com
Lihat diskusi, statistik, dan profil penulis untuk publikasi ini di:https://www.researchgate.net/publication/319645034
KUTIPAN BACA
35 19.541
2 penulis:
Histone Deacetylase Inhibitors Sensitize TRAIL-Induced Apoptosis pada Sel Kanker Usus BesarLihat proyek
Semua konten yang mengikuti halaman ini diunggah olehIngy I. Abdallahpada 12 September 2017.
Kertas konferensi
Abstrak
Terpenoid mewakili kelas terbesar produk alami dengan beragam struktur dan fungsi. Banyak terpenoid telah melaporkan sifat terapeutik seperti antimikroba,
anti-inflamasi, imunomodulator dan sifat kemoterapi membuat mereka sangat menarik di bidang medis. Juga, mereka banyak digunakan dalam industri rasa
dan wewangian, selain sebagai sumber biofuel. Terpenoid memiliki hasil alami yang rendah dan sintesis kimia yang rumit, oleh karena itu diperlukan metode
produksi yang lebih berkelanjutan. Rekayasa metabolisme memberikan peluang bagus untuk membangun pabrik sel mikroba yang memproduksi terpenoid
yang diinginkan. Jalur biosintetik mevalonat dan non-mevalonat yang terlibat dalam produksi prekursor terpenoid dicirikan sepenuhnya sehingga
mengeksplorasi metode untuk meningkatkan fluksnya akan menjadi langkah pertama dalam menciptakan pabrik sel yang sukses. Kompleksitas dan keragaman
struktur terpenoid terutama tergantung pada aksi sintase terpena yang bertanggung jawab untuk sintesisnya. Enzim-enzim ini diklasifikasikan ke dalam kelas
yang berbeda dan mendapatkan wawasan tentang mekanisme katalitiknya akan berguna dalam merancang pendekatan untuk meningkatkan produksi
terpenoid. Tinjauan ini berfokus pada biosintesis dan keanekaragaman hayati terpenoid, memahami keluarga enzim terpena sintase yang terlibat dalam
sintesisnya dan upaya rekayasa untuk membuat pabrik sel mikroba untuk produksi terpenoid. Kompleksitas dan keragaman struktur terpenoid terutama
Penulis yang sesuai:
tergantung pada aksi sintase terpena yang bertanggung jawab untuk sintesisnya. Enzim-enzim ini diklasifikasikan ke dalam kelas yang berbeda dan
Wim J. Quax
wjquax@rug.nl mendapatkan wawasan tentang mekanisme katalitiknya akan berguna dalam merancang pendekatan untuk meningkatkan produksi terpenoid. Tinjauan ini
berfokus pada biosintesis dan keanekaragaman hayati terpenoid, memahami keluarga enzim terpena sintase yang terlibat dalam sintesisnya dan upaya
Diterima: 9 Juni 2017 Diterima:
rekayasa untuk membuat pabrik sel mikroba untuk produksi terpenoid. Kompleksitas dan keragaman struktur terpenoid terutama tergantung pada aksi sintase
15 Juli 2017 Diterbitkan: 11
terpena yang bertanggung jawab untuk sintesisnya. Enzim-enzim ini diklasifikasikan ke dalam kelas yang berbeda dan mendapatkan wawasan tentang
September 2017
mekanisme katalitiknya akan berguna dalam merancang pendekatan untuk meningkatkan produksi terpenoid. Tinjauan ini berfokus pada biosintesis dan
Layanan penerbitan disediakan keanekaragaman hayati terpenoid, memahami keluarga enzim terpena sintase yang terlibat dalam sintesisnya dan upaya rekayasa untuk membuat pabrik sel
Ingy I. Abdallah dan Wim J. Kata kunci:amorfadiena; artemisinin;Bacillus subtilis;Escherichia coli; mevalonat; anggota
Quax. Artikel ini didistribusikan
parlemen; terpenoid; sintase terpena; taksol; taksadiena.
di bawah ketentuan
Lisensi Atribusi Creative Commons,
terbatas dan
Alam adalah peti harta karun dengan jumlah tak terbatas dari senyawa komersial
Seleksi dan Peer-review di
bawah tanggung jawab dan/atau obat yang signifikan. Secara historis, sebagian besar obat-obatan baru
Komite Konferensi NRLS. berasal dari produk alami (metabolit sekunder) di mana senyawa kimia dari hewan,
tumbuhan dan mikroba sangat berharga dalam mengobati berbagai penyakit
manusia sejak awal pengobatan. Produk alami memiliki sifat inheren yang tinggi
keragaman dan spesifisitas biokimia menjadikannya perancah terkemuka untuk obat
selain penggunaannya dalam industri makanan dan wewangian [1-4]. Telah diketahui
bahwa 34% dari obat bermolekul kecil baru yang disetujui oleh Food and Nistration
(FDA) pada periode 1981 hingga 2010 sebenarnya adalah produk alami.
m J. Quax, (2017), "Selayang Pandang ke Biosintesis Terpenoid" diProsiding Konferensi NRLS, halaman 81
Ilmu Hayati (2016), KnE Life Sciences, halaman 81–98. DOI 10.18502/kls.v3i5.981
Prosiding Konferensi NRLS
atau turunan dari hasil alam [5]. Selain itu, lebih dari 60% obat kemoterapi dan 75%
obat penyakit infeksi berasal dari alam.
Terpenoid, dengan sekitar 64.000 senyawa yang diketahui, dianggap sebagai kelas produk
alami terbesar dan paling beragam. Terpenoid merupakan metabolit sekunder yang
sebagian besar diproduksi oleh tumbuhan dan sebagian lagi oleh bakteri atau khamir.
