Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Produksi Enzim Sampah dari Berbagai Limbah Buah dan Sayur

dan Evaluasi Khasiat Enzim dan Antimikrobanya
Karuna Neupane1, Rama Khadka1
1 Padma Kanya Multiple College, Bagbazar, Kathmandu, Nepal

* Penulis yang sesuai:Rama Khadka, Dosen, Padma Kanya Multiple College, Bagbazar, Kathmandu,
Nepal; Email: khadkarama2072@yahoo.com

ABSTRAK
Tujuan:Untuk mengevaluasi kemanjuran enzimatik dan antimikroba dari enzim dari sampah yang dihasilkan dari buah-
buahan yang berbeda dan limbah sayuran.

Metode:Penelitian ini dilakukan dari Oktober-2018 hingga Februari-2019 di laboratorium Padma Kanya
Multiple College, Bagbazar, Kathmandu, Nepal. Penelitian ini dilakukan untuk produksi, analisis efikasi
enzimatik dan antimikroba dengan menggunakan ragi (Saccharomyces cerevisae)dan bakteri (Basiljenis)
dalam 5 kulit buah, Mosambi (Jeruk limau), Delima (Punica granatum), Nanas (Ananas comosus), Pepaya (
Carica pepaya) dan buah-buahan campuran yang dikumpulkan dari kios buah segar dan kulit sayuran
yang dikumpulkan dari asrama perguruan tinggi. Campuran fermentasi dibuat dengan perbandingan
1:3:10 (1 bagian gula merah, 3 bagian kulit buah/sayur dan 10 bagian air) dan dibiarkan selama 3 bulan
untuk fermentasi.

Hasil:Setelah fermentasi, aktivitas enzim (amilase, protease, kaseinase, selulase dan lipase) dan khasiat
antimikroba (S.aureus, S.aureus(ATCC 25923),Basilsp, SalmonellaTyphi, E.coli, E.coli (ATCC 25922),Shigellasp,
Pseudomonas aeruginosa) dianalisis. Semua sampel menunjukkan aktivitas enzim amilase dan kaseinase, hanya
Nanas (Ananascomosus), Pepaya (Carica pepaya)dan buah campuran menunjukkan aktivitas enzim protease
sedangkan hanya buah delima (Punicagranatum)menunjukkan aktivitas enzim lipase. Pada uji efikasi
antimikroba, enzim sampah yang dihasilkan dari sampel sayuran tidak menunjukkan aktivitas antimikroba
dengan bakteri yang digunakan kecualiE. coli(ATCC 25922) danS. aureus (ATCC 25923). Demikian pula enzim
sampah yang dihasilkan dari Campuran buah dan Pepaya (Carica pepaya) tidak menunjukkan aktivitas
antimikroba denganSalmonellaTyphi danS.aureus (ATCC 25923) masing-masing tetapi enzim sampah dari limbah
lain menunjukkan aktivitas antimikroba dengan bakteri yang digunakan dalam pengujian.

Kesimpulan:Limbah buah dan sayuran yang berbeda menunjukkan aktivitas enzim dan aktivitas
antimikroba yang berbeda.

Kata kunci:Enzim sampah, buah-buahan, sayuran, uji kepekaan antimikroba.

PENGANTAR dan menamakannya enzim sampah (Chelliah dan Palani

Enzim sampah adalah larutan organik yang dihasilkan dari 2015). Enzim ini merupakan senyawa organik komposit yang

fermentasi sederhana limbah sayuran segar, limbah buah terdiri dari asam-asam organik, rantai protein (enzim), dan

dengan penambahan gula merah dan air dengan garam-garam mineral yang dihasilkan dari fermentasi limbah

menggunakan mikroorganisme selektif seperti Ragi dan sayuran, buah-buahan, atau kulitnya, gula, dan air. Enzim

Bakteri (Thirumurugan 2016). Fermentasi ini menghasilkan sampah dapat diterapkan untuk menyusun, menguraikan,

cuka seperti cairan dengan protein alami, garam mineral, dan
enzim yang membuatnya sangat serbaguna di dalam dan di
luar rumah. Pada tahun 2006, seorang peneliti dari Thailand
bernama Rosukun mengembangkan solusi dari produk
menggunakan limbah padat organik
mengubah, dan mengkatalisis (Palanisamy dan Palani 2017).
Fungsi enzim sampah adalah untuk menyelesaikan
(mengurai), mengubah (mengubah), dan mengkatalisis
reduksi (Voet 2012).
Limbah buah dan sayuran diproduksi dalam jumlah besar

