Prinsip teknologi DNA rekombinan berdasarkan pada

bioteknologi, dimulai pada awal 1970 dengan Paul Berg dari

Universitas Stanford menghasilkan DNA rekombinan pertama.
Ini diikuti oleh generasi yang ditransformasikan
Escherichia coli pada tahun 1973 oleh Herbert Boyer dari Universitas Indonesia
California (San Francisco), yang menghasilkan
produksi insulin manusia rekombinan oleh Eli Lilly
Perusahaan pada tahun 1982. Jangkauan praktis secara genetik
organisme hasil modifikasi telah tumbuh sejak saat itu
untuk kemungkinan untuk mengekspresikan hampir semua jenis pengkodean
urutan dari sumber yang memungkinkan. Upaya telah dilakukan
untuk merekayasa secara genetis sebagian besar sistem kehidupan seperti
bakteri, ragi, jamur, tumbuhan dan hewan memiliki gen baru
produk atau karakteristik. Jumlah gen telah
dikloning dan diekspresikan menggunakan teknologi DNA rekombinan.
Manipulasi genetik menggunakan teknologi r-DNA adalah
lebih pasti dan hasil lebih pasti dari yang lain
metode yang menghasilkan produksi organisme dengan lebih cepat
sifat yang diinginkan. Kemajuan dalam biologi molekuler dan genetik
teknik rekayasa telah membuat dampak di dua bidang utama
(a) memahami biologi sistem kehidupan oleh
manipulasi informasi genom dan (b) produksi
metabolit yang berguna atau organisme hidup yang diinginkan
karakteristik metabolisme. Ini tidak hanya menghasilkan
produksi biomolekul spesifik dalam organisme yang berbeda
tetapi juga telah membantu mensintesis bahan genetik dan
produk terkait di laboratorium. Bahkan, penerapan
rekayasa genetika dan teknologi DNA rekombinan miliki
menyebabkan generasi kelas organisme baru yang disebut
organisme hasil rekayasa genetika (GMO) atau modifikasi hidup
organisme (LMO). Lebih dari itu, kemampuan genetik
manipulasi hampir semua organisme hidup telah menyebabkan
evolusi genomik dengan aplikasi yang luas dari
sistem biologi modern. Aplikasi paling terkenal dari
teknologi rekombinan memiliki dampak langsung pada
kemanusiaan telah:
1. Produksi protein terapeutik skala besar seperti
penggunaan insulin, hormon, vaksin dan interleukin
mikroorganisme rekombinan.
2. Produksi antibodi monoklonal yang dimanusiakan untuk
aplikasi terapi.
3. Produksi tanaman kapas tahan serangga oleh
penggabungan racun insektisida Bacillus
thuringiensis (tanaman kapas BT).
4. Produksi beras emas (beras yang mengandung vitamin A) oleh
menggabungkan tiga gen yang diperlukan untuk sintesis di
tanaman padi.
5. Bioremediasi dengan menggunakan organisme rekombinan
dan Penggunaan teknik rekayasa genetika dalam forensik
obat.
Aplikasi teknologi DNA rekombinan miliki
dampak besar pada produksi biofarmasi dan
pertanian diikuti dengan mengendalikan lingkungan
polusi.
Kloning gen dan konstruksi vektor diterapkan secara luas

teknik dalam teknologi r-DNA dan penelitian protein dan

adalah teknologi yang paling sering digunakan dalam suatu molekul

laboratorium biologi. Bahkan, untuk mempelajari gen tertentu, para

langkah pertama biasanya untuk mengkloning dan mengekspresikannya (An et al., 2007).

Ada banyak pendekatan yang tersedia untuk kloning DNA.

Teknik klasik umumnya melibatkan pembelahan a

plasmid tujuan dan urutan sisipan target dengan

enzim restriksi, dan kemudian menjahitnya bersama

bantuan DNA ligase. Pendekatan ini sangat luar biasa

nyaman dan lurus ke depan saat yang tepat

situs pembatasan diposisikan dengan baik dalam urutan yang sedang

dimanipulasi, tetapi menjadi bermasalah saat ini

situs pembatasan tidak ada. Selain itu, sebagian besar

gen eukariotik terganggu oleh urutan intervensi

(intron), yang membuat gen yang diinginkan sangat besar.

