Prosedur :

1. Pembuatan Larutan Uji

Ditimbang 0,2 gram ekstrak dan ditambahkan etanol 95% sampai 25 mL. Kemudian
diaduk selama 1 jam menggunakan mechanical stirrer. Larutan yang didapatkan disaring
kedalam labu terukur 25 ml, kertas saring dibilas menggunakan etanol, ad filtrat yang
didapat menggunakan etanol sampai tanda batas pada labu ukur.
2. Pembuatan Larutan Kuersetin Pembanding
Ditimbang 10 mg kuersetin kemudian dimasukan ke dalam labu ukur 10 ml. Larutan di-
ad dengan etanol sampai batas labu ukur. Dilakukan pengenceran larutan pembanding
dengan kadar berturu-turut 80, 70, 60, 50, dan 40 µg/mL
3. Pembuatan Larutan Aluminium Klorida 10% P
Ditimbang 10 g aluminium klorida kemudian dilarutkan dalam aquadest 100 mL
4. Pembuatan Larutan Natrium Asetat 1 M
Ditimbang 8,2 g natrium asetat P kemudian dilarutkan dalam air hingga 100 mL
5. Penentuan Jumlah Flavonoid
Dipipet secara terpisah 0,5 ml larutan uji dan masing-masing larutan pembanding yang
telah diencerkan ke dalam wadah yang sesuai kemudian ditambahkan masing-masing 1,5
ml etanol, 0,1 ml aluminium klorida 10%, 0,1 ml natrium asetat 1 M dan 2,8 ml aquadest.
Larutan dikocok dan diamkan selama 30 menit pada suhu ruang. Diukur serapan pada
panjang gelombang maksimum kurang lebih 425 nm. Dilakukan pengukuran blanko
dengan cara yang sama tanpa penambahan aluminium klorida dan dibuat kurva kalibrasi.
6. Pengujian Kualitatif
Dibuat batas atas dan bawah pada plat KLT sebesar 1 cm atau disesuaikan dengan
panjang plat KLT kemudian ditotolkan larutan ekstrak dan larutan baku dengan jarak
yang sama. Chamber diidi dengan 20 mL campuran n-butanol, asam asetat, dan air
(4:1:5) dan ditunggu sampai chamber jenuh. Dikembangkan plat dalam chamber yang
mengandung 20 mL campuran n-butanol, asam asetat, dan air (4:1:5). Plat dikeringkan
plat dan dilihat dibawah sinar UV. Nilai Rf dihitung dan dibandingkan dengan Rf
standar. Untuk pengujian warna pada spot plat, plat ditempatkan dalam chamber jenuh
yang mengandung uap amonia. Hasil positif ditunjukan dengan perubahan warna menjadi
kuning pekat