Mereka terjadi dalam berbagai struktur kimia dalam bermacam-macam biasa hidrokarbon
linier atau kerangka karbosiklik kiral dengan modifikasi kimia yang berbeda seperti gugus
hidroksil, keton, aldehida dan peroksida. Molekul terpenoidal yang berbeda telah dilaporkan
memiliki sifat antimikroba, antijamur, antivirus, antiparasit, antihiperglikemik, antialergenik,
antiinflamasi, antispasmodik, imunomodulator dan kemoterapi. Mereka juga dapat
digunakan sebagai insektisida alami dan zat pelindung dalam penyimpanan produk
pertanian. Susunan struktur dan fungsi terpenoid yang beragam ini telah memicu minat
besar dalam penggunaan obat dan aplikasi komersialnya sebagai rasa, wewangian, dan
rempah-rempah. Selain itu, terpenoid baru-baru ini muncul sebagai pemain kuat di pasar
biofuel. Di antara terpenoid dengan aplikasi medis yang mapan adalah artemisinin
antimalaria dan taksol antikanker [6-9].
Ulasan ini menggali dunia terpenoid. Tinjauan singkat tentang pentingnya
terpenoid, kelasnya yang berbeda dan biosintesis menjelaskan lebih banyak
tentang enzim kunci yang terlibat dalam sintesisnya, yaitu terpene sintase. Selain
itu, tren biosintesis terpenoid dalam mikroorganisme rekayasa dibahas.
2. Biosintesis terpenoid
Terlepas dari perbedaan struktural yang sangat besar antara terpenoid, mereka
semua berasal dari C . yang sama5kerangka isoprena. Tulang punggung terpenoidal
disintesis dari dua prekursor: isopentenil pirofosfat (IPP) dan dimetilalil pirofosfat
(DMAPP) melalui sejumlah reaksi pengulangan, penataan ulang, dan siklisasi yang
berbeda. Dua jalur biosintetik yang berbeda untuk pembentukan prekursor
universal ini telah dilaporkan, jalur mevalonat klasik (MVA) dan jalur yang paling
baru dikarakterisasi.C-metil-D-eritritol-4-fosfat (MEP), juga dikenal sebagai jalur 1-
deoksi-D-xylulose- 5-fosfat (DXP). Jalur MVA hadir pada eukariota (semua mamalia,
sitosol dan mitokondria tanaman, jamur), archaea, dan beberapa eubacteria
sedangkan jalur non-mevalonat terjadi pada eubacteria, alga, cyanobacteria, dan
kloroplas tanaman. Jalur MVA terdiri dari tujuh reaksi enzimatik untuk mengubah
prekursor asetil-KoA menjadi IPP dan DMAPP (Gbr. 1) sedangkan jalur MEP
mengubah bahan awal, piruvat dan gliseraldehida-3-fosfat, menjadi IPP dan DMAPP
melalui delapan reaksi enzimatik (Gbr. .1) [10-12]. Prenil difosfat linier seperti
geranyl pyrophosphate (GPP), farnesyl pyrophosphate (FPP), geranylgeranyl
pyrophosphate (GGPP), dan farnesyl
geranyl pyrophosphate (FGPP) disintesis dari dua blok bangunan dasar, IPP dan DMAPP di
mana sekelompok enzim yang disebut prenyltransferases berulang kali menambahkan unit
isoprena aktif (IPP) ke DMAPP atau prenyl diphosphate dalam kondensasi head-to-tail
berturut-turut yang mengarah ke produksi berbagai molekul dengan panjang tetap dan
stereokimia. Geranyl pyrophosphate synthase (GPPS) dan farnesyl pyrophosphate synthase
(FPPS) mengkatalisis kondensasi IPP dan DMAPP untuk menghasilkan GPP (C10) dan FPP (C15).
Geranylgeranyl pyrophosphate synthase (GGPPS) dan farnesyl geranyl pyrophosphate
synthase (FGPPS) bertanggung jawab untuk pembentukan GGPP (C20) dan FGPP (C25).
Prekursor GPP, FPP, GGPP dan FGPP, disiklisasi dan/atau diatur ulang oleh enzim terpen
sintase yang berbeda untuk menghasilkan kelas terpenoid yang berbeda [6, 13].
3. Klasifikasi terpenoid
Terpenoid biasanya diklasifikasikan menurut jumlah dan organisasi struktural dari lima
unit karbon isoprena yang terlibat dalam sintesisnya sebagai C.5hemiterpenoid, C10
monoterpenoid, C15seskuiterpenoid, C20diterpenoid, C25sesterterpenoid, C30
triterpenoid, C40tetraterpenoid, dan C>40politerpenoid. Sifat, signifikansi dan contoh
dari kelas yang berbeda dibahas secara singkat.
Hemiterpenoid adalah terpenoid terkecil yang diketahui di mana mereka terdiri dari satu
unit lima atom karbon. Yang paling terkenal adalah isoprena hidrokarbon volatil (Gbr. 2).
Isoprena adalah biofuel potensial dan blok bangunan polimer yang berharga dalam industri
kimia sintetik. Saat ini, Sekitar 95% dari produksi isoprena digunakan untuk memproduksi
cis-1,4-poliisoprena, versi sintetis dari karet alam. Enzim isoprena sintase bertanggung jawab
untuk konversi DMAPP untuk menghasilkan isoprena. Banyak tanaman memiliki isoprena
sintase tetapi pemanenan isoprena volatil dari tanaman sulit. Oleh karena itu,
mikroorganisme penghasil isoprena yang ditumbuhkan dalam bioreaktor tertutup
menawarkan sistem produksi yang lebih cocok untuk isoprena [14].
Monoterpenoid adalah asiklik, monosiklik, atau bisiklik C10senyawa yang disintesis dari
substrat GPP oleh monoterpen sintase. Monoterpenoid adalah komponen minyak atsiri yang
diekstraksi dari banyak tanaman yang berkontribusi terhadap rasa dan aroma tanaman ini.