Manipulasi DNA genom besar itu membosankan dan

bermasalah karena ukuran kapasitas vektor kloning dan

beberapa restriksi endonuklease yang menyulitkan

untuk menemukan enzim yang sesuai untuk subkloning. Untuk menghindari

kesulitan-kesulitan ini, berbagai pendekatan kloning alternatif

telah dikembangkan (Sambrook dan Russell, 2001)

termasuk kloning TA (Marchuk et al., 1991), ligasi

independent cloning (LIC) (Weeks et al., 2007; Yang et al.,

2010; Thieme et al., 2011), kloning tergantung-rekombinase

(Court et al., 2002; Cheo et al., 2004), dan yang dimediasi PCR

kloning (Shuldiner et al., 1990, 1991; Zuo dan Rabie, 2009;

Bond dan Naus, 2012).

3.0 RDT di bidang pertanian

Teknologi DNA rekombinan telah bertambah secara signifikan

perbaikan tanaman konvensional, dan memiliki yang besar

berjanji untuk membantu pemulia tanaman untuk memenuhi peningkatan makanan

permintaan diprediksi untuk abad ke-21. Kemajuan dramatis

telah dibuat selama dua dekade terakhir dalam memanipulasi

gen dari sumber yang beragam dan eksotis dan menyisipkannya

menjadi mikroorganisme dan tanaman tanaman untuk memberikan ketahanan terhadap

hama dan penyakit serangga, toleransi terhadap herbisida, kekeringan,

salinitas tanah dan toksisitas aluminium; peningkatan pasca panen

kualitas; peningkatan penyerapan nutrisi dan kualitas gizi;

peningkatan laju fotosintesis, gula, dan produksi pati;

peningkatan efektivitas agen biokontrol; ditingkatkan

pemahaman tentang aksi gen dan jalur metabolisme; dan

produksi obat-obatan dan vaksin pada tanaman tanaman. Begitu juga dengan

bantuan RDT, kami meningkatkan hasil kebutuhan pokok kami

tanaman di negara-negara berkembang. Meskipun beragam dan

aplikasi bioteknologi bermanfaat yang luas

produk, masih ada kebutuhan penting untuk menyajikan ini

manfaat bagi masyarakat umum secara nyata dan dapat dimengerti

cara yang merangsang publik yang tidak memihak dan bertanggung jawab

perdebatan. Pengembangan, pengujian dan pelepasan pertanian

produk yang dihasilkan melalui proses berbasis bioteknologi

harus terus dioptimalkan berdasarkan yang terbaru

pengalaman. Ini akan membutuhkan yang dinamis dan ramping

struktur peraturan, jelas mendukung manfaat

bioteknologi, tetapi sangat peka terhadap kesejahteraan

manusia dan lingkungan.

4.0 Metabolit sekunder

Tumbuhan menghasilkan berbagai produk alami yang disebut

metabolit sekunder, yang memainkan berbagai peran seperti

penarik penyerbuk (mis. pigmen dan aroma), dan

molekul pertahanan terhadap serangan oleh hewan dan

mikroorganisme. Zat ini juga penting untuk

manusia sebagai sumber obat-obatan, wewangian,

agrokimia dan aditif makanan. Namun, meski hebat

upaya oleh industri kimia untuk meniru dan mensintesis

metabolit sekunder spesifik tanaman, sedikit keberhasilan

tercapai dan tanaman masih tetap menjadi sumber utama banyak

senyawa obat vital (Wink, 1990). Seperti kebanyakan dari ini

senyawa berasal dari tanaman, faktor apa pun (mis. iklim,

politik, dll.) yang memengaruhi kelanjutan pasokan ini

Molekul akan membahayakan pasokan dunia. Pada akhir 1970-an

kultur sel tanaman dipandang sebagai alternatif atau tambahan

cara memproduksi senyawa ini, sejak itu dikenal

bahwa sel-sel tanaman dapat dengan mudah dikultur dan menghasilkan yang bermanfaat

metabolit sekunder (Alfermann & Peterson, 1995).