Tanggal Pengajuan:3 Oktober 2019 Tanggal Penerimaan:4 Desember 2019 DOI:

Diterbitkan Online:Desember, 2019 https://doi.org/10.3126/tujm.v6i0.26594

113 TUJM VOL. 6, TIDAK. 1, 2019

Neupane dan Khadka 2019, TUJM 6(1): 113-118
kuantitas di pasar dan merupakan sumber gangguan di tempat
pembuangan sampah kota karena biodegradabilitasnya yang
tinggi (Virturtia et al. 1989). Enzim sampah/jeruk berbeda dengan
enzim buah dan bukan untuk konsumsi manusia. Ini adalah
minuman bergizi yang disiapkan melalui fermentasi buah yang
tepat. Enzim sampah/jeruk digunakan sebagai pembersih rumah
tangga alami; pembersih udara; deodoran; insektisida; deterjen;
perawatan tubuh; pupuk organik dll. Ini menghilangkan bau dan
melarutkan udara beracun yang dilepaskan dari asap rokok,
knalpot mobil, sisa-sisa bahan kimia, dari produk rumah tangga
dll. Enzim yang mengalir di bawah tanah pada akhirnya akan
memurnikan sungai dan laut. Ini mengurangi nyamuk, lalat, tikus,
kecoa dll. Ini adalah antiseptik alami untuk rumah Anda. Ini
mencegah penyumbatan pipa pembuangan (Pinang 2012).
BAHAN DAN METODE
Ukuran sampel, lokasi sampel, dan durasi studi
Penelitian dilakukan pada bulan Oktober 2018 sampai
Februari 2019. Sebanyak 6 sampel termasuk 5 sampel
kulit buah yaitu Jeruk Nipis (Jeruk aurantiifolia), Nanas (
Ananas comosus), Delima(Punica granatum), Pepaya (
Carica pepaya) dan campuran buah dan satu sampel kulit
sayuran diambil untuk penelitian. Kulit buah dikumpulkan
dari berbagai kios jus segar di dekat Kampus Padma
Kanya. Begitu pula dengan kulit sayuran yang
dikumpulkan dari dapur asrama Kampus Padma Kanya.
Desain studi
Pengambilan sampel secara purposive/judgement sampling
dilakukan untuk pemilihan sampel dan desain penelitian cross-
sectional-deskriptif dilakukan.
Persiapan media fermentasi
Sampel buah dan sayuran yang dikumpulkan
dicampur dalam 1:3:10 (1 bagian molase, 3 bagian kulit
buah/sayuran dan 10 bagian air) untuk proses
fermentasi. Botol plastik kedap udara digunakan untuk
proses fermentasi. Dalam campuran ini, 3 sendok teh
bubuk ragi (Saccharomyces cerevisiae) dan 10 ml
suspensi bakteri(Basilspesies) ditambahkan. Kemudian
toples dibiarkan untuk fermentasi selama 12 minggu
(Thirumurugan 2016). Setelah 12 minggu, dilakukan uji
aktivitas enzim dan uji efikasi antimikroba. Untuk uji
enzimatik dan antimikroba, campuran yang
difermentasi disentrifugasi pada 5000 rpm selama 10
menit. Supernatan (enzim sampah mentah) digunakan
untuk menganalisis aktivitas enzim dan uji efikasi
antimikroba (Sarkar et al. 2011).
Skrining aktivitas enzim
TUJM VOL. 6, TIDAK. 1, 2019
Amilase
Untuk aktivitas enzim amilase, agar-agar dengan 1% pati
disiapkan secara aseptik. Dengan bantuan bor gabus
steril, dibuat sumur ukuran 4 mm yang diinokulasikan
50μl enzim dari sampah kemudian cawan diinkubasi
selama 48 jam pada suhu 370C. Hidrolisis pati
divisualisasikan sebagai zona bening di sekitar lubang
pelat dengan warna coklat biru tua untuk pati dengan
dibanjiri dengan larutan yodium (Emimol et al. 2012).
Diameter zona bening diukur dan tingkat aktivitas
mikroorganisme ditentukan berdasarkan diameter zona
bening yang terbentuk.
Selulase
Agar selulase dibuat dengan 1% karboksi metil selulosa
secara aseptik. Dengan bantuan penggerek gabus steril
ukuran 4mm, sumur dibuat di piring di mana 50μl enzim
dari sampah diinokulasi dalam sumur dan piring
diinkubasi pada suhu 370C selama 24 jam
- 48 jam, pelat digenangi dengan larutan kongor 0,3%
selama 10 menit. Kemudian dicuci dengan air dan
digenangi dengan NaCl 1N sebagai larutan distaining.
Produksi selulase divisualisasikan dengan zona tembus
di sekitar koloni. Diameter zona tembus cahaya diukur
dan tingkat aktivitas mikroorganisme ditentukan
berdasarkan diameter zona tembus cahaya yang
terbentuk (Thirumurugan 2016).
protease
Agar protease dibuat dengan gelatin 1% secara
aseptik. Dengan bantuan penggerek gabus steril
ukuran 4 mm, dibuat sumuran dalam cawan yang
telah diinokulasikan 50μl enzim dari sampah kemudian
cawan tersebut diinkubasi pada suhu 370c selama 24
jam-48 jam. Setelah pelat inkubasi dibanjiri dengan
larutan asam merkuri klorida dan didiamkan selama
5-10 menit, larutan berlebih dituang. Munculnya zona
bening di sekitar koloni menunjukkan hasil positif
untuk hidrolisis proteolitik gelatin oleh enzim
gelatinase. Diameter zona bening diukur dan tingkat
aktivitas mikroorganisme ditentukan berdasarkan
diameter zona bening yang terbentuk. Zona opak yang
tidak terhidrolisis dan terus menerus di sekitar
pertumbuhan menunjukkan tidak adanya enzim
gelatinase. Diameter zona bening diukur dan tingkat
aktivitas mikroorganisme ditentukan berdasarkan
diameter zona bening yang terbentuk (Emimol 2012).
kaseinase
Uji hidrolisis kasein dilakukan dengan cara inokulasi
114
 Neupane dan Khadka 2019, TUJM 6(1): 113-118

