teks$waterm

teks$wat
Machine Translated by Google
teks
$watermark Akses Publik NIH
Naskah Penulis
Antivirus Res. Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.
Diterbitkan dalam bentuk editan akhir sebagai:
Antivirus Res . Desember 2012; 96(3): 430–436. doi:10.1016/j.antiviral.2012.09.015.

Pengembangan dan evaluasi gel vagina termosensitif

mengandung raltegravir + efavirenz memuat nanopartikel untuk HIV
profilaksis
Abhijit A. Datea, Annemarie Shibatab, Michael Goedea, Bridget Sanfordc , Krista La Bruzzob,
Michel Belshanc , dan Christopher J. Destachea,*
aSekolah Farmasi dan Profesi Kesehatan, Universitas Creighton, Omaha, NE 68178, AS

bDepartemen Biologi, Creighton University, Omaha, NE 68178, USA

cDepartemen Mikrobiologi Medis dan Imunologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Creighton,

Omaha, NE 68178, AS

Abstrak
Tujuan dari penyelidikan ini adalah untuk mengembangkan gel vagina termosensitif yang mengandung
raltegravir + efavirenz memuat nanopartikel PLGA (RAL-EFV-NPs) untuk profilaksis pra pajanan
HIV. RAL-EFV-NP dibuat menggunakan metode penguapan pelarut emulsi yang dimodifikasi
dan dikarakterisasi berdasarkan ukuran dan potensi zeta. Ukuran rata-rata dan muatan permukaan RALEFV-NP
masing-masing adalah 81,8 ± 6,4 nm dan ÿ23,18 ± 7,18 mV. Efisiensi enkapsulasi rata-rata
raltegravir dan efavirenz masing-masing sebesar 55,5% dan 98,2%. Gel vagina termosensitif
mengandung RAL-EFV-NP berhasil dibuat menggunakan kombinasi Pluronic F127 (20%
b/v) dan Pluronic F68 (1% b/v). Penggabungan RAL-EFV-NP ke dalam gel tidak menghasilkan
agregasi nanopartikel dan RAL-EFV-NP yang mengandung gel menunjukkan termogelasi pada 32,5°C.
RAL-EFV-NP dievaluasi untuk penghambatan HIV-1NL4-3 menggunakan sel indikator TZM-bl.
EC90 dari RAL-EFV-NP lebih rendah dibandingkan larutan raltegravir + efavirenz (RAL-EFV) tetapi tidak
tidak mencapai signifikansi. Dibandingkan dengan mengontrol sel HeLa tanpa pengobatan apa pun, RAL-EFV-NP atau
gel kosong tidak bersifat sitotoksik selama 14 hari.
secaraTingkat
in vitro efavirenz intraseluler pada sel HeLa yang diobati
dengan NP RALEFV berada di atas EC90 selama 14 hari sedangkan tingkat efavirenz intraseluler
konsentrasi dihilangkan dalam waktu 6 hari. Eksperimen Transwell terhadap NPs-in-gel menunjukkan
transfer cepat nanopartikel fluoresen dari gel dan serapan dalam sel HeLa dalam waktu 30 menit.
Data ini menunjukkan potensi gel vagina antiretroviral NP untuk jangka panjang
profilaksis prapajanan vagina terhadap penularan HIV-1 heteroseksual.

Kata kunci

raltegravir; efavirenz; profilaksis sebelum paparan; PLN; partikel nano; HIV; Pluronik;
gel termosensitif

© 2012 Elsevier BV Hak cipta dilindungi undang-undang.

*Penulis yang sesuai. Telp. +1-402-280-4744 ; Faks: +1-402-280-3320, destache@creighton.edu (C.Destache).

Penafian Penerbit: Ini adalah file PDF dari naskah yang belum diedit dan telah diterima untuk diterbitkan. Sebagai layanan kepada kami
pelanggan kami menyediakan naskah versi awal ini. Naskah akan menjalani copyediting, typesetting, dan review
bukti yang dihasilkan sebelum diterbitkan dalam bentuk kutipan akhir. Harap dicatat bahwa kesalahan mungkin terjadi selama proses produksi
ditemukan yang dapat mempengaruhi konten, dan semua penafian hukum yang berlaku pada jurnal terkait.

