nutrisi 

Artikel 

Asupan Makanan dari Sayuran Kaya Karotenoid

Mengurangi Adipositas Visceral pada Pria Jepang
Obesitas — Percobaan Acak, Tersamar Ganda
Tomohisa Takagi 1,2,*, Ryotaro Hayashi 3, Yuji Nakai 4, Shinji Okada 5, Rumiko Miyashita 3,
Mayumi Yamada 6, Yoichi Mihara 7, Katsura Mizushima 1, Mayuko Morita 8, Kazuhiko Uchiyama 1,
Yuji Naito 1 dan Yoshito Itoh 1 
1
Gastroenterologi dan Hepatologi Molekuler, Sekolah Pascasarjana Ilmu Kedokteran, Universitas Kedokteran
Prefektur Kyoto, Kyoto 602-8566, Jepang; mizusima@koto.kpu-m.ac.jp (KM); 
k-uchi@koto.kpu-m.ac.jp (KU); ynaito@koto.kpu-m.ac.jp (YN); yitoh@koto.kpu-m.ac.jp (YI) 2 Departemen Inovasi
Medis dan Ilmu Kedokteran Translasional, Sekolah Pascasarjana Ilmu Kedokteran, Universitas Kedokteran
Prefektur Kyoto, Kyoto 602-8566, Jepang 
3
Nippon Flour Mills Co., Ltd ., Pusat Inovasi, Kanagawa 243-0041, Jepang; r-hayashi@nippn.co.jp (RH);
miyashita@nippn.co.jp (RM) 
4
Bagian Ilmu Pangan, Institut Inovasi Regional, Universitas Hirosaki, Aomori 038-0012, Jepang;
yunakai@hirosaki-u.ac.jp 
5
Sekolah Pascasarjana Pertanian dan Ilmu Hayati, Universitas Tokyo, Tokyo 113-8654, Jepang;
asoka@mail.ecc.u-tokyo.ac.jp 
6
Kantor Dukungan Penelitian Klinis, Rumah Sakit Pusat Kanker Nasional Timur, Kashiwa 277-8577, Jepang;
mayyamad@east.ncc.go.jp 
7
NK Medico co., LTD., Tokyo 105-0012, Jepang; y.mihara@noritsu-koki.com 
8
Nutrisi Perawatan Kesehatan, Showa Gakuin Junior College, Chiba 272-0823, Jepang; m-morita@koto.kpu-
m.ac.jp * Korespondensi: takatomo@koto.kpu-m.ac.jp; Tel .: + 81-75-251-5508 
Diterima: 24 Juni 2020; Diterima: 1 Agustus 2020; Ditayangkan: 5 Agustus 2020                  
Abstrak: Sindrom metabolik, dimana komponen diagnostik utamanya adalah obesitas, merupakan
faktor risiko penyakit terkait gaya hidup, diabetes tipe 2, dan penyakit kardiovaskular. Diet diketahui
mempengaruhi prevalensi sindrom metabolik. Namun, efek diet pada sindrom metabolik pada subjek
masyarakat Jepang belum dieksplorasi secara menyeluruh. Dalam penelitian ini, kami menyelidiki
efek sayuran kaya karotenoid, terutama sayuran kaya likopen dan lutein, terhadap sindrom metabolik
pada pria Jepang yang obesitas. Kami melakukan uji klinis acak, tersamar ganda, terkontrol selama 8
minggu di mana, 28 pria paruh baya Jepang (40 ≤ usia <65) dengan indeks massa tubuh (BMI ≥ 25)
diacak menjadi empat kelompok diet: tinggi likopen + lutein tinggi (HLyHLu), likopen tinggi + lutein
rendah (HLyLLu), likopen rendah + lutein tinggi (LLyHLu), dan likopen rendah + lutein rendah
(LLyLLu). Hasil kami menunjukkan bahwa asupan minuman harian meningkatkan plasma kadar
karotenoid tanpa efek samping, dan kadar lemak viseral menurun secara signifikan pada semua
kelompok. Lingkar pinggang menurun secara signifikan hanya pada kelompok HLyLLu, sedangkan
laju oksidasi CoQ10 menurun pada semua kelompok. Profil ekspresi gen sampel darah lengkap
sebelum dan sesudah konsumsi hanya berbeda pada kelompok LLyLLu, yang menunjukkan efek
karotenoid pada profil ekspresi gen. Sebagai kesimpulan, hasil kami menunjukkan bahwa asupan
makanan dari sayuran kaya karotenoid meningkatkan konsentrasinya dalam darah dan mengurangi
lemak visceral iintra-abdominal.

