PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

Volume 8 Nomor 4 November 2019

UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN Stylissa sp. DENGAN METODE

DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)
Muhammad Setiawan Ikhrar1), Adithya Yudistira 1), Defny S. Wewengkang1)
Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

ABSTRACT
This study aims to analyze the antioxidant activity of Stylissa sp., sponge.
The Stylissa sp., sponge sample was obtained from the Lembeh Strait, waters Bitung. This research
is an experimental laboratory by testing the ethanol extracts of Stylissa sp., sponge using DPPH
method (1,1-diphenil2-pikrihidrazil) to analyze antioxidant activity using a spectrophotometer. The
results of this study show the antioxidant levels of the Stylissa sp., sponge in the Lembeh Strait
waters have antioxidant activity and the higher the concentration the higher the antioxidant levels
produced. The greatest antioxidant level is found in Stylissa sp., sponge with a concentration of 100
mg / L.

Keywords : Antioxidants, DPPH, Sponge Stylissa sp

ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis aktivitas antioksidan dari Stylissa sp. Sampel Spons
Stylissa sp di peroleh dari perairan Selat Lembeh, Bitung. Penelitian ini merupakan eksperimental
laboratorium dengan pengujian terhadap ektrak etanol Spons Stylissa sp dengan metode DPPH (1,1-
diphenil-2-pikrihidrazil) untuk menganalisis aktivitas antioksidan dengan menggunakan
sprektrofotometer. Hasil penelitian ini memperlihatkan kadar antioksidan dari Spons Stylissa sp di
perairan Selat Lembeh mempunyai aktivitas antioksidan dan semakin tinggi konsenstrasi semakin
tinggi pula kadar antioksidan yang dihasilkan. Kadar antioksidan yang paling besar terdapat pada
Spons Stylissa sp dengan konsentrasi 100 mg/L.

Kata kunci : Antioksidan, DPPH, Spons Stylissa sp

961
PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Volume 8 Nomor 4 November 2019

PENDAHULUAN penyakit-penyakit di atas (Tahir et al.,

2003).
Penelitian bahan bioaktif dari
organisme laut beberapa tahun terakhir
METODOLOGI PENELITIAN
sangat banyak dilakukan, baik didalam
maupun diluar negeri. Substansi bioaktif, Waktu dan Tempat Penelitian
terutama terdapat pada biota laut yang
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan
tidak bertulang belakang (avertebrata)
Oktober 2018 - Desember 2018 di
seperti spons, koral dan tunikata. Biota
Laboratorium Farmasi Lanjut Program
tersebut mengandung senyawa aktif yang
Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan
lebih banyak dibanding alga dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam
tumbuhan darat. Diantara biota laut tak
Ratulangi
bertulang belakang tersebut, spons
menduduki tempat teratas sebagai sumber Bentuk Penelitian
substansi aktif (Proksch, 1998).
Bentuk dari penelitian ini adalah
Menurut Apri (2014), substansi
eksperimental laboratorium yang akan
kimia yang disekresikan karang lunak
menguji aktivitas antioksidan dengan
sebagai senyawa metabolit sekunder
menggunakan metode DPPH (1,1-difenil-
menarik untuk dikaji pemanfaatannya
2-pikrilhidrazil) dari ekstrak etanol spons
bagi sumber bahan obat-obatan alami.
Stylissa sp. dari perairan Selat Lembeh.
Oleh karena senyawa bioaktif yang
terdapat pada spons sangat dipengaruhi Alat
oleh mikroba simbionnya, maka variasi
Alat-alat yang digunakan dalam
dari senyawa bioaktif spons sangat tinggi.
penelitian ini ialah Scuba diving dan juga
Adanya radikal bebas didalam
alat-alat gelas seperti gelas 500 mL
tubuh manusia berperan dalam patologi
(pyrex), labu ukur 10 mL (pyrex), gelas
dari berbagai penyakit degeneratif yakni
ukur 1000 mL (pyrex), Erlenmeyer 500
kanker, aterosklerosis, rematik, jantung
mL, cawan petri, cawan porselin, wadah
koroner, katarak dan penyakit degenerasi
botol, timbangan digital (AE ADAM),
saraf seperti parkinson (Silalahi, 2006).
spektrofotometer UV-Vis , aluminium
Penggunaan senyawa antioksidan
foil, rotary evaporator, pipet tetes,
juga antiradikal saat ini semakin meluas
corong, mikro pipet, pipet volume.
seiring dengan semakin besarnya
pemahaman masyarakat tentang Bahan
peranannya dalam menghambat penyakit
Bahan yang digunakan dalam penelitian
degeneratif seperti penyakit jantung,
ini yaitu kertas saring, etanol 96%,
arteriosclerosis, kanker, serta gejala
etanol, DPPH (1,1-difenil-2-
penuaan. Masalah-masalah ini berkaitan
pikrilhidrazil), ekstrak etanol dari spons
dengan kemampuan antioksidan untuk
Stylissa sp. dan serbuk vitamin C p.a
bekerja sebagai inhibitor (penghambat)
sebagai kontrol positif.
reaksi oksidasi oleh radikal bebas reaktif
yang menjadi salah satu pencetus

