TUGAS TERSTRUKTUR

TAHAPAN PEMBUATAN OVERPRODUKSI BEBERAPA ASAM AMINO OLEH

MIKROBIUM DALAM SKALA INDUSTRI

Nama : Ajeng Mareta Astiyani

 Asam Glutamat
Asam glutamat atau yang sering disebut dengena Monosodium glutamat (MSG)
merupakan perasa yang kuat dibuat dari fermentasi. Organisme-organisme yang mampu
menghasilkan MSG dalam produksi yang banyak seperti spesies Micrococcus,
Corynebacterium, Brevibacterium, Microbacterium memiliki taksonomi yang sama, ditambah
dengan bakteri Brevibacterium lactofermentum dan Brevibacterium flavum diklasifikasikan
sebagai C. Glutamicum ssp. lactofermentum dan ssp. flavum. Organisme – organisme
tersebut mempunyai jalur glikolitik Embden-Meyerhof (EMP), jalur pentosa monofosfat,
siklus TCA dan bypass glioksilat. Oksaloasetat sangat diperlukan untut disintesis terus
menerus dalam siklus TCA yang menggantikan zat antara untuk sintesis biomassa dan asam
amino (Shancez, dkk., 2017).

Ekspresi glutamat yang terus menerus perlu dilakukan. Semua overproducer glutamat
adalah auxotroph biotin alami. Biotin merupakan kofaktor asetil-KoA untuk biosintesis asam
lemak. Pada suatu penelitian dilaporkan bahwa penambahan penisilin ke dalam sel bakteri
yang tumbuh dalam biotin tinggi menghasilkan asam glutamat. Adanya tingkat bitin yang
tidak terbatas menghasilkan penghalang permeabilitas sel pembungkus sehingga membatasi
jalan keluar asam amino intraseluler keluar dari sel termasuk glutamat. Penghambatan
biosintesis dinding sel oleh penisilin mengubah sifat permeabilitas sel amplop dan
memungkinkan glutamat keluar dari sel. Komposisi lipid dari sel akan berubah yang
mendukung keluarnya glutamat secara aktif dari sel. Selain itu, pembatasan oleat dari
auksotrof oleat dan gliserol dari auxotroph gliserol juga menghasilkan ekskresi glutamat.
Kemudian, sel-sel ekskresi glutamat ditemukan mengalami penurunan dalam jumlah besar
dalam lipid sel terutama fosfolipid. Dengan demikian, ekskresi glutamat tingkat tinggi
membutuhkan penghambatan pertumbuhan dengan adanya sumber karbon dan energi yang
tidak terbatas, dan perubahan regangan pada amplop yang disebabkan oleh defisiensi biotin,
oleat atau gliserol atau penambahan zat tertentu (Shancez, dkk., 2017).

Kemungkinan lain yang dapat dilakukan untuk membuat produksi berlebih pada asam
glutamat adalah adanya pengaruh penurunan aktivitas α-ketoglutarate dehydrogenase
(ODHC) terhadap peningkatan ekskresi glutamat. Mutan C. glutamicum dengan penghapusan
gen odhA, yang mengkodekan subunit E1 dari ODHC, ditemukan dapat menghasilkan
glutamat tingkat tinggi tanpa adanya pembatasan biotin atau penambahan penisilin. Akan
tetapi, perubahan fluks metabolik ODHC saja sudah cukup untuk menyebabkan sekresi
glutamat. Kompleks ini diatur oleh mekanisme yang melibatkan protein 15 kDa bernama
OdhI dan protein kinase serin / treonin G (PknG). OdhI berikatan dengan subunit E1 (OdhA)
dari ODHC dalam keadaan tidak terfosforilasi kemudian, aktivitasnya akan terhambat.
Penghambatan dihilangkan dengan fosforilasi OdhI pada residu threonine 14 oleh PknG
dalam kondisi yang membutuhkan aktivitas ODHC yang tinggi (Shancez, dkk., 2017)

 Lisin

Lisin merupakan anggota kelompok dari asam amino aspartat. Mutan auksotrofik dan
regulatoris dari galur glutamat digunakan untuk memproduksi lisin berlebih. Dengan
penghilangan genetik dari homoserine dehydrogenase, strain Corynebacterium galur murni
yang memproduksi glutamat diubah menjadi mutan yang memproduksi berlebih lisin yang
tidak dapat tumbuh kecuali apabila metionin dan treonin ditambahkan ke medium. Selama
suplemen treonin dijaga tetap rendah, konsentrasi treonin intraseluler menjadi terbatas dan
penghambatan umpan balik dari aspartat kinase dilewati, menyebabkan ekskresi lebih dari 70
g l-1 lisin dalam cairan kultur. Pada beberapa galur, penambahan metionin dan isoleusin ke
dalam medium meningkatkan produksi berlebih lisin. Seleksi untuk resistensi S-2-
aminoethylcysteine (AEC; thialysine) memblokir penghambatan umpan balik (hingga 1 mM
l-lisin ditambah 5 mM l-threonine) aspartate kinase. Antimetabolit lain yang berguna untuk
deregulasi aspartat kinase adalah campuran α-ketobutyrate dan aspartate hydroxamate.
Auksotropi leusin juga dapat meningkatkan produksi lisin (Shancez, dkk., 2017).

Rekonstruksi strain berbasis genom digunakan untuk meningkatkan tingkat produksi lisin
dari C. glutamicum dengan membandingkan galur B-6 yang berproduksi tinggi (laju produksi
sedikit kurang dari 2 g l − 1 jam − 1) dengan strain galur murni. Galur produksi (B ‐ 6) C.
glutamicum dari Kyowa Hakko menghasilkan sekitar 100 g l − 1l-lisin . Analisis transkriptome
mengungkapkan bahwa B-6, dibandingkan dengan galur murni, diregulasi dalam jalur
pentosa-fosfat dan gen biosintesis asam amino dan diturunkan pada gen siklus TCA. Titer
lisin diketahui setinggi 170 g l-1. Perbandingan 16 gen dari strain B-6, enzim pengkode jalur
dari glukosa ke lisin, mengungkapkan mutasi pada lima gen. Pengenalan tiga mutasi ini
(hom, lysC dan pyc encoding homoserine dehydrogenase, aspartokinase dan piruvat
karboksilase masing-masing) menciptakan strain baru yang menghasilkan 80 g l − 1 dalam 27
jam, pada tingkat 3 g l-1 h − 1, tingkat tertinggi yang pernah dilaporkan untuk fermentasi lisin.
Peningkatan tambahan (15%) dalam produksi lisin diamati dengan pengenalan mutasi pada
gen dehydrogenase 6-phosphogluconate (gnd). Analisis enzimatik mengungkapkan bahwa
enzim mutan itu kurang sensitif daripada enzim galur murni terhadap penghambatan alosterik
oleh metabolit intraseluler. Analisis fluks metabolik berbasis isotop menunjukkan bahwa
mutasi gnd menghasilkan peningkatan fluks karbon 8% melalui jalur pentosa fosfat selama
produksi lisin (Shancez, dkk., 2017).

DAFTAR PUSTAKA

Sanchez, S., dan A. L. Demain. 2008. Metabolic regulation and overproduction of primary
metabolites. Microbial biotechnology. 1(4) : 283–319. https://doi.org/10.1111/j.1751-
7915.2007.00015.x