Mereka memiliki keragaman yang tinggi dan banyak digunakan dalam industri farmasi,
kosmetik, pertanian dan makanan. Beberapa contoh monoterpenoid (Gbr. 2) adalah
myrcene asiklik dari hop dan linalool dari lavender, mentol monosiklik dari mint dan
timol dari thyme, dan eucalyptol bisiklik dari kayu putih dan kapur barus dari pohon
kamper [15, 16].
Seskuiterpenoid tersebar luas di alam dan mewakili kelas terpenoid yang paling
dominan. Mereka adalah asiklik, monosiklik, bisiklik atau trisiklik C15senyawa yang
disintesis dari substrat FPP oleh seskuiterpen sintase. Menariknya, kelas senyawa
lain yang memiliki fitur karakteristik sebagai sistem -metilen -lakton; , -karbonil tak
jenuh, atau epoksida dan berbeda secara kimia
Diterpenoid secara struktural beragam non-volatil C20hidrokarbon yang berasal dari substrat
GGPP oleh keluarga enzim diterpen sintase. Telah dilaporkan bahwa mereka sebagian besar
berasal dari sumber tanaman atau jamur, tetapi mereka juga dibentuk oleh serangga
tertentu serta organisme laut. Sintesis kimia dari senyawa ini sulit karena strukturnya yang
kompleks, dan ekstraksi alami sangat sulit sehingga produksi dalam inang mikroba sangat
menarik. Taxol (Gbr. 2) adalah diterpenoid terkenal yang digunakan dalam pengobatan dan
manajemen kanker [6, 19].
Sesterterpenoid jarang di alam dan terbentuk dari prekursor FGPP. Mereka umumnya
ditemukan dalam lilin pelindung serangga dan jamur [19].
Triterpenoid adalah C30hidrokarbon biosintesis dari enam unit isoprena di mana mereka
berbagi squalene prekursor asiklik. Berdasarkan berbagai kemungkinan cara penutupan
cincin di squalene, sejumlah besar triterpenoid yang memiliki keragaman struktur kerangka
dapat diproduksi. Squalene sendiri adalah antioksidan alami dan digunakan secara
komersial dalam kosmetik, nutrisi dan vaksin. Triterpenoid dapat dikategorikan menjadi dua
kelompok besar, steroid (C27) jenis dengan 27 atom karbon hadir dalam kerangka dan
pentasiklik (C30) Tipe. Kolesterol adalah contoh dari triterpenoid steroid dan hopane adalah
triterpenoid pentasiklik (Gbr. 2) [19].
Tetraterpenoid adalah C40senyawa yang berasal dari fitoena yang dibentuk oleh dua C20GGPP
dalam reaksi kondensasi head-to-head. Kelompok tetraterpenoid yang paling terkenal adalah
pigmen karotenoid. Karotenoid memiliki fungsi biologis yang penting karena aktivitas
antioksidannya, selain penggunaan komersialnya sebagai pewarna makanan. Lycopene dan
zeaxanthin (Gbr. 2) dianggap sebagai tetraterpenoid [19].
4.1. Artemisinin
Artemisinin (Gbr. 2), juga dikenal sebagaiqinghao su, adalah lakton seskuiterpenoid yang
diproduksi secara alami oleh tanamanArtemisia tahunL. Penghargaan Nobel diberikan kepada
Youyou Tu pada tahun 2015 atas penemuan artemisininnya, yang ia tunjukkan sebagai hadiah
dari pengobatan tradisional Tiongkok kepada dunia. Terapi kombinasi berbasis artemisinin (ACT)
didukung oleh Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) sebagai pengobatan lini pertama untuk
Plasmodium falciparummalaria. Mekanisme artemisinin yang disarankan adalah bahwa bagian
endoperoksidanya berinteraksi dengan heme, yang banyak terdapat pada parasit malaria,
menghasilkan generasi radikal bebas berbasis karbon yang pada gilirannya menyebabkan
kematianP. falciparumparasit. Baru-baru ini, telah dilaporkan bahwa artemisinin memiliki efek
antikanker di mana sel kanker, mirip dengan parasit malaria, memiliki konsentrasi besi bebas
yang tinggi. Kematian sel juga diakibatkan oleh pembentukan radikal bebas oleh reaksi
artemisinin-besi. Manfaat artemisinin sebagai antikanker tidak hanya potensinya, tetapi juga
selektivitasnya terhadap sel kanker dan toksisitas rendah terhadap sel normal. Produksi komersial
artemisinin sebagian besar masih bergantung pada ekstraksi dari
sumber alami membuat ACT lebih mahal daripada pengobatan malaria lain yang kurang efektif.
Oleh karena itu, penelitian untuk menciptakan pabrik sel mikroba untuk produksi artemisinin
yang berkelanjutan sangat penting [20, 21, 24].
4.2. Taksol
Taxol (Gbr. 2), juga dikenal sebagai paclitaxel, adalah diterpenoid pertama yang diisolasi dari
Taxus brevifoliakulit pohon. Pada tahun 1982, disetujui oleh FDA sebagai obat melawan berbagai
bentuk kanker, termasuk berbagai karsinoma (indung telur, payudara, paru-paru, kepala, leher,
kandung kemih dan leher rahim), melanoma dan sarkoma Kaposi terkait AIDS. Aktivitas taksol
didasarkan pada penghambatan mitosis di mana ia menargetkan tubulin menyebabkan kesulitan
dengan perakitan gelendong, pembelahan sel dan juga segregasi kromosom. Baru-baru ini, taxol
telah dilaporkan berguna dalam mengobati penyakit neurodegeneratif seperti penyakit
Alzheimer. Kelemahan utama taksol tampaknya adalah produksi massalnya, yang dapat diatasi
dengan mengeksplorasi sintesis mikroba paclitaxel karena sintesis kimia total terbukti
bermasalah karena strukturnya yang kompleks [25-27].