Namun demikian, hasil rendah diperoleh dengan sel yang dikultur,

sering kalah dengan jumlah yang ada pada tanaman utuh,

memberikan kelemahan utama pada iklan mereka

eksploitasi. Namun, beberapa proyek berhasil, untuk

misalnya produksi shikonin dan berberin oleh sel

budaya Lithospermum erythrorhizon dan Coptis

japonica masing-masing (Fujita 1988). Banyak strategi

telah dicoba dalam upaya untuk meningkatkan hasil produk, termasuk

misalnya induksi kultur sel yang dibedakan

yang diketahui memiliki potensi biokimia yang lebih tinggi

(Yeoman & Yeoman, 1996). Memang, dalam beberapa kasus lebih tinggi

hasil intermediet metabolik atau produk akhir

dicapai dengan menggunakan pendekatan ini. Memang akar rambutnya mapan

kultur berubah setelah infeksi dengan

Agrobacterium rhizogenes menunjukkan peningkatan produksi

dari metabolit sekunder yang terjadi secara alami di

akar yang tidak ditransformasi, menghasilkan jumlah sekunder

senyawa yang sebanding atau bahkan lebih tinggi dari yang ada

di akar utuh (mis. Sharp & Doran, 1990). Selama 10-

15 tahun, keberhasilan transformasi genetik tanaman

telah dilaporkan di sekitar 200 spesies termasuk

tanaman pertanian, pohon, tanaman hias, buah-buahan dan sayuran.

Modifikasi genetik semacam itu telah memperbaiki tanaman spesifik

sifat-sifat, seperti resistensi terhadap patogen, terhadap herbisida dan terhadap

berbagai faktor lingkungan termasuk kekeringan dan banjir (Bajaj, 1999). Sebagai lanjutan
dari kesuksesan genetik ini

transformasi tanaman obat telah dicoba,

terutama untuk meningkatkan produksi berbagai

obat-obatan, tetapi juga rasa, dan pigmen.

Kultur dan tanaman transgenik, telah dilaporkan

sekitar 70 spesies ini (Bajaj, 1999), dan menarik

hasilnya sudah muncul. Beberapa penelitian ini adalah

diarahkan menuju kontrol metabolisme. Pada 1991, Bailey

menyarankan agar rekayasa metabolisme biosintetik

jaringan dapat dicapai dengan aplikasi rekombinan

Metode DNA, tetapi juga menyarankan betapa rumitnya seluler

tanggapan terhadap gangguan genetik dapat menyulitkan

desain metabolik prediktif.

5.0 Antibodi monoklonal manusia

Antibodi monoklonal (Mab) sangat spesifik

imunoglobulin yang menunjukkan berbagai macam biologis

kegiatan. Selain digunakan dalam diagnosa, pengikatan antigen

situs molekul antibodi memiliki potensi besar untuk

mengembangkan peptida bioaktif Karena spesifik mereka

Aktivitas mengikat ligan, mereka dianggap sebagai keajaiban

peluru seperti yang dihipotesiskan oleh Paul Ehrlich. Hibridoma

teknologi, yang menggunakan fusi sel myeloma dan B,

membantu dalam produksi in vitro antibodi monoklonal.

Namun, teknologi ini dikembangkan oleh Kohler dan

Milestein tidak terlalu membantu karena sebagian besar antibodi

berasal dari murine dan memiliki masalah rendah

imunogenisitas. Penerapan DNA rekombinan

teknologi menghasilkan pengembangan chimeric dan

antibodi manusiawi dengan efisiensi dan aktivitas tinggi.

Karena kemanjurannya pada kanker, sudah ada

kegiatan luar biasa dalam mengembangkan antibodi monoklonal

untuk terapi manusia. Pada manusia, antibodi diklasifikasikan sebagai

anggota lima keluarga atau isotipe. Ini dinamai sebagai

immunoglobulin alpha, (IgA), delta (IgD), epsilon (IgE),

gamma (IgG) dan mu (IgM). Sebagian besar isotipe miliki

berat molekul sekitar 160-190 kD kecuali IgM yang

berat molekul sekitar 1000kD karena pentameriknya

alam. Antibodi yang paling umum pada manusia adalah IgG dan
sebagian besar antibodi terapeutik adalah tipe IgG.

Meskipun antibodi bekerja pada varietas jalur yang luas,

antibodi terapeutik bekerja pada salah satu dari empat berikut

cara (a) sebagai imunotoksikoterapi dimana antibodi

mencegah atau membalikkan efek racun dari racun, racun, obat atau

ligan (b) penghancuran sel target, tempat antibodi

digunakan untuk menghancurkan sel target seperti limfosit,

sel kanker dll. (c) perubahan fungsi sel dan

akhirnya (d) pengiriman obat dimediasi antibodi, di mana obat

dikonjugasikan dengan antibodi untuk penargetan spesifik. Untuk

produksi skala besar antibodi monoklonal,

ekspresi gen antibodi monoklonal tercapai

melalui teknologi DNA rekombinan. Lebih dari 20

antibodi monoklonal telah disetujui untuk penggunaan manusia.

