PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI
Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi
Ritter Moses
Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Analitika Data, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
Jl. Teknik Kimia, Keputih, Kec. Sukolilo, Kota SBY, Jawa Timur 60111
e-mail: rittermoses123@gmail.com
Abstrak—Media adalah bahan yang menunjang
pertumbuhan serta keberlangsungan
mikroorganisme saat proses kultur. Tujuan dari
praktkum ini adalah mengetahui pembuatan
medium dan teknik sterilisasi. Metode yang
digunakan dalam proses sterilisasi adalah panas
basah (autoclave). Dari praktikum yang telah
dilakukan, praktikan dapat mengetahui cara
pembuatan medium dan teknik sterilisasi.
Kata Kunci— Media, Mikroorganisme, Sterilisasi
I. PENDAHULUAN
Keberlangsungan hidup dan pertumbuhan
mikroorganisme bergantung pada nutrisi yang tersedia
dan lingkungan pertumbuhannya [1]. Pada laboratorium,
nutrisi tersebut diperoleh dari medium. Medium adalah
substrat yang terdiri atas campuran nutrisi yang
diperlukan Mikroorganisme untuk pertumbuhannya.
Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi yang disediakan
dari media berupa molekul-molekul yang selanjutnya
dirakit untuk menyusun komponen sel dan
memperbanyak diri sehingga sel-sel tersebut dapat
dimanfaatkan. Bedasarkan bentuknya media dibedakan
menjadi media padat (solid), media cair(broth),media
semisolid, slant, serta deep. Media padat atau solid
media adalah media yang berguna untuk menjaga sel
tidak berpindah tempat sehingga akan mudah dihitung
dan dipisahkan jenisnya ketika tumbuh menjadi koloni.
Media cair atau broth media yang tidak mengandung
agar, contohnya adalah NB (Nutrient Broth), LB
(Lactose Broth). Medium cair akan memberi
kesempatan bakteri untuk menyebar dan tercampur
dengan seluruh nutrisi sehingga lebih cocok untuk
mengoptimumkan pertumbuhan mikroorganisme.
Media setengah padat atau semisolid media adalah
media yang sedikit kenyal, tidak terlalu padat dan tidak
terlalu cair [2]. Slant dan deep media adalah berbentuk
agar padat.
Media bedasarkan komposisi bahannya dapat
dibedakan menjadi media komplek dan media sintentik
(terdefinisi). Media kompleks adalah media yang
sebagian komposisinya tidak diketahui dengan pasti.
Sedangkan media sintetik / terdefinisi adalah media yang
seluruh komponennya diketahui. Media ini digunakan
1
dalam penelitian uji metabolism suatu mikroorganisme.
Contoh media sintetik dalah medium untuk
Cyanobacteria yang memiliki komposisi (g/liter): Agar
10.0g, NaNO3 1.5g, MgSO4·7H2O 0.075g, H2PO40.04g,
CaCl2·2H2O0.036g, Na2CO30.02g, Citric acid6.0 mg,
Ferric ammonium citrate 6.0 mg, EDTA disodium salt
1.0 mg, Trace metal mix A 51.0 mL, [2].
Media bedasarkan komposisi bahannya dapat
dibedakan menjadi media komplek dan media sintentik
(terdefinisi). Media kompleks adalah media yang
sebagian komposisinya tidak diketahui dengan pasti.
Sedangkan media sintetik / terdefinisi adalah media yang
seluruh komponennya diketahui. Media ini digunakan
dalam penelitian uji metabolism suatu mikroorganisme.
Contoh media sintetik dalah medium untuk
Cyanobacteria yang memiliki komposisi (g/liter): Agar
10.0g, NaNO3 1.5g, MgSO4·7H2O 0.075g, H2PO40.04g,
CaCl2·2H2O0.036g, Na2CO30.02g, Citric acid6.0 mg,
Ferric ammonium citrate 6.0 mg, EDTA disodium salt
1.0 mg, Trace metal mix A 51.0 mL, [2].
Media bedasarkan komposisinya dibagi menjadi
media umum, media transport, media diperkaya, media
selektif dan media diferensial. Media umum atau media
sederhana adalah media yang digunakan untuk
pemeriksaan bakteriologis dan mendukung
pertumbuhan mikroorganisme yang tidak membutuhkan
nutrisi spesial. Contohnya nutrient broth, nutrient agar.
Media diperkaya adalah media yang diperkaya dengan
darah, serum, vitamin, ekstrasi khusus yang medukung
pertumbuhan organisme. Contohnya adalah blood agar,
serum agar, dan chocolate agar. Media selektif adalah
salah satu jenis media yang memungkinkan
pertumbuhan beberapa jenis organisme dan mencegah /
memperlambat pertumbuhan mikroorganisme yang
tidak dimaksudkan untuk tumbuh pada medium.
Contohnya adalah MacConkey agar dan Salmonella
shigella agar. Media diferensial adalah media ang
digunakan untuk mengindentifikasi satu spesies
mikroorganisme dari yang lainnya. Contohnya adalah
TCBs agar yang membedakan mikroorganisme
fermenter sukrosa dengan fermenter nonsukrosa [3].
Media transport (Carry-Blair) adalah media media yang
memiliki fungsi melindungi mikroorganisme agar tetap
hidup selama perjalanan apabila pemeriksaan terpaksa
tertunda. Media ini termasuk semisolid yang
mengandung agar berkisar 0,3 % - 0,4% [4].
Agar adalah polisakarida yang larut dalam air
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI
dan membentuk gel tetapi tidak larut dalam air dingin.
