Skripsi Nurhidayat - 3212077

PENGARUH PENAMBAHAN OKSIDATOR
PADA AIR RENDAMAN ANGKAK DAN DAUN JATI

TERHADAP HASIL MODIFIKASI PEWARNAAN GRAM
The effect of adding an oxidizing agent

to the immersion water of Angkak and teak leaves
on the modified Gram staining result.
SKRIPSI
NURHIDAYAT
NIM. 3212077
PROGRAM STUDI SARJANA TERAPAN

TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN
SURAKARTA
2022
The effect of adding an oxidizing agent

to the immersion water of Angkak and teak leaves
on the modified Gram staining result.
SKRIPSI
NURHIDAYAT
NIM. 3212077
PROGRAM STUDI SARJANA TERAPAN

TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN
SURAKARTA
2022
HALAMAN PERSETUJUAN
SKRIPSI

Oleh:
Nurhidayat
NIM. 3212077
Telah disetujui untuk diajukan pada ujian skripsi
Surakarta, 13 Mei 2022

Pembimbing Utama
Yusianti Silviani, S.Pd.Bio, M.Pd
i
HALAMAN PENGESAHAN
SKRIPSI

Oleh:
Nurhidayat
NIM. 3212077
Telah dipertahankan dihadapan Dewan Penguji dan diterima sebagai persyaratan

guna memperoleh gelar Sarjana Terapan Teknologi Laboratorium Medis
Pada tanggal 13 Mei 2022 di Surakarta

Dewan Penguji,
Ardy Prian Nirwana, S.Pd Bio, M.Si (Ketua) . .………………
Vector Stephen Dewangga, S.Si, M.Si (Anggota Penguji I) ……………….
Yusianti Silviani, S.Pd.Bio, M.Pd (Anggota Penguji II) ……………….
Mengetahui
Ketua Program Studi Sarjana Terapan
Teknologi Laboratorium Medis
M.Taufiq Qurrohman, M.Sc
ii
iii
PERNYATAAN KEASLIAN SKRIPSI
Saya menyatakan dengan sesungguhnya bahwa skripsi dengan judul:

yang dibuat untuk melengkapi persyaratan menyelesaikan jenjang pendidikan Sarjana

Terapan Teknologi Laboratorium Medis Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional,
adalah hasil penelitian saya sendiri dan tidak terdapat karya yang pernah diajukan
untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu pergururan tinggi, serta tidak terdapat
karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali secara
tertulis diacu dalam naskah ini dan disebut dalam daftar pustaka.
Apabila terdapat bukti tiruan atau duplikasi pada skripsi ini, maka penulis bersedia
untuk menerima pencabutan gelar akademik yang telah diperoleh.
Lampung, 13 Mei 2022
Nurhidayat
NIM. 3212077
iv
MOTTO
Raihlah ilmu, dan untuk meraih ilmu belajarlah untuk tenang

dan sabar
Tanpa tindakan, pengetahuan tidak ada gunanya dan

pengetahuan tanpa tindakan itu sia-sia
v
PERSEMBAHAN
Dengan penuh ketakwaan dan rasa syukur atas karunia-Mu ya Alloh aku bersaksi tiada
illah yang pantas untuk di ibadahi selain engkau dan kebanggaan atas suri tauladanku
Rasullulloh Muhammad SAW aku bersaksi bahwa engkaulah rasul Alloh yang
kugenggam sunahmu. Dengan segenap kerendahan dan kebanggaan hati,
kupersembahkan dan kuhadiahkan karya ini:
1. Ayah (Alm) dan Ibuku tercinta yang tak pernah lelah mendoakan dan memberi
perhatian dan motivasi yang tulus selama ini.
2. Isteriku tercinta, Kak Dila, Mas Ridho, Abang Yazid, Kak Mira dan Adek Fatih dan
cucuku Adek Uwais yang tiada lelah memberikan doa, perhatian dan motivasi yang
tiada putus selama ini.
3. Kakak-kakak dan semua keponakanyang tercinta, yang selalu memberikan doa dan
perhatian serta bantuan selama ini.
4. Untuk semua teman-teman yang selalu memberikan bantuan doa, perhatian yang
tidak dapat saya sebutkan satu persatu
5. Untuk almamater STIKES NASIONAL yang telah membantu kelancaran studiku.
6. Serta teman-teman Prodi Sarjana Teknologi Laboratorium Medis angkatan tahun

2021.
vi
KATA PENGANTAR
Assalamualaikum Warohmatulloh Wabarakatuh
Alhamdulillahirrobil’alamin dengan terpanjatnya puji syukur kehadirat Alloh Subhana

Wata’ala yang telah memberikan rahmat serta berbagai karunia yang begitu besar
sehingga dengan ijin-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi ini dengan judul
PENGARUH PENAMBAHAN OKSIDATOR PADA AIR RENDAMAN ANGKAK
DAN DAUN JATI TERHADAP HASIL MODIFIKASI PEWARNAAN GRAM”.
Sholawat serta salam semoga selalu tercurah kepada junjungan dan suri tauladan
hamba dalam kehidupan Rasululloh Muhammad SAW.
Skripsi ini disusun sebagai tugas akhir untuk menyelesaikan pendidikan

Sarjana Terapan Teknologi Laboratorium MediS di Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan
Nasional. Dalam proses penyusunan skripsi ini banyak sekali dukungan yang telah
diberikan kepada penulis terutama dari keluarga dan teman teman dipekerjaan yang
selalu memberi motivasi dalam menyelesaikan skripsi ini.
Ucapan terima kasih penulis sampaikan kepada:
1. Apt. Hartono,S.Si, M.Si., selaku Ketua Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional
yang telah memberikan kesempatan kepada penulis untuk menyusun dan
menyelesaikan Skripsi ini.
2. Bapak M. Taufiq Qurrohman, M.Sc sebagai ketua program studi Sarjana Terapan
Teknologi Laboratorium Medis Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan.
2. Bapak Ardy Prian Nirwana, S.Pd Bio, M.Si selaku ketua penguji yang telah ikut
membimbing dan memberi masukan dan saran kepada penulis untuk Skripsi ini.
3. Bapak Vector Stephen Dewangga, S.Si, M.Si selaku penguji 1 yang telah ikut
membimbing dan memberi masukan dan saran kepada penulis untuk Skripsi ini.
vii
4. Ibu Yusianti Silviani, S.Pd.Bio, M.Pd, selaku pembimbing yang selalu memberi
arahan, masukan dan saran serta dapat meluangkan waktunya untuk membimbing
penulis dengan nasehat, dan penuh kesabaran sehingga penulis dapat
menyelesaikan skripsi ini dengan baik dan lancar.
5. Ibu, isteri, anak-anakku serta cucuku tercinta yang telah memberikan dukungan, doa
dan perhatian selama ini.
6. Bapak /Ibu dewan Direksi PT. Prodia Widya Husada, Tbk.
7. Jajaran Prodia University (ProU) Jakarta
8. Ibu Siti Nurhidayati selaku Regional Head Greater Jakarta Region beserta seluruh
jajaran atas dukungannya.
9. Bapak Andhy Nur Prasetiyo selaku Branch Manager Prodia Lampung atas
dukungan dan perhatiannya.
10. Teman-temnn Laboratorium Klinik Prodia Lampung dan khususnya teman-teman

Laboratorium Klinik Prodia Metro atas bantuan dan doanya selama ini.
11. Seluruh staf dan dosen STIKES NASIONAL yang telah memberi dukungan dan
kerjasama dalam penyelesaian skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna, kritik dan saran
sangat membantu untuk menyempurnakan hasil penelitian ini. Tetapi penulisr
berharap semoga skripsi dapat bermanfaat bagi penulis dan pembaca.
Penulis,
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN PERSETUJUAN ...................................................................................... i

HALAMAN PENGESAHAN...................................................................................... ii
PERNYATAAN KEASLIAN SKRIPSI ..................................................................... iv
MOTTO ....................................................................................................................... v
PERSEMBAHAN ....................................................................................................... vi
KATA PENGANTAR ............................................................................................... vii
DAFTAR ISI ............................................................................................................... ix
DAFTAR TABEL ....................................................................................................... xi
DAFTAR GAMBAR ................................................................................................. xii
INTISARI.................................................................................................................. xiv
ABSTRACT ............................................................................................................... xv
BAB I PENDAHULUAN ............................................................................................ 1
A. Latar Belakang..................................................................................................... 1
B. Pembatasan Penelitian ......................................................................................... 8
C. Rumusan Masalah ................................................................................................ 9
D. Tujuan Penelitian ................................................................................................. 9
E. Manfaat Penelitian ............................................................................................. 10
BAB II TINJAUAN PUSTAKA................................................................................ 11
A. LANDASAN TEORI ........................................................................................ 11
1. Oksidator......................................................................................................... 11
2. Angkak ............................................................................................................ 18
3. Daun jati ......................................................................................................... 20
4. Staphylococcus aureus .................................................................................... 23
5. Escherichia coli .............................................................................................. 24
6. Pewarnaan Gram ............................................................................................. 26
B. KERANGKA PIKIR ......................................................................................... 32
C. HIPOTESA ........................................................................................................ 33
BAB III METODOLOGI PENELITIAN................................................................... 34
A. Desain penelitian ............................................................................................... 34
B. Tempat dan waktu penelitian ............................................................................. 34
ix
C. Subjek dan Objek penelitian .............................................................................. 35
D. Populasi dan Sampel penelitian ......................................................................... 35
E. Variabel penelitian ............................................................................................. 35
F. Defenisi operasional variable penelitian ............................................................ 36
G. Teknik Sampling ............................................................................................... 37
H. Sumber Data Penelitian ..................................................................................... 37
I. Instrumen Penelitian ........................................................................................... 38
1. Alat dan bahan ................................................................................................ 38
2. Cara Pembuatan zat warna modifikasi............................................................ 38
3. Cara pewarnaan modifikasi ............................................................................ 39
J. Alur Penelitian .................................................................................................... 40
K. Tehnik analisa data penelitian ........................................................................... 41
L. Jadwal dan rencana penelitian............................................................................ 42
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................... 43
A. Hasil penelitian .................................................................................................. 43
B. Pembahasan ....................................................................................................... 48
BAB V SIMPULAN DAN SARAN .......................................................................... 55
A. Simpulan ............................................................................................................ 55
B. Saran .................................................................................................................. 55
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................ 56
LAMPIRAN ............................................................................................................... 59
x
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
3.1 Definisi operasional variabel 35
3.2 Scoring pengamatan 40
3.3 Jadwal rencana penelitian 40
4.1 Score hasil pengamatan 43
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
2.1 Larutan Kalium Permanganat 14
2.2 Cara pewarnaan Gram 28
2.3 Hasil perwarnaan bakteri gram positif 29
2.4 Hasil pewarnaan bakteri gram negatif 30
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1. Dokumentasi Penelitian 61
2. Sertifikat Pengujian Sampel Bakteri 64
3. Sertifikat Pengujian Sampel Bakteri 65
4. Kemasan Angkak 66
5. Kartu Bimbingan Skripsi 67
6. Izin Etik Penelitian 73
xiii
INTISARI
Nurhidayat. NIM 3212077. Pengaruh penambahan oksidator pada air rendaman

