cemara, Mentha spicata), yang telah kodon-dioptimalkan dan heterologously
dinyatakan dalam cyanobacteria Synechocystis, Anabaena sp. PCC 7120 dan
Synechococcus sp. PCC 7002 masing-masing [93-95] (Tabel 2). Semua
cyanobacteria ini direkayasa yang terbukti berhasil memproduksi limonene.
-phellandrene adalah monoterpene tanaman lain, hadir dalam minyak esensial dari
lavender dan grand cemara, dan yang ditemukan pada permukaan daun dan bunga
di mana ia dapat berfungsi sebagai bagian dari pertahanan kimia terhadap
herbivora. -phellandrene digunakan sebagai bahan berharga dalam pengobatan,
kosmetik, dan di parfum, dan juga telah diusulkan sebagai senyawa kandidat untuk
menjadi de bangkan sebagai bahan bakar terbarukan [96]. -phellandrene adalah
produk dari cara jalan MEP tanaman kloroplas lokal dan langsung disintesis dari PDB
oleh sintase -phellandrene (-PHLS). Cyanobacteria kurangnya -PHLS dan tidak
dapat mensintesis beta-phellandrene alami. Untuk menghasilkan monoterpene ini
dari cyanobacteria, kodon-dioptimalkan -PHLS gen dari Lavandula angustifolia
(lavender) itu hetero logously dinyatakan dalam Synechocystis [96] (Tabel 2).
Sekresi -phellandrene diamati dari sel transgenik, dan mudah dipisahkan dari
kultur cair. Sistem ini memberikan keuntungan dari pemisahan produk dari
biomassa, tanpa mempengaruhi pertumbuhan sel, dan memungkinkan proses
produksi terus menerus. Baru-baru ini, penelitian lain melaporkan perbaikan sistem
dengan empl oying promotor yang berbeda untuk mendorong ekspresi dari PHLS-
gen, dan penulis menyimpulkan bahwa ekspresi heterolog protein PHLS adalah
langkah tingkat-membatasi di fotosintesis produksi -phellandrene di cyanobacteria
[97]. The linalool monoterpene alkohol adalah komponen dikenal banyak fragra nt
herbal, dan memberikan kontribusi untuk bau yang menyenangkan unik dari
tanaman vender la. Linalool memiliki severa l berharga sifat biologis, baru-baru ini
ditinjau oleh Aprotosoaie et al. [98]. Adapun isoprena dan Drene phellan, linalool
juga memiliki tinggi kepadatan energi yang bisa membuatnya cocok untuk
pengganti bahan bakar minyak. Linalool secara alami dihasilkan dari MEP jalur
tanaman tertentu, dan disintesis oleh linalool synthase (Lins) dari PDB [99].
Cyanobacteria umumnya kurang pengkodean gen Lins. Dengan tujuan untuk
menghasilkan linalool dari cyanobacteria, gen linalool synthase dari Norwegia
Spruce diperkenalkan ke Anabaena sp. PCC 7120 [100]. Over-ekspresi dan sekresi
linalool menggunakan CO 2 sebagai sumber karbon dilaporkan dari cyanobacteria
yang direkayasa (Tabel 2).

0,3. Seskuiterpen (C15)

Seskuiterpen, dengan 15 karbon, yang berasal dari kondensasi satu tambahan
monomer IDP ke PDB monoterpene C10 untuk membentuk difosfat farnesyl, FDP.
