13/06/2023, 20:03 Pewarnaan Gram - StatPearls - Rak Buku NCBI

Translated to: Indonesian Show original Options ▼

NCBI Bookshelf. A service of the National Library of Medicine, National Institutes of Health.

StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2023 Jan-.

Pewarnaan Gram
Nishant Tripathi ; Amit Sapra .

Informasi Penulis dan Afiliasi

Pembaruan Terakhir: 8 Agustus 2022 .

Perkenalan
Pewarnaan Gram adalah salah satu teknik pewarnaan yang paling penting dalam mikrobiologi.
Itu mendapatkan namanya dari ahli bakteriologi Denmark Hans Christian Gram yang pertama
kali memperkenalkannya pada tahun 1882, terutama untuk mengidentifikasi organisme penyebab
pneumonia. [1]  Seringkali tes pertama dilakukan, pewarnaan gram melibatkan penggunaan
kristal violet atau metilen biru sebagai warna primer. [2]  Sebutan untuk organisme yang
mempertahankan warna primernya dan tampak ungu kecokelatan di bawah mikroskop adalah
organisme Gram-positif. Organisme yang tidak mengambil pewarnaan primer tampak merah di
bawah mikroskop dan merupakan organisme Gram-negatif.

 Langkah pertama dalam pewarnaan gram adalah penggunaan pewarna kristal violet untuk
pewarnaan awal slide. Langkah selanjutnya, juga dikenal sebagai memperbaiki pewarna,
melibatkan penggunaan yodium untuk membentuk kompleks kristal violet-yodium untuk
mencegah penghilangan pewarna dengan mudah. Selanjutnya, penghilang warna, seringkali
pelarut etanol dan aseton, digunakan untuk menghilangkan pewarna. Prinsip dasar pewarnaan
gram melibatkan kemampuan dinding sel bakteri untuk menahan pewarna kristal violet selama
perlakuan pelarut. [3]  Mikroorganisme gram positif memiliki kandungan peptidoglikan yang
lebih tinggi, sedangkan organisme gram negatif memiliki kandungan lipid yang lebih tinggi. [4] 

Awalnya, semua bakteri menggunakan pewarna kristal violet; namun, dengan penggunaan
pelarut, lapisan lipid dari organisme gram negatif larut. Dengan pembubaran lapisan lipid, gram
negatif kehilangan pewarnaan primer. Sebaliknya, pelarut mendehidrasi dinding sel gram positif
dengan penutupan pori-pori yang mencegah difusi kompleks violet-iodine, dan dengan demikian,
bakteri tetap terwarnai. [5]  Panjang dekolorisasi merupakan langkah penting dalam pewarnaan
gram karena paparan yang terlalu lama terhadap zat penghilang warna dapat menghilangkan
semua noda dari kedua jenis bakteri tersebut. [6]

Langkah terakhir dalam pewarnaan gram adalah dengan menggunakan pewarna dasar fuchsin
untuk memberikan warna merah muda pada bakteri gram negatif agar lebih mudah diidentifikasi.
Ia juga dikenal sebagai counterstain. Beberapa laboratorium menggunakan safranin sebagai
counterstain; namun, fuchsin dasar menodai organisme gram negatif lebih kuat daripada safranin.
Demikian pula, Hemophilus spp., aplikasi Legionella , dan beberapa bakteri anaerobik bernoda
buruk dengan safranin.

Koleksi Spesimen
Berbagai spesimen klinis dapat digunakan untuk melakukan pewarnaan Gram. Beberapa
spesimen yang biasa digunakan adalah dahak, darah, cairan serebrospinal, cairan asites, cairan
sinovial, cairan pleura, dan urin, dll. Penyeka dari lubang hidung, tenggorokan, rektum, luka, dan
serviks, dll. Juga dapat digunakan. Pengumpulan spesimen harus selalu dalam wadah steril.

Prosedur
Jenis peralatan yang dibutuhkan untuk pewarnaan Gram antara lain:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK562156/ 1/6
13/06/2023, 20:03 Pewarnaan Gram - StatPearls - Rak Buku NCBI

pembakar Bunsen
Slide mikroskop yang dibersihkan dengan alkohol

Rak geser

Mikroskop

 Reagen yang diperlukan untuk pewarnaan Gram meliputi:

Crystal violet (noda primer)  [1]

Larutan yodium Gram (mordan)  [1]

Aseton/etanol (50:50 v:v) (penghilang warna)  [1]

0,1% larutan dasar fuchsin (penghitung noda)  [1]

Air

Prosedur

1. Persiapan apusan slide:

Inoculation loop digunakan untuk mentransfer setetes kultur yang ditangguhkan ke slide
mikroskop. 