Angkak dan daun jati terhadap hasil modifikasi pewarnaan Gram.
Penggunaan safranin memiliki kelemahan yaitu harganya yang mahal serta

warnanya sulit terserap pada preparat tertentu. Penggunaan pewarna alami merupakan
alternatif untuk menggantikan pewarna safranin. Salah satu pewarna alami yang dapat
digunakan adalah air rendaman angkak dan daun jati. Penambahan oksidator pada
pewarna alam menghasilkan lapang pandang bersih dan bentuk bakteri sempurna.
Tujuan penelitian untuk mengetahui pengaruh penambahan oksidator pada air
rendaman angkak dan daun jati terhadap modifikasi pewarnaan Gram. Desain
penelitian adalah deskriptif dengan pendekatan eksperimental untuk melihat pengaruh
penambahan oksidator KMnO₄ dan H₂O₂ pada pewarna alami rendaman angkak dan
daun jati terhadap bakteri gram positif dan bakteri gram negatif dengan mengamati
parameter kejelasan lapangan pandang, kekontrasan warna dan kesempurnaan bentuk
bakteri yang diwarnai. Teknik sampling menggunakan metode probability sampling
secara simple random sampling. Hasil penelitian menunjukan hasil pewarnaan bakteri
Staphylococcus aureus memberikan hasil baik dapat diamati dan diidentifikasi
morfologi nya, sedangkan bakteri Escherichia.coli hanya terwarnai sel nya saja sedang
morfologi tidak dapat diidentifikasi. Simpulan dari penelitian ini bahwa tidak ada
pengaruh penambahan oksidator pada air rendaman angkak dan daun jati terhadap
hasil modifikasi pewarnaan Gram.
Kata kunci: Angkak, Daun jati, Pewarnaan Gram, Oksidator
xiv
ABSTRACT
Nurhidayat. NIM 3212077. The effect of adding an oxidizing agent to the immersion
water of Angkak and teak leaves on the modified Gram staining result
.
The use of safranin has a weakness, namely the price is expensive and the color
is difficult to absorb in certain preparations. The use of natural dyes is an alternative
to replace safranin dyes. One of the natural dyes that can be used is water immersion
Angkak and teak leaves. The addition of an oxidizing agent to natural dyes resulted in
a clean field of view and a perfect bacterial shape. The purpose of this study was to
determine the effect of adding an oxidizing agent to the immersion water of angkak
and teak leaves on the modification of Gram staining. The research design was
descriptive with an experimental approach to see the effect of adding oxidizing agents
KMnO₄ and H₂O₂ to natural dyes soaked in Angkak and teak leaves on gram-positive
and gram-negative bacteria by observing the parameters of visual field clarity, color
contrast and the perfection of the shape of the stained bacteria. Sampling technique
using probability sampling method with simple random sampling. The results showed
that the staining of Staphylococcus aureus bacteria gave good results and the
morphology could be observed and identified, while the Escherichia.coli bacteria were
only stained with the cells, while the morphology could not be identified. The
conclusion of this study was that there was no effect of adding an oxidizing agent to
the immersion water of angkak and teak leaves on the modified Gram staining results.
Keyword: Angkak, Teak Leaves, Gram Staining, Oxidizing
xv
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Di dunia laboratorium khususnya di bidang mikrobiologi, pewarnaan
merupakan salah satu bagian terpenting. Pewarnaan berfungsi untuk memudahkan
melihat bakteri dengan menggunakan mikroskop, memperjelas ukuran dan bentuk
bakteri, untuk melihat struktur luar dan struktur dalam bakteri seperti dinding sel
vakuola, menghasilkan sifat–sifat dan kimia yang khas bakteri dengan zat warna,
serta serta meningkatkan kontras mikroorganisme dengan sekitarnya (Pelczar &
Chan, 2009).
Teknik pewarnaan pada bakteri dapat dibedakan menjadi empat macam
yaitu pengecatan sederhana, pengecatan negatif, pengecatan diferensial dan
pengecatan struktural. Pemberian warna pada bakteri atau jasad- jasad renik lain
dengan menggunakan larutan tunggal suatu pewarna pada lapisan tipis, atau olesan,
yang sudah difiksasi, dinamakan pewarnaan sederhana. Prosedur pewarnaan yang
menampilkan perbedaan di antara sel-sel bakteri atau bagian bagian sel bakteri
disebut teknik pewarnaan diferensial. Sedangkan pengecatan struktural hanya
mewarnai satu bagian dari sel sehingga dapat membedakan bagian-bagian dari sel.
1
2
Termasuk dalam pengecatan ini adalah pengecatan endospora, flagella dan
pengecatan kapsul (Waluyo, 2010).
Bakteri sulit dilihat dengan mikroskop cahaya, karena tidak mengadsorbsi
ataupun membiaskan cahaya. Alasan inilah yang menyebabkan zat warna
digunakan untuk mewarnai bakteri atau latar belakangnya. Zat warna mengadsorbsi
dan membiaskan cahaya sehingga kontras bakteri dengan sekelilingnya
ditingkatkan (Lay, 1994). Zat warna bakteri terbagi menjadi dua macam yaitu zat
warna sintetik maupun zat warna alami. Pewarna bakteri yang biasa digunakan
yaitu pewarna sintetis diantaranya safranin, carbol fuchsin, crystal violet, dan
methylen blue (Lay, 1994). Di Indonesia, bahan pewarna alami banyak digunakan
seperti dari bahan alam berupa tanaman yang mengandung antosianin baik bagian
bunga, daun, batang, ataupun akar. Aplikasi penggunaan pewarna alami
diantaranya yaitu sebagai pewarna alami pada makanan dan tekstil. Pewarna alami
yang dapat diaplikasikan pada makanan diantaranya yaitu buah naga (Ekawati et
al., 2015), kulit manggis (Farida & Nisa, 2015), kunyit (Syarfi, 2012) dan ubi jalar
(Winarti et al., 2008). Sedangkan pewarna alami yang dapat diaplikasikan sebagai
pewarna tekstil yaitu daun jati (Rosyida &Achadi, 2014).
Bakteri gram positif dan bakteri gram negatif dibedakan berdasarkan
struktur dinding selnya. Akibat struktur dinding sel yang berbeda, menimbulkan
respon yang berbeda ketika dilakukan pewarnaan gram. Bakteri gram positif
memiliki beberapa lapisan peptidoglikan sehingga lapisan peptidoglikannya tebal.
Umumnya, 90% penyusun dinding sel bakteri gram positif merupakan

3
peptidoglikan. Dinding sel bakteri gram positif mengandung teichoic acid (Tortora
dkk, 2010).
Berbeda halnya dengan bakteri gram negatif, yang memiliki lapisan
peptidoglikan lebih tipis. Namun, dinding sel bakteri gram negatif mempunyai
membran luar. Membran luar terdiri dari lipopolisakarida (LPS), lipoprotein, dan
fosfolipid. Peptidoglikan terikat dengan lipoprotein di membran luar dan
periplasma, yaitu struktur seperti gel yang berada di antara membran luar dan
plasma membran. Selain itu, Dinding sel bakteri gram negatif tidak mengandung
teichoic acid (Tortora dkk, 2010).
Perbedaan selanjutnya antara bakteri gram positif dan bakteri gram negatif
adalah respon yang berbeda diantara keduanya ketika dilakukan pewarnaan
gram. Bakteri gram positif akan tetap terwarnai kristal violet ketika dilakukan
dekolorisasi dengan alkohol dan bakteri akan menampakkan warna biru atau
ungu. Sebaliknya, bakteri gram negatif akan terdekolorisasi dengan alkohol dan
terganti dengan pewarna lawan (counterstain) seperti safranin sehingga bakteri akan
berwarna merah atau pink (Tortora dkk, 2010: 88).
Zat yang digunakan untuk mewarnai bakteri termasuk biological dye. Zat
pewarna/cat yang digunakan untuk mewarnai bakteri mempunyai dua sifat utama,
yaitu mempunyai kelompok kromofor dan memiliki ikatan dengan sel secara ionik,
kovalen, atau hidrofobik. Kromofor merupakan gugus pemberi warna dari
biological dye (Prescott dkk, 2002).
Pengecatan diferensial menggunakan beberapa zat warna dan hasilnya dapat
mengelompokkan bakteri ke dalam kelompok bakteri tertentu. Salah satu macam

4
pengecatan diferensial adalah pengecatan ram. Pengecatan Gram menggunakan
empat macam larutan. Larutan pertama adalah cat utama, yaitu kristal violet.
Larutan kedua adalah mordant, yaitu Gram’s iodine. Mordant berfungsi untuk
meningkatkan afinitas antara cat dengan sel bakteri. Mordant akan berikatan kuat
dengan kristal violet. Setelah diberi mordant, baik bakteri gram positif maupun
negatif, akan tampak berwarna ungu atau biru. Larutan ketiga adalah zat
pendekolorisasi, yaitu etanol atau aseton. Fungsi zat pendekolorisasi adalah untuk
meluruhkan warna ungu pada bakteri gram negatif, sedangkan bakteri gram positif
tetap berwarna ungu. Larutan keempat adalah zat pewarna lawan (counter stain),
yaitu safranin. Fungsi zat pewarna lawan adalah akan memberikan warna pink pada
bakteri gram negatif, sedangkan pada bakteri gram positif tetap berwarna ungu
(Benson, 2001; Tortora dkk, 2010).
Pewarnaan gram menggunakan empat jenis larutan, yaitu larutan gram A,
gram B, gram C, dan gram D. Setiap larutan tersebut mempunyai fungsi masing-
masing yang dijelaskan sebagai berikut: Larutan gram A adalah cat utama, yaitu
kristal violet. Larutan gram B adalah mordant, yaitu Gram’s iodine. Mordant
berfungsi untuk meningkatkan afinitas antara cat dengan sel bakteri. Mordant akan
berikatan kuat dengan kristal violet. Setelah diberi mordant, baik bakteri gram
positif maupun negatif, akan tampak berwarna ungu atau biru. Larutan gram C
adalah zat pendekolorisasi, yaitu etanol atau aseton. Fungsi zat pendekolorisasi
adalah untuk meluruhkan warna ungu pada bakteri gram negatif, sedangkan bakteri
gram positif tetap berwarna ungu. Larutan gram D adalah zat pewarna lawan
(counter stain), yaitu safranin. Fungsi zat pewarna lawan adalah akan memberikan
5
warna pink atau merah pada bakteri gram negatif, sedangkan pada bakteri gram
positif tetap berwarna ungu (Benson, 2001; Tortora dkk, 2010).
Safranin digunakan sebagai pewarna dalam beberapa pewarnaan preparat
untuk memberikan warna merah. Penggunaan safranin memiliki kelemahan yaitu
harganya yang mahal serta warnanya sulit terserap pada preparat tertentu (Saroh,
2011). Penggunaan pewarna alternatif adalah salah satu cara untuk menggantikan
pewarna safranin yang mahal. Pewarnaan alternatif merupakan pewarnaan
pengganti yang lebih efisien untuk menggantikan pewarna yang biasanya
digunakan (Gresby, 2013).
Bahan pewarna alternatif yang dapat digunakan adalah bahan pewarna dari
alam. Bahan pewarna dari alam dapat diperoleh dari proses filtrasi bagian tanaman
seperti buah, biji, daun, akar, kulit kayu, atau kelopak bunga. Nurwati (2013)
melakukan penelitian dengan menggunakan daun jati muda yang mengandungan
antosianin yang berwarna merah sebagai pengganti safranin. Temulawak
merupakan salah satu alternatif lain dalam pewarnaan jaringan, dapat dimanfaatkan
juga sebagai pewarna alami pada pengolahan makanan serta sebagai salah satu
bahan untuk pembuatan jamu tradisional (Cahyono, 2011).
Zat warna alami adalah zat warna (pigmen) yang diperoleh dari tumbuhan,
hewan, atau dari sumber-sumber mineral. Zat warna ini telah sejak dahulu
digunakan untuk pewarna makanan dan sampai sekarang penggunaannya secara
umum dianggap lebih aman daripada zat warna sintetis (Fitrihana, 2007). Angkak
dan daun jati merupakan bahan alam yang dapat digunakan sebagai pewarna alami
karena mengandung pigmen berwarna merah. Kandungan pigmen ini dapat

6
dimanfaatkan sebagai alternatif bahan pewarna dalam pewarnaan bakteri, yaitu
sebagai pewarna penutup pada pewarnaan Gram (Luciana, 2016).
Angkak merupakan salah satu jenis pewarna alami, berupa beras yang
difermentasi menggunakan ragi Monascus spp. Penggunaan angkak sebagai
pewarna makanan dilakukan karena mempunyai beberapa keunggulan, yaitu: warna
yang diperoleh lebih konsisten dan stabil, pigmen yang dihasilkan dapat larut dalam
air, warna yang dihasilkan dapat bercampur dengan pigmen lain serta aman untuk
dikonsumsi (Pattanagul, 2002). Angkak memiliki warna yang konsisten tetapi
kurang stabil terhadap pengaruh fisik dan kimia seperti panas, sinar-UV dan sinar
matahari, namun pigmen angkak dapat bercampur dengan pewarna alami lainnya
dengan bahan makanan (Nurika, 1999). Warna merah angkak sangat potensial
sebagai pengganti warna merah sintetik yang saat ini penggunaannya sangat luas
pada berbagai produk makanan. Monascus menghasilkan enam jenis pigmen, yaitu
2 pigmen kuning: monascin dan ankaflavin, 2 pigmen jingga: monascorubrin dan
rubropunctanin dan 2 pigmen merah: monascorubramine dan rubropunctamine
(Faradilla, 2012).
Hasil penelitian Cheng et al, (2010) menunjukkan bahwa Monascus spp.
memproduksi sejumlah metabolit sekunder, antara lain: pigmen, monakolin K,
asam γaminobutirat (GABA), asam dimerumat, dan citrinin. Penelitian yang
dilakukan oleh Aniya et al., (2000) menunjukkan bahwa salah satu hasil metabolit
sekunder Monascus spp. yakni asam dimerumat menunjukkan adanya aktivitas
penangkapan terhadap senyawa radikal DPPH (1,1- Diphenyl-2- Picrylhidrazyl).