enzim sampah yang akan diuji pada cawan agar yang untuk aktivitas antimikrobanya yaitu penentuan zona
mengandung 1% susu bubuk skim. Dengan bantuan hambat terhadap organisme yang diuji dengan metode
bor gabus steril dari sumur ukuran 4 mm, dibuat 50μl difusi sumur agar seperti yang diberikan oleh Balouiri et
enzim dari sampah diinokulasi kemudian cawan al. (2016). Menurut CLSI 2012, 3-4 koloni kultur bakteri
diinkubasi pada suhu 370c selama 24 jam-48 jam. segar diinokulasi dalam kaldu nutrisi dan diinkubasi
Setelah pelat inkubasi dibanjiri dengan larutan selama 4 jam kemudian dibandingkan dengan standar
tembaga sulfat dan larutan berlebih dituang. kekeruhan 0,5 McFarland. Kapas kapas steril dicelupkan
Pembentukan zona bening diamati di sekitar sumur ke dalam inokulum yang telah disiapkan, diputar dan
dan diukur diameter zona beningnya. Diameter zona ditekan ke dinding bagian dalam atas tabung untuk
bening diukur dan tingkat aktivitas mikroorganisme
mengeluarkan kelebihan cairan. Seluruh pelat agar-agar
ditentukan berdasarkan diameter zona bening yang
digores 3 kali, memutar pelat pada 60Haisudut antara
terbentuk (Sazci et al.1986)
setiap goresan. Inokulum dibiarkan mengering selama
5-10 menit. Kemudian dengan bantuan penggerek gabus
Lipase steril 4mm, dibuat sumuran pada media plate yang telah
1% media agar hidrolisis Tween-20 disiapkan. Dengan diinokulasi kemudian 50μl suspensi sampah yang berbeda
bantuan penggerek gabus 4 mm yang steril, dibuat diinokulasikan ke dalam sumur dengan bantuan
sumuran satu plat tadi. Sumur diberi label dengan nama mikropipet. Plate kemudian dibiarkan selama setengah
sampel yang akan diinokulasi. 50μl masing-masing jam dan diinkubasi pada suhu 37 .Haic semalam. Setelah
sampel ditambahkan ke dalam sumur. Pelat berada pada inkubasi, pelat dilihat untuk zona hambat (zona bening)
suhu 37°C selama 24 jam. Setelah inkubasi, zona bening
tanpa pertumbuhan di sekitar sumur. Zona hambat diukur
hidrolisis diamati di sekitar sumur (Emimol 2012).
dengan menggunakan skala dan rata-rata dicatat. Untuk
Uji kemanjuran antimikroba kontrol kualitas aktivitas antimikroba, kultur ATCC dariS.
Ekstrak kasar enzim sampah disaring aureus (ATCC 25923) danE. coli(ATCC 25922) digunakan.
HASIL
Tabel 1: Aktivitas enzim enzim sampah kasar pada media agar-agar tertentu
Zona hambat (mm) di media yang berbeda
Nama sampel Hidrolisis pati agar-agar Susu skim Dua belas-20 Selulosa
agar hidrolisagar agar agar hidrolisis agar hidrolisis
Mosambi(Jeruk
29 0 10 0 0
limetta)
Delima(Punika
35 13 18 28 0
granatum)
nanas(Nanas
28 15 12 0 0
koma)
Pepaya(Carica
21 10 10 0 0
pepaya)
Buah Campuran 23 8 12 0 0
Sayuran 25 0 9 0 0