Agar diperoleh dari agarophyte anggota dari Rhdophyta
[5]. Agar merupakan media pertumbuhan yang paling
umum dalam kultur mikroorganisme. Hal ini disebabkan
karena agar mudah digunakan dan dipakai (kering,
mudah larut, dan berbentuk gel) [6]. Medium padat
adalah medium yang memiiki kandungan agar 15 g/L,
sehingga saat dingin media ini menjadi padat. Medium
setengah padat atau semisolid media adalah media yang
mengandung agar 0,3 % - 0,4% agar yang menyebabkan
media ini sedikit kenyal, tidak padat dan tidak begitu cair
[2]. Contoh dari medium solid adalah Eosin Methylene
Blue (EMB) dan sheep blood agar. EMBA atau Eosin
Methylene Blue Agar merupakan medium / stain
yang spesifik untuk bakteri gram negatif [7].
Medium EMB memmiliki komposisi gelatin pancreas,
eosin methylene blue, laktosa dan dipotassium
phosphate [8]. Sheep blood agar merupakan medium
yang digunakan untuk membedakan bakteri
patogen berdasarkan kekuatan hemolitik mereka
pada sel darah merah. Sheep blood agar ini terbuat
dari 5-10% darah domba dan sisanya nutrisi umum
[9].
Sterilisasi adalah proses penghilangan atau
penghancuran semua bentuk mikroba [10]. MIkroba
yang dimaksud dapat berarti sel hidup (bakteri, fungi,
dan lainnya) sampai dengan virus. Sterilisasi dibagi
menjadi berbagai perlakuan sesuai dengan metode yang
digunakan. Setiap metode tersebut memiliki tingkat
kefektifannya masing-masing. Sterilisasi fisik
menggunakan panas (kering dan basah / lembab),
radiasi, dan filtrasi. Sterilisasi panas kering adalah
metode sterisilasi pertama yang ada dan sudah
digunakan sejak jaman Mesir kuno. Proses sterilisasi
panas kering tidak seefektif dan seefisien sterilisasi
panas basah dikarenakan waktu yang dipakai lebih lama.
Suhu yang dipakai sterilisasi kering berkisar 160 °C –
170 °C dengan waktu 2 – 4 jam [11]. Sterilisasi basah
adalah prses sterilisasi yang enggunakan uap air.
Sterilisasi basah biasanya dilakukan dengan alat autoklaf
uap dengan menggunakan uap air jenuh pada suhu 121
°C selama 15 menit [12]. Sterilisasi radiasi
menggunakan sinar gama dan sinar x yang akan
memproduksi ion bermuatan positif dalam proses
melewati materi akan menghasilkan radikal bebas
dengan efek mematikan dalam sel. Sterilisasi
menggunakan metode filtrasi akan membuang
mikroorganisme bedasarkan bentuk fisiknya
menggunakan filtrat [13].
Sterilisasi kimia merupakan metode desinfeksi
alat atau instrumen dengan cara merendam atau
menyemprotkannya dalam larutan desinfektan [14].
Senyawa desinfektan adalah agen kimia yang digunakan
untuk menghancurkan pathogen / menghambat
2
pertumbuhan mereka dan menghancurkan
mikroorganisme [15].
II. METODOLOGI
A. Waktu dan Tempat
Praktikum pembuatan sumbat, teknik
pembungkusan, medium, dan teknik sterilisasi dilakukan
secara hybrid pada hari Jumat, 15 Oktober 2021. Bagi
praktikan offline pembuatan sumbat dan teknik
pembungkusan dilakukan pada laboratorium dasar 1 dan
2. Pembuatan medium dan teknik sterilisasi dilakukan
pada laboratorium mikrobiologi. Bagi praktikan online
dilakukan melalui Zoom.
B. Alat dan Bahan
Pada praktikum ini terdapat alat dan bahan yang
digunakan. Bahan yang digunakan adalah : agar, pepton,
ekstrak ragi, glukosa, air rebusan kentang, kapas lemak,
karet, plastik wrap, selotip, kain kasa, alumunium foil,
dan yellow page. Sedangkan alat yang digunakan :
erlenmeyer 250 ml dan 500 ml, bunsen, neraca analitik,
magnetic stirrer, tabung reaksi dan rak tabung, dan
autoklaf.
C. Cara Kerja
Pada pembuatan sumbat dan teknik
pembungkusan hal pertama yang dilakukan adalah
kasa dan kapas lemak dimasukkan ke dalam mulut
tabung reaksi secara langsung. Lalu kasa dilinting
hingga rapat dan padat. Selotip bening dililitkan
pada kasa yang sudah berisi kapas lemak.Lalu
sumbat dimasukkan hingga leher tabung reaksi. Jika
sumbat ditarik mengeluarkan bunyi maka sumbat
sudah jadi. Ujung kasa yang berlebih dapat
digunting. Teknik pembungkusan diawali dengan
persiapan cawan petri. Lalu 2 kertas yellow page
dipersiapkan. Cawan petri diletakkan di atas yellow
page. Bagian atas yellow page dilipat hingga sampai
pada permukaan atas cawan petri. Bagian ujun
kanan dan kiri dilipat membentuk segitiga. Lipatan
segitiga dapat dilipat lagi ke arah bawah hingga
membentuk lingkaran. Tahap pertama dalam
pembungkusan tabung reaksi adalah tabung reaksi
diletakkan pada ujung yellow page tersebut dengan
posisi miring. Ujung yellow page dimasukkan
kedalam mulut tabung reaksi. Yellow page
dililitkan hingga semua bagian tabung reaksi
tertutupi, proses pembungkusan telah selesai.
Tahap pertama pembuatan nutrient agar
adalah perhitungan terkait massa nutrient broth dan
agar yang dibutuhkan dalam pembuatan Nutrient
agar dalam volume 500mL aquades. Ditemukan
hasilnya dibutuhkan 6,5 gr nutrient broth dan 7,5
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI
agar swallow. Serbuk natrium broth ditimbang
sebanyak 6,5 gram di neraca analitik dengan gelas
arloji dan bantuan spatula. Lalu dimasukkan ke
dalam labu erlenmeyer. Agar swallow ditimbang
sebanyak 7,5 gr di neraca analitik dengan gelas
arloji dan bantuan spatula. Lalu, dimasukkan ke
dalam labu erlenmeyer. Ditambahkan 500 ml
akuades ke dalam labu erlenmeyer dengan tiap 100
ml penuangan dengan bantuan corong, labu
erlenmeyer digoyangkan/dikocok ke kanan kiri
pelan-pelan. Larutan yang mana dalam labu
erlenmeyer telah dimasukkan magnetic stirrer,
dihomogenkan dengan menggunakan hot plate
magnetic stirrer dengan kecepatan sekitar 25 rpm.
Jika sudah homogen, magnetic stirrer diambil lalu
bagi menjadi masing-masing 250 kedalam labu
erlenmeyer dengan bantuan corong (ada 2 labu
erlenmeyer). Erlenmeyer ditutup dengan sumbat
serta plasik, medium siap disterilkan.
Pada pembuatan Potato Dextrose Agar
(PAD) tahap pertama adalah air rebusan kentang
dimasukkan ke gelas beaker sebanyak 400 ml. Lalu
dextrose ditimbang sebanyak 8 gram. Dextrose 8
gram dimasukkan ke dalam erlenmeyer dengan
bantuan corong. Agar ditimbang sebanyak 6 gram.
Agar tersebut dimasukkan kedalam Erlenmeyer.
Air rebusan kentang 400 ml dimasukkan ke dalam
erlenmeyer berisi dextrose dan agar. Semua bahan
sudah dimasukkan kedalam erlenmeyer.
Erlenmeyer dimasukkan ke oven untuk tahap
pemanasan dan homogen. PAD sudah terbentuk.
Pembuatan Nutrient Broth (NB) dimulai
dengan perhitungan untuk mengukur massa NB
yang dibutuhkan dalam membuat larutan NB 200
ml. Serbuk NB ditimbang sebanyak 2,6 gram
sesuai hasil perhitungan. Ditambahkan 200 ml
akuades ke dalam erlenmeyer. Larutan diaduk
menggunakan spatula. Larutan dihomogenkan
dengan menggunakan hot plate magnetic stirrer.
Jika sudah homogen larutan disumbat dan dilapisi
plastic wrap.
Pada proses sterilisasi dan destruksi dimulai
dengan tutup autoclave dibuka dan diisi dengan
aquades. Keranjang bawah autoclave diisi media
untuk destruksi. Keranjang atas autoclave diisi alat
dan bahan yang akan disterilsiasi. Autoclave ditutup
rapat. Tombol on ditekan, timer diatur 15 menit.
Tunggu tekanan dalam kompartemen turun hingga
sama dengan tekanan udara di lingkungan. Buka
klep pengaman dan keluarkan isi autoclave dengan
3
hati-hati. Posisikan tombol power ke ‘OFF’. Lepas
stop kontak dari sumber tenaga. Proses telah selesai.
III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Pembuatan Sumbat dan Teknik Pembungkusan
Sumbat merupakan alat yang digunakan untuk
menyumbat mulut alat gelas. Alat gelas dapat berupa
Erlenmeyer, tabung reaksi, dan lainnya. Sumbat dapat
terbuat dari kapas lemak yang kemudian dilapisi oleh
kasa steril. Pada Teknik pembungkusan bahan yan
gdigunakan adalah kertas dari buku yellow page. Kertas
tersebut memiliki tekstur tebal dan kaku yang dianjurkan
dalam penggunaan autoclave [12].
B. Pembuatan Medium
Nutrient agar adalah media umum solid yang
mendukung pertumbuhan organisme non-fastidious.
Nutrient agar mengandung (masa / volume) : 0.5 %
Peptone, 0.3 % beef extract / yeast extract, 1.5 % agar,
0.5 % sodium chloride, dan air distilasi. Peptone
merupakan sumber dari nitrogen organik. Beef extract /
yeast extract berfungsi untuk penyedia vitamin,
karbohidrat, nitrogen, dan garam. Agar berfungsi untuk
membuat larutan menjadi keras. Sodium chloride
memberikan campuran yang mirip dengan sitoplasma
kebanyakan organisme. Air distilasi berfungsi sebagai
pelarut agar [16].
Potato Dextrose Agar (PDA) merupakan media padat
yang sering digunakan untuk menumbuhkan dan
mengembangbiakkan yeast dan kapang / cendawan [17].
PDA termasuk dalam media semisintetik karena
tersusun atas bahan alami kentang dan bahan sintetik
dextrose (sumber karbohidrat) dan agar. Kentang
mengandung karbohidrat, vitamin, dan mikronutrien lain
yang dapat dimanfaatkan oleh cendawan. Sedangkan
dextrose sebagai karbohidrat sederhana menjadi sumber
energi yang dapat segera digunakan. Komponen agar
dalam media berfungsi sebagai bahan pemadat. Masing-
masing dari ketiga komponen tersebut sangat diperlukan
bagi pertumbuhan dan perkembangbiakan
mikroorganisme terutama cendawan [18].
Nutrient broth adalah media kompleks cair yang
terbuat dari ekstrak tanaman dan jaringan hewan. Media
ini memiliki variasi dalam komposisi bahan kimianya.
Sebagian besar media kompleks memiliki amino yang
berlimpah, asam, gula, vitamin, serta mineral. Namun
kandungan yang terdapat di dalamnya tidak diketahui.
Nutrient broth memiliki kandungan peptone dan beef
extract. Pepton adalah protein yang menjadi sumber
nitrogen. Beef extract berfungsi sebagai sumber karbon
organik, nitrogen, vitamin, dan garam anorganik [8].
Karena kandungan inilah, nutrient broth digunakan
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI 4