7
Hasil penelitian Trisnadjaja et al., (2010) menunjukkan bahwa nilai IC50 yang
terdapat pada ekstrak angkak sebesar 90-110 ppm.
Menurut Nurwanti (2012) daun jati muda memiliki kandungan beberapa
senyawa pigmen terutama antosianin yang dapat digunakan sebagai pewarna alami.
Pada saat ini pemanfaatan daun jati biasanya digunakan sebagai pembungkus
makanan. Daun jati muda mengandung pigmen alami antosianin yang cukup tinggi
sehingga dapat memberikan warna merah pada preparat. Menurut penelitian
Kembaren (2014), warna merah yang dihasilkan dari filtrat daun jati muda berasal
dari zat warna antosianin yang terkandung dalam daun jati muda. Salah satu zat
warna golongan antosianin yang terdapat dalam ekstrak daun jati adalah sianidin.
Hal tersebut sesuai dengan penelitian Baharudin (2015), hasil karakterisasi zat
warna daun jati secara umum besesuaian dengan salah satu pigmen antosianin yaitu
sianidin.
Hasil penelitian Luciana (2016) dengan hasil pengamatan menunjukkan
bahwa hasil pewarnaan yang cukup baik diperoleh dari perlakukan dengan waktu
perendaman pewarna penutup kombinasi angkak dan daun jati selama 10 menit
dengan penambahan oksidator pada proses pewarnaan Gram yang dilakukan, yaitu
menunjukkan lapang pandang yang bersih, dan bentuk bakteri yang sempurna dan
warna yang cukup kontras meskipun hasil yang diperoleh tidak sebaik pada kontrol.
Penambahan oksidator kalium permanganat tersebut didasari oleh hasil
penelitian (Hafiz et al., 2012) yang menyatakan bahwa pewarna alami harus
dioksidasi terlebih dahulu. Berdasarkan penelitian tersebut dinyatakan bahwa
kalium permanganat adalah oksidator yang paling bagus digunakan dibandingkan

8
dengan hydrogen peroxide, ferric chloride, dan potassium alum. Penambahan
KMnO₄ pada subsrat yang dilarutkan pada pelarut organik mempunyai mekanisme
oksidasi yang salah satu kemungkinannya adalah dengan cara disosiasi komplek
pasangan ion (Dash et al., 2009).
Mekanisme pada pewarnaan bakteri oleh zat alami yang dioksidasi oleh
kalium permanganat di duga terjadi karena adanya disosiasi komplek pasangan ion
zat warna dan kalium permanganat menjadi komplek kation kalium dan MnO₄-
yang menjadi anion. Komplek kation kalium dengan zat warna tersebut
menunjukan adanya ion bermuatan positif, sehingga memiliki sifat dapat terikat
pada komponen sel yang bermuatan negatif. Sel bakteri kaya asam nukleat yang
banyak membawa muatan negatif dalam bentuk gugus posfat, sehingga akan
berikatan dengan pewarna basa yang bermuatan positif (Brooks et al., 2004).
B. Pembatasan Penelitian
Penelitian ini dilakukan untuk menguji apakah penambahan oksidator
KMnO₄ dan H₂O₂ pada rendaman angkak dan daun jati dalam pewarnaan bakteri
Gram memiliki pengaruh dalam kualitas hasil pewarnaan. Dalam penelitian ini
dibatasi hanya menguji sampel dari bakteri biakan murni gram positif
(Staphylococcus aureus ATCC 25923) dan gram negatif (Escherichia.coli ATCC
25922).
9
C. Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang masalah diatas, maka rumusan masalah dalam
penelitian ini apakah penambahan oksidator pada air rendaman angkak dan daun
jati berpengaruh terhadap hasil modifikasi pewarnaan Gram?
D. Tujuan Penelitian
a. Tujuan Umum
Untuk mengetahui pengaruh penambahan oksidator pada rendaman angkak
dan daun jati terhadap modifikasi pewarnaan Gram.
b. Tujuan Khusus
1). Untuk mengetahui seberapa besar pengaruh penambahan oksidator pada
rendaman angkak dan daun jati dalam pewarnaan Gram bakteri.
2). Untuk mengetahui perbandingan hasil pewarnaan menggunakan rendaman
angkak dan daun jati yang di tambahkan oksidator dan tidak ditambahkan
oksidator.
3). Untuk mulai melakukan eksperimen menggunakan bahan bahan alami yang
dapat diperbaharui.
10
E. Manfaat Penelitian
1. Manfaat Teoritis
Berdasarkan kajian keilmuan, hasil penelitian ini dapat memberikan dan
menambah ilmu pengetahuan, terutama tentang pengaruh penambahan oksidator
pada rendaman angkak dan daun jati dalam pengecatan Gram.
2. Manfaat praktis dari penelitian ini adalah sebagai berikut:
a. Manfaat bagi penulis
Hasil penelitian ini diharapkan dapat meningkatkan khasanah ilmu
pengetahuan penulis dan meningkatkan kemampuan penulis untuk dapat
meneliti hal hal lain yang dapat membantu pekerjaan di laboratorium.
b. Manfaat bagi akademik
Dapat berkontribusi bagi akademik dalam jurnal jurnal penelitian yang
dapat dipakai dan disempurnakan lagi oleh peneliti peneliti berikutnya.

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. LANDASAN TEORI
1. Oksidator
Zat pengoksidasi atau oksidator adalah senyawa kimia yang mengoksidasi zat
lain dalam reaksi elektrokimia atau reduksi-oksidasi. Dalam reaksi ini, senyawa
pengoksidasi mengalami reduksi. Dalam kimia, zat pengoksidasi pengertian dalam
bahasa Indonesia lebih di kenal sebagai oksidator, memiliki dua makna. Pengertian
pertama, oksidator adalah spesies kimia yang menghilangkan elektron dari spesies
lainnya. Ini adalah salah satu komponen dalam reaksi oksidasi-reduksi (redoks).
Pengertian lainnya, oksidator adalah spesies kimia yang memindahkan atom
elektronegatif, biasa nya oksigen, ke dalam substrat pembakaran ledakan pada
umumnya, dan reaksi redoks organik melibatkan reaksi perpindahan atom. Dalam
penggunaan yang umum, oksidator memindahkan atom oksigen kepada substrat.
Dalam konteks ini, oksidator dapat disebut sebagai pereaksi oksigenasi atau agen
pemindah atom oksigen (oxygen-atom transfer (OAT) agent). (Sridianti, 2020).
Dalam arti lain yang lebih sehari-hari, oksidan mentransfer atom oksigen ke
substrat. Dalam konteks ini, oksidan dapat digambarkan sebagai zat pengoksidasi
11
12
atau zat pemindah atom oksigen. Beberapa contoh adalah anion MnO₄-
permanganat, CrO₄- kromat dan osmium tetroksida, OsO₄. Perhatikan bahwa semua
senyawa ini adalah oksida, lebih khusus polioksida. Dalam beberapa kasus, oksida
ini dapat digunakan sebagai akseptor elektron, seperti dalam reaksi konversi dari
permanganat MnO₄- ke manganat MnO₄2- (Sridianti, 2020).
Oksidator yaitu zat yang menyebabkan zat lain mengalami oksidasi sehingga
zat oksidator sendiri akan mengalami reduksi. Umumnya unsur unsur non logam
merupakan oksidator yang baik karena memiliki keelektronegatifan tinggi sehingga
mudah menangkap atau menarik elektron ke arah dirinya. Walaupun demikian tidak
selalu digunakan unsur dalam semua reaksi kimia (Seran, 2012).
Oksidator adalah zat yang mengalami reduksi, sedangkan reduktor adalah zat
yang mengalami oksidasi. Adapun bilangan oksidasi merupakan jumlah muatan
yang ada pada atom. Zat oksidator bisa direduksi dengan memperoleh elektron. Hal
inilah yang kemudian membuatnya disebut sebagai penerima atau akseptor elektron
dalam reaksi redoks. Saat elektron di dapat dari luar, akan ada lebih banyak muatan
negatif yang tidak dapat sepenuhnya dinetralkan oleh nukleus. Jadi, atom akan
mendapat muatan negatif. Akan tetapi, jika reduksi ini terjadi pada atom bermuatan
positif, maka oksidator akan memperoleh muatan positif lebih rendah atau muatan
netral. Ada banyak sekali contoh dari oksidator yang bisa kita temukan di sekeliling.
Beberapa di antaranya adalah [MnO₄] – (permanganat), [CrO₄]2 – (kromat), OsO₄
(osmium tetroksida), serta [CIO₄] – (peklorat). Ketiganya merupakan spesies dari
oksida. Pada beberapa kasus, oksida tersebut juga bisa bertindak sebagai akseptor
13
elektron, sebagaimana yang digambarkan dalam konversi [MnO₄]- menjadi
[MnO₄]2- manganat (Anne, 2021).
Beberapa contoh oksidator yang umum dikutip dari buku Redoks &
Elektrokimia karya Wati Sukmawati (2020) adalah sebagai berikut:
1. Sulfoksida
2. Timbal dioksida (PbO₂)
3. Peroksida, seperti hidrogen peroksida (H₂O₂)
4. Osmium tetroksida (OsO₄)
5. Oksigen (O₂)
6. Ozon (O₃)
7. Fluorin (F₂), klorin (Cl₂), dan halogen lainnya
8. Asam sitrat (HNO₃) dan senyawa nitrat
9. Asam sulfat (H₂SO₄)
10. Asam peroksidisulfat (H₂S₂O₈)
11. Asam peroksimonosulfat (H₂SO₅)
12. Klorit, klorat, perklorat, dan senyawa halogen sejenis lainnya
13. Hipoklorit dan senyawa hipohalit lainnya, termasuk pemutih rumah tangga
(NaClO)
14. Senyawa krom heksavalen, seperti dikromat dan asam kromat serta
Kromium trioksida, piridinium klorokromat (PCC), dan senyawa kromat atau
dikromat
15. Senyawa permanganat, seperti kalium permanganate
16. Natrium perborate