Sejumlah besar seskuiterpen Senyawa dapat diproduksi, karena meningkatnya
variabilitas dimungkinkan oleh peningkatan rantai panjang, dan seskuiterpen
ditemukan untuk berkontribusi berbagai fungsi biologis [103]. Alkohol seskuiterpen
diturunkan dikenal sebagai GEOS min dihasilkan dari beberapa organisme termasuk
cyanobacteria. Geosmin memberikan rasa bersahaja dan bau apak dalam air minum
su pplies, dan cyanobacteria dilaporkan menjadi sebagian besar bertanggung jawab
untuk ini [84]. Mekanisme biokimia sintesis geosmin telah diperiksa dalam model
cyanobacterium, Nostoc punctiforme PCC 73.102 [104]. dalam persetujuan dengan
laporan sebelumnya mengenai sintesis geosmin di acti nomycetes, pembentukan
geosmin di Hasil cyanobacteria dari konversi ses quiterpene prekursor FDP melalui
dua langkah dikatalisasi oleh geosmin synthase bi-fungsional, dikodekan oleh gen
geoA, dengan adanya Mg2+, Saat dikonfirmasi oleh percobaan in vitro [104]. Dalam
studi lain, yang synthase geosmin sama diidentifikasi dari Nostoc punctiforme PCC
73.102 [32]. Namun, setelah ekspresi enzim dalam E. coli, penulis ini Penelitian
tidak bisa mendeteksi produksi geosmin, tapi synt hesis dari germacradienol,
germacrene D, dan germacrene A, semua produk alternatif dikenal Sintase geosmin,
diamati. Selain itu, penulis mengidentifikasi sesquiterpene synthase hadir di kedua
Anabaena sp. PCC 7120 dan Anabaena variabilis ATCC 29413, yang kegiatan di E.
coli serta dalam uji in vitro mengakibatkan pembentukan germacrene A, dan
seskuiterpen tambahan di Nostoc punctiforme dari mana sintesis 8a-epi- -selinene
diamati. Gen yang mengkode dua yang terakhir e Sintase ini sesquiterpen
ditemukan untuk berada di cluster gen bersama-sama dengan sitokrom CP 450
enzim. Namun, fungsional mereka ekspresi tergantung pada kondisi lingkungan
yang berbeda masih perlu diselidiki untuk memahami fungsi mereka dalam
organisme. Dalam sebuah penelitian examini ng formasi sesquiterpene di
berserabut cyanobacterium Calothrix PCC 7507, geosmin ditemukan menjadi
senyawa mendominasi. seskuiterpen lanjut terdeteksi, termasuk germacrene D,
isodihydroagarofuran, 6,11-epoxyisodaucane dan eremophilone, yang dilaporkan
menjadi Toxi c untuk invertebrata spesifik tertentu [105].
Ekspresi heterolog dari Ses quiterpenes di Cyanobacteria
-caryophyllene adalah senyawa seskuiterpen bicyclic ditemukan dalam banyak
tanaman, termasuk rempah-rempah seperti lada hitam [106] dan cengkeh [107],
dan juga dalam minyak esensial dari Cannabis sativa [108]. Secara tradisional,
senyawa ini telah digunakan dalam industri kosmetik untuk memberikan kayu,
aroma pedas untuk kosmetik dan parfum. Ini juga telah f ound menjadi berpotensi
efektif sebagai obat bius [107] dan sebagai agen anti-inflamasi, mungkin bertindak
melalui nding bi dari reseptor cannabinoid [109]. Tidak ada laporan dari
cyanobacteria memproduksi -caryophyllene alami, dan dalam model
cyanobacterium Synechocystis ada tidak ada dikenal gen s untuk sintesis. Dalam
produksi vivo dari -caryophyllene di Synechocystis dilaporkan untuk pertama
kalinya setelah insersi stabil gen synthase -caryophyllene (QHS1) dari Artemisia
annua ke dalam genom dari Synechocystis [101]. Farnesene adalah sesquiterpene
langsung berasal dari FDP yang digunakan sebagai pelumas, kosmetik, di
wewangian dan juga sebagai biofuel [55]. Produksi farnesene adalah kepentingan
karena dianggap menjadi menarik biofuel, untuk sifat volatile dan kepadatan energi
yang tinggi. Dalam penelitian terbaru, berserabut itu, heterocystous
cyanobacterium Anabaena sp. PCC 7120 digunakan sebagai host atau ganism untuk
ekspresi kodon-dioptimalkan farnesene sintetase (FAS) gen dari Norwegia SPRU ce,
untuk memproduksi dan mengeluarkan farnesene [102]. strain rekayasa
menunjukkan aktivitas sintetik foto yang lebih tinggi dengan meningkatnya cahaya
intensitas dan penulis menyarankan bahwa fungsi farnesene c Ould kemungkinan
sebagai penyerap karbon ditambahkan dalam cyanobacterium, sehingga influe
ncing aktivitas fotosintesis. Enzim synthase -bisabolene mengkatalisis
pembentukan -bisabolene dalam berbagai tanaman. Dalam sebuah studi pada
produksi cyanobacterial dari limonene dan bisabolene, ekspresi heterolog dari (E) -
-bisabolene gen synthase dari Abies grandis di Synechococcus sp. PCC 7002
mengakibatkan pembentukan -bisabolene di cyanobacterium ini [95]. Namun,
tingkat produksi lebih rendah dari yang diperoleh untuk limonene. Para penulis
menyimpulkan th di karena cyanobacteria secara umum tidak menghasilkan jumlah
besar seskuiterpen, ketersediaan rendah dari prekursor FDP dapat membatasi juga
untuk produksi heterolog dari seskuiterpen.