Tabel 2 Aktivitas Antimikroba dari Crude Waste Enzym pada Bakteri Gram Positif
Zona hambat (mm) pada bakteri Gram positif
Nama sampel
S. aureus S. aureus(ATCC 25923) Basilsp
Mosambi
16 16 18
(jeruk limau)
Delima
30 25 18
(punica granatum)
nanas
23 24 22
(Ananas comosus)
Pepaya
18 0 13
(Carica pepaya)
Buah Campuran 12 14 16
Sayuran 0 19 0

115 TUJM VOL. 6, TIDAK. 1, 2019

Neupane dan Khadka 2019, TUJM 6(1): 113-118

Tabel 3: Aktivitas Antimikroba dari Crude Waste Enzym pada Bakteri Gram Negatif.
Zona hambat (mm) pada bakteri Gram negatif
Nama sampel pseudomonas E. coli(ATCC
Shigellasp Salmonella typhi E. coli
aeruginosa 25922)
Mosambi(jeruk limau) 20 17 20 18 24
Delima(Punika
19 13 18 24 21
granatum)
nanas(Ananas comosus) 28 25 20 18 27
Pepaya(Carica pepaya) Buah 17 21 15 14 14
Campuran 20 18 0 17 19
Sayuran 0 0 0 0 23

V = Sayuran
MF = Buah campur

Po = Delima
C = Kontrol

Foto 1: Aktivitas enzim amilase dari enzim sampah mentah

Pi = Nanas
P = Pepaya

Po = Delima
Pusat = kontrol

Foto 2: Uji efikasi antimikroba dari enzim sampah mentah pada spesies Bacillus

TUJM VOL. 6, TIDAK. 1, 2019 116


DISKUSI
Pada pelat agar-agar gelatin, hanya Nanas (15mm), Pepaya
(10mm) dan Campuran buah (8mm) yang menunjukkan
aktivitas enzim protease. Analisis aktivitas enzim protease
pada pelat agar-agar gelatin oleh Thirumurugan (2016)
mengambil sampel Jeruk, Delima, Mosambi dan Semangka
menganalisis bahwa pada sampel buah delima aktivitasnya
sedikit lebih tinggi dibandingkan sampel lainnya. Dalam
penelitian Thirumurugan, buah delima menunjukkan zona
hambat sebesar 34mm. Namun buah delima tidak
menunjukkan aktivitas enzim protease, hal ini disebabkan
karena perbedaan waktu fermentasi sampel. Dalam penelitian
yang dilakukan oleh Madhumithah et al. (2011) menggunakan
lima sampel limbah sayuran seperti Kentang, Terung, Labu,
Kembang Kol dan Kubis, enzim protease yang dihasilkan dari
fermentasi solid state menggunakanAspergillus niger
menunjukkan produksi enzim maksimum dalam kasus
substrat kembang kol dengan aktivitas 1,082 U g-1 dan
produksi minimum 0,43 U g-1 substrat kentang. Enzim
protease diproduksi di kedua penelitian tetapi perbedaan
didasarkan pada apakah enzim protease diproduksi atau tidak
sedangkan jumlah total protease yang diproduksi di setiap
sampel per gram substrat dihitung dalam penelitian
Madhumithah et al. (2011).
Pada agar hidrolisis pati, keenam sampel menunjukkan
aktivitas enzim amilase. Delima menunjukkan aktivitas
enzim amilase maksimum (35mm) sedangkan Pepaya
menunjukkan aktivitas enzim amilase minimum (21mm).
Namun, dalam penelitian yang dilakukan oleh
Thirumurugan (2016) dalam hal aktivitas enzim amilase
pada cawan agar caesine, Jeruk, Mosambi, Semangka dan
Delima dimasukkan sebagai sampel, hanya Semangka
(15mm) dan kapur (19mm) yang menunjukkan aktivitas
amilase. Perbedaan ini mungkin disebabkan oleh