Penyandang dana tidak mempunyai peran dalam desain penelitian, pengumpulan dan analisis data, keputusan untuk menerbitkan, atau persiapan naskah.
 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 2

1. Perkenalan
Pencegahan infeksi HIV-1 untuk mengurangi jumlah orang yang baru terinfeksi merupakan prioritas
internasional. Berbagai cara seperti sunat pada pria (Warner et al., 2009), vaksin profilaksis HIV (Munier
et al., 2009), mikrobisida vagina (Kelly dan Shattock, 2011) dan profilaksis pra-pajanan oral (García-Lerma
et al., 2010) telah dieksplorasi untuk mencegah penularan HIV secara seksual. Pencegahan infeksi HIV
dengan menggunakan obat antiretroviral sebagai mikrobisida vagina telah mendapat perhatian lebih
dalam beberapa tahun terakhir. Namun, uji klinis yang berfokus pada profilaksis HIV melalui vagina
dengan menggunakan mikrobisida topikal menunjukkan hasil yang beragam. Mikrobisida topikal fase
awal seperti PRO 2000 (McCormack et al., 2010) dan Carraguard™ (Skoler-Karpoff et al., 2008) telah
gagal menunjukkan kemanjuran dalam uji klinis sedangkan pemberian gel tenofovir 1% yang bergantung
pada hubungan seksual telah menunjukkan hasil yang baik. keberhasilan dalam uji coba CAPRISA 004
(Abdool Karim et al., 2010). Sebaliknya, uji coba VOICE yang menggunakan gel tenofovir 1% yang tidak
bergantung pada koitus dan diminum sekali sehari dihentikan karena kurangnya kemanjuran (Adams dan
Kashuba, 2012). Kemunduran uji coba VOICE telah mendorong para peneliti untuk mengkaji strategi alternatif
seperti penggunaan kombinasi obat antiretroviral yang bekerja pada berbagai tahap replikasi
virus. Terapi antiretroviral kombinasi (HAART) telah menunjukkan keberhasilan dalam
pengobatan orang yang terinfeksi HIV. Baru-baru ini, gel yang mengandung kombinasi tenofovir dan
UC-781 (penghambat transkriptase balik non-nukleosida hidrofobik) sedang dievaluasi (Kiser et al., 2012).

Efavirenz (EFV) adalah penghambat transkriptase balik non-nukleosida yang disetujui FDA dengan
kemampuan menghambat HIV pada konsentrasi nanomolar.secara
Waktu paruh eliminasi EFV yang lama (~40
in vitro

jam) dapat berguna untuk mencapai profilaksis HIV-1 sebelum pajanan jangka panjang (Magiolo, 2009).
Maurin et al., (2002) telah menunjukkan bahwa efavirenz memiliki stabilitas maksimum pada pH 4. Dengan
demikian, efavirenz dapat memiliki stabilitas optimal di lingkungan vagina jika dikembangkan
sebagai mikrobisida vagina. Raltegravir (RAL) adalah satu-satunya penghambat integrase HIV-1 yang saat
ini disetujui oleh FDA. Baru-baru ini, Clavel et al., (2011) melaporkan bahwa rejimen yang
mengandung raltegravir menyebabkan penetrasi raltegravir di saluran genital perempuan yang terinfeksi
HIV-1. Hingga saat ini, belum ada upaya untuk mengevaluasi potensi raltegravir dan/atau efavirenz sebagai
mikrobisida vagina.