5. Sintase terpena
Sintase terpena adalah keluarga enzim yang bertanggung jawab untuk mengkatalisis
penataan ulang dan/atau siklisasi prekursor GPP, FPP, dan GGPP untuk menghasilkan kelas
terpenoid yang berbeda. Keterlibatan terpen sintase merupakan persyaratan yang sangat
diperlukan untuk produksi terpenoid. Keragaman struktural terpenoid yang menarik
didasarkan pada orientasi substratnya di situs aktif dari terpen sintase yang berkorelasi yang
kemudian menjalani serangkaian siklisasi dan/atau penataan ulang untuk menghasilkan
terpenoid tertentu. Sintase terpena diklasifikasikan ke dalam sintase terpena kelas I dan
kelas II berdasarkan mekanisme aktivasi substratnya. Sintase terpena kelas I dicirikan
dengan mengkatalisis ionisasi ikatan ester difosfat alilik dalam substrat isoprenilnya
sedangkan sintase terpena kelas II mengkatalisis reaksi siklisasi yang diinduksi protonasi
dari substrat, kadang-kadang diikuti oleh penataan ulang. Selain mekanisme aktivasi
substrat yang berbeda, dua kelas sintase terpena yang berbeda memiliki lipatan protein
yang tidak terkait. Sintase terpene kelas I menggunakan kluster logam tri-nuklir yang diikat
oleh motif pengikatan ion logam yang dilestarikanDDXXDdan (N,D)DXX(S,T)XXXE(bold
menunjukkan ligan logam khas) untuk memicu ionisasi kelompok difosfat substrat mereka,
yang memulai katalisis dengan menghasilkan karbokation. Di sisi lain, terpen sintase kelas II
menggunakan katalisis asam umum untuk memulai pembentukan karbokation,
menggunakan asam aspartat tengah dalam motif DXDD untuk memprotonasi ikatan
rangkap substrat atau bagian oksiran. Penting juga untuk menyebutkan bahwa sintase
terpene dapat diklasifikasikan lebih lanjut menjadi:
Sintase terpena kelas I dicirikan sebagai enzim yang memulai ionisasi. Sintase terpena Kelas I mikroba terdiri dari
domain yang homolog secara struktural, bahkan tanpa adanya homologi urutan yang jelas. Situs aktif mereka
ditemukan dalam domain , yang mengasumsikan lipatan bundel- yang umum di mana motif DDXX(XX)D/E yang kaya
aspartat di samping motif (N,D)DXX(S,T,G)XXXE yang kurang dilestarikan mengikat kofaktor magnesium esensial yang
memicu kepergian kelompok pirofosfat substrat, dan secara bersamaan memulai reaksi siklisasi dan penataan ulang.
Berlawanan dengan sintase terpena kelas I mikroba, sebagian besar sintase monoterpen dan seskuiterpen
tumbuhan mengasumsikan rakitan di mana lipatan melakukan fungsi biasanya, tetapi lipatan tidak aktif. Di semua
sintase terpena kelas I, pembentukan kompleks substrat, ion logam dan motif pengikatan ion logam mendorong
perubahan konformasi yang mengasingkan situs aktif dari pelarut massal. Ini menunjukkan bahwa kantong situs
aktif tidak mengadopsi kontur seperti produk sampai setelah pengikatan substrat. Sintase terpena memicu ionisasi
substrat hanya dalam kompleks enzim-substrat tertutup ini. Setelah ionisasi, karbokation alilik yang awalnya
terbentuk biasanya mengalami siklisasi dan/atau penataan ulang. Namun, terkadang deprotonasi langsung diamati
sesuai dengan Sintase terpena memicu ionisasi substrat hanya dalam kompleks enzim-substrat tertutup ini. Setelah
ionisasi, karbokation alilik yang awalnya terbentuk biasanya mengalami siklisasi dan/atau penataan ulang. Namun,
terkadang deprotonasi langsung diamati sesuai dengan Sintase terpena memicu ionisasi substrat hanya dalam
kompleks enzim-substrat tertutup ini. Setelah ionisasi, karbokation alilik yang awalnya terbentuk biasanya mengalami
siklisasi dan/atau penataan ulang. Namun, terkadang deprotonasi langsung diamati sesuai dengan
penunjukan yang lebih umum dari keluarga enzim ini sebagai sintase daripada siklase
(walaupun tata nama belakangan ini akan lebih sesuai dengan sebagian besar enzim dalam
keluarga). Selain itu, setelah siklisasi dan/atau penataan ulang, enzim-enzim ini biasanya
mendeprotonasi karbokation akhir. Meskipun demikian, penangkapan air oleh karbokation
akhir telah terdeteksi, baik dengan deprotonasi langsung untuk membentuk gugus hidroksil,
atau bahkan siklisasi berikutnya sebelum deprotonasi, membentuk eter siklik. Akhirnya,
sintase terpena kelas I menampilkan beragam katalitik promiskuitas. Beberapa cukup
spesifik sementara yang lain menghasilkan rangkaian produk yang khas dari substrat yang
sama [28, 30, 34].
Isoprena sintase (ISPS) adalah satu-satunya hemiterpen sintase yang diketahui. ISPS bertanggung
jawab atas produksi global isoprena di alam dan bioteknologi. Situs aktif ISPS mengandung ion
magnesium yang berinteraksi dengan substrat dimethylallyl diphosphate (DMAPP) yang
mengkatalisis eliminasi pirofosfat anorganik untuk menghasilkan isoprena. Struktur ISPS
mengungkapkan rongga situs aktif yang lebih dangkal dibandingkan dengan sintase terpene
kelas I lainnya, bahkan sintase monoterpen. Ini sesuai dengan spesifisitasnya untuk DMAPP
substrat yang lebih kecil [28, 35].