962
PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Volume 8 Nomor 4 November 2019
Pengambilan Sampel
Sampel ini diambil di perairan
selat lembeh menggunakan alat bantu
(scuba diving). Sebelum diambil sampel
di foto menggunakan kamera bawah laut
setelah diambil di masukan dalam
kantong plastik jepit yang sudah di
siapkan dan di simpan dalam kotak
pendingin lalu di bawah ke Laboratorium
Farmasi Lanjut Program Studi Farmasi
Universitas Sam Ratulangi.
Preparasi Sampel
Spons Stylissa sp. yang di sudah di ambil
di cuci kembali dan di potong-potong
kecil lalu di masukan kedalam wadah
botol, sampel yang di dalam botol di isi
dengan etanol 96% sebanyak 200 mL.
Ekstraksi Sampel
Sampel spons Stylissa sp. sebanyak 140 g
di maserasi dengan pelarut etanol 96%
sebanyak 200mL dengan 3 kali
pengulangan selama 24 jam dengan
sesekali di kocok. Hasil dari maserasi
kemudian di saring untuk mendapatkan
hasil filtrat, kemudian hasil filtrat yang di
dapatkan dari 3 kali pengulangan di
uapkan menggunakan rotary evaporator
sehingga menghasilkan ekstrak kental
dari sampel, lalu di taruh di cawan petri
dan di masukan kedalam oven pemanas
untuk mendapatkan ekstrak kasar dari
sampel spons Stylissa sp.
Pembuatan Larutan Stok
Sebanyak 100 mg ekstrak spons Stylissa
sp. dilarutkan dalam 100 mL etanol 96%.
Dengan masing-masing konsentrasi 100,
75, 50 dan 25 mg/L, dihitung dengan
menggunakan rumus pengenceran, yaitu :
V1.M1 = V2.M2
Dari masing-masing hasil yang
didapatkan dari hasil V1 dipipet dan
ditambahkan etanol 96% hingga
mencapai tanda batas (10 mL), kemudian
dipindahkan ke dalam tabung reaksi dan
ditutup dengan menggunakan aluminium
foil untuk digunakan pada perlakuan
selanjutnya.
Pembuatan Larutan DPPH
Sebanyak 4 mg DPPH ditimbang dan
dilarutkan dalam etanol 96% sebanyak
100 mL, dan buat larutan stok DPPH
sesuai konsentrasi yang sama dengan
konsentrasi pada larutan stok sebelumnya
yaitu 100, 75, 50 dan 25 . Pada masing-
masing konsentrasi, ditambahkan etanol
sampai tanda batas (10 mL). Selanjutnya
larutan yang di buat untuk uji aktivitas
antioksidan yaitu ekstrak etanol spons
Stylissa sp. di pipet sebanyak 0,5 mL
dimasukan kedalam tabung reaksi dengan
masing-masing konsentrasi 100, 75, 50
dan 25 mg/L dan di tambahkan 1,5 mL
larutan DPPH kedalam masing-masing
kosentrasi dan divortex selama 2 detik.
Sampel dibuat sebanyak 3 kali
pengulangan.
Pembuatan Larutan Vitamin C (p.a)
Vitamin C p.a ditimbang sebanyak 10
mg. Kemudian, vitamin C p.a dilarutkan
dalam etanol p.a sebanyak 10 mL, buat
larutan stok dengan konsentrasi yang
sama, yaitu konsentrasi 100, 75, 50 dan
25 mL dengan ditambahkan masing-
masing larutan dengan etanol p.a
mencapai tanda batas (10 mL), dengan
963
PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Volume 8 Nomor 4 November 2019