Munculnya nanoteknologi telah membawa perubahan paradigma dalam pengobatan semua penyakit
yang mengancam jiwa termasuk HIV. Faktanya, produk berbasis nanoteknologi (VivaGel®, Starpharma,
Australia) telah dikembangkan untuk profilaksis HIV dan infeksi menular seksual lainnya dan telah
menjalani evaluasi keamanan praklinis dan klinis yang ekstensif (Price et al., 2011). Woodrow et al., (2009)
telah menunjukkan bahwa pemberian nanopartikel PLGA-siRNA intravaginal dapat menginduksi
pembungkaman gen berkelanjutan di vagina selama 14 hari. Investigasi ini dengan jelas menunjukkan bahwa
nanopartikel PLGA mempunyai potensi untuk profilaksis HIV vagina jangka panjang. Namun, tidak
ada laporan yang menjelaskan penggunaan nanopartikel PLGA yang mengandung kombinasi
obat antiretroviral untuk profilaksis vagina.

Cara penyampaian mikrobisida vagina juga merupakan aspek yang sangat penting dalam
profilaksis HIV. Hingga saat ini, sebagian besar uji klinis telah menggunakan gel konvensional untuk
pemberian mikrobisida melalui vagina. Namun, kebocoran gel, distribusi yang tidak merata, dan kekacauan
merupakan kelemahan utama gel konvensional untuk wanita (Adams dan Kashuba, 2012).
Gel termosensitif telah mendapat perhatian lebih besar sebagai alternatif gel konvensional dalam dekade
terakhir. Gel termosensitif berbentuk cair pada suhu kamar tetapi membentuk gel yang sangat kental pada
suhu 37°C setelah dimasukkan ke dalam tubuh (Ruel-Gariépy dan Leroux, 2004).
Gel termosensitif mudah ditangani dan dikirim dibandingkan dengan gel konvensional karena sifatnya yang
cair, dapat menyebar secara merata pada gelasi sedangkan viskositasnya tinggi pada tubuh.

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 3

suhu dapat meminimalkan kemungkinan kebocoran gel (Roy et al., 2001). Selain itu, gel
termosensitif juga dapat mempertahankan penghantaran obat (Balogu et al., 2011). Tujuan
dari penyelidikan ini adalah untuk mengevaluasi potensi gel termosensitif yang mengandung
raltegravir + efavirenz yang memuat nanopartikel PLGA (RAL-EFV-NPs) untuk profilaksis HIV melalui
vagina.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Bahan

Poli-laktida-co-glikolida (Rata-rata Mol. Berat 52000 Da, Viskositas bawaan: 0,59 dL/g dalam
hexafluoroisopropanol) dibeli dari Birmingham Polymers (Birmingham, AL).
Raltegravir (RAL) dan efavirenz (EFV) dibeli dari Sequoia Research Ltd.
(Pangbourne, Inggris). Kalium dihidrogen fosfat (tingkat HPLC), asetonitril (tingkat HPLC),
dimetil sulfoksida (DMSO, Tingkat AR), etil asetat (tingkat AR), asam sitrat (tingkat AR), trisodium
sitrat (tingkat AR), polivinil alkohol (88% terhidrolisis) ; Mol. Wt. 88000) dan Rhodamine 6G dibeli
dari Fischer Scientific Ltd (Pittsburg, PA, USA).
Pluronic F127, Pluronic F68 (BASF Corp., Edison, NJ, USA) dan N-methylpyrrolidone
(Pharmasolv®, Ashland Inc, Wayne, NJ, USA) diterima sebagai sampel hadiah. Air ultra murni
digunakan untuk semua percobaan.

2.2. Budaya sel

Sel serviks manusia (HeLa), sel T (sel H9) dan sel indikator HIV (TZM-bl) digunakan untuk berbagai
percobaan. Metode kultur dan penggunaan sel dijelaskan dalam materi tambahan.