5.1.2. Monoterpenesintase
Semua sintase monoterpen mengkatalisis ionisasi dan siklisasi yang bergantung pada logam
dari prekursor 10-karbon geranyl pyrophosphate (GPP) untuk menghasilkan monoterpen
yang berbeda. Sintase monoterpen mencapai keragaman struktural dan kimia yang luar
biasa dalam bermacam-macam produk mereka, meskipun katalisis mereka dari kaskade
siklisasi terpene paling sederhana di mana mereka menggunakan substrat isoprenoid linier
terpendek [28, 30]. Limonene sintase dariMentha spicataL. adalah contoh monoterpen
sintase yang memadamkan intermediet karbokation siklis akhir dengan deprotonasi untuk
membentuk olefin (limonene) [36]. Sineole sintase dariSalvia fruticosaPabrik. menawarkan
contoh integrasi air untuk membentuk eter siklik (cineole) [37]. Bornil difosfat sintase dari
Salvia officinalisL. adalah sintase monoterpen pertama yang dideskripsikan secara struktural
dan ini menampilkan contoh khas dari penambahan kembali anion pirofosfat ke karbokation
akhir tersiklus yang menghasilkan bornil difosfat [38]. Sintase monoterpen mikroba hanya
memiliki domain (Gbr. 3a) sedangkan enzim tumbuhan memiliki domain dan (Gbr. 3b).
Sintase terpena kelas II dicirikan sebagai enzim yang memulai protonasi. Kelas ini
terdiri dari diterpen sintase Kelas II dan sintase triterpen yang dapat berupa
skualen-hopena atau oksido-skualen sintase. Sintase diterpen bakteri dan semua
sintase triterpen terdiri dari dan domain (Gbr. 3d) sedangkan sintase diterpena
kelas II terdiri dari ,β dan domain (Gbr. 3e). Situs aktif mereka terletak di antara /
domain, keduanya menampilkan lipatan -barrel di mana motif DXDD di domain
menawarkan donor proton yang mengaktifkan pembentukan karbokation awal.
Setelah produksi karbokation awal, enzim ini sering mengkatalisis
reaksi siklisasi yang kompleks secara stereokimia menghasilkan dari satu hingga lima cincin,
diikuti dengan penataan ulang berikutnya. Mirip dengan terpen sintase kelas I, enzim kelas
ini pada dasarnya tidak langsung mendeprotonasi karbokation akhir tetapi kadang-kadang
air ditangkap oleh deprotonasi untuk membentuk produk terhidroksilasi. Juga mereka
menunjukkan berbagai katalitik promiskuitas [28, 30].
Amorphadiene synthase (ADS) adalah kelas I cisoid sesquiterpene synthase. Ini adalah enzim
kunci dalam biosintesis obat antimalaria artemisinin di tanamanA. tahun di mana ia
mengkatalisis langkah pembatas laju pertama mengubah substrat FPP menjadi
amorpha-4,11-diena yang merupakan prekursor artemisinin. Tidak ada struktur kristal yang
dilaporkan untuk ADS, namun, model homologi 3D yang mewakili konformasi enzim ini
baru-baru ini diterbitkan (Gbr. 4a). Model ini dibangun menggunakan sintase seskuiterpen
lain dariA. tahunsebagai template yaitu -bisabolol synthase (BOS). Baik ADS dan BOS berbagi
identitas urutan tinggi yang membuat BOS menjadi template ideal untuk pemodelan
homologi ADS. Model ADS yang dibuat menunjukkan motif pengikatan ion logam yang khas
dari sintase terpena kelas I yang mengkelat tiga ion magnesium di situs aktif. Selain itu, FPP
substrat ditambatkan di situs aktif dan orientasinya yang benar telah dikonfirmasi. Karena
ADS termasuk dalam famili cisoid, mekanisme multilangkahnya dimulai dengan isomerisasi
ikatan rangkap C2-C3 FPP untuk menghasilkan nerolidil difosfat (NPP) yang terionisasi
menjadi kation 2,3-cis-farnesil. Kation ini awalnya akan melakukan siklisasi 1,6 untuk
memberikan kation bisabolil diikuti oleh penutupan cincin 1,10 untuk menghasilkan produk
utama amorfa-4,11-diena. Penyelidikan residu asam amino yang berbeda di situs aktif ADS
membantu memberikan lebih banyak wawasan tentang mekanisme katalitiknya. Selain itu,
upaya rekayasa ADS untuk meningkatkan efisiensi katalitik dan mengubah profil produk
telah menghasilkan hasil yang menarik [24, 40].
Taxadiene synthase (TXS), kelas I diterpene synthase, mengkatalisis langkah pertama dalam
biosintesis taxol di kulit kayuT. brevifoliadengan siklisasi GGPP yang bergantung pada logam
untuk menghasilkan taksa-4(5),11(12)-diena yang merupakan prekursor taksol. Panjang penuh
enzim adalah 862-residu (98 kD) tetapi urutan transit terminal dari sekitar 80 residu asam amino
terputus setelah pematangan dalam plastida. Oleh karena itu, struktur kristal TXS yang dilaporkan
adalah varian terpotong, tidak memiliki urutan transit, terkompleks
Angka3: Representasi skematis dari struktur umum sintase terpena yang berbeda. (a) Mikroba kelas I mono-
dan seskuiterpen sintase; (b) Tumbuhan kelas I mono- dan seskuiterpen sintase; (c) Tumbuhan kelas I diterpen
sintase; (d) triterpen kelas II dan sintase diterpen bakteri; (e) Sintase diterpena Kelas II Tumbuhan. Perhatikan
bahwa domain berwarna biru, domain berwarna hijau, domain berwarna kuning dan terminal N berwarna
ungu. Motif pengikatan ion logam DDXX(XX)D/E dan (N,D)DXX(S,T,G)XXXE masing-masing berwarna oranye
dan merah muda. Motif DXDD berwarna coklat. Tiga bola kuning mewakili ion magnesium dan rantai samping
merah adalah gugus pirofosfat dari substrat.
dengan substratnya (GGPP) (Gbr. 4b). Enzim ini memiliki struktur tri-domain di mana ia tidak
hanya memiliki domain dan terpen sintase tanaman yang khas, tetapi juga domain , yang
disisipkan di antara heliks pertama dan kedua dari domain sehingga struktur akhirnya
mengandung kedua kelas I. dan lipatan kelas II. Terminal-C enzim mengandung motif pengikatan
logam yang dilestarikan dengan tiga gugus logam magnesium untuk mengikat dan mengaktifkan
substrat tetapi terminal-N dan domain penyisipan tidak memiliki motif DXDD yang khas yang
menunjukkan bahwa enzim berfungsi sebagai terpen sintase kelas I [28, 29 ].