14
17. Dinitrogen monoksida (N₂O)
18. Kalium nitrat (KNO₃), oksidator dalam serbuk hitam
a. Ion Permanganat (MnO₄–)
Ion permanganat berwarna ungu demikian pula larutan yang
mengandung ion permanganat. Warna tersebut merupakan ciri khas dari ion
permanganat. Biasanya dalam laboratorium ion permanganat diperoleh dari
garam kalium permanganat (KMnO₄). KMnO₄ merupakan suatu kristal
berwarna hitam keunguan.
Gambar 2.1 Larutan Kalium Permanganat (koleksi pribadi 2021)
Bilangan oksidasi mangan dalam KMnO₄ adalah +7, ketika terjadi reaksi
kimia bilangan oksidasi mangan turun atau mengalami reduksi. Reaksi reduksi
mangan dalam KMnO₄ bergantung pada keasaman larutan. Dalam suasana
larutan asam kuat mangan direduksi menjadi Mn2+ dan warna larutan
15
memudar (hampir tidak berwarna). Setengah reaksi reduksi ion permanganat
dalam suasana asam (Seran, 2012).
Pada zat warna dengan penambahan mordan (KMnO₄) setelah direndam
dengan air deterjen 1% selama 15 menit kelunturannya tidak signifikan,
terlihat dari penurunan penyerapan yang di peroleh tidak terlalu besar, serta
warna dari kayu tidak mengalami perubahan. Hal ini terlihat dari warna air
deterjen terjadi perubahan yang tidak signifikan dari warna awal air deterjen.
Hal ini menunjukkan bahwa dengan adanya penambahan mordan (KMnO₄)
sangat memberikan pengaruh yaitu dapat memperkuat ikatan antara zat warna
dengan serat kayu. Semakin banyak mordan yang ditambahkan maka ikatan
yang terjadi pada zat warna dengan serat kayu menjadi semakin kuat serta
mempertajam warna kayu yang dihasilkan (Bogoriani, 2010).
Penambahan kalium permanganat tersebut didasari oleh hasil penelitian
(Hafiz et al., 2012) yang menyatakan bahwa pewarna alami harus dioksidasi
terlebih dahulu. Berdasarkan penelitian tersebut dinyatakan bahwa kalium
permanganat adalah oksidator yang paling bagus digunakan dibandingkan
dengan hydrogen peroxide, ferric chloride, dan potassium alum. Penambahan
KMnO₄ pada substrat yang dilarutkan pada pelarut organik mempunyai
mekanisme oksidasi yang salah satu kemungkinannya adalah melalui disosiasi
komplek pasangan ion (Dash et al., 2009).
Mekanisme pada pewarnaan bakteri oleh zat alami yang dioksidasi oleh
kalium permanganat di duga terjadi karena adanya disosiasi komplek pasangan
ion zat warna dan kalium permanganat menjadi komplek kation kalium dan
16
MnO₄- yang menjadi anion komplek kation kalium dengan zat warna tersebut
menunjukan adanya ion bermuatan positif, sehingga memiliki sifat dapat
terikat pada komponen sel yang bermuatan negatif. Sel bakteri kaya asam
nukleat yang banyak membawa muatan negatif dalam bentuk gugus posfat,
sehingga akan berikatan dengan pewarna basa yang bermuatan positif (Brooks
et al., 2004).
Ion permanganat memiliki geometri tetrahedral dengan ikatan yang luas.
Ini stabil dalam media netral atau sedikit basa, tetapi dalam media yang sangat
basa, tidak proporsional atau bereaksi dengan ion hidroksida untuk membentuk
mangan (V) (hipomanganat) atau manganes (VI) (manganat). Akibatnya, pada
nilai pH tinggi, terkadang sulit untuk memastikan apakah oksidasi berlangsung
melalui proses satu atau dua elektron. Dalam larutan netral atau sedikit basa
dalam gelap, sangat lambat. Namun, dikatalisis oleh cahaya dalam larutan basa,
permanganat berfungsi sebagai oksidator kuat (Dash et al., 2009).
b. Hidrogen Peroksida ( H₂O₂)
Hidrogen peroksida (H₂O₂) adalah cairan tak bewarna dengan rasa pahit
dan sangat larut dalam air menghasilkan larutan asam. H₂O₂ adalah agen
pengoksidasi dengan berbagai aplikasi industri seperti pemutihan atau
penghilang bau tekstil, pulp kayu, rambut, bulu dan makanan, dalam
pengolahan air dan limbah, sebagai desinfektan benih dan agen penetral dalam
17
distilasi anggur. Konsentrasi rendah H₂O₂ telah ditemukan dalam hujan dan air
permukaan, pada jaringan manusia dan tumbuhan, pada makanan dan
minuman, dan pada bakteri. Hidrogen peroksida adalah spesies oksigen reaktif,
bersama dengan superoksida (O2-), hidroksil (HO), peroksil (ROO) dan
alkoksil (RO) (Putra, 2020).
Senyawa ini ditemukan oleh Louis Jacques Thenard pada tahun 1818 dan
disebut sebagai "air teroksidasi". Sebagai senyawa teroksidasi, hidrogen
peroksida bersifat tidak stabil dan sangat mudah terurai dalam bentuk basa nya.
Hal ini membuatnya lebih sering disimpan dalam larutan asam lemah untuk
mencegah dekomposisi saat disimpan dalam waktu yang lama. Pada
perkembangannya, hidrogen peroksida pun mulai diproduksi masal dan
digunakan untuk berbagai keperluan, seperti pemutih dan bahan detergen.
Sekitar 60% produksi H₂0₂ di dunia digunakan sebagai produk pemutih kertas,
sementara sisanya digunakan sebagai campuran detergen dalam bentuk
natrium perkarbonat (Na₂CO₃). Sifat korosif senyawa ini dapat dengan mudah
mengangkat noda dari kain dan substrat lain apabila digunakan dalam jumlah
yang tepat (Akbar, 2018).
Hidrogen peroksida (H₂O₂) sebagai bahan kimia anorganik dalam bidang
industri dan biasanya digunakan sebagai bahan pemutih pada kertas, pakaian,
tekstil dan lain-lain dan sebagai desinfektan (pembunuh kuman) pada furniture
serta merupakan senyawa yang tidak aman bagi manusia yaitu sebagai oksidan
yang dapat menyebabkan kondisi dalam sel yang reduktif menjadi oksidatif,
18
jika dikonsumsi oleh tubuh secara terus-menerus dapat menyebabkan
terjadinya kanker (Riyadi dan Utami, 2009).
Hasil penelitian (Fatonah 2016), pada perlakuan 0 jam, pengukuran
terhadap absorbansi ekstrak buah senggani didapatkan sebesar 0,598 setelah 3
jam lama reaksi antara oksidator dan sampel didapatkan nilai absorbansi
sebesar 0,429. Persentase penurunan absorbansi pada 3 jam reaksi adalah
sebesar 16,9%. Setelah 6 jam dilakukan kembali pengukuran terhadap nilai
absorbansi, didapatkan nilai sebesar 0,316. Persentase penurunan absorbansi
pada waktu reaksi 6 jam adalah 47,1%. Dari data diatas disimpulkan bahwa
antosianin pada buah senggani mengalami degradasi warna dengan
penambahan hidrogen peroksida. Antosianin yang tidak mengandung gugus
hidroksil bebas dan terikat bersebelahan, akan bereaksi dengan hidrogen
peroksida menghasilkan turunan asam benzoat. Reaksi ini terjadi karena
adanya pemutusan ikatan antara atom C-2 dan atom C-3 dari cincin peroksinum
(Siregar dan Nurlela, 2011).
2. Angkak
Angkak dikenal dengan banyak sebutan yaitu Hung-Chu, Hong Qu, Beni-
Koji, red yeast rice, dan red mold rice (Lin, et al., 2008). Angkak merupakan
hasil fermentasi beras dengan bantuan kapang Monascus sp. Dengan strain yang
paling sering digunakan yaitu Monascus Purpureus Dari aktivitas fermentasi

19
tersebut dapat menghasilkan pigmen warna sebagai metabolit primer. Pigmen
warna yang muncul yaitu monascin dan ankavlavin (pigmen kuning),
monaskorubin (pigmen merah) dan rubronpunctatin (pigmen jingga) (Romulo,
2012).
Pigmen merah tersebut mempunyai sifat kestabilan yang baik pada suhu 50º
C selama 30 menit, 5 jam pada UV. Berbeda dengan pigmen merah alami lainnya
seperti antosidanin yang lebih stabil pada pH asam. Pigmen merah pada angkak
(monaskurobin) lebih stabil pada pH basa dan mengalami kerusakan pada
kondisi asam. Pigmen tersebut memiliki strukstur kimia yang bersifat larut
dalam air, kloroform, aseton, etanol, dan metanol (Priatni, 2015).
Angkak merupakan salah satu pewarna alami yang dapat digunakan dan
dikembangkan. Angkak adalah hasil produksi fermentasi beras (Oryza sativa)
oleh kapang Monascus purpureus yang berupa pigmen berwarna kuning sampai
merah. Monascus purpureus sendiri merupakan kapang utama yang ada pada
angkak (Ismawatie, 2010).
Penggunaan angkak sebagai pewarna telah banyak diaplikasikan khususnya
di wilayah Asia. Di Cina sendiri angkak digunakan sebagai pewarna keju dan
minuman cina yang dikenal sebagai anchu. Pigmen angkak di Jepang juga
digunakan secara luas. Mereka menggunakan pigmen kuning sebagai pewarna
produk confectionary dan pigmen merah pada wine (Andarwulan dan Faradilla,
2012).
Warna merah angkak sangat potensial sebagai pengganti warna merah
sintetik yang saat ini penggunaannya sangat luas pada berbagai produk makanan.
20
Monascus menghasilkan enam jenis pigmen, yaitu dua pigmen kuning:
monascin dan ankaflavin, dua pigmen jingga: monascorubrin dan
rubropunctanin dan dua pigmen merah: monascorubramine dan
rubropunctamine (Andarwulan dan Faradilla, 2012).
Penggunaan angkak sebagai pewarna makanan dilakukan karena
mempunyai beberapa keunggulan antara lain: warna yang diperoleh lebih
konsisten dan stabil, pigmen yang dihasilkan dapat larut dalam air, warna yang
dihasilkan dapat bercampur dengan pigmen lain serta aman untuk dikonsumsi.
Angkak merupakan produk fermentasi yang potensial untuk dikembangkan
sebagai zat pewarna alami produk makanan dan menjadi alternatif pengganti zat
warna sintetis (Ramadhan et al., 2013).
Angkak juga terkenal karena kadar antioksidan nya yang tinggi. Selain
merusak pigmen yang ada, suhu yang tinggi dan waktu pemanasan yang lama
dapat mengakibatkan kerusakan senyawa antioksidan nya (Nur dan Estiasih,
2009).
3. Daun Jati
Tanaman jati yang tumbuh di Indonesia berasal dari India. Tanaman yang
mempunyai sebutan ilmiah Tectona grandis linn. F. Secara historis, penamaan
Tectona berasal dari bahasa portugis (Tekton) yang berarti tumbuhan yang
memiliki kualitas tinggi. Di negara asalnya, tanaman jati ini dikenal dengan
banyak nama daerah, seperti Ching-jagu (di wilayah Asam), Saigun (Bengali),
21
Tekku (Bombay), dan Kyun (Burma). Tanaman ini dalam bahasa Jerman dikenal
dengan nama Teck atau Teakbun, sedangkan di Inggris dikenal dengan nama
teak. Secara morfologis, tanaman jati memiliki tinggi yang dapat mencapai
sekitar 30-45 m dengan pemangkasan, batang yg bebas cabang dapat mencapai
antara 15–20 cm. Diameter batang dapat mencapai 220 cm. Kulit kayu berwarna
kecoklatan atau abu-abu yang mudah terkelupas. Pangkal batang berakar papan
pendek dan bercabang sekitar 4. Daun berbentuk jantung membulat dengan
ujung meruncing, berukuran panjang 20-50 cm dan lebar 15–40 cm,
permukaannya berbulu. Daun muda (petiola) berwarna hijau kecoklatan,
sedangkan daun tua berwarna hijau tua keabu-abuan (Yana, 2006).
Menurut (Yana, 2006) dalam sistematika (taksonomi) tumbuhan, sampel
daun jati muda memiliki klasifikasi ilmiah sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Angiospermae
Sub-kelas : Dicotyledoneae
Ordo : Verbenales
Famili : Verbenaceae
Genus : Tectona
Spesies : Tectona grandis linn. F.
Tanaman jati (Tectona grandis) merupakan tanaman yang banyak tumbuh
di daerah tropis seperti Indonesia. Daun dari tanaman jati dapat digunakan
sebagai makanan maupun obat-obatan. Beberapa tahun belakangan ini,

22
penggunaan obat herbal cukup marak, salah satunya berasal dari daun pohon jati
(Yana, 2006).
Menurut (Setijo, 2010), pucuk daun dan daun muda adalah bagian yang
terpenting dalam usaha memperoleh zat warna merah dari tanaman jati. Cara
untuk menyiapkan pucuk daun dan daun muda tanaman jati yaitu dengan
memetiknya secara langsung dari pohon jati. Daun jati dibersihkan dari kotoran
dan dipotong kecil-kecil, kemudian dilumatkan dengan alat pelumat.
Selanjutnya, ditambahkan sedikit air, kemudian diperas dan disaring. Air
seduhan daun jati muda berwarna merah tua, berbau khas dan agak sepet. Warna
air seduhan bertahan agak lama dan setelah 24 jam akan terbentuk endapan
merah tua.
Menurut Nurwanti (2012) daun jati muda memiliki kandungan beberapa
senyawa pigmen terutama antosianin yang dapat digunakan sebagai pewarna
alami. Daun jati muda mengandung pigmen alami antosianin yang cukup tinggi
sehingga dapat memberikan warna merah pada preparat.
Banyak tumbuhan di Indonesia yang belum tereksploitasi, dapat
dimanfaatkan sebagai pewarna alami makanan salah satunya yaitu tanaman jati
(T. grandis). Daun jati yang terdapat di daerah tropis sejauh ini masih jarang
dimanfaatkan. Daun jati merupakan salah satu sumber pigmen antosianin yang
dapat memberikan warna merah. Oleh karena itu, daun jati muda dapat dijadikan
sebagai alternatif baru penghasil warna alami dan antioksidan (Fathinatullabibah
dkk, 2014).
23
Dari struktur molekul antosianin tersebut dapat diketahui bahwa zat warna
dari daun jati muda merupakan zat organik yang tidak jenuh dan termasuk
golongan flavonoid. Struktur utamanya ditandai dengan adanya dua cincin
aromatik benzene (C6H6) yang dihubungkan dengan tiga atom karbon. Ketiga
atom karbon tersebut dirapatkan oleh sebuah atom oksigen, sehingga terbentuk
cincin diantara dua cincin benzene 7. Di dalam larutan, antosianin berada dalam
5 bentuk kesetimbangan tergantung pada kondisi pH. Ke 5 bentuk tersebut yaitu
kation flavilium, basa karbinol, kalkon, basa quinonoidal dan quinonoidal
anionik. Pada pH sangat asam (pH 1-2) bentuk dominan antosianin adalah kation
flavilium. Pada bentuk ini, antosianin berada dalam kondisi paling stabil dan
paling berwarna. Ketika pH meningkat diatas 4, berbentuk senyawa antosianin
berwarna kuning (bentuk kalkon), senyawa berwarna biru (berbentuk quinoid),
atau senyawa yang tidak berwarna (basa karbinol) Sea Fast Centre, 2013.
Dengan ion logam, antosianin membentuk senyawa kompleks yang berwarna
abu-abu violet (Koswara. S, 2009).
4. Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus merupakan bakteri gram positif berbentuk bulat
berdiameter 0,7 – 1,2 um, tersusun dalam kelompok kelompok yang tidak teratur
seperti buah anggur, fakultatif anaerob, tidak membentuk spora, dan tidak
bergerak. Berdasarkan bakteri yang tidak membentuk spora, maka S.aureus
termasuk jenis bakteri yang paling kuat daya tahannya. Pada Agar miring dapat
24
tetap hidup sampai berbulan bulan, baik dalam lemari es maupun pada suhu
kamar. Dalam keadaan kering pada benang, kertas dan dalam nanah dapat tetap
hidup selama 6-14 minggu (Syahrurahman et al., 2010).
Menurut (Syahrurahman et al., 2010), klasifikasi Staphylococcus aureus
adalah sebagai berikut:
Domain : Bacteria
Kingdom : Eubacteria
Ordo : Eubacteriales
Famili : Micrococcaceae
Genus : Staphylococcus
Spesies : Staphylococcus aureus
Sebagian bakteri S.aureus merupakan normal flora pada kulit, saluran
pernafasan, dan saluran pencernaan makanan pada manusia. Bakteri ini juga
ditemukan di udara dan di lingkungan sekitar. S.aureus yang patogen bersifat
invasive, menyebabkan hemolysis, membentuk koagulase, dan mampu
meragikan mannitol. S.aureus yang terdapat di folikel rambut menyebabkan
terjadinya nekrosis pada jaringan setempat (Jawetz et al., 2008).
5. Escherichia coli
Escherichia coli merupakan bakteri batang gram negatif, tidak berspora,
motil berbentuk flagel peritrik, berdiameter ± 1,1 – 1,5 µm x 0,2 – 0,6 µm. E.
25
coli dapat bertahan hidup di medium sederhana menghasilkan gas dan asam dari
glukosa dan memfermentasi laktosa. Pergerakan bakteri ini motil, tidak motil,
dan peritrikus, ada yang bersifat aerobik dan anaerobik fakultatif (Elfidasari et
al., 2011).
Bakteri E. coli adalah satu jenis spesies utama bakteri gram negatif fakultatif
anaerobic yang mempunyai alat gerak berupa flagel dan tersusun dari sub unit
protein yang disebut flagelin, yang mempunyai berat molekul rendah dengan
ukuran diameter 12-18 nm dan dengan panjang 12 nm, kaku dan berdiameter
lebih kecil dan tersusun dari protein, pili dapat berfungsi sebagai jalan
pemindahan DNA saat konjugasi. Selain itu, mempunyai kapsul atau lapisan
lendir yang merupakan polisakarida tebal dan air yang melapisi permukaan luar
sel (Ikmalia, 2008).
Bakteri E. coli mempunyai tiga jenis antigen, yaitu antigen O, antigen K dan
atigen H. Antigen-O yang merupakan inti dari lipopolisakarida dan unit-unit
polisakarida, biasnya antigen-O berhubungan dengan penyakit khusus pada
manusia, misalnya tipe spesifik O dari E. coli ditemukan pada diare. Antigen-K
yang merupakan kapsul dari polisakarida, sedangkan antigen-H merupakan
antigen flagella (Wibowo et al., 2008).
Bakteri E. coli adalah salah satu bakteri yang digunakan sebagai indikator
adanya kontaminasi feces dan kondisi sanitasi yang tidak baik terhadap air,
makanan, dan minuman. E. coli menjadi patogen jika jumlah bakteri dalam
saluran pencernaan meningkat atau berada di luar usus, menghasilkan
enterotoksin sehingga menyebabkan terjadinya bebarapa infeksi yang