pengulangan sebanyak 3 kali pada bebas. Diukur absorbansi pada

masing-masing konsentrasi. Sampel
vitamin C p.a diuji pada spektrofotometer
UV-Vis dengan panjang gelombang 517
nm.
Pengujian Larutan Kontrol DPPH dan
Aktivitas Atioksidan dengan Metode
DPPH
Larutan kontrol DPPH diuji pada
spektrofotometer UV-Vis dengan panjang
gelombang 517 nm sebagai absorbansi
kontrol dalam pengujian ini. Sampel
diinkubasi selama 30 menit pada suhu
37ºC. Untuk mengetahui aktivitas dari
penangkal radikal bebas tersebut, di uji
pada spektrofotometer. Berubahnya
warna ungu menjadi warna kuning
menunjukkan efisiensi penangkal radikal
spektrofotometer UV-Vis dengan panjang
gelombang 517 nm setelah diinkubasi
selama 30 menit berubahnya warna
menjadi kuning menunjukkan bahwa,
masing-masing konsentrasi menunjukkan
efisiensi penangkal radikal bebas di uji
dengan spektrofotometer UV-Vis dengan
panjang gelombang 517 nm.
Kemudian diamati perbandingannya
dengan vitamin C p.a sebagai standar.
Aktivitas penangkapan radikal bebas
(persen inhibisi) dihitung sebagai
persentase berkurangnya warna DPPH
dengan menggunakan rumus :

HASIL DAN PEMBAHASAN

Pengujian ini dilakukan untuk mengetahui

aktivitas dari penangkal radikal bebas, di
uji pada spektrofotometer. Hasil pengujian
disajikan pada tabel dibawah ini :

Tabel 1. Hasil perbandingan pengujian Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Stylissa

sp.