Jika cawan Petri atau tabung biakan miring memiliki koloni, setetes atau beberapa tetes air
ditambahkan untuk memfasilitasi transfer koloni dalam jumlah minimal ke kaca objek
pemeriksaan. 

Kultur dalam jumlah minimal diperlukan. Jika biakan dapat dideteksi secara visual pada
loop inokulasi, ini menunjukkan pengumpulan biakan yang terlalu banyak.

Kultur disebarkan dengan loop inokulasi ke film tipis yang rata di atas lingkaran
berdiameter 15 mm. Slide tipikal dapat berisi hingga 4 apusan kecil jika memeriksa lebih
dari satu biakan.

Slide dapat dikeringkan dengan udara atau dikeringkan dengan bantuan panas di atas nyala
api yang lembut. Slide harus digerakkan secara melingkar di atas api untuk mencegah
panas berlebih atau pembentukan pola cincin di slide. Panas membantu adhesi sel ke slide
kaca dan mencegah hilangnya kultur secara signifikan selama pembilasan. 

2. Pewarnaan gram:

Noda kristal ungu ditambahkan di atas biakan tetap. 

Setelah 10 hingga 60 detik, noda dituangkan, dan noda berlebih dibilas dengan air.
Tujuannya adalah untuk menghilangkan noda tanpa menghilangkan kultur tetap. 

Larutan yodium digunakan untuk menutup apusan selama 10 sampai 60 detik. Langkah ini
dikenal sebagai "memperbaiki pewarna". Larutan yodium dituangkan, dan slide dibilas
dengan air mengalir. Kelebihan air dari permukaan terguncang. [7]

Beberapa tetes decolorizer ditambahkan ke slide. Penghilang warna sering merupakan

pelarut campuran etanol dan aseton. Langkah ini dikenal sebagai "perlakuan pelarut." Slide
dibilas dengan air dalam 5 detik. Untuk mencegah dekolorisasi berlebih pada sel gram
positif, hentikan penambahan dekolorisasi segera setelah pelarut tidak diwarnai saat
mengalir di atas slide.

Apusan diimbangi dengan larutan dasar fuchsin selama 40 sampai 60 detik. Larutan
fuchsin dicuci dengan air, dan kelebihan air dihilangkan dengan kertas bibulous. Perosotan
j d dik i k d
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK562156/ d l h hil k k l bih i 2/6
13/06/2023, 20:03 Pewarnaan Gram - StatPearls - Rak Buku NCBI
juga dapat dikeringkan dengan udara setelah menghilangkan kelebihan air. 

3. Pemeriksaan mikroskopis slide:

Slide harus menjalani pemeriksaan di bawah mikroskop di bawah perendaman minyak.

Pemeriksaan slide awal harus menggunakan objektif X40 untuk mengevaluasi distribusi
smear, dan kemudian diperiksa menggunakan objektif minyak imersi X100.

Semua area slide memerlukan pemeriksaan awal. Area yang tebalnya hanya satu sel harus
diperiksa. Area tebal pada slide sering memberikan hasil yang bervariasi dan salah. 

Sel darah putih dan makrofag menodai Gram-negatif.

Sel epitel skuamosa menodai Gram-positif.

Berbagai modifikasi pewarnaan gram digunakan, seperti pewarnaan gram Atkin, dan pewarnaan
gram Burke, dll. 

Indikasi
Pewarnaan Gram diindikasikan setiap kali infeksi bakteri dicurigai untuk diagnosis yang mudah
dan dini. [8]

Diagnosis Potensial
Pewarnaan Gram membantu diagnosis penyakit atau kondisi patologis. 

Contoh organisme gram positif adalah: 

Cocci: spesies Staphylococcus , dan spesies Streptococcus

Bacilli: spesies Corynebacterium , spesies Clostridium  , dan spesies Listeria

Contoh organisme gram negatif adalah [9] :

Cocci: Neisseria gonorrheae, Neisseria meningitidis, dan spesies Moraxella

Bacilli: Kumparan Escherichia, spesies Pseudomonas, spesies Proteus , dan spesies 

Klebsiella

Contoh organisme variabel gram meliputi:

spesies Actinomyces

Temuan Normal dan Kritis

Temuan normal dalam cairan tubuh yang steril adalah tidak adanya organisme patologis dalam
apusan. Organisme diidentifikasi berdasarkan warna dan bentuk. Organisme gram positif
berwarna ungu atau biru, sedangkan organisme gram negatif berwarna merah muda atau merah.
Basil berbentuk batang, sedangkan kokus berbentuk bulat. 

Temuan pada pewarnaan gram yang menunjukkan infeksi bakteri yang mendasarinya:

Kokus Gram-positif dalam kelompok: Biasanya karakteristik spesies Staphylococcus

seperti S. aureus.