26
berasosiasi dengan enteropatogenik kemudian menghasilkan enterotoksin pada
sel epitel. Manifestasi klinik infeksi oleh E. coli bergantung pada tempat infeksi
dan tidak dapat dibedakan dengan gejala infeksi yang disebabkan oleh bakteri
lain (Ismail, 2012).
6. Pewarnaan Gram
Secara konvensional, untuk mengelompokkan suatu bakteri termasuk dalam
gram positif atau gram negatif, dilakukan teknik pewarnaan Gram yang
dilanjutkan dengan pengamatan di bawah mikroskop. Bakteri gram positif akan
berwarna ungu kebiruan sedangkan bakteri gram negatif akan berwarna merah
(Cappucino, 2001).
Pengetahuan tentang sifat gram suatu bakteri dapat membantu dokter untuk
memilih terapi antimikroba yang sesuai karena banyak obat antimikroba secara
selektif memiliki aktivitas terhadap bakteri gram positif atau gram negatif. Untuk
itu diperlukan suatu metode yang dapat digunakan untuk identifikasi awal sifat
gram bakteri yang dapat dilakukan dengan cepat, murah dan praktis (Sacher,
2004).
Pewarnaan Gram mempunyai kelebihan dapat mengetahui morfologi
bakteri selain sifat Gram bakteri tersebut sehingga dapat mempunyai makna
diagnostik. Kekurangan tes ini memerlukan tenaga terlatih untuk identifikasi
sifat gram dan morfologi bakteri serta memerlukan alat mikroskop (Triyana,
2007).
27
Menurut Brown (2005), bahwa secara morfologis, bakteri Gram positif pada
pewarnaan Gram akan memperlihatkan bentuk coccus, baik tunggal atau rantai
pendek dan berwarna ungu. Warna ungu yang terbentuk didapat dari ikatan
antara Kristal violet dan iodium yang digunakan saat pewarnaan Gram. Bakteri
ini memiliki struktur peptidoglikan pada dinding sel yang tebal (90%). Dinding
sel yang tebal ini akan menyusut saat pemberian alkohol akibat terjadinya
dehidrasi sel dan menyebabkan bakteri memiliki kemampuan mempertahankan
warna Kristal violet.
a. Prinsip pewarnaan Gram
Pewarnaan ini dikembangkan pertama kali oleh Christian Gram
(1884) dan termasuk pengecatan differensial, karena dapat membedakan
bakteri yang bersifat gram positif dan gram negatif. Dari segi pewarnaan
perbedaan antara bakteri Gram positif dan Gram negatif dapat diamati dengan
jelas. Bakteri Gram positif mengikat cat utama (crystal violet) dengan kuat
sehingga tidak dapat dilunturkan oleh cat peluntur dan tidak diwarnai lagi
oleh cat lawan (safranin), hal ini disebabkan karena sifat dinding sel dan
sitoplasmanya, yang mempunyai afinitas kuat terhadap kompleks crystal
violet dan iodine (jodium). Bakteri Gram negatif tidak mengikat cat utama
secara kuat, sehingga dapat dilunturkan oleh peluntur dan dapat diwarnai oleh
cat lawan (Fitriani, 2019).

28
b. Komposisi pembuatan pewarnaan Gram (Saragih AB, 2013)
Jenis Pewarna Komposisi
Pewarna Primer 1.Kristal Violet 2 gr
(Kristal violet) 2.Etil Alkohol 95% 20 ml
3.Amonium Oksalat 0,8 gr
4. Akuades Steril 80 ml
Larutan Mordant 1.Potasium Iodid 2 gr
(Lugols iodine) 2.Kristal Iodin 1 gr
3.Akuades Steril 300 ml
Larutan Dekolorizer 1.Etanol 50 ml
(Etil Alkohol) 2.Aseton 50 ml
Pewarna Sekunder 1.Safranin 0,25 gr
(Safranin) 2.Etanol 95% 10 ml
3.Akuades steril 90 ml
c. Prosedur Pewarnaan Gram
1). Siapkan kaca objek yang bersih dan sudah di fiksasi di atas lampu bunsen.
2). Teteskan 1-2 tetes aquades steril diletakkan di atas kaca objek.
3). Ambil satu ose bakteri dari media biakan diletakkan di atas aquades steril
Selanjutnya di ratakan.
4). Setelah kering, lewatkan 3 kali di atas api bunsen preparat bakteri yang
di buat tujuan mematikan bakteri tapi tetap mempertahankan morfologi.
5). Teteskan denga Kristal violet (Gram A) selama 60 detik.

29
6). Kemudian bilas dengan aquadest, lalu keringkan.
7). Teteskan larutan iodium (Gram B) selama dua menit.
8). Bilas dengan aquadest lalu keringkan.
9). Teteskan dengan Etanol 96% (Gram C) selam 30 detik.
10). Cuci dengan aquadest lalu keringkan.
11). Teteskan dengan Safranin (Gram D) selama 30 detik.
12). Bilas dengan aquadest, lalu keringkan.
13). Setelah itu amati di bawah mikroskop pada perbesaran kuat (Waluyo,
2010).
Gambar 2.2 Pewarnaan Gram (Benjamin Cummings, 2004)
d. Hasil pewarnaan Gram
1). Gram positif
Adalah bakteri yang mempertahankan zat warna kristal violet
sewaktu proses pewarnaan gram sehingga akan berwarna ungu di bawah
mikroskop, Perbedaan keduanya didasarkan pada perbedaan struktur
dinding sel yang berbeda dan dapat dinyatakan oleh prosedur pewarnaan
30
gram, ditemukan oleh ilmuwan Denmark bernama Christian gram dan
merupakan prosedur penting dalam klasifikasi bakteri. (Jawetz, 2005).
Beberapa sepesies Staphylococcus sp merupakan anggota flora
normal pada kulit dan selaput lendir manusia, Staphylococcus yang
patogen sering menghemolisa darah, mengkoagulasi plasma dan
menghasilkan beberapa enzim dan toksin yang setabil terhadap panas. 3
type Staphylococcus yang berkaitan dengan medis adalah,
Staphylococcus epidermoidis, Staphylococcus saprophyticus,
Staphylococcus aureus, bersifat koagulase positif, merupakan patogen
utama pada manusia, Staphylococcus koagulasi negatif merupakan flora
normal manusia dan kadang-kadang menyebabkan infeksi, misalnya
Staphylococcus epidermidis (Jawetz, 2005)
Gambar 2.3 Bakteri Staphylococcus aureus pada hasil

pewarnaan Gram yang diamati di bawah mikroskop dengan
pembesaran 1000x (sumber JIMVET. 01(3): 366-374 (2017)
31
2). Gram negatif
Bakteri gram negatif merupakan bakteri yang tidak mampu
mempertahankan warna kristal violet pada dinding selnya saat perwarnaan
gram dilakukan, pewarnaan gram sangat penting untuk mengetahui
klasifikasi bakteri dan mengetahui identifikasinya (Radji, 2006).
Escherichia coli bakteri gram negatif, bentuk batang, tidak
bersepora, memiliki flagel, ukuran kecil - sedang, konsistensinya halus,
tepi rata, menghasilkan tes positif terhadap indol dan menghasilkan gas
dari glukosa, Escherichia coli mempunyai morfologi yang khas pada
media pembeda seperti media agar EMBA akan menunjukkan warna
kemilau Metalic sheen dan tes indol positif. Patogenitas Escherichia coli
menyebabkan penyakit bila resistensi usus melemah, bakteri akan
menyerang jaringan dinding usus yang meyebabkan diare pada usus
manusia, infeksi saluran kemih, infeksi saluran paru (infeksi nosokomial)
dan infeksi kulit (Jawetz, 2005).
Gambar 2.4 Escherichia coli pada pembesaran lensa objektif

100x (Hasibuan, 2016).
32
B. KERANGKA PIKIR
PEWARNAAN GRAM
Alami Sintetis
Daun Jati, Angkak Gram D (Safranin)
Antosianin
Harga mahal dan
mudah rusak dalam
penyimpanan
Sel Terwarnai Penambahan Oksidator
KMnO₄ H₂O₂
Oksidasi Zat Warna Degradasi zat warna
Ikatan KMnO₄ dan Sel Terwarnai Tipis

Antosianin
Sel Terwarnai jelas

33
C. HIPOTESA
Adapun hipotesis dalam penelitian adalah, dengan penambahan oksidator
(KMnO₄ dan H₂O₂) pada air rendaman angkak dan daun jati berpengaruh terhadap
hasil pewarnaan modifikasi Gram.

BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
A. Desain penelitian
Penelitian ini menggunakan desain deskriptif dengan pendekatan
eksperimental untuk melihat pengaruh penambahan oksidator KMnO₄ dan H₂O₂
pada pewarna alami rendaman angkak dan daun jati terhadap bakteri gram positif
dan bakteri gram negatif dengan mengamati parameter kejelasan lapangan pandang,
kekontrasan warna dan kesempurnaan bentuk bakteri yang diwarnai.
B. Tempat dan waktu penelitian
1. Tempat penelitian
Tempat penelitian ini dilakukan di Laboratorium Klinik Prodia Metro
Lampung.
2. Waktu Penelitian
Waktu penelitian dari bulan Januari – Maret 2022.
34
35
C. Subjek dan Objek penelitian
1. Subjek penelitian ini adalah air rendaman angkak dan daun jati yang ditambahkan
oksidator KMnO₄ dan H₂O₂.
2. Objek Penelitian
Objek penelitian ini bakteri gram positif dan gram negatif
menggunakan modifikasi rendaman angkak dan daun jati.
D. Populasi dan Sampel penelitian
1. Populasi
Populasi penelitian ini adalah angkak (Monascus purpureus) dan daun jati
(Tectona grandis linn. F).
2. Sampel
Sampel penelitian ini adalah angkak (Monascus purpureus) dan daun jati
(Tectona grandis linn. F).
E. Variabel penelitian
1. Variabel bebas (Independent Variable)
Variabel Bebas (Independent Variable) variabel yang mempengaruhi
atau yang menjadi sebab perubahannya atau timbulnya variabel dependen.
Variabel ini dapat merupakan faktor stimulus, prediktor, antecedent (Sugiyono,

36
2014). Variabel bebas dalam penelitian ini adalah:
a). Oksidator ( KMnO₄ dan H₂O₂)
b). Air rendaman angkak dan daun jati
2. Variabel terikat (Dependent Variable)
Adalah variabel variabel yang dipengaruhi atau yang menjadi akibat,
karena adanya variabel bebas. Variabel ini disebut sebagai variabel output,
kriteria, konsekuen (Sugiyono, 2014). Dalam penelitian ini, variabel terikat
adalah : Pewarnaan Gram.
F. Defenisi operasional variable penelitian
Tabel 3.1 Defenisi Operasional Variable
Variabel Definisi Operasional Cara ukur Hasil ukur Skala

Ukur
KMnO₄ dan Oksidator yang dipakai Oksidator Konsentrasi Numerik
untuk mengoksidasi dibuat KMnO₄ 0,1
H₂O₂
rendaman angkak dan menggunakan N dan H₂O₂
daun jati rumus 1%
pengenceran
Angkak yang di beli dari Rendaman Pemberian

pasar swalayan dan daun Angka dan Oksidator
jati muda yang berasal Daun jati (KMnO₄ dan
dari kebun jati daerah H₂O₂)
Air rendaman Numerik
Pesawaran Lampung kombinasi
angkak dan dibuat dengan cara angkak daun
merendam dalam air jati (2:1).
daun jati
selama 10-12 jam
37
Pewarnaan Memberikan pewarnaan Bakteri kejelasan Numerik

Gram sel bakteri dengan Staphylococcus lapang
menggunakan zat kimia aureus dan pandang,
tertentu. untuk Bakteri kekontrasan
membedakan jenis-jenis Escherichia.coli warna dan
bakteri berdasarkan kesempurnaan
komposisi kimiawi bentuk bakteri
dinding sel yang berupa yang diwarnai
peptidoglikan
G. Teknik Sampling
Teknik sampling menggunakan metode probability sampling secara simple
random sampling.
H. Sumber Data Penelitian
Data penelitian ini adalah data primer yang berasal dari pengamatan
langsung hasil pewarnaan preparat bakteri gram positif (Staphylococcus aureus
ATCC 25923) dan gram negatif (Escherichia.coli ATCC 25922) menggunakan
modifikasi rendaman angkak dan daun jati yang ditambahkan oksidator KMnO₄
dan H₂O₂ dengan perbandingan warna kontrol dari pewarnaan gram. Parameter
yang diamati meliputi kejelasan lapang pandang, kekontrasan warna dan
kesempurnaan bentuk bakteri yang diwarnai.

38
I. Instrumen Penelitian
1. Alat dan bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah gunting, kaca objek, ose,
lampu bunsen, rak pengecatan, pipet tetes, batang pengaduk, botol semprot, neraca
analitis, indikator pH merk MQuant 1.09543.0001, gelas ukur volume 50 mL dan
10 mL, kertas saring Whatman, corong gelas, mikroskop, gelas erlemeyer volume
500 mL, pipet ukur 5 mL, pipet gondok 1 mL, 2 mL, 3 mL, pipet pump merk
Marienfield, botol gelap wadah reagen.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah KMnO₄ 0,1N merk
Merck, H₂O₂ merk Merck, angkak, daun jati muda, aqudest steril, pewarna gram
(gram set) merk Indo Reagen 0030544 B, minyak imersi, biakan bakteri
Staphylococcus aureus kode ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922.
2. Cara Pembuatan zat warna modifikasi
a.Timbang 5 gram Angkak dan 5 gram daun jati yang sudah dibersihkan dan
dipotong potong kecil.
b. Rendam masing masing dalam 10 mL aquades, biarkan selama 10-12 jam.
c. Kemudian hasil rendaman disaring menggunakan kertas saring masing-
masing zat warna.
d. Setiap zat warna yang dibuat tersebut dipipet dicampurkan ke dalam satu
wadah dengan komposisi larutan angkak sebanyak 2 mL dan larutan daun

39
jati sebanyak 1 mL (komposisi 2: 1 berdasarkan penelitian Luciana. C, 2016
dimana zat warna merah dari angkak berfungsi mewarnai sel bakteri,
sedangkan zat warna antosianin dari daun jati berfungsi memperjelas
morfologi/ bentuk bakteri ), sehingga di dapatkan zat warna:
a). Kombinasi angkak : daun jati (2:1) zat warna tanpa perlakuan
b). Kombinasi angkak: daun jati (2:1) di tambahkan oksidator KMnO₄ 0,1N
1mL
c). Kombinasi angkak: daun jati (2:1) di tambahkan oksidator H₂O₂ 1% 1 mL.
3. Cara pewarnaan modifikasi
a. Preparat yang telah di fiksasi di letakkan di atas rak pengecatan.
b. Teteskan pewarna primer (Kristal Violet) secara merata pada ulasan bakteri,
biarkan selama 20 detik.
c. Bilas pewarna primer menggunakan akuades steril dan tunggu hingga cukup
kering.
d. Teteskan larutan mordant (Lugols Iodine) pada permukaan ulasan bakteri, dan
biarkan selama 60 detik.
e. Bilas larutan mordant menggunakan akuades steril dan tunggu hingga cukup
kering.
f. Teteskan larutan dekolorizer (Alkohol Asam) secara merata pada ulasan
bakteri hingga permukaan ulasan tampak jernih.
g. Bilas larutan dekolorizer menggunakan akuades steril dan tunggu hingga
cukup kering.
40
h. Teteskan preparat bakteri dengan larutan pewarna modifikasi rendaman
angkak dan daun jati masing-masing:
1). Zat warna tanpa perlakuan selama 10 menit
2). Zat warna yang di tambah KMnO₄ 0.1N selama 10 menit
3). Zat warna yang di tambah H₂O₂ 1% selama 10 menit
i. Bilas dengan akuades steril, kemudian keringkan di udara.
j. Baca pada mikroskop objektif 100x.
k. Amati kejelasan lapangan pandang, kekontrasan warna dan kesempurnaan
bentuk/ morfologi bakteri yang di warnai.
J. Alur Penelitian
PEMBUATAN CAT
WARNA
KULTUR BAKTERI
PENGECATAN
PENGAMATAN
MIKROSKOPIS
PELAPORAN HASIL
PENGAMATAN
41
K. Tehnik analisa data penelitian
Analisa data penelitian ini adalah deskriptif dengan desain quasi-
eksperimen menggunakan postest pada kelompok kontrol dan kelompok sampel
/eksperimen, kemudian diberikan perlakuan yang berbeda pada kedua kelompok
tersebut. Hasilnya kemudian dibandingkan secara langsung antara hasil
pewarnaan gram positif (Staphylococcus aureus ATCC 25923) dan gram negatif
(Escherichia.coli ATCC 25922) menggunakan modifikasi air rendaman angkak
dan daun jati antara yang tidak ditambahkan oksidator KMnO₄ dan H₂O₂ dengan
yang ditambahkan oksidator KMnO₄ dan H₂O₂.
Hasil pengamatan berupa scoring terhadap parameter yang diamati yaitu:
Tabel 3.2 Scoring pengamatan
Parameter Deskripsi SCORING

Pengamatan
Lapangan pandang kurang terlihat jelas, sulit 1
Kejelasan identifikasi bentuk bakteri
lapangan pandang Lapangan pandang terlihat jelas untuk 2
identifikasi bentuk bakteri
Bakteri terwarnai tetapi warna samar dan 1
Kekontrasan kurang kontras
Warna Bakteri terwarnai baik, jelas dan warna 2
kontras baik untuk pengamatan
Bentuk bakteri kurang jelas 1
Bentuk/morfologi
bakteri Bentuk bakteri jelas 2
42
L. Jadwal dan rencana penelitian
Jadwal rencana penelitian yang meliputi persiapan, pelaksanaan dan
pelaporan hasil penelitian ini direncanakan dan dilaksanakan dari bulan
September 2021 – Juni 2022 dengan rincian sebagai berikut:
Tabel 3.3 Jadwal Rencana Penelitian
2021 2022
Kegiatan
Sept Okt Nop Des Jan Febr Mar Apr Mei Jun
Sosialisasi
Mahasiswa
Sosialisasi
Dosen
Pembimbing
Pengajuan
Judul
Proposal
Bab I-III
Ujian
Proposal
Pengumpulan
Form
Pesetujuan
Revisi
Kegiatan
Penelitian
Bab IV-V
Ujian
Pendadaran
Ujian
Terbuka
Pengumpulan
Naskah
Skripsi
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil penelitian
Berdasarkan hasil penelitian pewarnaan modifikasi Gram dengan
menggunakan air rendaman angkak dan daun jati dengan penambahan oksidator
KMNO₄ dan H₂O₂ pada bakteri Staphlylococcus aureus ATCC 25923 dan
Escherichia coli ATCC 25922, didapatkan hasil pengamatan.
Tabel 4.1 Hasil pewarnaan preparat
Parameter
No Preparat Bakteri Pewarnaan Score
Pengamatan
1 Staphylococcus Gram Kontrol Kejelasan lapangan
2
aureus ATCC pandang
25923 Kekontrasan Warna 2
Bentuk/morfologi
2
bakteri
Total score 6
2 Escherichia coli Gram Kontrol Kejelasan lapangan

2
ATCC 25922 pandang
2
Kekontrasan Warna
43
44
Bentuk/morfologi
2
bakteri
Total score 6
3 Staphylococcus Angkak + daun Kejelasan lapangan

2
aureus ATCC jati (2:1) pandang
25923 Kekontrasan Warna 2
Bentuk/morfologi
2
bakteri
Total score 6
4 Escherichia coli Angkak + daun Kejelasan lapangan

2
ATCC 25922 jati (2:1) pandang
Kekontrasan Warna 1
Bentuk/morfologi
1
bakteri
Total score 4

2
aureus ATCC jati (2:1) + pandang
25923 Oksidator Kekontrasan Warna 2
KMnO₄ Bentuk/morfologi
2
bakteri
Total score 6

2
ATCC 25922 jati (2:1) + pandang
45
Oksidator Kekontrasan Warna 1
KMnO₄ Bentuk/morfologi
1
bakteri
Total score 4

2
aureus ATCC jati (2:1) + pandang
25923 Oksidator H₂O₂ Kekontrasan Warna 2
Bentuk/morfologi
2
bakteri
Total score 6