964
PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Volume 8 Nomor 4 November 2019
Spons merupakan biota laut yang
hidup menetap di dasar perairan, yang
memiliki peran yang cukup penting di
dalam ekosistem terumbu karang. Selain
itu spons merupakan salah satu
komponen biota penyusun terumbu
karang yang mempunyai potensi bioaktif
yang belum banyak dimanfaatkan.
Hewan laut ini mengandung senyawa
aktif yang persentase keaktifannya lebih
besar dibandingkan dengan senyawa-
senyawa yang dihasilkan oleh tumbuhan
darat contohnya pada biota laut spons
Stylissa sp. (Rachmaniar, 1998).
Ekstraksi pada spons Stylissa sp.
menggunakan proses maserasi, dimana
sediaan cair yang dibuat dengan cara
mengekstraksi bahan nabati yaitu
direndam menggunakan pelarut bukan air
(pelarut nonpolar) atau setengah air,
misalnya etanol encer, selama periode
waktu tertentu, waktu yang
digunakan untuk perlakuan ini selama 24
jam untuk 3x pengulangan dengan
sampel sebanyak 180 g. Kelebihan dari
ekstraksi dengan metode maserasi adalah
Unit alat yang dipakai sederhana, hanya
dibutuhkan bejana perendam Biaya
operasionalnya relatif rendah Prosesnya
relatif hemat penyari dan tanpa
pemanasan.
Pembuatan larutan stok dimana
pada umumnya dinyatakan dalam
kelipatan konsentrasi media yaitu 10x,
20x, 100x, bahkan 1000x konsentrasi
media. Pada penelitian ini dilakukan
pengujian dengan pengulangan
konsentrasi 25, 50, 75, dan 100 mg/L.
Pada pembuatan larutan stok harus
memperhatikan daya simpan larutan
karena larutan yang apabila sudah
mengalami pengendapan tidak dapat
digunakan lagi. Pengendapan larutan stok
umumnya terjadi bila kepekatan larutan
terlalu tinggi.
Tujuan dari pembuatan larutan stok
sendiri ialah untuk menghindari
penimbangan yang berulang-ulang setiap
kali membuat media dimana
penimbangan berulang-ulang ini lebih
membutuhkan banyak waktu. Dengan
adanya larutan stok lebih memudahkan
karena pembuatan media selanjutnya
tinggal mengencerkan larutan stok saja
larutan stok dibuat hanya untuk satu jenis
bahan. Langkah ini bertujuan untuk
menghindari pengendapan larutan.
Metode yang digunakan pada
penelitian ini adalah DPPH (1,1-difenil-2-
pikrilhidrazil). karena merupakan metode
yang paling sering digunakan untuk
menguji aktivitas antioksidan tanaman
obat adalah metode uji dengan
menggunakan radikal bebas DPPH.
Tujuan metode ini adalah mengetahui
parameter konsentrasi yang ekuivalen
memberikan 50% efek aktivitas
antioksidan (IC50). Hal ini dapat dicapai
dengan cara menginterpretasikan data
eksperimental dari metode tersebut.
DPPH merupakan radikal bebas yang
dapat bereaksi dengan senyawa yang
dapat mendonorkan atom hidrogen, dapat
berguna untuk pengujian aktivitas
antioksidan komponen tertentu dalam
suatu ekstrak.
Sebanyak 4 mg DPPH ditimbang
dan dilarutkan dalam etanol 96%
sebanyak 100 mL, dan buat larutan stok
DPPH sesuai konsentrasi yang sama
dengan konsentrasi pada larutan stok
sebelumnya yaitu 100, 75, 50 dan 25 .
Pada masing-masing konsentrasi,
ditambahkan etanol sampai tanda batas
965
PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Volume 8 Nomor 4 November 2019
(10 mL). Selanjutnya larutan yang di buat
untuk uji aktivitas antioksidan yaitu
ekstrak etanol spons Stylissa sp. di pipet
sebanyak 0,5 mL dimasukan kedalam
tabung reaksi dengan masing-masing
konsentrasi 100, 75, 50 dan 25 mg/L dan
di tambahkan 1,5 mL larutan DPPH
kedalam masing-masing kosentrasi dan
divortex selama 2 detik. Sampel dibuat
sebanyak 3 kali pengulangan.
Pada penelitian ini menggunakan
vitamin C p.a sebagai Pembanding untuk
kontrol positif sampel spons Stylissa sp.
karena berfungsi sebagai antioksidan
sekunder yaitu menangkap radikal bebas,
mencegah terjadinya reaksi berantai,
aktivitas antioksidannya sangat tinggi,
mudah diperoleh dan vitamin C lebih
polar dari vitamin yang lain. Vitamin C
mempunyai gugus hidroksi bebas yang
bertindak sebagai penangkap radikal
bebas.
Sebelum memasuki pengujian
dengan alat spektrofotometer UV-Vis,
sampel spons Stylissa sp. dan larutan
sampel vitamin C p.a diinkubasi terlebih
dahulu dengan cara menutup sampel
dengan aluminium foil selama 30 menit.
Spektrofotometer umum digunakan
karena kemampuannya dalam
menganalisa begitu banyak senyawa
kimia serta kepraktisannya dalam hal
preparasi sampel apabila dibandingkan
dengan beberapa metode analisa.
Spektrofotometri UV/Vis melibatkan
energi elektronik yang cukup besar saat
analisis, sehingga spektrofotometer
UV/Vis lebih banyak dipakai untuk
analisis kuantitatif dibanding kualitatif.
Spektrofotometri UV-vis adalah
pengukuran serapan cahaya di daerah
ultraviolet (200 –350 nm) dan sinar
tampak (350 – 800 nm) oleh suatu
senyawa.
Pada konsentrasi 25, 50, 75 dan 100
mg/L Hasil pengukuran aktivitas
antioksidan pada larutan sampel spons
Stylissa sp. menunjukkan bahwa spons
Stylissa sp. memiliki aktivitas
antioksidan yang cukup tinggi hal ini
dapat dilihat pada (Tabel 1) dengan rata-
rata 65,90% di konsentrasi 25 mg/L,
66,30% di konsentrasi 50 mg/L, 69,30%
di konsentrasi 75 mg/L dan yang paling
besar di konsentrasi 100 mg/L yaitu
sebesar 70,26% berbanding dengan
aktivitas pada konsentrasi sampel spons
Stylissa sp. dengan kontrol positif dari
sampel vitamin C yang tinggi hal ini
dapat dilihat pada (tabel 1) dengan rata-
rata 93,90 % di konsentrasi 25 mg/L,
93,30 % di konsentrasi 50 mg/L, 69,30%
di konsentrasi.
75 mg/L dan yang paling besar di
konsentrasi 100 mg/L yaitu sebesar
93,80%. Berdasarkan hasil yang
diperoleh pada (Tabel 1) menunjukkan
bahwa pengukuran persen inhibisi pada
ekstrak etanol spons Stylissa sp. memiliki
aktivitas antioksidan dan mengalami
peningkatan dari konsentrasi 25 mg/L
sampai dengan 100 mg/L.Pada ekstrak
etanol spons Stylissa sp. dengan
konsentrasi 100 mg/L memiliki persen
inhibisi rata-rata paling tinggi yaitu
sebesar 70,26% Penigkatan persen
inhibisi pada ekstrak etanol spons Stylissa
sp. menandakan bahwa konsentrasi
ekstrak yang ditambahkan mempengaruhi
kemampuan ekstrak dalam merendam
radikal bebas.Hal ini didukung oleh
penelitian yang dilakukan oleh Hanani et
al., (2005) sebagai jurnal pembanding
yang menyatakan bahwa presentasi
966
PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Volume 8 Nomor 4 November 2019