Kata kunci: karotenoid; likopen; lutein; adipositas viseral; sindrom metabolik

Nutrisi 2020, 12, 2342; doi:10.3390/nu12082342

1. Pendahuluan 
Salah satu komponen diagnostik utama dari sindrom metabolik adalah obesitas, yang
biasanya diukur dengan lingkar pinggang dan lemak viseral intraabdomen, selain
dislipidemia (kondisi trigliserida yang meningkat dan penurunan kolesterol lipoprotein
(HDL) kepadatan tinggi dalam darah); Komponen lainnya adalah peningkatan tekanan darah
dan glukosa plasma puasa, yang semuanya berhubungan dengan penambahan berat badan.
Di Jepang, prevalensi obesitas (indeks massa tubuh (BMI) ≥ 25) telah dilaporkan sebesar
30,4% pada pria dan 21,1% pada wanita [1], dan sindrom metabolik telah dikaitkan dengan
peningkatan risiko diabetes tipe 2 dan penyakit kardiovaskular [2]; Dengan demikian,
promosi mengenai pengelolaan berat badan yang tepat menjadi isu penting dalam program
kesehatan nasional.
Hubungan positif dan negatif antara sindrom metabolik dan diet telah dilaporkan; di
satu sisi, hal itu menunjukkan bahwa diet Mediterania mengurangi prevalensi sindrom
metabolik dan risiko kardiovaskular terkait dengan penurunan peradangan pembuluh darah
sistemik dan disfungsi endotel [3]. Di sisi lain, pola makan barat meningkatkan risiko
sindroma metabolik. Dengan demikian, diet mempengaruhi prevalensi sindrom metabolik
[4]. 
Karotenoid adalah pigmen larut lemak berwarna kuning atau merah, dan tersebar luas di
alam. Banyak pigmen karotenoid disintesis oleh organisme fotosintesis, termasuk tumbuhan
dan mikroorganisme. Sejauh ini, lebih dari 750 karotenoid alami telah dilaporkan [5]. Tiga
puluh empat jenis karotenoid dan metabolitnya telah terdeteksi dalam plasma manusia [6].
Pada mamalia, β-karoten, α-karoten, dan β-kriptoksantin diubah menjadi retinal oleh enzim
pembelahan dioksigenase dan mewakili sumber makanan utama vitamin A [7]. Namun,
likopen dan lutein tidak dilaporkan memiliki aktivitas pro-vitamin A dan/atau aktivitas
antioksidan biologis [8-10]. Oleh karena itu, dalam penelitian ini kami memfokuskan pada
efek likopen dan lutein pada jaringan adiposa viseral pria Jepang yang mengalami obesitas. 
Asupan karotenoid telah dikaitkan dengan penurunan risiko penyakit yang berhubungan
dengan gaya hidup [11-14] dan tingkat lycopene tinggi pada plasma telah dikaitkan dengan
risiko penurunan  penyakit kardiovaskular [15].Beberapa laporan menjelaskan mekanisme
potensial fungsi likopen untuk pencegahan penyakit yang berhubungan dengan gaya hidup.
Misalnya, produk tomat yang mengandung likopen terbukti mampu mengurangi risiko
arteriosklerosis dan penyakit jantung iskemik dengan menekan pembentukan serum
peroksida asam lemak[16]. Likopen mencegah penyakit kardiovaskular dengan menurunkan
tingkat sintesis lipoprotein densitas rendah (LDL) melalui reduksi 3-hydroxy-3-
methylglutaryl coenzyme A (HMG-CoA) [17]. Selain itu, sebuah studi terpisah menunjukkan
bahwa likopen dapat mencegah penyakit kardiovaskular melalui peningkatan fungsi HDL
dengan merangsang aktivitas lecithin kolesterol acyltransferase (LCAT) [18]. 
Lutein dihubungkan dengan peningkatan fungsi kognitif dan mekanisme yang diusulkan
menunjukkan bahwa peningkatan lutein sentral meningkatkan efisiensi saraf dan
meningkatkan konduksi saraf [19]. Lutein juga meningkatkan faktor neurotropik yang
diturunkan dari otak (BDNF) [20], dan diduga bahwa lutein mungkin dapat
mempertahankan fungsi otak dengan mengurangi stres oksidatif [21]. Selain itu, dilaporkan
bahwa suplementasi lutein meningkatkan kepadatan optik pigmen makula baik pada pasien
dengan degenerasi makula terkait usia dan pada subjek sehat [22]. Telah ditunjukkan bahwa
StARD3, protein pengikat lutein retinal manusia yang diekspresikan dalam makula,
meningkatkan akumulasi lutein dan peningkatan kepadatan optik pigmen makula [23]. Data
tentang korelasi antara lutein dan sindrom metabolik saling bertentangan. Asupan makanan
yang lebih tinggi dan konsentrasi lutein dalam darah yang lebih tinggi umumnya dikaitkan
dengan kesehatan kardiometabolik yang lebih baik [24], sedangkan tingkat serum lutein
tidak terkait dengan lemak tubuh [25].
Selain itu, banyak jenis karotenoid terdapat dalam berbagai sayuran dan buah-buahan,
dan peningkatan konsumsi makanan tersebut telah dikaitkan dengan penurunan risiko
penyakit kardiovaskular, diabetes, dan kanker [26-28]. Dengan demikian, konsumen mulai
menghargai potensial manfaat dari pola makan aktif sayuran dan buah-buahan terkait
pencegahan penyakit melalui pemeliharaan dan peningkatan kesehatan mereka secara
keseluruhan [29]. Namun, asupan harian sayuran dan buah-buahan untuk orang dewasa
Jepang diakui secara global kurang dari jumlah yang dibutuhkan setiap hari yaitu 350g untuk
sayuran dan 200 g untuk buah-buahan.
Sejauh ini, studi intervensi klinis pada sayuran hanya terbatas efek pada penyakit yang
berhubungan dengan gaya hidup, termasuk obesitas. Oleh karena itu, dalam penelitian ini,
kami melakukan uji coba untuk mengevaluasi fungsionalitas berbagai sayuran kaya
karotenoid bagi kesehatan masyarakat Jepang yang  berfokus pada adipositas viseral pada
penderita obesitas. Secara khusus, kami berfokus pada efek likopen dan lutein dan kami
menyelidiki bagaimana kontribusi mereka terhadapnya. 