2
ATCC 25922 jati (2:1) + pandang
Oksidator H₂O₂ Kekontrasan Warna 1
Bentuk/morfologi
1
bakteri
Total score 4
46
Tabel 4.2 Hasil pewarnaan
Preparat
No Zat Warna Hasil pewarnaan
Bakteri
1 Staphylococcus Gram
aureus ATCC standar
25923
2 Escherichia Gram
coli ATCC standar
25922
3 Staphylococcus Angkak +
aureus ATCC daun jati
25923 (2:1)
47
4 Escherichia Angkak +
coli ATCC daun jati
25922 (2:1)
25923 (2:1) +
Oksidator
KMnO₄
coli ATCC daun jati
25922 (2:1) +
Oksidator
KMnO₄
25923 (2:1) +
Oksidator
H₂O₂
48
coli ATCC daun jati
25922 (2:1) +
Oksidator
H₂O₂
Dari hasil penelitian yang di tunjukan dengan score pembacaan pada Tabel 4.1,
maka didapatkan hasil untuk bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 dari tiga
perlakuan pewarnaan menggunakan bahan cat modifikasi campuran angkak dan
daun jati menunjukan total score 6, yang berarti preparat bakteri dapat diamati
dibawah mikroskop dengan jelas dan dapat diidentifikasi jenis bakteri. Sedangkan
untuk bakteri Escherichia coli ATCC 25922 dari tiga perlakuan pewarnaan
menggunakan cat modifikasi campuran angkak dan daun jati menunjukan total
score 4, yang berarti preparat bakteri hanya terwarnai sel nya saja sehingga tidak
dapat diidentifikasi.
B. Pembahasan
Pewarnaan Gram dilakukan untuk membedakan bakteri berdasarkan grupnya
yaitu gram positif dan gram negatif yang berbeda dalam komposisi dinding sel nya.
Bakteri gram positif dan bakteri gram negatif dibedakan berdasarkan struktur
dinding selnya. Akibat struktur dinding sel yang berbeda, menimbulkan respon
yang berbeda ketika dilakukan pewarnaan gram. Bakteri gram positif memiliki
49
beberapa lapisan peptidoglikan sehingga lapisan peptidoglikannya tebal.
Umumnya, 90% penyusun dinding sel bakteri gram positif merupakan
peptidoglikan. Dinding sel bakteri gram positif mengandung teichoic acid (Tortora
dkk, 2010).
Berbeda halnya dengan bakteri gram negatif, yang memiliki lapisan
peptidoglikan lebih tipis. Namun, dinding sel bakteri gram negatif mempunyai
membran luar. Membran luar terdiri dari lipopolisakarida (LPS), lipoprotein, dan
fosfolipid. Peptidoglikan terikat dengan lipoprotein di membran luar dan
periplasma, yaitu struktur seperti gel yang berada di antara membran luar dan
plasma membran. Selain itu, dinding sel bakteri gram negatif tidak mengandung
teichoic acid (Tortora dkk., 2010).
Pewarna yang digunakan terdiri dari pewarna utama dan pewarna penutup.
Pewarna utama yang digunakan pada pewarnaan Gram yaitu kristal violet yang
berwarna ungu. Pelekatan pewarna utama pada sel bakteri lebih ditingkatkan
dengan penambahan mordant (Harley&Prescott, 2002).
Terjadi mekanisme yang berbeda pada bakteri Gram positif dan Gram negatif
ketika ditambahkan larutan peluntur, pada bakteri Gram positif warna akan
dipertahankan tetapi pada Gram negatif akan hilang. Oleh karena itu diperlukan
pewarna penutup yang kontras untuk mewarnai bakteri Gram negatif, yaitu dengan
pewarna yang berwarna merah. Pewarna penutup yang sering digunakan pada
pewarnaan Gram adalah basic fuchsin atau safranin. Pada penelitian ini dilakukan
pengujian menggunakan rendaman angkak dan daun jati, untuk aplikasinya sebagai
pewarna penutup.
50
Angkak atau beras merah cina adalah salah satu bahan yang biasa digunakan
sebagai pewarna, warna yang dihasilkan oleh angkak adalah warna merah. Warna
merah ini stabil dalam berbagai pH dan mudah larut dalam pelarut polar (Radiastuti,
2005). Selain angkak , daun jati muda juga bisa di gunakan sebagai pewarna, warna
yang di hasilkan adalah warna merah yang di hasilkan dari antosianin (Pratama,
2013).
Berdasarkan hasil penelitian Luciana (2016) bahwa angkak dapat memberikan
warna merah terhadap bakteri tetapi bentuk bakteri yang di dapat tidak jelas
sedangkan hasil yang di dapat pada penggunaan daun jati muda, bakteri tidak
optimal terwarnai tetapi bentuk bakteri terlihat jelas. Maka formula yang
menggunakan kombinasi angkak dan daun jati muda lebih baik digunakan dalam
pewarnaan bakteri. Berdasarkan hasil penelitian (Hafiz.et al, 2012) yang
menyatakan bahwa pewarna alami harus dioksidasi terlebih dahulu dengan
penambahan oksidator dalam penelitian ini menggunakan KMnO₄ dan H₂O₂.
Dari hasil pewarnaan penutup yang dilakukan menggunakan cat modifikasi
pada preparat bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan Escherichia coli
ATCC 25922 di bandingkan dengan pewarnaan standar Gram:
1. Campuran rendaman angkak dan daun jati
2. Campuran rendaman angkak dan daun jati ditambahkan oksidator KMnO₄
3. Campuran rendaman angkak dan daun jati ditambahkan oksidator H₂O₂
Didapatkan hasil pengamatan dibawah mikroskop, bakteri Staphylococcus
aureus ATCC 25923 bisa terwarnai dengan baik sel bakteri, lapangan pandang
yang kontras, morfologi bakteri jelas dan dapat dilakukan identifikasi. Sedangkan
51
untuk bakteri Escherichia coli ATCC 25922 hanya terwarnai sel nya saja, lapangan
pandang tidak kontras, dan morfologi bakteri tidak jelas sehingga sulit dilakukan
identifikasi.
Hasil pewarnaan dapat di lihat pada Tabel 4.2, jika dibandingkan antara hasil
pewarnaan standar Gram untuk bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923
morfologi jelas bentuk bulat/coccus gram positif, diameter 0.7-1.2 um,
berkelompok seperti buah anggur. Sedangkan hasil pewarnaan menggunakan
pewarna penutup modifikasi:
1. Campuran rendaman angkak dan daun jati tanpa penambahan oksidator, terlihat
masih bisa diamati morfologi bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923
bentuk bulat/coccus gram positif, susunan sudah tersebar tidak bergerombol,
ukuran 07-1.2 um, lapangan pandang dan latar belakang jelas, masih bisa di
identifikasi. Berdasar tabel 4.1 data skoring, penilaian skor pengamatan
didapatkan skor 6 sedangkan pewarnaan kontrol Gram skor 6, berarti skor
pengamatan sesuai dengan standar.
2. Campuran rendaman angkak dan daun jati dengan penambahan oksidator
KMnO₄ terlihat morfologi bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 jelas
bentuk bulat/coccus gram positif, ukuran 0.7-1.2 um, lapangan pandang dan latar
belakang warna jelas dan masih bisa dilakukan identifikasi. Berdasar tabel 4.1
data skoring, penilaian skor pengamatan didapatkan skor 6 sedangkan
pewarnaan kontrol Gram skor 6, berarti skor pengamatan sesuai dengan standar.
3. Campuran rendaman angkak dan daun jati dengan penambahan oksidator H₂O₂
terlihat morfologi bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 hasil pewarnaan

52
sedikit lebih tipis tetapi masih cukup jelas bentuk bulat/coccus gram positif,
ukuran 07-1.2 um, lapangan pandang dan latar belakang warna lebih tipis jelas
dan masih bisa dilakukan identifikasi. Berdasar tabel 4.1 data skoring, penilaian
skor pengamatan didapatkan skor 6 sedangkan pewarnaan kontrol Gram skor 6,
berarti skor pengamatan sesuai dengan standar.
Sedangkan hasil pewarnaan preparat bakteri Escherichia coli ATCC 25922
dengan pewarnaan Gram standar terlihat morfologi jelas bentuk batang gram
negatif, ukuran 1.1-1.5 um, bakteri susunannya menyebar. Sedangkan hasil
pewarnaan menggunakan pewarna penutup modifikasi:
1. Dengan campuran rendaman angkak dan daun jati tanpa penambahan oksidator,
pada preparat bakteri Escherichia coli ATCC 25922 jika dibandingkan dengan
hasil pewarnaan kontrol Gram, morfologi terlihat kurang jelas, warna tidak jelas
dan cenderung masih menyerap sisa zat warna utama, lapangan pandang dan
latar belakang tidak cukup jelas, tetapi tidak dapat dilakukan identifikasi.
Berdasar tabel 4.1 data skoring, penilaian skor pengamatan didapatkan skor 4
sedangkan pewarnaan kontrol Gram skor 6, berarti skor pengamatan kurang dari
pewarnaan kontrol sebagi standar.
2. Dengan campuran rendaman angkak dan daun jati dengan penambahan oksidator
KMnO₄ terlihat morfologi bakteri Escherichia coli ATCC 25922 jika
dibandingkan dengan hasil pewarnaan kontrol Gram, morfologi tidak jelas dan
hasil pewarnaan lebih cenderung masih menyerap sisa zat warna utama,
lapangan pandang dan latar belakang cukup jelas, akan tetapi tidak dapat
dilakukan identifikasi. Berdasar tabel 4.1 data skoring, penilaian skor

53
pengamatan didapatkan skor 4 sedangkan pewarnaan kontrol Gram skor 6,
berarti skor pengamatan kurang dari pewarnaan kontrol sebagai standar.
3. Dengan campuran rendaman angkak dan daun jati dengan penambahan oksidator
H₂O₂ terlihat morfologi bakteri Escherichia coli ATCC 25922 jika dibandingkan
dengan hasil pewarnaan kontrol Gram, morfologi tidak jelas dan hasil pewarnaan
lebih cenderung menyerap sisa zat warna utama, lapangan pandang dan latar
belakang cukup jelas akan tetapi lebih tipis , sehingga bakteri sulit dilakukan
identifikasi. Berdasar tabel 4.1 data skoring, penilaian skor pengamatan
didapatkan skor 4 sedangkan pewarnaan kontrol Gram skor 6, berarti skor
pengamatan kurang pewarnaan kontrol sebagai standar.
Jika dibandingkan dengan penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Luciana
(2016) menggunakan campuran ekstrak angkak dan daun jati yang menggunakan
alkohol 96%, menghasilkan zat warna yang lebih tinggi konsentrasinya. Hasil
penelitian ini setelah dilakukan perendaman selama 10 menit terhadap preparat
bakteri menggunakan ekstrak angkak dan daun jati menunjukan lapangan pandang
yang cukup jelas, bentuk bakteri yang sempurna berbentuk batang (Escherichia
coli), hasil yang cukup kontras bila dibandingkan dengan hasil pewarnaan kontrol
Gram. Sehingga simpulan hasil penelitian tersebut, ekstrak angkak dan daun jati
bisa digunakan sebagai alternatif pewarna penutup pada pewarnaan Gram.
Perbedaan hasil penelitian tersebut kemungkinan terjadi akibat konsentrasi zat
pigmen merah: monascorubramine dan rubropunctamine pada angkak dan pigmen
merah antosianin pada daun jati yang rendah, didapatkan dari proses rendaman
menggunakan pelarut aquadest steril, sehingga zat warna tidak optimal diserap oleh
54
dinding sel bakteri. Sedangkan pada penelitian sebelumnya menggunakan ekstrak
angkak dan daun jati menggunakan Alkohol 96% yang dapat menghasilkan zat
warna monascorubramine dan rubropunctamine dari angkak juga antosianin dari
daun jati dengan konsentrasi yang tinggi.
Rendah nya konsentrasi zat warna campuran rendaman angkak dan daun jati
yang dipakai dikarenakan volume pelarut (aquadest steril) yang cukup besar
dibandingkan dengan konsentrasi pigmen merah dari angkak monascorubramine
dan rubropunctamine dan pigmen merah dari daun jati antosianin.
Air merupakan bahan pelarut yang universal, sehingga air merupakan pelarut
yang baik. Air mampu melarutkan berbagai jenis senyawa kimia misalnya seperti
garam-garam, gula, asam, beberapa jenis gas dan banyak macam molekul organik
(Utomo, S. 2015).
Konsentrasi larutan adalah komposisi yang menunjukkan dengan jelas
perbandingan jumlah zat terlarut terhadap pelarut. Kelarutan dapat kecil atau besar
sekali, dan jika jumlah zat terlarut melewati titik jenuh, zat itu akan keluar
(mengendap di bawah larutan). Dalam kondisi tertentu suatu larutan dapat
mengandung lebih banyak zat terlarut dari pada dalam keadaan jenuh (Adha, S. D.
2015). Sifat-sifat suatu larutan sangat dipengaruhi oleh susunan komposisinya.
Untuk menyatakan komposisi larutan tersebut maka digunakan istilah konsentrasi
larutan yang menunjukkan perbandingan jumlah zat terlarut terhadap pelarut
(Khikmah, N. 2015).
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
A. Simpulan
Dari hasil penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan tidak ada pengaruh
penambahan oksidator KMnO₄ dan H₂O₂ pada rendaman angkak dan daun jati pada
hasil modifikasi pewarnaan Gram.
B. Saran
1. Untuk semua TLM yang bekerja di laboratorium dapat bekerja sesuai SOP dan
melaksanakan pedoman K3 di laboratorium secara konsisten agar dapat tercipta
keselamatan kerja.
2. Untuk peneliti selanjutnya, dapat menggunakan bahan pewarna alami lainya
yang memiliki potensi sebagai pewarna.
3. Untuk peneliti selanjutnya, dapat melanjutkan dan menyempurnakan penelitian
yang telah dilakukan dengan meningkatkan konsentrasi pewarna modifikasi.
55
DAFTAR PUSTAKA
Adha. S. D. (2015), Pengaruh Konsentrasi Larutan HNO3 dan Waktu Kontak

Terhadap Desorpsi Kadmium (II) yang Terikat Pada Biomassa Azolla
Micropylla-Sitrat. Kimia Student Journal. Vol.1 (1):636-642.
Andarwulan, N., dan Faradilla, R. H. F. (2012), “Pewarna Alami Untuk Pangan”.

Bogor: SEAFAST Center.
Bulele, (2019) “Identifikasi bakteri dengan pewarnaan Gram pada penderita infeksi
mata luar di Rumah Sakit Mata Kota Manado” Program Studi Pendidikan
Dokter Universitas Sam Ratulangi Manado, Jurnal e-Biomedik (eBm),
Volume 7, Nomor 1, Januari-Juni 2019.
Bogoriani, N. W. (2010), “Ekstraksi Zat Warna Alami Campuran Biji Pinang, Daun
Sirih, Gambir dan Penambahan KmnO₄ Terhadap Pewarnaan Kayu Jenis
Albasia”. Jurusan Kimia FMIPA Universitas Udayana. Jurnal Kimia 4 (2) :
125-134.
Dash, S., Patel, S., Mishra, B. (2009), “Oxidation by Permanganate: Synthetic and
Mechanistic Aspect Tetrahedron”.Vol 65(859) : 707-39.
Harley, J. P. & Prescott, L. M. (2002), “Laboratory Exercise in Microbiology”.