Kebutuhan akan produksi terpenoid yang berkelanjutan, sebagai kelas produk alami yang
sangat terkenal, sangat besar. Masalah rendahnya hasil alami terpenoid dan sintesis kimia
yang mahal atau sulit dapat diatasi dengan merekayasa sel mikroba untuk bertindak sebagai
biofactories untuk produksi terpenoid yang berkelanjutan. Pendekatan ini akan
membutuhkan transfer jalur biosintetik dari sumber asli terpenoid ke mikroba ini dengan
segala tantangannya. Pabrik mikroba ini memberikan manfaat penggunaan sumber karbon
yang murah, kemampuan untuk meningkatkan hasil produksi secara genetik
manipulasi, dan kimia ramah lingkungan. Karena semua terpenoid berasal dari C . yang
sama5prekursor IPP dan DMAPP yang diproduksi oleh jalur MVA atau MEP, merekayasa
strain platform yang menghasilkan sejumlah besar prekursor ini bermanfaat untuk
pembuatan berbagai jenis terpenoid di mana terpen sintase yang bertanggung jawab untuk
produksi terpenoid yang diinginkan dapat langsung dimasukkan ke dalam strain platform.
Dalam beberapa dekade terakhir, biosintesis terpenoid dalam mikroorganisme sebagian
besar berfokus pada karotenoid bersama dengan prekursor untuk obat-obatan penting
seperti artemisinin dan taxol [41, 42].Escherichia coliadalah salah satu organisme platform
yang paling banyak digunakan. Banyak laporan yang mengeksploitasi jalur MEP yang
melekat dengan ekspresi berlebih untuk produksi terpenoid berhasil. Juga, upaya dilakukan
untuk memperkenalkan jalur MVA heterolog diE. coli. Banyak terpenoid termasuk
amorphadiene dan taxadiene secara efektif diproduksi diE. coli. Salah satu kelemahan dari
E.coliadalah kemungkinan kontaminasi produk akhir oleh endotoksin yang membuatnya
sampai sekarang tidak ditetapkan sebagai organisme yang Dianggap Aman (GRAS) oleh FDA
[43, 44]. Organisme lain yang telah banyak diteliti untuk produksi terpenoid adalah ragi
Saccharomyces cerevisiaeMeyen eks EC Hansen.S. cerevisiaedapat mentolerir pH rendah dan
peningkatan tekanan osmotik dibandingkan dengan bakteri sehingga sangat disukai di
industri. Ragi ini memiliki jalur MVA endogen, namun sebagian besar FPP yang dihasilkan
oleh jalur tersebut dikonsumsi untuk produksi sterol. Oleh karena itu, para peneliti berfokus
pada peningkatan kumpulan prekursor GPP, FPP, dan GGPP untuk produksi terpenoid. Hal
ini dapat dicapai dengan penekanan jalur bersaing yang menguras prekursor ini bersama
dengan upregulasi jalur MVA dan ekspresi sintase terpene yang diinginkan. Kerugian utama
dariS. cerevisiaeadalah laju pertumbuhannya yang lambat sehingga akan membutuhkan
lebih banyak waktu untuk menghasilkan terpenoid yang sama dibandingkan dengan
E. coli[9, 45]. Dalam beberapa tahun terakhir, minat untuk menggunakanBacillus subtilis(
Ehrenberg 1835) Jagung 1872 sebagai pabrik sel untuk produksi terpenoid telah berkembang.B.
subtilisadalah bakteri Grampositif yang mengandung jalur MEP inheren yang mampu
menghasilkan isoprena dalam jumlah yang lebih tinggi daripada kebanyakan penghitungan
eubakteriE. coli. Ini memiliki tingkat pertumbuhan yang tinggi, rentang substrat yang luas dan
dianggap sebagai organisme GRAS oleh FDA. Karenanya,B. subtilismuncul sebagai kandidat kuat
untuk produksi terpenoid dengan meningkatkan fluks jalur MEP. Ekspresi berlebih dari gen jalur
MEP,dxsdanidi, meningkatkan produksi amorphadiene diB. subtilis. Juga, Ekspresi heterologCrtM
dan CrtNgen dalamB. subtilisberhasil memungkinkan produksi C30karotenoid. Produksi
karotenoid ini lebih lanjut ditingkatkan dengan ekspresi berlebih dari gen jalur MEP yang
berbeda, selain itu, memungkinkan analisis sistematis fungsi enzim jalur MEP yang berbeda [8,
46-48]. Lebih lanjut, mikroorganisme fotosintesis sebagai cyanobacteria menawarkan keuntungan
tambahan dalam produksi terpenoid dibandingkan tanaman dan sistem mikroba lainnya. Mirip
dengan tanaman, mereka memiliki kemampuan untuk langsung menggunakan CO2sebagai
sumber karbon dan cahaya sebagai sumber energi. Mereka
Angka4: (a) Model 3D amorpha-4,11-diene synthase yang dilaporkan; (b) Struktur kristal taxadiene synthase
yang dilaporkan.