untuk menumbuh biakan mikroorganisme secara memiliki bagian-bagian beserta fungsinya seperti :
general. Tombol pengatur waktu mundur (timer), katup
Berikut merupakan perbedaan antara medium NA, untuk mengeluarkan uap, barometer atau pengukur
PDA, dan NB. tekanan, tombol on off, thermometer, lempeng
Pembed sebagai pemanas, sekrup pengaman, batas
NA PDA NB
a penambahan air sebagai indikator. Pada proses
Gambar sterilisasi dan destruksi dimulai dengan tutup
medium autoclave dibuka dan diisi dengan aquades.
Keranjang bawah autoclave diisi media untuk
destruksi. Keranjang atas autoclave diisi alat dan
Gambar bahan yang akan disterilsiasi. Autoclave ditutup
Gambar PDA rapat. Tombol on ditekan, timer diatur 15 menit.
NA [19] [20] Gambar NB Tunggu tekanan dalam kompartemen turun hingga
[21] sama dengan tekanan udara di lingkungan. Buka
Medium Solid Solid Broth / klep pengaman dan keluarkan isi autoclave dengan
berdasar liquid
hati-hati. Posisikan tombol power ke ‘OFF’. Lepas
kan
bentukn
stop kontak dari sumber tenaga. Proses telah selesai.
ya Destruksi atau sterilisasi kotor adalah cara untuk
Medium Komplek Kompleks Kompleks menghancurkan bakteri hasil penelitian yang tidak
berdasar s digunakan Kembali. Destruksi dilakukan setelah
kan percobaan dilakukan agar tidak berbahaya. Waktu
komposi yang digunakan pada destruksi lebih cepat
si dasar dibandingkan sterilisasi [23].
Medium Umum Umum Pengaya
IV. SIMPULAN
berdasar
kan Pada praktikum ini praktikan dapat mengetahui
komposi cara pembuatna medium nutrient agar (NA), nutrient
si dan broth (NB), dan potato dextrose agar. Praktikan juga
fungsi dapat mengetahui cara pembungkusan alat gelas,
Komposi Air Air infuse Beef extract pembuatan sumbat, serta teknik sterilisasi.
si bahan distilasi, kentang, / yeast
medium agar dextrose, agar, ectract,
powder, air distilasi. peptone, V. DAFTAR PUSTAKA
yeast / NaCl.
beef
[1] J. P. Harley and L. M. Presscot, Laboratory
extract,
Exercises in Microbiology, 5th Edition. The
peptone,
McGraw−Hill, 2002
NaCl
Fungsi Mempela Pertumbuhan Menumbuh
[2] Hafsan, Mikrobiologi Analitik. Makassar: Alauddin
jari dan biakan
University Press, 2014.
koloni perkembangbi mikroorgani
bakteri akan sme secara
[3] A. Tagesu, “Microbiology
mikroorganis general.
Examination,” International Journal of Veterinary
me terutama
Science and Research, vol. 1, pp. 65-077, 2018, DOI :
cendawan
http://dx.doi.org/10.17352/ijvsr.