2. Bahan dan Metode 

2.1. Desain Penelitian
Penelitian ini adalah penelitian acak terkontrol tersamar ganda (RCT), dengan
durasi 8 minggu dari  14 Mei 2014 hingga 11 Juni 2014. Protokol studi telah disetujui
oleh Ethics Committee of Kyoto Prefectural University of Medicine (nomor yang
disetujui: ERB -C-111), dan semua subjek diberikan informed consent. Kelayakan
setiap subjek dievaluasi berdasarkan tinjauan lengkap dari riwayat klinis mereka
dan pemeriksaan fisik, serta hitung darah lengkap dan kimia serum. Subjek terpilih
yang memenuhi syarat berusia paruh baya (40 ≤ usia <65), dengan BMI tinggi (BMI ≥
25). Subjek yang pernah mengikuti uji klinis dalam 3 bulan terakhir sebelum
dimulainya penelitian ini dikeluarkan. Selain itu, subjek laki-laki dikeluarkan jika
mereka sedang menjalani pengobatan tertentu, memiliki pemahaman yang buruk
tentang intervensi harian, dan memiliki riwayat penyakit serius termasuk penyakit
kanker.
Setelah skrining berhasil, 28 subjek dari 50 kandidat terdaftar dalam penelitian
ini. Subjek yang memenuhi syarat dilakukan pengacakan dan didistribusikan secara
merata untuk menerima salah satu dari empat intervensi: (A) wortel TCH-722 dan
pasta kale TCL-499 (likopen tinggi + tinggi lutein atau kelompok HLyHLu), (B)
wortel TCH-722 dan pasta kubis "Shibuki" (likopen tinggi + rendah lutein atau
kelompok HLyLLu), (C) wortel "Kinbi" dan pasta kale TCL-499 (likopen rendah +
lutein tinggi atau kelompok LLyHLu), atau (D) wortel "Kinbi"  dan pasta kubis TCL-
 499 (likopen rendah + lutein tinggi atau kelompok LLyHLu), atau (D) wortel "Kinbi" 
dan pasta kubis (likopen rendah + lutein rendah atau LLyLLu kelompok). Selama 8
minggu fase intervensi  setiap subjek menerima satu kali sehari, sebelum sarapan,
minuman identik yang mengandung 400 g pasta uji (Gambar 1). Asupan minuman
yang tepat dipantau dengan mengumpulkan kertas rekaman asupan minuman setiap
minggu selama periode intervensi. Syarat uji coba eksperimental telah diregistrasi oleh
University Hospital Medical Information Network (UMIN) Center (www.umin.ac.jp)
dan UMIN Clinical Trials Registry (UMIN-CTR) dengan nomor identifikasi
UMIN000014482.

2.2. Penilaian Fisik dan Analisis Biokimia 

Semua subjek yang terdaftar menyelesaikan pemeriksaan fisik singkat
termasuk pengukuran lingkar pinggang menurut pedoman International Society for
Advancement of Kinanthropometry (ISAK). Untuk mengevaluasi jaringan lemak
viseral (VAT), kami mengukur kadar lemak visceral menggunakan Body Composition
Analyzer, INNER SCAN50 BC-320 (Tanita Co., Tokyo, Japan), dan menerapkan
metode Bioelectrical Impedance Analysis (BIA) yang memiliki korelasi baik dengan
penilaian area lemak visceral menggunakan Computed Tomography (CT) pada tingkat
pusar [30].
Trigliserida serum, kolesterol total, kolesterol HDL, kolesterol LDL, dan kadar
glukosa puasa plasma diukur pada awal dan pasca-intervensi oleh klinisi kimia rutin.
Selain itu, sebagai indeks status antioksidan, stres oksidatif, dan peradangan sistemik,
reseptor lipoprotein densitas rendah teroksidasi seperti lektin yang larut dalam
sirkulasi-1 (sLOX-1), koenzim Q10 (CoQ10), interleukin (IL) -6, dan tumor necrosis
factor (TNF)-α juga dievaluasi pada awal dan pasca intervensi, diukur oleh BioMarker
Science Co., Ltd. (Kyoto, Japan). Singkatnya, kadar serum IL-6 dan TNF-α, dan kadar
plasma sLOX-1 diukur menggunakan Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA),
sedangkan bentuk reduksi dari koenzim Q10 (ubiquinol) dan bentuk teroksidasi
CoQ10 (ubiquinone) diukur dalam sampel serum sesuai dengan metode yang
dijelaskan sebelumnya [31]. Mengenai CoQ10, nilainya dinyatakan sebagai persentase
bentuk teroksidasi CoQ10 (ubiquinone) dalam total CoQ10 (% CoQ10). 