2.3. Pembuatan nanopartikel PLGA yang mengandung kombinasi RAL dan EFV (RAL EFVNP)

Secara singkat, PLGA (50 mg) dan Pluronic F127 (100 mg) dilarutkan dalam 3 ml etil asetat dengan
pemanasan pada suhu 40°C dalam bak pengocok inkubasi. RAL (5 mg) dan EFV (5 mg)
dilarutkan dalam campuran DMSO (0,15 ml) dan N-metilpirolidon (0,1 ml) dengan pemanasan pada
suhu 40°C dalam bak pengocok inkubasi. Larutan etil asetat ditambahkan ke dalam campuran
DMSO dan N metilpirolidon yang mengandung RAL dan EFV hingga diperoleh larutan yang
homogen (fasa organik). Fase organik diemulsi dalam 10 ml air ultra murni menggunakan probe
sonicator (UP100H; Hielscher USA, Inc., NJ, USA; Amplitudo: 80% dan Intensitas: 0,8) selama 15
menit dalam penangas es. Emulsi minyak dalam air yang dihasilkan dipindahkan ke gelas kimia 50
mL dan diaduk pada 700 rpm selama 2 jam menggunakan pengaduk magnet untuk menguapkan etil
asetat. Ukuran partikel, indeks polidispersitas, dan muatan permukaan RAL-EFV-NP yang
dihasilkan diukur menggunakan hamburan cahaya dinamis (instrumen ZetaPlus, Brookhaven
Instruments Corp, NY, USA) seperti yang dijelaskan sebelumnya (Shibata et al., 2012). Semua
percobaan dilakukan dalam rangkap tiga. RAL-EFV-NP disaring secara steril melalui filter 0,22 µm
dan digunakan untuk penelitian lebih lanjut. Untuk pembuatan nanopartikel fluoresen, Rhodamin 6G
(1 mg) dilarutkan dalam 3 mL etil asetat sebagai pengganti obat antiretroviral dan diproses seperti dijelaskan di atas.

2.4. Pencitraan RAL-EFV-NP oleh SEM

RAL-EFV-NP ditempatkan pada permukaan slide dan dibiarkan kering. Slide dilapisi dengan 2% b/
v uranil asetat, dikeringkan, dan kemudian divisualisasikan dengan menggunakan mikroskop
elektron pemindaian JEOL-40A (JEOL Ltd, Sheboygan, WI) (Shibata et al., 2012).

2.5. Studi sitotoksisitas in vitro

Sitotoksisitas in vitro jangka panjang dari RAL-EFV-NP dievaluasi dalam sel HeLa. Secara singkat, sel-sel
diunggulkan dalam 12 pelat sumur dengan kepadatan 1,0 × 104 sel/sumur dalam rangkap tiga dan dibiarkan

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 4

melekat pada sumur semalaman. RAL-EFV-NP ditambahkan untuk mendapatkan

konsentrasi RAL dan EFV sebesar 5 µg/mL di setiap sumur. Gel kosong yang tidak mengandung
nanopartikel (50 ÿL) ditambahkan ke sumur rangkap tiga untuk menentukan sitotoksisitas
komponen ini. Viabilitas sel dinilai pada hari 1, 2, 4, 7, 10 dan 14 sesuai metode MTT (Destache
et al., 2009). Absorbansi yang diperoleh untuk RAL-EFV-NP dibandingkan dengan sel kontrol (tanpa pengobatan).
Dengan asumsi distribusi non-Gaussian, statistik nonparametrik digunakan untuk menentukan
signifikansi.

2.6. Aktivitas anti-HIV

Aktivitas larutan RAL-EFV-NP dan RAL-EFV terhadap HIV-1NL4-3 ditentukan menggunakan sel
indikator TZM-bl HIV-1 sesuai metode yang dilaporkan dengan modifikasi yang sesuai (Fletcher
et al., 2009). Penjelasan lebih lanjut mengenai eksperimen ini disertakan dalam materi tambahan.

2.7. Studi tentang pelepasan raltegravir dan efavirenz intra-seluler dari RAL-EFV-NPs

Pelepasan RAL dan EFV intraseluler dari RAL-EFV-NP dipelajari menggunakan sel HeLa.
Sel HeLa (1 × 105 sel / sumur) diunggulkan ke dalam piring 12 sumur dan dikultur semalaman.
RAL-EFV-NP ditambahkan ke dalam sumur dengan kombinasi konsentrasi awal raltegravir +
efavirenz sebesar 10 ± 2 µg/sumur. Pelepasan RAL dan EFV dalam sel HeLa dan media kultur
dianalisis dengan HPLC pada hari ke 1, 2, 4, 5, 6, 7, 10 dan 14. Rincian lebih lanjut dijelaskan dalam
materi tambahan.