[4] Y. Supriatin and M. Rahayyu, “Modification of

C. Teknik Sterilisasi
Metode sterilisasi pemanasan (panas lembab)
biasanya menggunakan autoklaf yang memanfaatkan
panas dalam suatu ruangan bertekanan dengan
temperatur 121°C selama 60 menit [22]. Autoclave
Carry-Blair Transport Media for Storage Salmonella
Typhi,” Jurnal Teknologi Laboratorium, vol. 5, no. 2,
pp. 72–73, Sep. 2016, Accessed: Oct. 16, 2021.
https://www.teknolabjournal.com/index.php/Jtl/article/
view/83/62.
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI
[5] Khalid Mahmood Zia, Farukh Jabeen, Muhammad
Naveed Anjum, and Saiqa Ikram, Bionanocomposites :
Green Synthesis and Applications. Amsterdam Elsevier,
2020.
[6] M. Moeller and K Matyjaszewski, Polymer Science:
a Comprehensive Reference. Elsevier Science, 2012.
[7] M. Levine, “Differentiation of B. Coli and B.
Aerogens on a Simplified Eosin-Methylene Blue
Agar,” Journal of Infectious Diseases, vol. 23, no. 1, pp.
43–47, Jul. 1918, doi: 10.1086/infdis/23.1.43
[8] J. G. Cappuccino and C. Welsh, Microbiology : a
Laboratory Manual. Harlow: Pearson Education
Limited, 2018.
[9] D. D. R. Turista and E. Puspitasari, “The Growth of
Staphylococcus Aureus in the Blood Agar Plate Media
of Sheep Blood and Human Blood Groups A, B, AB, and
O,” Jurnal Teknologi Laboratorium, vol. 8, no. 1, pp. 1–
7, May 2019, doi: 10.29238/teknolabjournal.v8i1.155 .
[10] J.-H. Yoo, “Review of Disinfection and
Sterilization – Back to the Basics,” Infection &
Chemotherapy, vol. 50, no. 2, p. 101, 2018, doi:
10.3947/ic.2018.50.2.101.
[11] V. R. Sastri and Plastics Design Library, Plastics in
Medical Devices : properties, requirements, and
Applications. Amsterdam: Elsevier/William Andrew,
2014.
[12] I. Istini, “Pemanfaatan Plastik Polipropilen
Standing Pouch Sebagai Salah Satu Kemasan Sterilisasi
Peralatan Laboratorium,” Indonesian Journal of
Laboratory, vol. 2, no. 3, p. 41, Aug. 2020, doi:
10.22146/ijl.v2i3.57424.
[13] N. Bhana, A. S. Zanwar, V. Trivedi, and D. Jain, “A
REVIEW: STEAM STERILIZATION a METHOD OF
STERILIZATION,” Journal of Biological & Scientific
Opinion, vol. 1, no. 2, pp. 138–141, Sep. 2013, doi:
10.7897/2321-6328.01222.
[14] I. Siregar and E. A. Ekoningtyas, “Efektivitas
Sterilisasi Kimia Dengan Larutan Daun Sukun Padaalat
Kedokteran Gigi,” Jurnal Kesehatan Gigi, vol. 4, no. 2,
2017, ISSN 2407.0866.
[15] S. Lakshmana Prabu, T. N. K. Suriyaprakash, and
5
R. Thirumurugan, “Chapter 4 - Impact of Microbial
Surface Contamination and Effective Environment
Monitoring System in Pharmaceutical
Manufacturing,” ScienceDirect, Jan. 01, 2013.
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B978
1437778816000041
[16] A. C. S. American Public Health Association and
Harvard University, Standard Methods for the
Examination of Water and Sewage. American public
health association, 1920.
[17] M. Radji, Buku Ajar Mikrobiologi Panduan
Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran. Jakarta : EGC,
2011
[18] A. N, J. M, and A. A, “Perbandingan Pertumbuhan
Aspergillus Fumigatus Pada Media Instan Modifikasi
Carrot Sucrose Agar Dan Potato Dextrose Agar,” Jurnal
Mikologi Indonesia, vol. 4, no. 1, pp. 168–174, 2020,
doi: 10.46638/jmi.v4i1.69.
[19 ] P. Jadhav, M. Sonne, A. Kadam, S. Patil, K.
Dahigaonkar, and J. K. Oberoi, “‘Formulation of Cost
Effective Alternative Bacterial Culture Media Using
Fruit and Vegetables Waste,’” International Journal of
Current Research and Review, vol. 10, no. 2, 2018, doi:
10.7324/ijcrr.2018.1022.
[20] G. W. Griffith et al., “Copper deficiency in potato
dextrose agar causes reduced pigmentation in cultures of
various fungi,” FEMS Microbiology Letters, vol. 276,
no. 2, pp. 165–171, Nov. 2007, doi: 10.1111/j.1574-
6968.2007.00923.x.
[21] Z. A.-A. A. Alkhfaji, “Bee collected pollen load
(BCPL) as alternative culture media for bacterial and
yeast growth,” Journal of Pharmaceutical Sciences and
Research, vol. 10, no. 4, 2018.
[22] Nurrobifahmi, I. Anas, Y. Setiadi, and Ishak,
“Pengaruh Metode Sterilisasi Radiasi Sinar Gamma Co-
60 Dan Autoklaf Terhadap Bahan Pembawa, Viabilitas
Spora Gigaspora Margarita Dan Ketersediaan Fe, Mn,
Dan Zn,” Jurnal Tanah Dan Iklim, vol. 41, no. 1, 2017,
ISSN 1410-7244.
[23] Rochmawati, I, Mikrobiologi Dasar dan Terapan.
Jakarta : Gramedia Pustaka Utama.
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI 6