McGraw-Hill Company.
Irfannuddin, “Cara Sistematis Berlatih Meneliti”, cetakan pertama April 2019,

Penerbit Rayyana Komunikasindo Jakarta.
Jawetz M & Adelberg’s., (2008), “Medical Microbiology. 24th ed. North America:
Lange Medical book.
56
Khikmah, N. (2015), Pengaruh Konsentrasi NaOH dan Laju Alir pada Penentuan
Kreatinin Dalam Urin Secara Sequential Injection Analysis. Kimia Student
Journal. Vol.1 (1):613-615.
Khofifu Riski, Fakhrurrazi, Mahdi Abrar, (2017) “Isolasi bakteri Staphylococcus

aureus pada ikan asin Talang talang (Scomberoides commersonnianus) di
kecamatan Leupung Kabupaten Aceh Besar “, Program Studi Pendidikan
Dokter Hewan Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Syiah Kuala.
Luciana, C. (2016), “Pemanfaatan Kombinasi Angkak dan Daun Jati sebagai

Pewarna pada Pewarnaan Bakteri”. Karya Tulis Ilmiah (Tidak di
publikasikan). Prodi DIII Analis Kesehatan. STIKes Bakti Tunas Husada.
Tasikmalaya.
Ma, J., Y. Li, Q. Ye, J. Li, Y. Hua, D. Ju, D. Zhang, R. Cooper, and M. Chang.
(2000), “Constituents of Red Yeast Rice, a Traditional Chinese Food and
Medicine”. Journal of Agricultural and Food Chemistry 48: 5220-5225.
Pelczar. M. J., dan Chan, E. C. S. (2009), “Dasar – dasar Mikrobilogi jilid 1”. UI
Press. Jakarta. 2009.
Pratama, Y. (2013), “Pemanfaatan Ekstrak Daun Jati (Tectona grandis lin. F.)
Sebagai Indikator Titrasi Asam Basa. Skripsi (tidak dipublikasikan).
Jurusan Kimia. Fakultas MIFA. Universitas Negeri Semarang
Prescott LM, Harley JP and Klein DA. 2002. Mikrobiology. 5th Ed. Boston:
McGrawHill. Publishing. USA: 485 hlm.
Rasbawati dan Fitriani, (2019) “Penuntun Praktikum Mikrobiologi Hewan “ Program

Studi Peternakan Fakultas Pertanian, Peternakan dan Perikanan Universitas
Pare Pare.
Rio Wahyu Septian Marbun, Febrizki Nabilah Mardanif, dan Uliya Fitri Aini (2020)
“Pemanfaatan sari ubi jalar ungu (Ipomoea batatas poiret) sebagai zat
57
pewarna pada pewarnaan Gram terhadap Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli “, Sekolah Menengah Kejuruan Abdurrab Pekan Baru,
Dipublikasikan Desember 2020.
Rosyida, A dan Achadi, D. (2014), “Pemanfaatan daun jati muda untuk pewarnaan
kain kapas pada suhu kamar.Arena tekstil. Vol 29(2) : 115-122.
Saragih, AB. (2013), “Skrining bakteri pelarut fosfat adaptif vinasse dari lahan tebu
pabrik gula Jatiroto kabupaten Lumajang Jawa Timur”, FMIPA Universitas
Jember 2013.
Setijo, P., Zumiati. (2010), “Pewarna Nabati Makanan”. Penerbit Percetakan

Kanisius. Yogyakarta.
Sugiyono, (2014), “Metode penelitian pendidikan pendekatan kuantitatif, kualitatif

dan R&D, alfabeta”, Bandung cetakan ke-19 hal.32.
Syahrurachman, Agus, Chatim, Soebandrio, Karuniawati, Santoso, Harun (2010),

“Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran”.Jakarta: Binarupa Aksara Publishers
2010.
Tortora, G. J., Funke, B. R. & Case, C. L., 2010, Microbiology an introduction 10th
edition, Pearson edition, Inc., Publishing as Pearson Benjamins Cummings,
San Francisco, 1301 Sansome.
Utomo, S. 2015. Pengaruh Konsentrasi Larutan NaNO2 Sebagai Inhibitor Terhadap

Laju Korosi Besi dalam Media Air Laut. Jurnal Teknologi. Vol.7 (2):93-103.
Wulaningrum, RA, (2013), “Pengaruh Asam Organik Dalam Ekstraksi Zat Warna
Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana)”, Jurusan Kimia FMIPA
Universitas Negeri Semarang.
58
LAMPIRAN
Lampiran 1
Dokumentasi penelitian
Beras Angkak Daun Jati
Penimbangan daun jati Penimbangan angkak
59
Rendaman angkak Rendaman daun jati
Penyaringan rendaman angkak Penyaringan rendaman daun jati
Hasil penyaringan angkak dan Pembuatan preparat bakteri
60
Daun jati
Pewarnaan preparat bakteri Pengamatan hasil pewarnaan bakteri
61
Lampiran 2
SERTIFIKAT PENGUJIAN SAMPEL BAKTERI
62
Lampiran 3
SERTIFIKAT PENGUJIAN SAMPEL BAKTERI
63
Lampiran 4
Kemasan Angkak
64
Lampiran 5
65
MATERI BATAS PARAF PARAF MHS
NO. TGL RANGKUMAN BIMBINGAN
BIMBINGAN WAKTU PEMBIMBING
VALIDASI
UJIAN
PENGUMPULAN
NASKAH
Skripsi Dimulai : ………………………………………..
Skripsi Selesai : ………………………………………..
66
MATERI BATAS PARAF PARAF
NO. TGL RANGKUMAN BIMBINGAN
BIMBINGAN WAKTU PEMBIMBING MHS
1 03 Bimbingan oleh Ibu Yusianti. S terkait

JUDUL gambaran judul penelitian dan proposal
Okt
skripsi yang dapat di usulkan serta jurnal
2021 via Whats App group
2 4 Okt Bimbingan oleh Ibu Yusianti. S terkait

penyusunan proposal skripsi dan jurnal
2021
pendukung via Whats App Group.
3 18 Pengajuan judul Pemanfaatan Sari Buah Bit

Okt dan Sari Ubi Ungu Dalam Pengecatan Bakteri
2021 Tahan Asam ( Mycobacterium
tuberculosae ) Judul 1
4 12
Nop Pengajuan judul ke 2 Pengaruh
2021 Penambahan Oksidator Pada Air
Rendaman Angkak dan Daun Jati pada
Pewarnaan Gram ( Judul 2 )
67
1 08 Pada point latar belakang belum terlihat
alasan mengapa ZN A di cari alternative
Nop
pengganti dengan pewarna alami ( judul 1)
2021
BAB I 2 17 Pengajuan BAB I

Nop
2021
3 19 Bimbingan Rev Bab 1
Nop
2021
4 26 Bimbingan oleh Ibu Yusianti S terkait

regulasi EC beserta syarat dan ketentuannya
Nop
sebelum melakukan peneli via Whats App
2021 group
5 29
Bimbingan Rev 2 Bab 1,
Nop
ACC Bab 1 ( Judul 2 )
2021
BAB II 1 08 Pengajuan BAB II

Des
2021
09 Bimbingan dan revisi1 BAB II

2 Des
2021
10 Bimbingan revisi2 BAB II

Des
3 2021
68
MATERI BATAS PARAF PARAF
BIMBINGAN WAKTU NO. TGL RANGKUMAN BIMBINGAN PEMBIMBI MHS
NG
BAB III 1 13 Pengajuan BAB III
Des
2021
2 14 Bimbingan BAB III

Des
2021
3 16 Bimbingan dan rev BAB III

Des
2021
4 17 Bimbingan dan ACC BAB III

Des
2021
BAB IV & V 1 15 Monitoring dan bimbingan

Febr penelitian via
2022 WA group
2 24 Monitoring dan bimbingan

Febr penelitian via
2022 WA group
14 Monitoring dan bimbingan

3 Mar penelitian via
2022 WA group
31 Pengajuan dan bimbingan

4
Mar BAB IV dan V
2022
69
5 4 Apr Bimbingan BAB IV dan V
2022
6 7 Apr Bimbingan dan ACC BAB IV

2022 dan V
12 Persetujuan ujian pendadaran ,

7
Apr Konsultasi
2022 Intisari/abstrak
8 1 Revisi skripsi pasca ujian

Mei pendadaran
2022
9 12 ACC Revisi pasca ujian

Mei pendadaran
2022
10 22 Konsultasi dan koreksi

artikel publikasi skripsi
Mei
2022
11 23 ACC artikel publikasi utk

Mei submit
2022
70
LAMPIRAN 6
71

Skripsi Nurhidayat - 3212077

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Skripsi Nurhidayat - 3212077

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PENGARUH PENAMBAHAN OKSIDATOR

PADA AIR RENDAMAN ANGKAK DAN DAUN JATI

The effect of adding an oxidizing agent

PROGRAM STUDI SARJANA TERAPAN

The effect of adding an oxidizing agent

PROGRAM STUDI SARJANA TERAPAN

PENGARUH PENAMBAHAN OKSIDATOR

Telah disetujui untuk diajukan pada ujian skripsi

Surakarta, 13 Mei 2022

Yusianti Silviani, S.Pd.Bio, M.Pd

PENGARUH PENAMBAHAN OKSIDATOR

Telah dipertahankan dihadapan Dewan Penguji dan diterima sebagai persyaratan

Pada tanggal 13 Mei 2022 di Surakarta

Ardy Prian Nirwana, S.Pd Bio, M.Si (Ketua) . .………………

Vector Stephen Dewangga, S.Si, M.Si (Anggota Penguji I) ……………….

Yusianti Silviani, S.Pd.Bio, M.Pd (Anggota Penguji II) ……………….

M.Taufiq Qurrohman, M.Sc

Saya menyatakan dengan sesungguhnya bahwa skripsi dengan judul:

PENGARUH PENAMBAHAN OKSIDATOR

yang dibuat untuk melengkapi persyaratan menyelesaikan jenjang pendidikan Sarjana

Lampung, 13 Mei 2022

Raihlah ilmu, dan untuk meraih ilmu belajarlah untuk tenang

Tanpa tindakan, pengetahuan tidak ada gunanya dan

5. Untuk almamater STIKES NASIONAL yang telah membantu kelancaran studiku.

6. Serta teman-teman Prodi Sarjana Teknologi Laboratorium Medis angkatan tahun

Assalamualaikum Warohmatulloh Wabarakatuh

Alhamdulillahirrobil’alamin dengan terpanjatnya puji syukur kehadirat Alloh Subhana

Skripsi ini disusun sebagai tugas akhir untuk menyelesaikan pendidikan

Ucapan terima kasih penulis sampaikan kepada:

6. Bapak /Ibu dewan Direksi PT. Prodia Widya Husada, Tbk.

7. Jajaran Prodia University (ProU) Jakarta

10. Teman-temnn Laboratorium Klinik Prodia Lampung dan khususnya teman-teman

sangat membantu untuk menyempurnakan hasil penelitian ini. Tetapi penulisr

berharap semoga skripsi dapat bermanfaat bagi penulis dan pembaca.

HALAMAN PERSETUJUAN ...................................................................................... i

3.1 Definisi operasional variabel 35

3.2 Scoring pengamatan 40

3.3 Jadwal rencana penelitian 40

4.1 Score hasil pengamatan 43

2.1 Larutan Kalium Permanganat 14

2.2 Cara pewarnaan Gram 28

2.3 Hasil perwarnaan bakteri gram positif 29

2.4 Hasil pewarnaan bakteri gram negatif 30

2. Sertifikat Pengujian Sampel Bakteri 64

3. Sertifikat Pengujian Sampel Bakteri 65

5. Kartu Bimbingan Skripsi 67

6. Izin Etik Penelitian 73

Nurhidayat. NIM 3212077. Pengaruh penambahan oksidator pada air rendaman

Penggunaan safranin memiliki kelemahan yaitu harganya yang mahal serta

Kata kunci: Angkak, Daun jati, Pewarnaan Gram, Oksidator

Keyword: Angkak, Teak Leaves, Gram Staining, Oxidizing

Di dunia laboratorium khususnya di bidang mikrobiologi, pewarnaan

merupakan salah satu bagian terpenting. Pewarnaan berfungsi untuk memudahkan

melihat bakteri dengan menggunakan mikroskop, memperjelas ukuran dan bentuk

serta serta meningkatkan kontras mikroorganisme dengan sekitarnya (Pelczar &

Teknik pewarnaan pada bakteri dapat dibedakan menjadi empat macam

yaitu pengecatan sederhana, pengecatan negatif, pengecatan diferensial dan

yang sudah difiksasi, dinamakan pewarnaan sederhana. Prosedur pewarnaan yang

disebut teknik pewarnaan diferensial. Sedangkan pengecatan struktural hanya

Termasuk dalam pengecatan ini adalah pengecatan endospora, flagella dan

pengecatan kapsul (Waluyo, 2010).

Bakteri sulit dilihat dengan mikroskop cahaya, karena tidak mengadsorbsi

ataupun membiaskan cahaya. Alasan inilah yang menyebabkan zat warna