3.4. Diterpenes (C20)
Diterpenoid secara struktural beragam hidrokarbon C20 yang berasal dari
penambahan satu molekul IDP untuk FDP untuk membentuk geranyl geranyl
difosfat, GGDP. Dari GGDP, keragaman struktural diciptakan melalui aksi dua
keluarga enzim, yang Sintase diterpen dan sitokrom CP450 [61]. Karena mereka
kompleksitas struktural, kimia s ynthesis senyawa ini biasanya sulit, dan
ketersediaan diterpenoid alami umumnya terbatas karena prosedur ekstraksi
melelahkan diperlukan untuk mengisolasi mereka dari sumber tanaman asli. Hal ini,
oleh karena itu, menarik untuk menemukan host mikroba untuk memproduksi
senyawa, dan cyanobacteria dapat penyediaan in de lingkungan yang sesuai untuk
e enzim yang diperlukan th, karena mereka secara alami menyerupai kondisi di
kloroplas. Tentu cyanobacteria lakukan menghasilkan beberapa diterpenes dengan
fungsi spesifik c, misalnya, tolypodiol, sebuah senyawa diterpenoid terdeteksi dari
Tolypothrix nodosa yang terbukti memiliki anti-inflamasi sifat [110]. Sebuah novel
ekstraseluler metabolit "noscomin" dengan kerangka diterpenoid biasa dilaporkan
dari Nostoc commune ketegangan [111112] dan ditemukan memiliki sifat
antibakteri. Dua diterpenes abietane terisolasi dari cyanobacterium Microcoleous
lacustris menunjukkan antibakteriaktivitas terhadap beberapa bakteri ecific sp
[113]. GGDP juga substrat untuk pembentukan phytyl, oleh aksi th e enzim
geranylgeranyl reduktase. Phytyl digunakan pada tanaman dan cyanobacteria
untuk pembentukan tokoferol, dan berfungsi sebagai substrat untuk menambahkan
rantai samping fitol dari klorofil, ubiquinones, plastoquinone dan phylloquinone.
Inaktivasi gen encoding geranylgeranyl reduktase, chlP, di Synechocystis
mengakibatkan pembentukan klorofil geranylgeranylated bukannya bentuk
phytylated normal, pembentukan tocotrienol bukannya -tokoferol, dan mutan
stra di ditemukan mampu mempertahankan fotoautotropik Pertumbuhan [114].
3.5. Triterpen (C30)
Triterpen adalah hidrokarbon 30-karbon, biosynthe berukuran melalui kepala-to-
kepala kondensasi dua molekul FDP untuk membentuk squalene. Squalene pada
gilirannya berfungsi sebagai prekursor untuk pembentukantriterpenoid termasuk
bakteri l hopanoid dan sterol eukariotik. Squalene sendiri adalah alami antioksidan
dan memiliki penggunaan komersial dalam kosmetik, nutrisi dan vaksin [115-117],
dan diekstrak untuk penggunaan komersial dari minyak hati ikan hiu, atau zaitun
atau minyak tumbuhan lainnya. Di cyanobacteria, beberapa tapi tidak semua ins
stra memiliki gen squalene synthase, SQS. Fungsional karakterisasi dari synthase
squalene di cyanobacteria pertama kali dilaporkan pada T. memanjang BP-1 [118].