Tabel 5 mencantumkan beberapa antibodi monoklonal yang penting

sebagai hasil dari teknologi DNA rekombinan. Itu diharapkan

yang dalam waktu dekat, karena produksi yang manusiawi

antibodi menggunakan teknologi DNA rekombinan, akan ada

lebih banyak Mab di pasar.

6.0 Tanaman transgenik sebagai sumber bio-farmasi

Tumbuhan merupakan bioreaktor yang paling efisien

menghasilkan jumlah material dengan sinar matahari dan berbasis tanah

nutrisi sebagai input. Upaya sedang dilakukan untuk mengganti

prosedur fermentasi tradisional untuk produksi

biofarmasi untuk produksi berbasis tanaman. Keuntungan-keuntungan

menggunakan tanaman adalah kemampuan untuk meningkatkan produksi pada tingkat

rendah

biaya dengan menanam lebih banyak hektar, daripada membangun

kapasitas fermentasi, modal yang lebih rendah dan biaya operasi,

pemrosesan hilir yang disederhanakan, dll. Obat terapi untuk

mengobati kanker, penyakit menular, penyakit autoimun,

penyakit kardiovaskular dan beberapa kondisi lainnya

vaksin berpotensi ditanam di tanaman. Menanam

teknologi transgenik sedang digunakan untuk menghasilkan tanaman itu

akan menghasilkan benih yang mengekspresikan terapi yang diinginkan

protein. Benih ini dapat berkembang biak di bawah pertumbuhan yang tepat

kondisi untuk menghasilkan tanaman dan stok benih untuk memproduksi

protein yang diinginkan. Protein yang diinginkan dapat diekstraksi

benih untuk membuat biofarmasi. Berbasis tanaman

terapi diharapkan jauh lebih efektif dari segi biaya.

Misalnya, Dow Plant Pharmaceuticals menggunakan jagung untuk

menumbuhkan obat-obatan dengan merancang dan memilih pabrik

yang akan mengandung farmasi aktif dalam

kompartemen benih endosperma. Manfaat menghasilkan

obat-obatan dalam jagung termasuk penyimpanan jangka panjang

keuntungan, pemurnian lebih mudah mengingat jumlah terbatas

protein biji larut dalam biji jagung, beban mikroba rendah,

aktivitas proteolitik rendah dan promotor khusus untuk memungkinkan

ekspresi protein di bagian spesifik tanaman.

7.0 Vaksin yang dapat dimakan

Tanaman tanaman menawarkan bioreaktor yang hemat biaya untuk diekspresikan

antigen yang dapat digunakan sebagai vaksin yang dapat dimakan. Gen

pengkodean protein antigenik dapat diisolasi dari patogen dan diekspresikan dalam tanaman
dan transgenik tersebut

tanaman atau jaringannya yang memproduksi antigen dapat dimakan

vaksinasi / imunisasi (vaksin yang dapat dimakan). Itu

ekspresi protein antigenik seperti pada tanaman seperti pisang

dan tomat bermanfaat untuk imunisasi manusia sejak itu

Buah pisang dan tomat bisa dimakan mentah. Dapat dimakan

vaksin yang diproduksi di pabrik transgenik sudah bagus

keuntungan seperti pengentasan masalah penyimpanan, mudah

sistem pengiriman dengan pemberian makan dan biaya rendah dibandingkan dengan

vaksin rekombinan yang dihasilkan oleh fermentasi bakteri.

Vaksinasi orang terhadap penyakit mengerikan seperti kolera

dan hepatitis B dengan memberi mereka makan pisang / tomat, dan

memvaksinasi hewan terhadap penyakit penting seperti kaki

dan penyakit mulut dengan memberi makan mereka gula bit bisa a

kenyataan dalam waktu dekat.

8.0 Penerapan DNA Rekombinan di Lingkungan

Sebagian besar aplikasi lingkungan

bioteknologi menggunakan mikroorganisme yang terjadi secara alami

(bakteri, jamur, dll.) untuk mengidentifikasi dan memfilter pembuatan

limbah sebelum dimasukkan ke lingkungan.

Program bioremediasi melibatkan penggunaan

mikroorganisme sedang dalam proses pembersihan

udara yang terkontaminasi, jejak tanah, danau dan saluran air.