bahkan dapat melakukan itu lebih efisien dengan tingkat pertumbuhan yang lebih cepat dan konversi energi
matahari yang lebih baik daripada tanaman. Secara bersamaan, galur cyanobacteria tertentu memiliki
kelebihan yang sama dengan sistem mikroba lain di mana mereka dapat tumbuh hingga kepadatan tinggi
dalam fotobioreaktor, dapat dimodifikasi secara genetik, dan menyediakan proses ekstraksi dan pemurnian
yang lebih sederhana untuk terpenoid target daripada sistem tanaman. Juga, mereka memberikan
kemungkinan yang lebih baik dari ekspresi fungsional enzim tanaman dan jalur metabolisme dibandingkan
Di pasar obat dan komersial, terpenoid akan selalu menjadi senyawa berharga yang
sangat menarik. Jalur biosintetik yang terlibat dalam produksi terpenoid dijelaskan
sepenuhnya, namun, lebih banyak wawasan tentang mekanisme katalitik enzim yang
terlibat dalam jalur ini, terutama terpen sintase, sangat penting. Karakterisasi terpen
sintase yang berbeda dan mengeksplorasi hubungan strukturfungsi dari residu asam
amino yang berkaitan dengan interaksi mereka dengan substrat akan menjadi dasar
untuk memanipulasi enzim ini. Rekayasa protein terpen sintase akan memberikan
kesempatan untuk meningkatkan stabilitas enzim, efisiensi katalitik dan spesifisitas
produk yang bertujuan untuk produksi terpenoid yang lebih berkelanjutan. Terlepas
dari kemajuan yang dicapai dalam memahami regulasi metabolisme mikroba dan
menciptakan alat genetik yang sesuai, ada beberapa tantangan yang masih dihadapi
pembangunan pabrik sel mikroba untuk produksi komersial terpenoid. Tantangan-
tantangan ini dapat diringkas menjadi masalah pasokan prekursor, optimasi jalur,
toleransi mikroba, dan ekstraksi produk yang efisien. Penelitian masa depan harus
fokus pada optimasi lebih lanjut dari fluks melalui jalur MEP atau MVA
untuk menyediakan suplai prekursor yang tinggi dan merekayasa enzim terpen sintase untuk
meningkatkan produksi terpenoid yang diinginkan. Juga, upaya harus dilakukan untuk meningkatkan
toleransi mikroba terhadap produksi terpenoid tingkat tinggi dan untuk mengembangkan metode
ekstraksi terpenoid yang sesuai, terutama yang mudah menguap, selama produksi.
Referensi
[1] Koehn FE, Carter GT. Peran yang berkembang dari produk alami dalam penemuan obat.
Nature Review Drug Discovery 2005;4:206–220.
[2] Lahlou M. Keberhasilan produk alam dalam penemuan obat. Farmakologi &
Farmasi 2013;4:17–31.
[3] Dias DA, Urban S, Roessner U. Tinjauan sejarah produk alami dalam penemuan
obat. Metabolit 2012; 2:303–36.
[4] Harvey AL, Edrada-Ebel R, Quinn RJ. Kemunculan kembali produk alam untuk
penemuan obat di era genomik. Nature Review Drug Discovery 2015;14:111–29.
[5] DJ Newman, Cragg GM. Produk alami sebagai sumber obat baru selama 30 tahun dari
1981 hingga 2010. Journal of Natural Products 2012;75:311–35.
[6] Wang G, Tang W, Bidigare RR. Terpenoid sebagai obat terapeutik dan agen farmasi.
Produk alami: Penemuan obat dan obat terapeutik. Dalam: Zhang L, Demain AL
(Eds.). Totowa, NJ: Humana Press; 2005. hal. 197–227.
[7] Thoppil RJ, Bishayee A. Terpenoid sebagai agen kemopreventif dan terapi potensial
pada kanker hati. Jurnal Hepatologi Dunia 2011; 3:228–249.
[8] Guan Z, Xue D, Abdallah II, Dijkshoorn L, Setroikromo R, Guiyuan L, dkk. Rekayasa
metabolismeBacillus subtilisuntuk produksi terpenoid. Mikrobiologi dan Bioteknologi
Terapan 2015;99:9395–9406.
[9] Ajikumar PK, Tyo K, Carlsen S, Mucha O, Phon TH, Stephanopoulos G. Terpenoid:
Peluang untuk biosintesis obat produk alami menggunakan mikroorganisme
rekayasa. Farmasi Molekuler 2008;5:167–190.
[10] Lange BM, Rujan T, Martin W, Croteau R. biosintesis isoprenoid: evolusi dua jalur
kuno dan berbeda di seluruh genom. Prosiding National Academy of Sciences of
USA 2000;97:13172–13177.
[11] Dewick PM. Jalur mevalonat dan deoksisilulosa fosfat: terpenoid dan steroid.
Dalam: Produk alami obat. John Wiley & Sons, Ltd; 2001. hal. 167– 289.
[16] Banthorpe DV, Charlwood BV, Francis MJO. Biosintesis monoterpen. Tinjauan Kimia
1972; 72:115–155.
[19] Bhat SV, Sivakumar M, Nagasampagi BA. Kimia produk alam. Berlin: Narosa;
2005.
[20] Tu Y. Penemuan artemisinin (qinghaosu) dan hadiah dari pengobatan Cina.
Pengobatan Alam 2011;17:1217–1220.
[21] Lai HC, Singh NP, Sasaki T. Pengembangan senyawa artemisinin untuk pengobatan
kanker. Narkoba Baru Investigasi 2013; 31:230–246.
[22] Das AK. Efek antikanker senyawa artemisinin antimalaria. Sejarah Penelitian Ilmu
Kedokteran dan Kesehatan 2015;5:93-102.
[23] Lai H, Sasaki T, Singh NP. Pengobatan kanker yang ditargetkan dengan senyawa
pembawa besi yang ditandai artemisinin dan artemisinin. Pendapat Ahli tentang Target
Terapi 2005;9:995–1007.
[24] Abdallah II, Czepnik M, van Merkerk R, Quax WJ. Wawasan struktur tiga dimensi
amorpha-4,11-diena sintase dan penyelidikan residu plastisitas. Jurnal Produk
Alami 2016;79:2455–2463.
[25] Priyadarshini K, Keerthi Aparajitha U. Paclitaxel melawan kanker: Tinjauan singkat
Kimia Medis 2012; 2:139–141.