penghambat atau persen inhibisi terhadap Proksch, P. 1998. Pharmacologically

aktivitas radikal bebas akan ikut Active Natural Product from
meningkat seiring dengan meningkatnya Marine Invertebrates and
konsentrasi. Hasil pengujian Associated Microorganisms.
perbandingan aktivitas antioksidan Prosiding Seminar Bioteknologi I,
ekstrak spons Stylissa sp. dan vitamin C Ed. Rachmaniar et al., Puslit
Oseanologi LIPI, Jakarta.
(Tabel 1) juga menukjukkan bahwa
aktivitas antioksidan ekstrak etanol spons Rachmaniar. 2003. Produk Alam Laut
Stylissa sp. lebih rendah dibandingkan Sebagai Lead Compound Untuk
dengan vitamin C. Farmasi Dan Pertanian,
Dibawakan Pada Seminar Sehari
KESIMPULAN Perfektif Baru Dalam Drug,
Discovery, Makassar, 26 Oktober
Berdasarkan dari hasil penelitian 2003.
yang telah dilakukan dapat disimpulkan
bahwa ekstrak etanol spons Stylissa sp. Silalahi, J. 2006. Makanan Fungsional.
Kanisius. Jogjakarta.
dari Perairan Selat Lembeh, Kota Bitung
memiliki aktivitas antioksidan. Tahir, I., Wijaya, K., dan Widianingsih,
D. 2003. Terapan Analisis
SARAN
Hansch Untuk Aktivitas
Perlu dilakukan penelitian lebih Antioksidan Senyawa Turunan
lanjut untuk mengetahui senyawa aktif Flavon/Flavonol. Artikel Seminar
yang terkandung dalam spons Stylissa sp. Chemometrics- Chemistry. Dept
dan pengujian aktivitas antioksidan Gadjah Mada University,
Yogyakarta.
dengan metode lain dan sebaiknya
membandingkan hasilnya dengan
penelitian ini.

DAFTAR PUSTAKA
Apri, R. 2014. Kandungan Senyawa
Bioaktif Dan Uji Fitokimia
Sinularia sp dan Lobophytum sp
Dari Perairan Pulau Pongkok
Bangka Selatan. Thesis. Sekolah
Pascasarjana Institut Pertanian
Bogor, Bogor. 50 hal.
Hanani E, Mun’im B, Sekarini R. 2005.
Identifikasi senyawa antioksidan
dalam spons Callispongia sp. dari
Kepulauan Seribu.Jurnal Ilmu
Kefarmasian2 (3) : 127-133.
Jurnal (Endang Hanani).

967