2.3. Reagen Kimia standar

Standart α-karoten dan β-karoten dibeli dari Wako Pure Chemical Industries,
Ltd. (Osaka, Jepang). Standar lutein dibeli dari CaroteNature GmbH (Ostermundigen,
Swiss). Standar likopen dibeli dari Sigma-Aldrich Co. LLC (St. Louis, MO, USA).
Tingkatan khusus n-Heksana, aseton, etanol, toluena, dan pirogalol dibeli dari Wako
Pure Chemical Industries, Ltd. Metil tert-butil eter, asetonitril, dan metanol kadar
HPLC dibeli dari Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Selulosa dibeli dari Amano
Enzyme Inc. (Nagoya, Jepang). Pektinase dibeli dari Yakult Pharmaceutical Industry
Co., Ltd. (Tokyo, Jepang). Asam sitrat dibeli dari Showa Kako Co., Ltd., (Osaka,
Japan). Pektin dibeli dari Unitec Foods Co., Ltd., (Tokyo, Japan).

2.4. Bahan Tanaman 

 Dalam studi ini, kami menggunakan kultivar wortel, yang sangat kaya likopen
(Gambar 2A), dan kultivar kale yang sangat kaya akan lutein (Gambar 2B). Wortel
pada umumnya tidak mengandung likopen; Namun untuk penelitian ini, kami memilih
kultivar wortel yang mengandung likopen tingkat tinggi selain α-karoten, β-karoten,
dan lutein. Kami juga memasukkan kultivar kale yang mengandung lutein tingkat
tinggi selain β-karoten untuk mengevaluasi efek berbagai karotenoid pada kesehatan
manusia.
Kultivar wortel (Daucus carota subsp. Sativus) yang digunakan dalam
percobaan kami adalah "TCH-722" (Takii Co., Ltd. Kyoto, Jepang), dan Kale
(Brassica oleracea var. Acephalakultivar) yang digunakan adalah "TCL-499" (Takii
Co., Ltd.). Sebagai sayuran plasebo, kami menggunakan wortel “Kinbi” (Mikado
Kyowa seed Co., Ltd., Chiba, Japan) untuk wortel TCH-722, dan kubis (Brassica
oleracea var. Capitata) “Shibuki” (Ishii Seed Growers Co., Ltd. Shizuoka, Jepang)
untuk kale TCL-499. Panen sayuran disterilisasi dengan uap super panas pada suhu
120 ◦C selama 30 menit dan dihancurkan serta dicincang untuk dijadikan pasta. Pasta
dibekukan dan disimpan pada suhu -20 ◦C sampai diproses untuk minuman untuk uji
klinis.
2.5. Persiapan Minuman 
Kami memproduksi empat jenis minuman, masing-masing termasuk dua jenis
pasta. Kombinasi dua pasta tersebut  adalah sebagai berikut: (A) pasta wortel TCH-722
dan kale TCL-499 (kelompok HLyHLu), (B) wortel TCH-722 dan pasta kubis
"Shibuki" (kelompok HLyLLu), (C) wortel "Kinbi" dan pasta kale TCL-499 (kelompok
LlyHLu) dan (D) wortel "Kinbi" dan pasta kubis (kelompok LLyLLu). 
Pasta wortel (400 kg) dan pasta kale atau kubis (200 kg) dicampur dan
dipanaskan sampai 35◦C. Enzim selulosa (3 kg) dan pektinase (3 kg) ditambahkan ke
campuran pasta dan diinkubasi pada suhu 45◦C selama 60 menit . Selanjutnya,
campuran pasta disterilkan pada suhu 70◦C selama 60 menit. Rebusan air (400L), pektin
(8 kg), dan asam sitrat (3,25 kg) ditambahkan ke campuran pasta. Asam sitrat
digunakan untuk mengatur pH (<4). Dua ratus mililiter campuran pasta dimasukkan ke
dalam kantong logam aluminium dan disterilkan pada suhu 90 ◦C selama 40 menit.
Minuman disimpan pada suhu 20-25°C. 

2.6. Analisis Serat Makanan dan Karotenoid dalam Minuman

 
Kandungan serat makanan dari minuman ditentukan dengan menggunakan
AOAC Offcial Method of Analysis 985.29 [32]. Sampel sayuran dicincang
menggunakan pengolah makanan rumah tangga. Air (5mL) dan pyrogallol (2g)
ditambahkan ke sampel cincang (1g) dan dihomogenisasi dengan polytron homogenizer
(PT-3000; Kinematica Swiss). Sampel minuman (2,5 g) dicampur dengan pirogallol
(2g) dan air (1 mL). Empat puluh mililiter n-Hexane/Aseton/Ethanol/Toluene
(10:7:6:7) dan 20 mL etanol ditambahkan ke sampel sayuran atau minuman, diekstraksi
dengan gelombang supersonik selama 10 menit, dan diisi hingga 100 mL dengan
etanol. Ekstrak karotenoid disaring menggunakan penyaring 0,2 µm (Advantec Toyo
Kaisha, Ltd. Tokyo, Jepang) dan dianalisis dengan HPLC. Akhirnya kandungan
karotenoid dari sayuran dan minuman untuk uji klinis dianalisis dengan HPLC.
2.7. HPLC Aparatur dan Ketentuan
 