Kokus Gram-positif berantai: Biasanya khas untuk spesies Streptococcus  seperti S.

pneumoniae, Streptococcus grup B

Kokus Gram-positif dalam tetrad: Biasanya karakteristik dari Micrococcus spp.

Basil gram positif, tebal: Biasanya ciri-ciri Clostridium spp., seperti C. perfringes , C.
septicum
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK562156/ 3/6
13/06/2023, 20:03 Pewarnaan Gram - StatPearls - Rak Buku NCBI
septicum .

Basil gram positif, tipis: Biasanya karakteristik Listeria spp.

Basil Gram-positif bercabang: Biasanya karakteristik Actinomyces dan Nocardia .

Diplokokus Gram-negatif: Biasanya karakteristik Neisseria spp., seperti N. meningitidis .

(Harap diperhatikan: Moraxella spp., dan Acinetobacter  spp., seringkali bersifat diplokokus
dalam morfologi. Acinetobacter kadang-kadang dapat muncul sebagai cocci Gram-positif, dan
dapat bersifat pleomorfik.

Coccobacilli : Biasanya karakteristik Acinetobacter spp., dan dapat berupa gram positif,
gram negatif, atau gram variabel.

Basil Gram-negatif, tipis: Biasanya karakteristik Enterobacteriaceae , seperti E. coli .

Coccobacilli: Biasanya karakteristik Hemophilus spp., seperti H. influenzae .

Melengkung: Biasanya karakteristik Vibrio spp.,; Campylobacter spp., seperti V. cholerae ,

dan C. jejuni .

Bentuk jarum tipis: Biasanya karakteristik Fusobacterium spp.

Organisme variabel gram: organisme ini tidak berkelompok menjadi organisme gram positif atau
gram negatif.

Faktor Pengganggu
Jika koleksi spesimen tidak steril, beberapa organisme dapat mengkontaminasi spesimen.
Demikian pula, pengambilan spesimen yang tidak tepat dan penggunaan antibiotik sebelumnya
dapat mengganggu pertumbuhan organisme. Selama interpretasi pewarnaan Gram, seperti yang
dijelaskan oleh Organisasi Kesehatan Dunia pada tahun 2003, langkah-langkah berikut harus
diikuti:

1. Sifat umum dari apusan memerlukan analisis dengan perbesaran daya rendah (10X)

Latar belakang slide umumnya harus gram negatif atau jelas

Sel darah putih bila ada harus menodai gram negatif

Endapan keras kristal violet atau gentian yang tipis tidak boleh disalahartikan sebagai
bakteri bacillus gram positif

Apusan harus setebal satu sel tanpa tumpang tindih sel

2. Pembesaran daya rendah harus dimanfaatkan dengan memperhatikan hal-hal berikut:

Jumlah relatif neutrofil polimorfonuklear (PMN), sel mononuklear, dan sel darah merah
(RBC)

Jumlah relatif sel epitel skuamosa, dan bakteri mikrobiota normal

Lokasi, susunan, dan bentuk organisme

3. Pemeriksaan minyak imersi beberapa bidang perlu diperhatikan hal-hal sebagai

berikut:

Mikro-organisme: Jika teridentifikasi, harap dicatat jumlah dan morfologinya

Bentuk: coccus, bacillus, coccobacillus, filamen, dan seperti ragi

Penampilan ujung: bulat, meruncing, cekung, dipukul dan diratakan

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK562156/ 4/6
13/06/2023, 20:03 Pewarnaan Gram - StatPearls - Rak Buku NCBI

Penampakan sisi: sejajar, bulat telur, tidak beraturan atau cekung

Sumbu organisme: lurus, melengkung atau spiral

Pleomorfisme (variasi bentuk)

Percabangan atau ekstensi seluler

Komplikasi
Interpretasi slide bisa sulit jika apusan mikroskopis tebal dan menggumpal. Waktu penghilangan
warna harus memiliki pemantauan yang sangat ketat untuk menghindari penghilangan warna
yang kurang atau penghilangan warna yang berlebihan. Smear yang lebih tebal membutuhkan
waktu penghilangan warna yang lebih lama. Demikian pula, kultur harus menjalani evaluasi saat
masih segar. Kultur lama cenderung kehilangan dinding sel peptidoglikan, yang menyebabkan
sel gram positif menjadi gram negatif atau variabel gram. Pewarnaan Gram tidak berguna untuk
organisme tanpa dinding sel seperti  spesies Mycoplasma  , dan untuk bakteri yang lebih kecil
seperti  spesies Chlamydia  dan  Rickettsia  .

