WEBINAR

PEMANFAATAN LABORATORIUM BSL-2

PCR PASCA PANDEMI COVID-19 :
UJI DNA PORCINE
24 November 2021
Heryani, S.Si., M.T.Pn
Manajer Laboratorium LPPOM MUI
Outline
Regulasi Halal

Persyaratan Laboratorium Molekuler

Acuan Metode Uji DNA Porcine

Validasi dan Verifikasi

Jaminan Mutu Pengujian

 Regulasi Halal
• UU No. 33/2014 (Jaminan Produk
Halal)
• UU No. 11/2020 (Cipta Kerja)
• PP No. 39/2021 (Penyelenggaraan
Bidang Jaminan Produk Halal)
• PMK No. 57/2021 (Tarif Layanan BLU
BPJPH)
• KMA No. 748/2021 (Jenis Produk
Wajib Sertifikasi)
• Kep KaBadan No. 57/2021 (Kriteria
SJPH)
 Regulasi Halal
Proses sertifikasi halal:
1. Persiapan sertifikasi halal oleh perusahaan
terhadap pemenuhan Sistem Jaminan Halal (SJH /
HAS 23000)
2. Pendaftaran melalui BPJPH (SIHALAL) dan LPPOM
MUI (CEROL)
3. Pemeriksaan halal :
 Pembayaran biaya sertifikasi
 Pemeriksaan Pre Audit
 Audit dan Pengambilan sampel*
 Evaluasi hasil audit / post audit dan Pengujian
sampel*
 Keputusan SJH & Ketetapan Halal
 Penerbitan Status/Sertifikat SJH dan Ketetapan
Halal
4. Penerbitan Sertifikat Halal di BPJPH
 Regulasi Halal
Pengujian laboratorium dilakukan terhadap :
1. Bahan yang diragukan kehalalannya (PP No.
39/2021 Pasal 71, SK18/Dir/LPPOM
MUI/X/20)
2. Produk tertentu seperti produk berbahan
hewan (olahan daging, gelatin, enzim, dll),
minuman, kosmetika, tinta pilkada, dll
(SK18/Dir/LPPOM MUI/X/20)
3. Fasilitas : Validasi pencucian
Persyaratan Laboratorium Molekuler
Acuan Metode Uji DNA Porcine
• ISO/TS 20224-3:2020
• SNI ISO 20224-3:2021
• GSO CD 05/2018
• MS 2627:2017
• GB/T 25165-2010
Acuan Metode Uji DNA Porcine
Metode Ekstraksi
Acuan Metode Uji DNA Porcine
Acuan Metode Uji DNA Porcine
Reaksi PCR
Acuan Metode Uji DNA Porcine
Acuan Metode Uji DNA Porcine
 Validasi dan Verifikasi
Validasi Verifikasi
Parameter
Broeders et. al., 2014 BVL, 2016 FDA, 2019 KAN K-03.06
Spesifisitas/Selektivitas √ √ √
Sensitivitas/LOD √ √ √ √
PCR Efficiency (ɛ) √
Linearitas (R2) √
Robustness √ √ √
False Positive/Negative Rate √ √ √ √
Extraction Efficiency √
Presisi (Repitabilitas &
√
Reprodusibilitas)
Validasi dan Verifikasi
• Spesivitas/selektivitas : mengevaluasi cross-reactivity dengan DNA non target yang
serupa/dekat
 Theoritical/In-silico test : cek sekuens primer dan probe pada data base (ex. BLAST
pada GenBank)
 Experimental test : menguji pada sejumlah sampel target dan non target
• False Positive/Negative Rate :
Validasi dan Verifikasi
• Sensitivitas/LOD : pengenceran DNA target berseri pada DNA background (opsional) yang
menghasilkan hasil positif pada 12 ulangan (LOD95%).
• Linearitas : R2 ≥ 0,98 dengan nilai slope berada pada rentang -3,9 ≤ slope ≤ -2,9.
• PCR Efficiency (ɛ) : 80 – 120 % berlaku untuk kualitatif dengan multiplex PCR (Broeders et al.
2014).
1
− 𝑠𝑙𝑜𝑝𝑒
ɛ = 100 𝑥 (10 − 1)
• Efisiensi ekstraksi : spike analit target pada matriks sebelum proses ekstraksi untuk memastikan
apakah metode ekstraksi cukup dan reproducible.
• Repeatability: pengujian berulang untuk mendapatkan hasil yang sama, misal 3 sampel negatif
dan 3 sampel positif pada operator dan/atau waktu yang berbeda. (hasil: 100% sama)
• Reproducability: kemampuan metode pengujian untuk memberikan hasil yang konsisten melalui
pengujian 3 sampel negatif dan 3 sampel positif dengan protokol, reagen dan kontrol yang sama
oleh 3 laboratorium yang berbeda pada waktu yang bersamaan. (hasil: 100% sama)
Validasi dan Verifikasi
• Robustness: Dilakukan dengan perubahan kecil beberapa parameter yang tetap
menghasilkan true positive dan true negative menggunakan DNA target yang di-spike
dalam DNA non target pada titik LOD.
Jaminan Mutu Pengujian
• Implementasi GLP laboratorium Molekuler. Kontrol kontaminasi dengan:
 Metode fisik : kondisi ruangan (layout, workflow, air pressure), laminar/BSC,
filter tip, UV
 Metode kimia : Uracil-DNA-glycosylase (UDG)  mencegah false positive
• Kontrol positif PCR : dari DNA target
• Kontrol inhibitor PCR : penggunaan exogenous internal positive control dan DNA
template-nya  mencegah false negatif
• Kontrol negatif PCR : nuclease-free water
• Kontrol negatif metoda/Blanko Ekstraksi : nuclease-free water yang diekstraksi
bersamaan dengan sampel
• Replikasi pengujian
• Jaminan mutu tahunan : uji profisiensi, uji banding, uji spiking, uji kontrol
lingkungan, dll
TERIMA KASIH