Baru-baru ini, sebuah gen SQS juga diidentifikasi dan fungsinya e xperimentally
diverifikasi oleh inaktivasi di Synechocystis [119]. Dalam studi yang sama, itu
menunjukkan bahwa inaktivasi gen putatively encoding sebuah squalene hopene
siklase, shc, menyebabkan squalene menumpuk di sel Synechocystis. SHC adalah
enzim bertanggung jawab untuk siklisasi squalene untuk membentuk hopene,
prekursor untuk pembentukan keluarga senyawa triterpen dikenal sebagai hopanoid
[120.121]. Hopanoid, senyawa triterpenoid pentasiklik ditemukan di banyak bakteri,
telah digunakan sebagai biologi spidol, misalnya, kehadiran distribusi tertentu
hopanoid dalam batuan dan depos minyak menyediakan informasi tentang kondisi
lingkungan selama deposisi seperti yang kita akan seperti usia sampel [122]. Pada
bakteri, hopanoid terbentuk sebagai blok bangunan untuk biogenesis membran dan
memiliki peran dalam menjaga integritas membran dan permeabilitas [123124],
sebagai sumur sebagai dalam mengatasi stres eksternal, misalnya, oksigen difusi
[125], stres pH [126], resistensi antimikroba [127] dan stres etanol [128.129]. Baru
saja, yang biosintesis jalur hopanoid ha sudah ditandai di beberapa gram negatif
bakteri [130.131]. Berbagai macam struktur hopanoid telah dilaporkan dari
organisme yang berbeda, menunjukkan bahwa ada adalah fungsi spesifik yang
belum ditemukan. Peran hopanoi ds di cyanobacteria tidak baik belajar belum.
Namun demikian, kehadiran beberapa senyawa hopanoid telah dilaporkan dari
cyanobacteria [132-135] dan telah menyarankan bahwa mereka mungkin
memainkan peran dalam melindungi terhadap kondisi lingkungan yang ekstrim
[134].
3.6. Tetraterpenes (C40)
Tetraterpenes dengan 40 karbon yang berasal dari phytoene dibentuk oleh dua C20
GGDP dalam head-to-head reaksi kondensasi [136]. Satu kelompok tetraterpenes
adalah karotenoid pigmen, yang merupakan keluarga dari senyawa dengan
keragaman struktur yang besar. Karotenoid memiliki fungsi biologis tant impor,
dengan peran dalam menangkap cahaya, aktivitas antioksidan dan perlindungan
dari efek merusak dari radikal bebas, sintesis hormon tanaman, dan mponents co
sebagai struktural dalam membran. Terlepas dari biologis mereka fungsi, pigmen ini
memiliki penggunaan komersial sebagai pewarna makanan, suplemen makanan
hewan, di nutraceuticals dan obat-obatan. Karotenoid disintesis baik oleh
fotosintesis dan organisme non-fotosintetik, namun pada organisme fotosintetik,
termasuk cyanobacteria, mereka komponen penting dalam fotosintesis membran nd
bersama dengan klorofil mereka menstabilkan pusat reaksi fotosintesis dan
melindungi dan mengatur fotosintesis oksigenik [137-139]. Topik karotenoid terlalu
luas untuk dibahas di sini, dan telah dengan baik dijelaskan sebelumnya. Untuk
review karotenoid, sintesis mereka, fungsi selular nd, lihat [137,140-142].
4. Strategi untuk Meningkatkan Produksi Terpenoid
Produksi terpenoid adalah Subj dll dengan peraturan dalam sel, dan produktivitas
maksimum ditentukan oleh langkah-langkah membatasi laju di jalur MEP. Se upaya
veral telah dilakukan dalam studi terbaru untuk meringankan keterbatasan pada
produktivitas terpenoid di cyanobacterial organisme Model.