Pewarnaan Gram mungkin tidak mengungkapkan organisme secara salah dalam skenario
berikut:

Penggunaan antibiotik sebelum mengumpulkan spesimen

Usia budaya yang tidak sesuai: terlalu muda atau terlalu tua

Memperbaiki smear sebelum kering

Smear terlalu tebal

Kristal violet konsentrasi rendah

Fiksasi panas yang berlebihan

Pencucian berlebihan di antara langkah-langkah

Paparan yodium yang tidak mencukupi

Dekolorisasi berkepanjangan

Counterstaining yang berlebihan

Kurangnya pengalaman dalam menyiapkan slide, dan mereview slide

Kadang-kadang hasil pewarnaan Gram mungkin tidak cocok dengan hasil akhir kultur dan
berpotensi menyebabkan penggunaan antibiotik yang tidak tepat. [10]

Signifikansi Klinis
Pewarnaan Gram seringkali merupakan tes diagnostik awal untuk evaluasi infeksi. Penggunaan
pewarnaan Gram memfasilitasi penggunaan antibiotik yang tepat secara cepat. Namun, urutan
genetik dan teknik molekuler lebih spesifik daripada pewarnaan gram klasik. 

Tinjau Pertanyaan

Akses pertanyaan pilihan ganda gratis tentang topik ini.

Komentari artikel ini.

Referensi
1. BARTHOLOMEW JW, MITTWER T. Pewarnaan Gram. Bacteriol Rev. 1952 Mar; 16 (1):1-
29. [ Artikel gratis PMC: PMC180726 ] [ PubMed: 14925025 ]
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK562156/ 5/6
13/06/2023, 20:03 Pewarnaan Gram - StatPearls - Rak Buku NCBI

2.

O'Toole GA. Sorotan Klasik: Cara Kerja Pewarnaan Gram. Bakteri J. 01 Desember 2016; 198
(23):3128. [ Artikel gratis PMC: PMC5105892 ] [ PubMed: 27815540 ]
3. LIBENSON L, McILROY AP. Pada mekanisme pewarnaan gram. J Menginfeksi Dis. 1955
Juli-Agustus; 97 (1):22-6. [ PubMed: 13242849 ]
4. SHUGAR D, BARANOWSKA J. Mempelajari noda gram; pentingnya protein dalam reaksi
Gram. Acta Mikrobiol Pol (1952). 1954; 3 (1):11-20. [ PubMed: 13147751 ]
5. HASLETT SEBAGAI. Signifikansi kimia uji Gram untuk bakteri. Aust J Sci. 1947 21 Juni; 9
(6):211. [ PubMed: 20255991 ]
6. Popescu A, Doyle RJ. Pewarnaan Gram setelah lebih dari satu abad. Biotek Histokimia. Mei
1996; 71 (3):145-51. [ PubMed: 8724440 ]
7. MITTWER T, BARTHOLOMEW JW, KALLMAN BJ. Mekanisme reaksi gram. II. Fungsi
yodium dalam pewarnaan gram. Noda Technol. 1950 Oktober; 25 (4):169-79. [ PubMed:
14782050 ]
8. Wilson ML. Mikrobiologi klinis yang relevan secara klinis dan hemat biaya. Strategi untuk
mengurangi pengujian yang tidak perlu. Am J Clinic Pathol. Februari 1997; 107 (2):154-67. [
PubMed: 9024064 ]
9. Beveridge TJ, Davies JA. Respon seluler Bacillus subtilis dan Escherichia coli terhadap
pewarnaan Gram. Bakteri J. November 1983; 156 (2):846-58. [ Artikel gratis PMC:
PMC217903 ] [ PubMed: 6195148 ]
10. Rand KH, Tillan M. Kesalahan interpretasi pewarnaan Gram dari biakan darah positif. Am J
Clinic Pathol. November 2006; 126 (5):686-90. [ PubMed: 17050065 ]
Pengungkapan: Nishant Tripathi menyatakan tidak ada hubungan keuangan yang relevan dengan perusahaan
yang tidak memenuhi syarat.

Pengungkapan: Amit Sapra menyatakan tidak ada hubungan keuangan yang relevan dengan perusahaan yang
tidak memenuhi syarat.

Hak Cipta © 2023, StatPearls Publishing LLC.

Buku ini didistribusikan di bawah ketentuan Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International
(CC BY-NC-ND 4.0) ( http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ ), yang mengizinkan orang lain untuk
mendistribusikan karya tersebut, asalkan artikel tersebut tidak diubah atau digunakan secara komersial. Anda tidak diharuskan
mendapatkan izin untuk mendistribusikan artikel ini, asalkan Anda memberi kredit pada penulis dan jurnalnya.

ID rak buku: NBK562156 PMID: 32965827

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK562156/ 6/6