Lutein, α-carotene, β-carotene, dan lycopene dalam minuman yang diukur
menggunakan sistem HPLC terdiri dari Pompa L-2130, oven kolom L-2300, detektor
L-2400 UV-VIS, dan pengambil sampel otomatis L -2200 (perusahaan Teknologi
Tinggi Hitachi, Tokyo, Jepang), dan komputer tunggal yang  dilengkapi dengan
perangkat lunak sistem Data Kromatografi EZ Chrome Elite (Scientific Software Inc.,
Pleasanton, CA, USA). Semua komponen terdeteksi menggunakan kolom karotenoid
karotenoid (4,6 × 250 mm; YMC Co., Ltd. Kyoto, Japan). Campuran metil tert-butil
eter / asetonitril (85:15, vol / vol) digunakan sebagai fase gerak A, dan metanol
digunakan sebagai fase gerak B. Elusi gradien yang diterapkan  adalah sebagai berikut:
fase gerak A dimulai pada 10% pada laju alir 1,5 mL / menit, meningkat secara linier
menjadi 100% A dari 0 menit menjadi 9,0 menit dan disimpan selama 3,0 menit, dan
akhirnya berubah menjadi 10% A dari 12 menit menjadi 12,1 menit dan disimpan
selama 3,9 menit. Suhu kolom diatur pada 30 ° C. Volume injeksi adalah 20 μL. Semua
komponen dideteksi pada 475 nm menggunakan detektor L-2400 UV-VIS. Isinya
dihitung dari area puncaknya menggunakan kurva standar. Konfirmasi identitas
karotenoid dilakukan dengan perbandingan waktu retensi dengan standar karotenoid
yang diperoleh. Waktu yang umum untuk retensi standar adalah sebagai berikut, lutein:
5,01 menit, α-karoten: 7,71 menit, β-karoten: 8,12 menit, likopen: 11,14 menit. Analisis
ini dilakukan dalam rangkap dua.

2.8. Eksperimen DNA Microarray dan Analisis Data 

RNA total diisolasi dari darah utuh menggunakan Kit RNA Darah PAXgene
(QIAGEN-PreAnalytix GmbH, Hombrechtikon, Swiss). Kualitas dan kuantitas total
yang dimurnikan masing-masing RNA dikonfirmasi dengan elektroforesis gel agarosa
dan spektrofotometri. Satu sampel dari kelompok LLyHLu tidak digunakan untuk
analisis DNA microarray karena integritas RNA totalnya sangat rendah. cRNA
terbiotinilasi diperoleh dari 200 ng RNA total yang dimurnikan menggunakan
GeneChip® 3' Kit reagen IVT PLUS (Affymetrix, Santa Clara, CA, USA). cRNA
kemudian terfragmentasi dan dihibridisasi ke GeneChip® Human Genome U133 Plus
2.0 Array (Affymetrix). Array dicuci dan diberi label dengan streptavidin-
phycoerythrin menggunakan GeneChip® Hybridization, Wash, dan Stain Kit dan
sistem Fluidics Station 450 (Affymetrix). Fluoresensi dideteksi menggunakan
GeneChip® Scanner 3000 7G (Affymetrix). Semua prosedur eksperimental dilakukan
sesuai dengan instruksi pabrik. Semua data microarray sesuai dengan Informasi
Minimum Tentang Eksperimen Microarray (MIAME) dan telah disimpan dalam
database yang sesuai dengan MIAME, National Center for Biotechnology Information
(NCBI) Gene Expression Omnibus (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) / geo /, nomor
aksesi Seri GEO GSE151683), sebagaimana dirinci diFGED situs webSociety
(http://fged.org/projects/miame/). PerangkatAffymetrix GeneChip® lunak Command
Console (AGCC) digunakan untuk mengurangi gambar array ke intensitas setiap probe
(file CEL). File CEL dihitung menggunakan Factor Analysis Algoritma for Robust
 (FARMS) [33] dengan bahasa statistik R [34] dan Microarray Summarization
Bioconductor [35]. Analisis komponen utama [36] dilakukan dengan menggunakan
fungsi prcomp () dan paket ggplot2 [37] di R. 

2.9. Analisis Statistik 

Semua nilai dinyatakan sebagai mean ± standar deviasi (SD). Data fisik,
karotenoid darah, dan penanda oksidatif darah dianalisis dengan uji-t berpasangan.
Nilai p kurang dari 0,05 dianggap signifikan secara statistik. Analisis statistik dari data
eksperimen dilakukan dengan GraphPad Prism 8 (GraphPad Software Inc., La Jolla,
CA, USA) untuk Macintosh. 