2.8. Pengembangan gel vagina termosensitif

Untuk pengembangan gel vagina termosensitif, RAL-EFV-NP dibuat dalam buffer sitrat berair pH 4,5.
Tabel 1 menguraikan komposisi gel yang digunakan untuk percobaan lebih lanjut. Berbagai
jumlah Pluronic F127 dan Pluronic F68 digunakan untuk mengidentifikasi komposisi gel termosensitif
yang sesuai. Penjelasan lebih lanjut mengenai percobaan pendahuluan untuk membuat gel
termosensitif diberikan dalam informasi tambahan.

2.9. Karakterisasi transfer nanopartikel PLGA fluoresen dari gel termosensitif menggunakan transwell

Sel HeLa disepuh pada 0,5 × 106 sel/ml pada Poly-D Lysine yang dilapisi dengan kaca
penutup BD BioCoat*12 mm (BD Biosciences, San Jose, CA). Sel dikultur semalaman dalam
DMEM ditambah 10% serum janin anak sapi pada suhu 37°C, 5% CO2. Gel termosensitif
(100 ÿl) yang mengandung nanopartikel PLGA berlabel Rhodamin 6G ditempatkan pada penyangga
permeabel transwell 0,4 ÿm (Corning Inc. Life Sci., MA, USA) pada suhu 37°C selama 10 menit
untuk memungkinkan pemadatan gel. Transwell ditempatkan di atas sel HeLa selama 15, 30 menit, 2
jam, 12 jam dan 24 jam. Pada waktu yang tepat, sel HeLa difiksasi dan dicitrakan menggunakan
mikroskop fluoresensi untuk menentukan transfer nanopartikel dari gel ke dalam sel HeLa.
Hal ini dijelaskan dalam informasi tambahan.

2.10. Analisis statistik

Hasil dilaporkan sebagai rata-rata ± SEM untuk semua percobaan. Perbedaan dianggap
signifikan secara statistik pada p <0,05.

3. Hasil
3.1. Persiapan dan karakterisasi RAL-EFV-NP

Nanopartikel PLGA yang mengandung kombinasi RAL dan EFV (RAL-EFV-NPs) memiliki ukuran
partikel 81,8 ± 6,4 nm, indeks polidispersitas 0,15 ± 0,02 dan muatan permukaan ÿ23,18 ± 7,18 mV
(n=3). Efisiensi penjebakan RAL dan EFV di

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 5

rata-rata nanopartikel (± SEM) masing-masing 55,5 ± 5,61% dan 98,2 ± 1,2% (n=3). RAL-EFV-
NP menunjukkan stabilitas fisik dan koloid tanpa perubahan signifikan dalam ukuran partikel dan pH
selama minimal 1 bulan. Pemindaian mikroskop elektron menunjukkan adanya RAL-EFV-NP sub-100
nm (Gambar 1) memvalidasi hasil hamburan cahaya dinamis.
Osmolaritas RAL-EFV-NP rata-rata 405,3 ± 0,57 mOsm/kg karena adanya 1,5% v/v DMSO dan 1% v/
v N-methylpyrrolidone.

3.2. Studi sitotoksisitas in vitro

Sitotoksisitas RAL-EFV-NP jangka panjang secara in vitro dilakukan untuk memastikan bahwa NP
RAL-EFV tidak menyebabkan sitotoksisitas apa pun pada sel HeLa selama studi pelepasan obat
intraseluler (dibahas di bagian 3.4.). Telah diamati bahwa RAL-EFV-NP pada konsentrasi
RAL dan EFV 5 µg/ml tidak menyebabkan toksisitas yang signifikan dibandingkan dengan sel kontrol
atau gel kosong (Gambar 3).

3.3. Aktivitas anti-HIV

Kemanjuran RAL-EFV-NP dibandingkan dengan solusi RAL-EFV dengan mengevaluasi nilai EC90
terhadap strain HIV-1NL4-3 (Gambar 3). Konsentrasi penghambatan untuk NP RAL-EFV lebih kecil
(rata-rata ± MSE, formulasi NP 90,3 ± 0,02, larutan 144 ± 0,067 ng/mL; P > 0,05) dibandingkan
larutan RAL-EFV.