DXS, enzim mengkatalisis langkah pertama dari jalur MEP, telah diidentifikasi
sebagai hambatan jalur [143]. Untuk mengarahkan fluks mobil bon terhadap
pembentukan produk, Kudoh et al. [144] mengembangkan DXS berlebih ketegangan
dalam Synechocystis, dengan mengungkapkan salinan tambahan dari DXS
Synechocystis asli gen di bawah kontrol dari psbA2 promotor sangat aktif. The
expressi ekstra pada dari DXS di dimodifikasi regangan menyebabkan peningkatan
kadar karotenoid, dengan faktor sekitar 1,5, dan penurunan kadar glikogen, yang
memimpin penulis untuk menyarankan bahwa peningkatan kandungan karotenoid
adalah karena konsumsi glikogen. Hal itu disimpulkan dari hasil yang melalui
optimasi ekspresi gen dan dibatasi sintesis senyawa penyimpanan, sebuah hasil
produk terpenoid ditingkatkan adalah mungkin di cyanobacteria. Namun, dalam
studi lain di Synechococcus sp. PCC 7002, tidak ada di rutan dalam produk
terpenoid formasi ketika glikogen sintesis adalah menonaktifkan d. Sebaliknya,
sekresi metabolit pusat tidak terhubung dengan terpenoid biosintesis diamati [95].
Dalam studi terbaru yang lain, berlebih dari tiga enzim asli, DXS, IDI dan PDB, di
Synechocystis bawah l contro dari promotor trc kuat, menyebabkan peningkatan
pembentukan limonene (Dibentuk oleh ekspresi heterologou s dari LIMS, lihat lebih
lanjut di atas dan Tabel 2) dengan faktor 1,4, mirip dengan efek pada pembentukan
karotenoid dilihat dalam penelitian ini berdasarkan [143] oleh ekspresi DXS saja
[93]. Dalam serupa belajar pada strain limonene memproduksi Anabaena sp. PCC
7120, penulis berusaha untuk meningkatkan fluks melalui MEP jalur oleh heterol
berlebih ogous dari DXS dari E. coli, IDI dari pluvalis Haematococcus, dan PDB dari
Mycoplasma tuberkulosis dalam operon bersama-sama dengan LIMS, di bawah
kontrol dari P nir-P psbA1 promotor ganda membangun [94]. Hal ini menyebabkan
peningkatan pembentukan limonene dengan faktor 2,3 dalam cahaya rendah,
namun produksi berkerut dengan faktor 6,8 di bawah cahaya tinggi. Selain itu,
diamati bahwa produksi limonene ing strain yang digunakan dalam penelitian e th
dipamerkan lebih tinggi evolusi oksigen di bawah cahaya tinggi daripada galur liar,
saya ndicating bahwa produksi limonene bertindak sebagai penyerap karbon ekstra
dalam sel. resu Kejadian ini, dibandingkan dengan efek yang lebih kecil terhadap
hasil produk diamati dalam studi tentang overekspresi gen MEP jalur asli di
Synechocystis, mungkin menunjukkan keuntungan yang diperoleh dengan
menggunakan heterolog en Zymes untuk meningkatkan fluks karbon melalui MEP
jalur, karena hal ini dapat menghindari peraturan asli dari enzim mengganggu
aktivitas mereka. Mengambil pendekatan ini satu langkah lebih jauh, seperti yang
disebutkan di atas, Bentley et al. [72] heterologously menyatakan seluruh MEV
jalur, di bawah kendali promotor psbA2, di strain isoprena memproduksi dari
Synechocystis menghasilkan 2,5 kali peningkatan hasil isoprena. Peningkatan
pembentukan produk diamati dalam penelitian ini karena ketersediaan substrat
dditional untuk sel untuk mengarahkan ke terpenoid pembentukan, karena jalur
MEV menggunakan asetil-CoA sebagai substrat daripada GAP dan piruvat, tetapi
mungkin dibatasi oleh kemacetan di jalur diperkenalkan.