3. Hasil 

3.1. Karakteristik Klinis 

Dua puluh delapan subjek secara acak dibagi menjadi empat kelompok dan
mengkonsumsi minuman uji selama 8 minggu. Setelah pengacakan, 2 pria dari
kelompok B (kelompok HLyLLu) mengundurkan diri dari penelitian, satu karena
dirawat di rumah sakit setelah kecelakaan lalu lintas dan yang lainnya karena relokasi
tempat tinggal. Dari kelompok D (kelompok LLyLLu), 2 laki-laki juga dikeluarkan
dari analisis, satu karena sampel serum yang diterima tidak memadai dan yang lainnya
karena dimulainya pengobatan farmakologis untuk yang tidak terkait dengan masalah
penelitian ini. Dengan demikian, total 24 peserta yang menerima asupan harian
minuman uji dapat dipastikan menyelesaikan studi ini tanpa efek samping (Gambar 1).
Usia rata-rata subjek di masing-masing empat kelompok adalah sebagai berikut: (A)
kelompok HLyHLu: 49,0 ± 6,2; (B) Kelompok HLyLLu: 46,8 ± 8,8; (C) kelompok
LLyHLu: 44.9 ± 5.2; (D) LLyLLu kelompok: 45,8 ± 9,7, dan tidak ada perbedaan
yang signifikan antara semua kelompok.

3.2. Karotenoid dan Serat Makanan dari Minuman 

Semua subjek menerima minuman uji satu kali sehari yang terdiri dari 400 g
pasta. Kami menganalisis kandungan karotenoid dan serat makanan yang terkandung
dalam minuman uji (Tabel 1). Minuman kelompok HLyHLu (A) dan kelompok
HLyLLu (B) yang mengandung wortel TCH-722 memiliki kandungan likopen yang
lebih tinggi dibandingkan minuman kelompok lainnya karena pada wortel TCH-722
mengandung likopen selain α-/β-karoten. Kelompok HLyHLu (A) dan LLyHLu (C),
termasuk kale, juga mengandung kadar lutein dan serat makanan yang lebih tinggi
dibandingkan dengan kelompok lain.

3.3. Evaluasi Kadar Karotenoid Plasma 

Kami mengukur kadar karotenoid plasma untuk mengevaluasi penyerapannya
setelah asupan minuman uji (Tabel 2). Pada kelompok HLyHLu (A), kadar semua
karotenoid plasma meningkat secara nyata (p <0,01). Kadar α-karoten meningkat
secara signifikan pada kelompok HLyHLu (A) dan kelompok HLyLLu (B) yang
 meliputi wortel TCH-722; β-karoten juga meningkat pada semua kelompok meskipun
jumlahnya berfluktuasi. Kadar likopen plasma tidak menunjukkan peningkatan yang
signifikan kecuali pada kelompok HLyHLu (A), meskipun kadar likopen dalam plasma
cenderung meningkat pada HLyLLu kelompok (B) yang meliputi wortel TCH-722.
Selain itu, kadar lutein plasma tidak menunjukkan peningkatan yang signifikan kecuali
untuk kelompok HLyHLu (A), meskipun kadar ini cenderung meningkat pada
kelompok LLyHLu (C) yang termasuk kale TCL-499. Sejumlah kecil subjek mungkin
bertanggung jawab atas tidak adanya peningkatan likopen yang signifikan pada
kelompok HLyLLu (B) dan lutein pada kelompok LLyHLu (C).

3.4. Penilaian Fisik 

Kami mengukur berat badan, lingkar pinggang, indeks massa tubuh, dan
indikator lemak viseral pada awal dan setelah 8 minggu intervensi seperti yang
ditunjukkan pada Tabel 3. Meskipun kelompok LLyLLu (D) tampaknya kemungkinan
obesitas, parameter ini tidak memiliki perbedaan yang signifikan pada awal di antara
semua kelompok. Lingkar pinggang mengecil setelah konsumsi minuman uji pada
kelompok HLyLLu (B) (p = 0,02). Lebih penting lagi, tingkat lemak visceral menurun
secara signifikan pada semua kelompok setelah 8 minggu intervensi. Selain itu, kami
tidak menemukan hubungan antara peningkatan setiap karotenoid dan penurunan
kadar lemak viseral (data tidak ditampilkan). Tidak ada variasi yang signifikan pada
berat badan dan indeks massa tubuh pada penelitian ini. Selain itu, tida ada perubahan
yang nyata terhadap tekanan darah dan denyut jantung selama pengamatan ini (data
tidak ditampilkan).

3.5. Analisis Biokimia Darah 

Kami melakukan beberapa tes biokimia pada darah seperti yang ditunjukkan
pada Tabel4. Pada tingkat glukosa puasa, trigliserida, kolesterol total, dan kolesterol
HDL, tidak ada perbedaan atau pergantian yang jelas pada awal dan setelah 8 minggu
intervensi di antara semua kelompok. Kadar kolesterol LDL meningkat secara
signifikan setelah 8 minggu intervensi hanya pada kelompok LLyHLu (C), meskipun
mekanisme yang mendasari tidak jelas. Kami juga mengukur penanda oksidatif darah,
ditunjukkan pada Tabel5. Meskipun tingkat plasma sLOX-1 tidak berbeda secara
signifikan di antara semua kelompok, % CoQ10 secara signifikan berkurang setelah
intervensi 8 minggu pada semua kelompok. Selain itu, kami juga mengukur kadar
serum TNF-α dan IL-6, sebagai sitokin proinflamasi yang terkait dengan jaringan
adiposa [38]. Dalam penelitian ini, produksi sitokin ini tidak menunjukkan perbedaan
atau pergantian yang jelas pada awal dan setelah intervensi 8 minggu di antara semua
kelompok. 

