PERTUMBUHAN

MIKROBA#2
Cara Pengukuran
Pertumbuhan Mikroba
Kurva Pertumbuhan – growing in enclosed vessel (batch culture)

Typical growth curve for a bacterial population. A viable count measures the cells in the culture that are
capable of reproducing. Optical density (turbidity), a quantitative measure of light scattering by a liquid
culture, increases with the increase in cell number.
Pertumbuhan mikroorganisme dalam suatu batch culture
CARA PENGUKURAN
PERTUMBUHAN
MIKROBA
• Metode Pengukuran Jumlah Sel

1. Perhitungan sel total

• Pengamatan langsung sampel dibawah mikroskop
• breed slides method (sampel padat)
• counting chamber (sampel cair)
• Ditentukan dulu luas area pada gelas benda yang akan dioles atau ditetesi
sampel
• Keunggulan : cepat
• Kelemahan :
• Sel mati dan sel hidup tidak dapat dibedakan
• Sel yang kecil sulit diamati dibawah mikroskop
• Presisi sulit ditentukan
• Dibutuhkan fase kontras pada mikroskop terutama pada sampel yanng tidak diwarnai
• Tidak dapat digunakan pada suspensi biakan dengan densitas yang rendah
Perhitungan sel total
• Alat yang digunakan
• Petroff-Hauser counting chamber → bakteri
• Hemocytometer → eukariotik agak besar
• Electric counter → protozoa, algae, nonfilamentous yeast
2. Perhitungan sel hidup:
❑menggunakan perhitungan koloni → plate count / colony
count
❑Ada dua cara
❑spread plate methods ( metode sebaran) mana yg unt aerob?
❑pour plate methods ( metode tuang) mana yg unt anaerob?
❑Diawali dg pengenceran
❑pertumbuhan bakteri pada cawan petri tidak terlalu banyak
❑koloni yang terbentuk dapat dihitung
❑dihasilkan perhitungan statistik yang signifikan
❑Jumlah koloni yang valid : 30-300 koloni tiap cawan petri
Pengenceran bertingkat dan plate count
Procedure for viable counting
using serial dilutions of the
sample and the pour-plate
method
CFU = colony-forming unit
3. Metode Pengukuran Massa Sel

a. Teknik langsung :
• secara fisik : berat kering, berat basah, volume sel setelah sentrifugasi
• secara kimia : pengukuran komponen-komponen kimia (total nitrogen, total
protein dan DNA)

b. Tidak langsung :
• Kimia : pengukuran aktivitas kimia seperti produksi O2 dan CO2, konsumsi O2
dan CO2
• Fisik :pengukuran turbiditas
 Menghitung massa sel
• Menghitung berat kering bakteri
• Sel pada medium cair → sentrifugasi (opt.)→ oven → timbang
• Kekurangan :
• Time consuming
• Kurang sensitif
• Perlu banyak sampel

• Spektrofotometer
• Berdasar turbiditas → mengukur biomassa sel berdasar kekeruhan atau
konsentrasi
• Dapat juga untuk menghitung jumlah protein, N, klorofil, ATP
Microbial Mass & Number
 Most Probable Number (MPN) Method (cont.)

Inoculation

Incubation
MPN
• Membrane filter
• Jumlah bakteri dihitung berdasar koloni yang tumbuh (berasal dari membran
filter)
• Filter membran mempunyai pori-pori kecil untuk “menangkap” bakteri
• Prosedur : sampel disaring melalui filter → filter ditaruh di medium
agar/medium cair → tumbuh/terbentuk koloni → dihitung
• Filter membran policarbonat
• Sampel disaring melewati filter membran polikarbonat (hitam)
• Bakteri dicat dengan cat fluorescent (misal : acridin orange)
• Diamati/dihitung dengan mikroskop epifluorescent
 PENGENDALIAN
PERTUMBUHAN MIKROBA
Diskusi Kelompok
• Tiap kelompok: 3-4 orang
• Diskusikan alternatif strategi untuk pengendalian pertumbuhan mikroba.