perbedaan waktu fermentasi dan perbedaan pelat agar
yang digunakan.
Dalam penelitian ini, keenam sampel limbah buah dan
sayuran menunjukkan hidrolisis kasein. Di antara semua
sampel Delima menunjukkan hidrolisis kasein maksimum
(18mm) sedangkan sampel sayuran menunjukkan
hidrolisis kasein minimum (9mm). Hal ini dapat
disimpulkan bahwa semua sampel menghasilkan enzim
kaseinase selama fermentasi.
Tidak ada sampel buah dan sayuran yang menunjukkan
aktivitas enzim selulase yang berarti tidak ada produksi
selulase selama fermentasi di semua sampel. Namun
dalam penelitian yang dilakukan oleh Thirumurugan
117
Neupane dan Khadka 2019, TUJM 6(1): 113-118
(2016) mengambil sampel Jeruk, Semangka, Mosambi dan
Delima, hanya semangka (18mm) dan Mosambi (12mm)
yang menunjukkan aktivitas enzim selulase namun buah
delima tidak menunjukkan aktivitas enzim selulase yang
berarti buah delima tidak dapat menghasilkan enzim
selulase . Mosambi tidak menunjukkan aktivitas enzim
selulase yang dapat menjadi faktor perbedaan seperti pH
enzim sampah, suhu dll. Lama fermentasi sampel juga
dapat mempengaruhi aktivitas enzim selulase. Di antara
enam sampel buah dan sayuran yang berbeda, hanya
Delima yang menunjukkan aktivitas enzim lipase. Ini
mungkin juga bahwa hanya sampel buah delima yang
menghasilkan aktivitas enzim lipase selama fermentasi.
Pada penelitian ini aktivitas antimikroba enzim dari sampah
pada bakteri Gram positif dan Gram negatif menunjukkan
zona hambat yang berbeda. Sampah enzim yang dihasilkan
dari Pepaya (Carica pepaya) dan buah campuran tidak
menunjukkan aktivitas antimikroba denganS. aureus(ATCC
25923) danSalmonellaTyphi masing-masing sedangkan enzim
sampah yang dihasilkan dari limbah sayuran menunjukkan
aktivitas antimikroba hanya denganS. aureus(ATCC 25923)
danE. coli(ATCC 25922). Enzim sampah yang dihasilkan dari
sampel lain menunjukkan aktivitas antimikroba dengan
bakteri Gram positif dan Gram negatif yang digunakan dalam
pengujian. Namun, dalam penelitian yang dilakukan oleh
Saramanda dan Kaparapu (2017), aktivitas antimikroba dari
enzim sampah dari ekstrak kulit buah jeruk menunjukkan
zona hambat yang lebih tinggi. Hal ini diamati dengan
menggunakan 150μl larutan enzim sampah, zona hambat
untukE. coli, S. aureus, Streptococcus pyogens, Salmonella
Typhi danPseudomonas eruginosaadalah 11mm, 10mm,
10mm, 13mm dan 9mm masing-masing. Perbedaan zona
hambat ini mungkin disebabkan oleh perbedaan jenis sampel
yang menghasilkan enzim sampah. Juga, konsentrasi enzim
sampah yang tersebar di sumur berbeda di kedua penelitian.
KESIMPULAN
Limbah buah dan sayuran yang berbeda menunjukkan aktivitas
enzim dan aktivitas antimikroba yang berbeda. Enzim yang
dihasilkan dari sampah menunjukkan aktivitas antimikroba
dengan bakteri Gram positif dan Gram negatif sehingga enzim
sampah harus dimanfaatkan untuk membunuh/menghambat