3.6. Perubahan Profil Ekspresi Gen

Profil ekspresi gen dalam darah lengkap sebelum dan setelah konsumsi
minuman nabati dievaluasi dengan analisis komponen utama. Sebelum pengujian (0
mgg), plot sampel di setiap kelompok tersebar secara seragam di plot PC1-PC2
 (Gambar3A, panel kiri). Namun, setelah 8 minggu konsumsi minuman (8 mgg), profil
ekspresi gen dalam darah menjadi dekat satu sama lain kecuali pada kelompok
LLyLLu (D) (Gambar3B, panel kanan). Area elips probabilitas pada Gambar3A untuk
masing-masing kelompok dinyatakan sebagai rasio 8mgg ke 0mgg (Gambar3B). Hasil
ini menunjukkan bahwa karotenoid dalam minuman mempengaruhi profil ekspresi
gen dalam darah subjek.

4. Diskusi 
Dalam penelitian ini, kami melakukan studi percontohan intervensi tentang efek
asupan jangka pendek  minuman yang mengandung karotenoid yang dihasilkan dari
sayuran, pada pria Jepang paruh baya yang obesitas. Ciri yang paling mencolok dari
penelitian ini adalah penurunan kadar lemak viseral yang signifikan dengan asupan
minuman yang mengandung karotenoid. Selain itu, konsumsi karotenoid selama 8 minggu
menghambat status stres oksidatif, seperti yang ditunjukkan oleh penghambatan % CoQ10.
Hasil ini mungkin menunjukkan kegunaan sayuran dengan kandungan tinggi karotenoid
dan fungsionalitas mereka  pada kesehatan individu yang memiliki risiko tinggi untuk
berkembang menjadi sindrom metabolik, meskipun studi ini hanya dipertimbangkan untuk
pria Jepang setengah baya yang obesitas. Sebaliknya, penghambatan kadar lemak viseral
dan status stres oksidatif diamati pada kelompok likopen rendah + lutein rendah (LLyLLu)
maupun pada kelompok lain yang menerima minuman uji yang berasal dari sayuran kaya
karotenoid. Kami yakin hasil ini dapat diperoleh dengan mempromosikan modifikasi
perilaku ke gaya hidup sehat melalui partisipasi dalam penyelidikan klinis ini, meskipun
temuan ini harus diselidiki secara rinci di masa mendatang. Selain itu, temuan ini mungkin
saja dipengaruhi oleh kandungan serat pangan pada semua kelompok. Namun demikian,
itu dianggap mewakili aspek sulit dari uji klinis dengan menggunakan sayuran sebagai
sampel uji.
Sindrom metabolik adalah salah satu faktor risiko yang terkait dengan penyakit gaya
hidup, dan juga diketahui terkait dengan pola makan. Secara khusus, asupan karotenoid
telah dilaporkan berkorelasi negatif dengan perkembangan sindrom metabolik dan
penyakit yang berhubungan dengan gaya hidup [39]. Banyak sayuran mengandung
karotenoid, dan manusia mengonsumsi karotenoid melalui asupan nabati dalam makanan
sehari-hari. Oleh karena itu, perlu dijelaskan efek sayuran yang mengandung karotenoid
terhadap tubuh dan sindroma metabolik. Namun, efek sayuran yang mengandung
karotenoid pada sindrom metabolik pada populasi Jepang masih belum jelas. Untuk
menganalisis dampak dari beberapa karotenoid yang terkandung dalam nabati, terutama
likopen dan lutein, pada sindrom metabolik, kami merancang uji coba RCT dengan dua
kombinasi dari empat sayuran berbeda dalam empat kelompok. Untuk mengevaluasi efek
kesehatan dari sayuran kaya karotenoid, kami menguji minuman yang mengandung
sayuran utuh. Dalam hasil kami, tidak ada efek samping yang terlihat jelas yang
mencerminkan keamanan sayuran yang digunakan.
Untuk evaluasi jaringan adiposa visceral, CT scan di tingkat pusar biasanya
dilakukan untuk menilai area lemak viseral. Namun, penggunaan CT scan tidak hemat
biaya, dan juga mencakup kebutuhan paparan radiasi. Sebaliknya, metode analisis
impedansi bioelektrik (BIA) yang digunakan dalam penelitian ini adalah prosedur
sederhana dan non-invasif untuk penilaian akumulasi lemak viseral, dan korelasi yang
sangat baik telah diamati dalam estimasi akumulasi lemak viseral antara metode BIA
abdomen dan CT scan [30]. Hasil kami menunjukkan bahwa kadar lemak visceral
menurun secara signifikan pada semua kelompok. Namun, lingkar pinggang berkurang
hanya pada kelompok HLyLLu (likopen tinggi + lutein rendah), menunjukkan bahwa
karotenoid saja mungkin tidak berkontribusi dalam pengurangan lemak viseral dan lingkar
pinggang. Sayuran mengandung berbagai metabolit sekunder dengan efek anti-metabolik,