5. Perspektif Masa Depan
Terpenoid sangat penting untuk semua organisme li Ving, dan ada banyak aspek
dari biosintesis mereka yang masih harus dijelaskan. Ada juga kemungkinan akan
keragaman senyawa terpenoid yang memiliki masih belum teridentifikasi. Sebagai
informasi lebih lanjut tentang biosintesis terpenoid tertentu menjadi tersedia,
terutama mengenai berbagai metabolit sekunder terpenoid dengan berguna Sifat
dari tanaman, juga menjadi menarik untuk membangun bentuk plat mikroba untuk
produksi mereka pada skala yang lebih besar. Cyanobacteria dapat berubah
menjadi organisme tuan rumah unggul untuk produksi rologous HETE terpenoid,
karena mereka membentuk jumlah yang relatif besar senyawa ini secara alami,
terutama di bentuk karotenoid dan sebagai rantai samping fitol dari klorofil, dan
karena mereka penyediaan de tanaman-seperti lingkungan di dalam sel, dengan
akses ke kekuasaan mengurangi berasal dari fotosintesis untuk mendorong
pembentukan terpenoid oleh aksi Sintase terpene dan enzim sitokrom P450. seperti
dijelaskan di atas, beberapa terpenoid non-pribumi telah berhasil memproduksi
dalam model cyanobacteria. Sebagai organisme produksi bioteknologi, acteria
cyanob memiliki keuntungan besar menjadi fotosintesis dan dengan demikian
mampu tumbuh pada nutrisi minimal dengan sinar matahari sebagai sumber energi
mereka. Namun, mereka terbatas dalam kemampuan mereka untuk menghasilkan
terpenoid karena peraturan dan kendala pada MEP jalan. Upaya untuk meringankan
kendala mereka baru-baru ini telah dibuat, seperti dijelaskan di atas, tetapi memiliki
sejauh ini hanya pernah cukup sukses dan perangkat tambahan lebih lanjut
diperlukan untuk mencapai komersial produksi yang layak. Untuk meningkatkan
pembentukan produk Targ et, fluks metabolik perlu diarahkan untuk produksi
terpenoid tertentu. Untuk pemulihan mudah produk dari budaya, akan sangat
membantu untuk fokus pada produk yang ar e baik senyawa fobia volatile atau
hidro yang dapat dikeluarkan dari sel-sel dan mudah dipisahkan dari medium
pertumbuhan. Untuk produk yang tidak dikeluarkan dari sel, pengenalan transporter
rekayasa tertentu dapat dianggap sebagai cara untuk mencapai ekspor efisien
molekul terpenoid intraseluler disintesis pada media.
Ada secara umum untuk cyanobacteria kurangnya ools t sesuai untuk rekayasa
genetika, dan pengembangan promotor, vector s, dan sistem regulasi untuk
digunakan dalam rekayasa baru dan asli jalur masih perlu dikembangkan lebih
lanjut. Furtherm bijih, seperti yang dibuat jelas dalam ulasan ini, asli biosintesis
terpenoid di cyanobacteria jauh dari diselidiki sepenuhnya, dan banyak pertanyaan
tetap tentang regulasi dan kontrol dari jalur MEP serta sintesis terpenoid tertentu.
Sana juga mungkin ada senyawa terpenoid masih belum diketahui PR oduced oleh
cyanobacteria. Lebih lanjut penyelidikan asli terpenoi d biosintesis di cyanobact eria
sangat penting, karena akan memberikan pengetahuan diperlukan untuk rekayasa
sukses mekanisme-orga ini untuk produksi terpenoid yang menarik untuk aplikasi
farmasi, gizi, atau biofuel sebagai masa depan.
Ucapan Terima Kasih
Kami berterima kasih kepada Badan Energi Swedia, yang Knut dan Alice Wallenberg
Foundation (proyek Mose) dan Carl Trygger Yayasan dukungan keuangan dari
pekerjaan ini.
Konflik kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.