VI. Lampiran
VI. LAMPIRAN

No. Dokumentasi Perlakuan Fungsi Hasil

Perlakuan

Pembuatan Sumbat

1. Kasa dan kapas agar bentuk bentuk

lemak kapas dapat kapas akan
dimasukkan ke sesuai dengan mengikuti
dalam mulut mulut tabung tabung
tabung reaksi reaksi reaksi yang
secara langsung akan
atau disumbat
menggunakan
tangan terlebih
dahulu

2. Kasa dilinting agar kapas hasil kapas

hingga rapat dan lemak tetap akan padat
padat dapat padat mengikuti
ketika tabung yang
digunakan akan
sebagai disumbat dan
sumbat semakin
rekat.

3. Selotip bening agar kapas hasil

dililitkan pada lemak tetap sumbatan
kasa yang sudah dapat padat menjadi rekat
berisi kapas ketika dan bentuk
lemak digunakan kapas tetap
sebagai terjaga.
sumbat
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI 7

4. Sumbat untuk ukuran

dimasukkan ke mengetahui sumbat
leher tabung kesesuaian sesuai
reaksi. sumbat dengan dengan
mulut tabung mulut
reaksi, serta tabung
memastikan reaksi
bahwa sumbat
sudah rapat

5. Apabila sumbat sumbat siap sumbat

ditarik digunakan dapat
mengeluarkan pada tabung digunakan
bunyi maka reaksi untuk
sumbat sudah menyumbat
jadi. Untuk ujung tabung
kasa yang reaksi
berlebih dapat
digunting

Teknik Pembungkusan Cawan Petri

1. Cawan petri untuk alat yang

disiapkan menyiapkan akan
alat yang akan dibungkus
dibungkus siap
dengan yellow
page

2. Yellow page 2 menyatukan 2 yellow page

lembar disiapkan lembar yellow dapat
page, karena digunakan
jika hanya 1 untuk
lembar bagian menutupi
cawan petri seluruh
tidak tertutupi bagian
cawan petri
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI 8

3. Cawan petri untuk cawan petri

diletakkan diatas menyesuaikan terletak di
yellow page posisi cawan tengah
petri sebelum yellow page
dilakukan
pembungkusan

4. Bagian atas dilipat hingga lipatan rapat

yellow page permukaan sampai
dilipat hingga cawan petri permukaan
sampai pada agar posisi cawan petri
permukaan atas pembungkusan
cawan petri dapat rapat
serta tidak
mudah
berganti posisi

5. Ujung kanan dan sebagai posisi

kiri yellow page pengunci agar pembungku
dilipat cawan petri san rapat
membentuk tidak berubah
segitiga posisi

6. Lipatan segitiga cawan petri bentuk

dapat dilipat lagi yang sudah bungkus
ke arah bawah dibungkus sesuai
hingga dapat segera di dengan
membentuk sterilisasi bentuk alat
lingkaran

Teknik Pembungkusan Tabung Reaksi

1. tabung reaksi dengan posisi yellow page

diletakkan pada miring agar menutupi
ujung yellow seluruh bagian seluruh
page tersebut tabung reaksi bagian
dengan posisi dapat tertutupi tabung
miring oleh yellow reaksi
page
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI 9

2. ujung yellow untuk yellow page

page dimasukkan mengunci dan mengunci
kedalam mulut menutup mulut
tabung reaksi bagian mulut tabung
tabung reaksi reaksi

3. yellow page agar semua Semua

dililitkan hingga bagian tabung bagian
semua bagian reaksi tertutupi tabung
tabung reaksi sebelum reaksi sudah
tertutupi dilakukan tertutupi
sterilisasi yellow page