Teknologi rekombinan membantu dalam meningkatkan kemanjuran

proses ini sehingga proses biologis dasar mereka

lebih efisien dan dapat menurunkan bahan kimia yang lebih kompleks

dan volume bahan limbah yang lebih tinggi. DNA rekombinan

teknologi juga sedang digunakan dalam pengembangan

bioindikator di mana bakteri telah secara genetik

dimodifikasi sebagai 'bioluminescors' yang mengeluarkan cahaya sebagai respons

ke beberapa polutan kimia. Ini sedang digunakan untuk

mengukur keberadaan beberapa bahan kimia berbahaya di Internet

lingkungan Hidup. Sensor genetik lain yang bisa digunakan untuk itu
mendeteksi berbagai kontaminan kimia yang juga sedang terjadi

uji coba dan termasuk sensor yang dapat digunakan untuk melacak caranya

polutan secara alami terdegradasi di air tanah. Untuk

contoh ketika gen seperti gen resistensi merkuri

(mer) atau gen degradasi toluena (tol) terkait dengan

gen yang mengkode bioluminesensi dalam bakteri hidup

sel, sel-sel biosensor dapat menandakan tingkat yang sangat rendah

merkuri anorganik atau toluena yang ada di Indonesia

air dan tanah yang terkontaminasi dengan memancarkan cahaya tampak,

yang dapat diukur dengan fluro meter serat optik.

9.0 Analisis DNA dalam Identifikasi Kejahatan

Tersangka:

Mungkin mustahil bagi seseorang untuk melakukan kejahatan

tanpa meninggalkan jejak DNA-nya. Rambut,

bercak darah dan bahkan sidik jari konvensional mengandung

jejak DNA, cukup untuk dipelajari oleh polimerase

reaksi berantai (PCR). Analisisnya tidak harus

dilakukan segera dan dalam beberapa tahun terakhir sejumlah masa lalu

kejahatan telah diselesaikan dan penjahat diadili

karena pengujian DNA yang telah dilakukan

bahan yang diarsipkan. Dasar dari sidik jari genetik dan

Profiling DNA adalah satu-satunya kembar identik

individu yang memiliki salinan identik manusia

genom. Genom manusia kurang lebih sama di

semua orang - gen yang sama akan berada dalam urutan yang sama dengannya

membentang DNA intergenik yang sama di antara mereka. Tapi

genom manusia, serta orang-orang dari organisme lain,

mengandung polimorfisme, posisi tempat nukleotida

urutan tidak sama di setiap anggota

populasi. Situs polimorfik yang digunakan sebagai DNA

penanda dalam pemetaan genom termasuk fragmen pembatasan

polimorfisme panjang (RFLP), pengulangan tandem pendek

(STR) dan polimorfisme nukleotida tunggal (SNP). Semua

tiga dapat terjadi di dalam gen maupun di intergenik

daerah, dan semuanya ada beberapa juta di antaranya

situs polimer I genom manusia, dengan SNP menjadi

paling umum. DNA rekombinan dibuat secara buatan

dari dua atau lebih DNA yang dimasukkan ke dalam satu

molekul. Rekayasa genetika, DNA rekombinan

teknologi, modifikasi / manipulasi genetik dan gen

splicing adalah istilah yang diterapkan pada direct

manipulasi gen suatu organisme. Pengembangan dari

teknologi baru ini telah menghasilkan produksi

sejumlah besar protein medis yang ditentukan secara biokimia

signifikansi dan menciptakan potensi besar untuk

industri farmasi. Yang diturunkan secara biokimia

terapi adalah protein seluler ekstra besar untuk digunakan dalam keduanya

terapi penggantian kronis atau untuk perawatan hidup

indikasi yang mengancam. Teknologi DNA rekombinan memiliki

juga peran penting dalam ilmu forensik dalam identifikasi

penjahat, profil DNA untuk mempelajari analisis kekerabatan dan

dalam pengujian ayah.

10.0 Kesimpulan dan perspektif masa depan

RDT telah tumbuh lebih banyak dalam 15 tahun terakhir daripada hampir

bidang ilmu lainnya. Pertumbuhan ini disebabkan oleh fakta

bahwa itu telah membantu memberi manfaat bagi hampir setiap aspek manusia
kehidupan. Manfaatnya mungkin dapat dicapai suatu hari nanti

untuk membantu hampir semua orang, dalam profesi apa pun, dalam

cara positif. Meskipun ada beberapa kekhawatiran yang jelas

berbagai aspek RDT, peraturan pemerintah miliki

membantu memastikan bahwa teknologi yang kami gunakan aman dan

memiliki dampak konstruktif pada kita dan lingkungan kita dan

bahwa manfaat positif yang kita peroleh dari RDT jauh lebih besar daripada

implikasi moral dan sosial.