[26] Boghigian BA, Salas D, Ajikumar PK, Stephanopoulos G, Pfeifer BA. Analisis
produksi taxadiene heterolog pada Escherichia coli turunan K dan B.
Mikrobiologi dan Bioteknologi Terapan 2012;93:1651–1661.
[27] Hezari M, Croteau R. Taxol biosintesis: Pembaruan. Planta Medica 1997;63:291–295.
[28] Gao Y, Honzatko RB, Peters RJ. Struktur sintase terpenoid: Sejauh ini pandangan yang tidak lengkap
tentang katalisis kompleks. Laporan Produk Alami 2012; 29:1153–1175.
[29] Köksal M, Jin Y, Coates RM, Croteau R, Christianson DW. Struktur sintase
taxadiene dan evolusi arsitektur modular dalam biosintesis terpene. Alam
2011;469:116–120.
[30] Christianson DW. Biologi struktural dan kimia siklase terpenoid. Ulasan Bahan
Kimia 2006;106:3412–3442.
[31] Noel JP, Dellas N, Faraldos JA, Zhao M, Hess BA, Smentek L, dkk. Penjelasan
struktural jalur siklisasi cisoid dan transoid dari seskuiterpen sintase
menggunakan 2-fluorofarnesil difosfat. Biologi Kimia ACS 2010;5:377–392.
[32] Bloom JD, Meyer MM, Meinhold P, Otey CR, MacMillan D, Arnold FH. Mengembangkan
strategi untuk rekayasa enzim. Opini Saat Ini dalam Biologi Struktural 2005;15:447– 452.
[33] Diaz JE, Lin CS, Kunishiro K, Feld BK, Avrantinis SK, Bronson J, Greaves J, Saven JG,
Weiss GA. Desain dan pilihan komputasional untuk sintase terpena termostabil yang
direkayasa. Ilmu Protein 2011;20:1597–1606.
[34] Christianson DW. Menggali akar terpenome. Opini Saat Ini dalam Biologi Kimia
2008;12:141–150.
[35] Köksal M, Zimmer I, Schnitzler JP, Christianson DW. Struktur isoprena sintase
menjelaskan mekanisme kimia emisi karbon atmosfer teragram. Jurnal Biologi
Molekuler 2010;402:363–373.
[36] Hyatt DC, Youn B, Zhao Y, Santhamma B, Coates RM, Croteau RB, dkk. Struktur
limonene sintase, model sederhana untuk katalisis terpenoid siklase. Prosiding
National Academy of Sciences USA 2007;104:5360–5365.
[37] Kampranis SC, Ioannidis D, Purvis A, Mahrez W, Ninga E, Katerelos NA, dkk.
Konversi rasional substrat dan spesifisitas produk dalam sintase monoterpen
Salvia: wawasan struktural ke dalam evolusi fungsi sintase terpena. Sel Tanaman
2007;19:1994–2005.
[38] Whittington DA, Wise ML, Urbansky M, Coates RM, Croteau RB, Christianson DW.
Bornyl diphosphate synthase: struktur dan strategi untuk manipulasi
karbokation oleh terpenoid cyclase. Prosiding National Academy of Sciences USA
2002;99:15375–15380.
[39] Miller DJ, Allemann RK. Sintase seskuiterpen: Katalis pasif atau pemain aktif?
Laporan Produk Alami 2012;29:60–71.
[40] Li JX, Fang X, Zhao Q, Ruan JX, Yang CQ, Wang LJ, dkk. Rekayasa rasional residu
plastisitas sintase seskuiterpen dariArtemisia tahun: Spesifisitas produk dan
efisiensi katalitik. Jurnal Biokimia 2013;451:417–426.
[41] Klein-Marcuschamer D, Ajikumar PK, Stephanopoulos G. Rekayasa pabrik sel
mikroba untuk biosintesis molekul isoprenoid: di luar likopen. Tren Bioteknologi
2007;25:417–424.
[42] Chang MCY, Keasling JD. Produksi obat-obatan isoprenoid oleh mikroba yang
direkayasa. Biologi Kimia Alam 2006; 2:674–681.
[43] Chen X, Zhou L, Tian K, Kumar A, Singh S, Sebelum BA, Wang Z. Rekayasa metabolisme
Escherichia coli: Platform industri berkelanjutan untuk produksi bahan kimia berbasis
bio. Kemajuan Bioteknologi 2013;31:1200–1223.
[44] Martin VJJ, Pitera DJ, Withers ST, Newman JD, Keasling JD. Rekayasa jalur
mevalonat diEscherichia coliuntuk produksi terpenoid. Bioteknologi Alam
2003;21:796–802.
[45] Kampranis SC, Makris AM. Mengembangkan pabrik sel ragi untuk produksi
terponoid. Jurnal Bioteknologi Komputasi dan Struktural 2012;3:1–7.
[46] Xue D, Abdallah II, de Haan IEM, Sibbald MJJB, Quax WJ. Peningkatan produksi
karotenoid C30 diBacillus subtilisoleh ekspresi berlebih sistematis dari gen jalur MEP.
Mikrobiologi dan Bioteknologi Terapan 2015;99:5907–5915.
[47] Zhou K, Zou R, Zhang C, Stephanopoulos G, Terlalu HP. Optimalisasi sintesis
amorfadiena dalamBacillus subtilismelalui transkripsi, translasi, dan modulasi media.
Bioteknologi dan Bioteknologi 2013;110:2556–2561.
[48] Yoshida K, Ueda S, Maeda I. Produksi karotenoid diBacillus subtilisdicapai dengan
rekayasa metabolisme. Surat Bioteknologi 2009;31:1789–1793.
[49] Ducat DC, Way JC, Perak PA. Rekayasa cyanobacteria untuk menghasilkan produk bernilai
tinggi. Tren Bioteknologi 2011;29:95-103.