Sterilisasi bahan eksplan dengan bahan sterilisasi adalah sebatas

membersihkan debu, cendawan, bakteri, dan kontaminan lain dari bagian

permukaan eksplan atau disebut dengan desinfektan.

Selanjutnya Inokulasi bahan eksplan. Inokulasi bahan eksplan adalah

kegiatan penanaman bahan tanam (eksplan) ke dalam media inisiasi baik berupa
media padat/cair dalam botol kultur di laminar air flow cabinet/enkas dengan
kondisi aseptik. Kondisi aseptik diperlukan untuk keberhasilan inokulasi eksplan
sehingga kegiatan inokulasi memerlukan peralatan dan bahan yang mendukung
terciptanya kondisi yang aseptik. Laminar atau enkas merupakan meja kerja steril
tempat inokulasi eksplan maka untuk menciptakan kondisi aseptik laminar atau
enkas perlu disterilisasi terlebih dahulu dengan cara menyalan lampu Ultra Violet
(UV) minimal 30 menit sebelum dioperasikan. Apabila pada enkas tidak terdapat
lampu UV, Sterilisasi dapat dilakukan dengan cara menempatkan larutan formalin
5% pada petridish/cawan petri yang diletakkan didalam enkas selama 1 malam.

Alat-alat diseksi terdiri dari pinset yang digunakan untuk menjepit

eksplan dan menanam eksplan serta scalpel beserta mata pisau digunakan dalam
pemotong eksplan. Cawan Petri atau Petridish digunakan untuk alas memotong
eksplan atau digunakan untuk menyimpan sementara bahan eksplan sebelum
diinokulasikan kedalam media kultur. Lampu bunsen atau lampu spiritus berfungsi
untuk membakar atau mensterilkan alat-alat diseksi (pinset dan pisau scalpel) dan
eksplan.

Jika sudah melakukan sterilisasi bahan eksplan dan melakukan sterilisasi

ruangan beserta Laminar atau Enkas. Langsung saja mulai menginisiasikan bahan
eksplan yang sudah steril untuk dimasukkan kedalam laminar atau enkas.
Melakukan inisiasi seperti ini harus sangat steril, mulai dari jas lab, sarung tanga,
hingga masker yang kita gunakan. Jika tidak steril, maka hati-hati saja jika bahan
eksplan akan langsung terkontaminasi sebelum dibawa ke lab kultur. Lakukan
dengan sangat teliti dan jangan melakukan hal lainnya selama menginisiasikan
eksplan.

Sterilisasi bahan tanaman, media dan peralatan. Pendampingan terkait

teknik sterilisasi dan penggunaan instrument sterilisasi sangat diperlukan.
Sterilisasi bahan tanaman biasanya menggunakan alkohol maupun produk
disinfektan lainnya. Konsentrasi sterilan dan lama waktu perendaman merupakan
tahap yang sangat penting. Sterilisasi yang baik adalah ketika tidak didapat
kontaminasi dan ekplan dapat tumbuh dan berkembang. Eksplan biji yang masih
berada pada struktur buah yang belum pecah biasanya masih steril, sehingga
perlakuan sterilisasihanya diperlukan pada struktur buahnya. Sterilisasi media dan
alat menggunakan autoklaf yang diatur suhu dan tekanannya. Suhu yang
dibutuhkan untuk sterilisasi biasanya mencapai 121oC, dan tekanan 1.5 atm,
selama 1 jam untuk peralatan, dan 20 menit untuk media

Enkas adalah suatu ruang penanaman steril yang membatasi udara keluar
masuk.