4. tabung reaksi tabung reaksi Tabung

sudah selesai siap di reaksi sudah
dibungkus sterilisasi tertutup
dengan yellow sempurna
page dan siap dan siap
dilakukan proses disterilisasi
sterilisasi

Pembuatan Nutrient Agar

1. Dilakukan Perhitungan didapatkan

perhitungan dilakukan perhitungan
terkait massa untuk yang
nutrient broth dan menentukan dipakai
agar yang jumlah untuk
dibutuhkan komposisi NB menakar
dalam pembuatan dan agar yang bahan
NA dalam akan dipakai
volume 500 mL untuk
aquades. pembuatan
Ditemukan medium NA
hasilnya dalam volume
dibutuhkan 6,5 gr 500 ml
NB dan 7,5 agar aquades
swallow
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI 10

2. serbuk NB penimbangan bahan

ditimbang serbuk NB serbuk NB
sebanyak 6,5 ditujukan yang
gram di neraca supaya dalam dipakai
analitik dengan pemberian sesuai
gelas arloji dan komposisinya takaran
bantuan spatula. sesuai dan
Lalu dimasukkan tidak
ke dalam labu menyebabkan
erlenmeyer kegagalan
dalam proses
pembuatan
medium

3 Agar swallow penimbangan bahan agar

ditimbang agar swallow yang
sebanyak 7,5 gr ditujukan dipakai
di neraca analitik supaya dalam sesuai
dengan gelas pemberian takaran
arloji dan komposisinya
bantuan spatula. sesuai dan
Lalu, dimasukkan tidak
ke dalam labu menyebabkan
erlenmeyer kegagalan
dalam proses
pembuatan
medium
(Yunita et al,
2016)

4 Ditambahkan 500 aquades larutan

ml akuades ke ditambahkan menjadi
dalam labu sebagai pelarut homogen
erlenmeyer senyawa
dengan tiap 100 didalamnya.
ml penuangan (Achmad,
dengan bantuan 2004)
corong, labu
erlenmeyer
digoyangkan/dik
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI 11

ocok ke kanan
kiri pelan-pelan

5. Larutan yang untuk larutan

mana dalam labu mempercepat menjadi
erlenmeyer telah reaksi dalam homogen
dimasukkan proses sempurna
magnetic stirrer, homogen
dihomogenkan larutannya,
dengan karena
menggunakan hot senyawa akan
plate magnetic lebih mudah
stirrer dengan homogen
kecepatan sekitar dengan suhu
25 rpm tinggi. (Liu &
Pan, 2017)

6 Jika sudah dibagi menjadi didapatkan

homogen, 2 agar jika beberapa
magnetic stirrer salah satu medium
diambil lalu bagi terkontaminasi
menjadi , maka dapat
masing-masing menggunakan
250 ml kedalam yang satunya.
labu erlenmeyer
dengan bantuan
corong (ada 2
labu erlenmeyer)

7 tutup labu Fungsi didapatkan

erlenmeyer penyumbatan medium
dengan sumbat + agar larutan yang siap
plastic wrap dan tidak tumpah disterilkan
medium siap dan tidak
untuk disterilkan menguap saat
sterilisasi
(Citra, 2017)
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI 12

Pembuatan Potato Dextrose Agar

1. air rebusan sebagai pelarut Air rebusan

kentang sekaligus infus kentang siap
dimasukkan ke sumber energi digunakan
gelas beaker bagi mikroba
sebanyak 400 ml yang akan
tumbuh.
(Cappucino,
2008)

2. dextrose agar takaran Dextrose

ditimbang dextrose dapat sesuai
sebanyak 8 gram sesuai dengan takaran
yang
dibutuhkan,
serta agar
menghasilkan
hasil yang
akurat dan
presisi.
(Nazali, 2016)

3. dextrose 8 gram dextrose Dextrose

dimasukkan ke sebagai bahan siap
dalam sintetik dalam digunakan
erlenmeyer proses
dengan bantuan pembuatan
corong kultur bagi
mikroba.
(Benson,
2002)

4. agar ditimbang agar takaran Agar telah

sebanyak 6 gram serbuk agar sesuai
swallow dapat takaran
sesuai dengan
yang
dibutuhkan,
dan
menghasilkan
hasil yang
akurat dan
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI 13

presisi.
(Nazali, 2016)

5. agar swallow 6 agar swallow Agar siap

gram dimasukkan sebagai zat digunakan
ke dalam pemadatan
erlenmeyer yang baik bagi
mikroba
karena
sebagian besar
mikroba tidak
dapat
mendegradasi.
(Willey et al.,
2004)

6. air rebusan sebagai Bahan

kentang 400 ml pelarut bahan telah
dimasukkan ke sekaligus infus siap
dalam sumber energi dicampur
erlenmeyer berisi bagi mikroba
dextrose dan agar yang akan
tumbuh.
(Cappucino,
2008)