seperti polifenol dan glukosinolat, selain karotenoid; dengan demikian, ada kemungkinan
bahwa zat ini mungkin telah berkontribusi pada pengurangan lemak dan lingkar visceral
pinggang, dalam kombinasi dengan karotenoid.
Dalam penelitian ini, kami tidak dapat memastikan peningkatan yang signifikan dari
trigliserida serum, kolesterol total, kolesterol HDL, kolesterol LDL, dan glukosa puasa
plasma, yang merupakan komponen penting untuk diagnosis sindrom metabolik.
Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa sLOX-1 berhubungan dengan metabolisme
adiposit, inflamasi, dan respon imun yang berhubungan dengan obesitas [40,41]; oleh
karena itu, kami menguji level plasma sLOX-1. Namun, tidak ada perubahan yang jelas
setelah 8 minggu intervensi di keempat kelompok. Sebaliknya, penurunan tingkat%
CoQ10 diamati pada semua kelompok. Ini mungkin menunjukkan bahwa pengurangan
stres oksidatif karena konsumsi karotenoid muncul relatif lebih awal daripada perbaikan
penanda serum sindrom metabolik. Keseimbangan redoks CoQ10 dalam serum manusia
merupakan penanda yang baik untuk stres oksidatif karena bentuk tereduksi CoQ10
(ubiquinol) sangat sensitif terhadap oksidasi dan secara kuantitatif diubah menjadi bentuk
teroksidasi (ubikuinon) [42]. Sebenarnya, peningkatan % CoQ10 telah dikonfirmasi pada
pasien dengan berbagai penyakit, termasuk sepsis, hepatitis, sirosis, hepatoma, penyakit
Parkinson, fibromyalgia remaja, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), dan sindrom pasca-
serangan jantung [43]. Meskipun studi lebih lanjut tentang hubungan antara asupan
sayuran dan penghambatan oksidasi CoQ10 diperlukan, peningkatan konsentrasi
karotenoid dalam plasma dapat berkontribusi pada perbaikan status redoks.
Selain itu, telah dibuktikan bahwa jaringan adiposa secara sistemik melepaskan
sitokin proinflamasi seperti TNF-α dan IL-6, yang mengaktifkan makrofag di jaringan
adiposa pada individu yang mengalami obesitas [44]. Sitokin proinflamasi ini tidak hanya
mengganggu kerja insulin dalam jaringan metabolik, tetapi juga mendukung
perkembangan kanker [38]. Namun, meskipun kami juga memeriksa sitokin ini,
produksinya tidak menunjukkan perubahan yang jelas setelah periode intervensi 8 minggu,
pada semua kelompok. Sebaliknya, analisis komponen utama dari profil ekspresi gen
dalam darah utuh, sebelum dan sesudah konsumsi karotenoid, membuat mereka dekat satu
sama lain kecuali untuk kelompok LLyLLu (likopen rendah + lutein rendah), yang
menunjukkan bahwa konsumsi karotenoid dapat memang mempengaruhi profil ekspresi
gen.
Studi ini memiliki beberapa keterbatasan: Investigasi klinis hanya mencakup
sejumlah subjek yang terdaftar, periode intervensi pendek (8 minggu), dan dilakukan di
satu pusat, alasannya berfungsi sebagai studi eksplorasi sebelum studi uji klinis besar.
 Secara khusus, karena kami tidak dapat memperkirakan ukuran sampel sebelumnya,
tampaknya ukuran sampel yang kecil mungkin telah mempengaruhi hasil dan tidak
memiliki kekuatan yang cukup untuk menghasilkan hasil. Selain itu, asupan makanan
sebagai faktor perancu tidak dapat disesuaikan karena survei asupan makanan belum
dilakukan dalam uji coba ini. Namun, terungkap dalam penelitian ini bahwa konsumsi
sayuran yang mengandung karotenoid tinggi meningkatkan karotenoid darah. Penemuan
ini memerlukan evaluasi lebih lanjut dari kegunaan sayuran yang kaya karotenoid pada
pasien dengan sindrom metabolik, termasuk sejumlah besar subjek, dalam waktu dekat. 

5. Kesimpulan

Secara ringkas, penelitian ini mengungkapkan bahwa pada pria paruh baya dengan
BMI 25 atau lebih tinggi, konsumsi sayuran kaya karotenoid menyebabkan peningkatan
kadar karotenoid serum dan penurunan kadar adipositas viseral dan stres oksidatif. Lebih
lanjut, konsumsi sayuran yang mengandung karotenoid berpengaruh nyata terhadap
profil ekspresi gen dalam darah. Hasil ini mungkin menunjukkan efek menguntungkan
dari asupan nabati, termasuk asupan karotenoid, untuk pencegahan sindroma metabolik
pada populasi Jepang. Untuk mengklarifikasi mekanisme konsumsi sayuran kaya
karotenoid dapat mengarah pada temuan ini, uji klinis skala besar diperlukan dalam
waktu dekat.