patogen di rumah maupun di laboratorium.
UCAPAN TERIMA KASIH
Kami ingin mengucapkan terima kasih kepada Departemen
TUJM VOL. 6, TIDAK. 1, 2019
Neupane dan Khadka 2019, TUJM 6(1): 113-118
Science, Padma Kanya Multiple Campus, Bagbazar yang telah
memberikan kesempatan untuk melakukan penelitian ini.
Kami juga sangat berterima kasih dan berhutang budi kepada
Bapak Amrit Acharya, Departemen Mikrobiologi, Kampus
Ganda Padma Kanya atas saran yang berharga.
KONFLIK KEPENTINGAN
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.
REFERENSI
Balouiri M, Sadak M dan Ibnsounda SK (2016). Metode
untuk in vitro mengevaluasi aktivitas antimikroba.J
Pharm Anal6: 71-79.
Chelliah A dan Palani S (2015). Investigasi
potensi biokatalitik enzim sampah dan
pengaruhnya terhadap stabilisasi lumpur aktif
limbah industri.Keamanan Proses dan
Perlindungan Lingkungan94:471-478.
Emimol A, Ganga G, Parvathy R, Radhika G dan Nair
GM (2012). Penapisan mikroba penghasil enzim
hidrolitik ekstraseluler dari tempat pembuangan
limbah perusahaan dan limbah rumah tangga
untuk peningkatan metode bioremediasi.IOSR-
JPBS4(1): 54–60.
Madhumithah CG, Krithiga R, Sundharam S, Changam
SS, Guthakurta S dan Cherian KM (2011). Pemanfaatan
limbah sayuran untuk produksi protease melalui
fermentasi solid state dengan menggunakan
Aspergillus niger. Ilmu Pertanian Dunia J7(5): 550-555.
Palanisamy S dan Palani (2017). Optimalisasi lipase
produksi dari limbah padat organik dengan pencernaan
anaerobik dan penerapannya dalam produksi biodiesel.
Teknologi Proses Bahan Bakar165: 1-8.
TUJM VOL. 6, TIDAK. 1, 2019
Pinang PS (2012). Ubah iklim. http://www.
enzymeos.com diakses pada 16 Agustus 2019.
Saramanda G dan Kaparapu J (2017). Antimikroba
aktivitas ekstrak kulit buah jeruk yang
difermentasi.Jurnal Int Penelitian dan Aplikasi
Teknik7: 25-28.
Sarkar P, Meghvanshi M dan Singh R (2011). Mikroba
consortinum: Pendekatan dalam degradasi
efektif limbah dapur organik. IJEST2(3): 170-174.
Sazci A, Erenler K dan Radford A (1986). Deteksi
jamur selulolitik dengan indikator Congo red:
studi banding dengan metode pereaksi asam
dinitrosalisilat.Bakteri J Appl61(6): 559–562.
Selvakumar P dan Sivashanmugam P (2017).
Optimalisasi produksi lipase dari limbah padat
organik dengan pencernaan anaerobik dan
aplikasinya dalam produksi biodiesel.Teknologi
Proses Bahan Bakar165: 1-8.
Thirumurugan P (2016). Produksi dan analisis
enzim bio-cleaners dari limbah buah dan sayuran
dengan menggunakan ragi dan bakteri. Laporan
proyek siswa (DORc.No.1082/2015A; Proyek No: 28)
diserahkan ke Dewan Pendidikan Tinggi Negara
Bagian Tamil Nadu (TANSCHE), India hlm: 4-6.
Viturtia A, Alvarez JM, Cecchi F dan Fazzini G (1989).
Pencernaan anaerobik dua fase dari campuran
limbah buah dan sayuran.Limbah Biol29: 189-99.
Voet V (2012). Cara menghemat energi (2012). http://
www.waystosaveenergy.net diakses pada 16
Agustus 2019.
118