7. Semua bahan PDA 400 ml Semua

sudah dengan serbuk bahan telah
dimasukkan dextrose 8 tercampur
gram dan
serbuk agar
swallow 6
gram sudah
terbentuk
(Azzahra
N,2020)
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI 14

8. Erlenmeyer Disterilisasi Erlenmeyer

dimasukkan ke supaya telah steril
oven untuk tahap membunuh
pemanasan dan dan
homogen menghilangka
n kotoran serta
mikroba yang
terdapat pada
alat -bahan
praktikum.
(Azzahra N et
al,2020)

9. Potato dextrose diberikan Medium

agar sebanyak sumbat untuk potato
400 ml sudah mencegah dextrose
terbentuk adanya agar telah
kontaminasi siap dipakai
dari
lingkungan
luar.
(Cappucino,
2008)

Pembuatan Nutrient Broth

1. Dilakukan agar bahan Ditemukann

perhitungan yang ya massa
untuk mengukur digunakan NB yang
massa NB yang dapat sesuai dibutuhkan
dibutuhkan dengan yang
dalam membuat sudah
larutan NB 200 ditentukan
ml

2. Serbuk NB agar takaran diperoleh

ditimbang serbuk NB serbuk NB
sebanyak 2,6 dapat sesuai yang sudah
gram sesuai hasil dengan yang ditimbang
perhitungan dibutuhkan,
dan
menghasilkan
hasil yang
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI 15

akurat dan
presisi.
(Nazali, 2016)

3. Ditambahkan 200 Sebagai akuades

ml aquades ke pelarut menjadi
dalam nutrient broth pealarut NB
erlenmeyer agar tidak
menempel di
erlenmeyer

4. Larutan diaduk Untuk larutan yang

menggunakan menghomo homogen
spatula genkan suatu
larutan dengan
pengadukan

5. Larutan Berfungsi larutan telah

dihomogenkan untuk diaduk dan
dengan menghomogen dipanaskan
menggunakan hot kan suatu
plate magnetic larutan dengan
stirrer pengadukan
dan
pemanasan
(Wardiyah,
2016)

6. Jika sudah Fungsi agar NB

homogen larutan penyumbatan tidak
disumbat dan agar larutan terkontamina
dilapisi plastic tidak tumpah si
wrap dan tidak
menguap saat
sterilisasi
(Citra, 2017)

Teknik Sterilisasi
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI 16

1. Tutup Autoclave aquades uap air yang

dibuka dan digunakan dihasilkan
Autoclave diisi sebagai steril tanpa
aquades pembuat uap kontaminasi
air dan
mengurangi
resiko
berkarat

2. Keranjang bawah media media siap

Autoclave diisi dimasukkan ke didestruksi
media untuk keranjang
destruksi bawah untuk
destruksi

3. Keranjang atas alat dan bahan autoklaf

Autoclave diisi dimasukkan siap untuk
alat dan bahan untuk dioperasika
untuk sterilisasi diautoklaf n

4. Autoclave ditutup agar uap air autoclave

rapat dan tekanan bekerja
pada alat tidak dengan baik
bocor keluar
alat

5. Tombol on untuk Autoclave

ditekan mengaktifkan akan aktif
alat dan bersiap
untuk
mensterilisa
si alat

6. Saklar pada alat untuk Autoclave

dinyalakan mengalirkan mulai
listrik ke alat mendidihka
n air dan
menciptaka
n tekanan
untuk
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI 17

proses
sterilisasi

7. timer diatur autoklaf autoklaf

untuk 15 menit bekerja dalam siap untuk
suhu 121 mensterilisa
derajat, si alat dan
tekanan 2 atm bahan
dalam waktu
15 menit

8. Menunggu timer Alat akan alat dan

melakukan bahan
sterilisasi sedang
dalam
proses
sterilisasi

9. Tunggu tekanan Tekanan Tekanan

dalam dibiarkan sama
kompartemen hingga dengan
turun hingga menunjuk tekanan
sama dengan angka 0 agar udara luar
tekanan udara di autoklaf dapat
lingkungan dibuka
(jarum pada
preisure gauge
menunjuk ke
angka nol).

10. Buka klep untuk alat yang

pengaman dan mengeluarkan sudah
keluarkan isi alat yang disterilisasi
autoclave dengan sterilisasi dikeluarkan
hati-hati.

11. Posisikan tombol tombol sterilisasi

power ke ‘OFF’. dimatikan agar sudah
autoklaf selesai
berhenti
bekerja
PEMBUATAN MEDIUM DAN TEKNIK STERILISASI 18

Lepas stop untuk mencegah autoklaf

kontak dari terjadinya korsleting sudah
sumber tenaga. dan merupakan selesai
bagian dari digunakan
perawatan alat
laboratorium agar
tidak terjadi
kerusakan

Teknik Destruksi
Langkah kerja tahap destruksi sama dengan langkah kerja sterilisasi, yang membedakan adalah
waktu yang digunakan. Teknik destruksi memakan waktu yang lebih singkat dibanding dengan
sterilisasi.