ELISA IB

(16 serum)
Kodel sampel
- Kandang A : A1-A8
- Kandang B : B1-B8
Buatlah
1. PZ : 400 ml
Brp gram NaCl harus ditimbang?
2. Washing Buffer (WB)
- 400 ml PZ + 0,4 ml triton
- Brp % Tritonnya ?
3. Blocking Buffer (BB)
- creamer 5% = ?
- Bagaimana cara membuatnya ?
- Buatlah 30 ml dalam pelarut WB
Blocking
- Setelah proses blocking selesai dan microplate diinkubasi, hitung berapa BB yang
tersisa
- Jadikan BB 5% sisa tadi dan menjadi larutan 1% tambah dengan menggunakan
buffer washing
- Bagaimana caranya?
- BB 1% selanjutnya disebut sebagai Buffer assay
Penambahan Sampel
- Setelah buffer assay disiapkan
- Lakukan pengenceran As IB 1:500
- Bagaimana caranya jika kita membuat larutan sebanyak 1 ml?
- Masukan masing-masing sampel @ 100 mikroliter/well secara duplo pada
microplate
- Apa itu duplo dan mengapa perlu duplo?
- Inkubasi : 37o C 1 jam
Penambahan Konjugat
- Setelah washing
- Lakukan penambahan konjugat : anti-chicken berlabel Alkaline Phospatase (AP)
- Pengenceran 1:4000
- Bagaimana caranya?
- Masukkan konjugat @100 mikroliter/well
- Inkubasi :37oC 1 jam
Perhitungan di tabel Excel ELISA Latihan
- Tentukan berapa rata-rata titer antibodi tiap kelompok (Kel A dan B)
- Tentukan pula berapa nilai SD nya?
- Tentukan pula veradapa nila CV nya?
 CV = SD/rata-rata x 100%
CV < 30% artinya baik
CV 30-50% artinya sedang
CV > 50% artinya jelek
- Berikan kesimpulan berdasarkan jurnal yang anda baca (sebutkan jurnal yang
sudah dibaca sebagai acuan)
- Bandingkan hasil Kd A dan Kd B mana yang baik?
- Ingat kekebalan ayam adalah kekebalan populasi bukan individual !

Bahan Diskusi

1. Juka coating Ag menggunakan Ag IB strain H120, kemudian digunakan untuk

menguji As hasil vaksinasi dengan strain H120, bagaimana hasilnya? Sebutkan
jurnal yang sdr baca
2. Sebaliknya jika digunakan untuk menguji As hasil vaksinasi dengan strain
Connecticut, bagaimana hasilnya? Sebutkan jurnal yang sdr baca

ELISA RABIES
(14 serum)
Kode sampel D1-D14
Buatlah
1. PZ : 300 ml
Brp gram NaCl harus ditimbang?
2. Washing Buffer (WB)
- 300 ml PZ + 0,3 ml triton
- Brp % Tritonnya ?
3. Blocking Buffer (BB)
- creamer 4% = ?
- Bagaimana cara membuatnya ?
- Buatlah 30 ml dalam pelarut WB
Blocking
- Setelah proses blocking selesai dan microplate diinkubasi, hitung berapa BB yang
tersisa
- Jadikan BB 4% sisa tadi dan menjadi larutan 1% tambah dengan menggunakan
buffer washing
- Bagaimana caranya?
 - BB 1% selanjutnya disebut sebagai Buffer assay
-
Penambahan Sampel
- Setelah buffer assay disiapkan
- Lakukan pengenceran As Rabies 1:100
- Bagaimana caranya jika kita membuat larutan sebanyak 1 ml?
- Masukan masing-masing sampel @ 100 mikroliter/well secara duplo pada
microplate
- Apa itu duplo dan mengapa perlu duplo?
- Inkubasi : 37o C 1 jam
Penambahan Konjugat
- Setelah washing
- Lakukan penambahan konjugat : anti-dog berlabel HRP
- Pengenceran 1:5000
- Bagaimana caranya?
- Masukkan konjugat @100 mikroliter/well
- Inkubasi :37oC 1 jam
Hitung
- Hitung rata-rata standard pada kolom 5 & 6
 Rata-rata masing-masing standard
- Hitung rata-rata OD kontrol positif
- Hitung rata-rata OD blank
- Dan rata-rata masing-masing As uji yang ad apada kolom 1-4
- Cocokkan OD masing-masing sampel dengan OD standard, kemudian kalikan dengan
kada EU
- Misal OD sampel 1 setara dengan OD stad 4 :
*Hasil pembacaan rabies tidak menggunakan rumus tetapi memakai analog
(kemiripan)
OD1 : OD1’ x kadar standard
0,475 x 0,3125 = 0,312 EU/ml
0,476

Buatlah Grafik Ab standard

- Buatlah grafik pada antibodi standard berdasarkan kadar antibodi (sumbu X) dan nilai
OD (sumbu Y)
- Kemudian lakukan analisis dimana letak kadar antibodi tersebut pada garis kurva
(berikan tanda titik pada lokasi tersebut)