3.4. Studi tentang pelepasan RAL dan EFV intraseluler dari nanopartikel PLGA
Konsentrasi RAL dan EFV intraseluler dan media yang dilepaskan dari RAL-EFV-NP dalam sel
HeLa ditunjukkan pada Gambar 4. Formulasi nanopartikel menawarkan pelepasan
raltegravir dan efavirenz intraseluler yang berkelanjutan. Kami sebelumnya telah
menunjukkan bahwa konsentrasi efavirenz intraseluler tidak terdeteksi dari larutan efavirenz setelah
secara in vitro 2 hari (Destache et al., 2009). Konsentrasi EFV intraseluler pada hari ke 14 > 150

ng/105 sel. EC90 dalam percobaan kami rata-rata 90,3 ng/mL dan oleh karena itu
konsentrasi efavirenz pada hari ke-14 berada di atas EC90 selama 14 hari penuh. Konsentrasi
raltegravir intraseluler menurun selama 6 hari dan berada di bawah batas deteksi pengujian kami
pada hari ke 6. Namun, RAL muncul di media selama 10 hari, sehingga disimpulkan bahwa
perlindungan dari infeksi HIV-1 dapat terjadi selama 7 hari. hari dengan produk kombinasi ini.
Eksperimen lebih lanjut secara alami diperlukan untuk mengkonfirmasi hasil ini.

3.5. Pengembangan gel vagina termosensitif

Dalam penyelidikan ini, kami fokus pada pengembangan gel termosensitif untuk memungkinkan
persalinan RAL-EFV-NP melalui vagina. Berbagai komposisi dipelajari untuk mendapatkan
gel termosensitif dengan karakteristik optimal. Suhu termogelasi yang diperoleh untuk
berbagai komposisi tercantum dalam bahan pelengkap (Tabel S1). Penambahan Pluronic F68
mempunyai pengaruh yang besar terhadap termogelasi Pluronic F127.
Hal ini sejalan dengan pendapat orang lain (Aka-Any-Grah et al., 2010). Pluronic F127 (20%) dan
Pluronic F68 (1%) menunjukkan termogelasi optimal dalam penyelidikan kami. Kurva transisi
sol-gel untuk komposisi ini dan pengaruh suhu terhadap viskositas yang diperoleh dengan
menggunakan reometri disediakan dalam bahan tambahan (Gbr. S1 dan S2). Gambar S3 menunjukkan
foto gel RAL-EFV-NP sebelum dan sesudah termogelasi.

3.6. Karakterisasi transfer nanopartikel dari gel termosensitif menggunakan transwell

Kami berusaha untuk menentukan apakah nanopartikel dapat dilepaskan dari gel termosensitif,
bergerak melalui membran semi-permeabel dan diambil oleh sel HeLa. Untuk melakukan percobaan
ini, kami menggunakan percobaan transwell di mana gel ditempatkan di bagian atas penyangga
transwell dan sel-sel dilekatkan pada bagian bawah sumur kultur. Kami menggunakan

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 6

nanopartikel fluoresen dibuat serupa dengan NP RAL-EFV untuk menentukan waktu sebelum nanopartikel
dipindahkan ke sel. Hasil percobaan ini ditunjukkan pada Gambar 5 A dan B. Nanopartikel fluoresen mampu
berpindah melalui membran transwell dan diambil oleh sel HeLa dalam waktu 30 menit.

4. Diskusi
Investigasi saat ini difokuskan pada eksplorasi potensi nanopartikel polimer untuk profilaksis HIV melalui
vagina yang tidak tergantung pada hubungan seksual. Agar persalinan pervaginam berhasil,
nanopartikel yang dikembangkan sebaiknya mempunyai ukuran partikel yang kecil dan kemampuan
untuk menembus lendir vagina dengan cepat untuk mengantarkan obat antiretroviral ke epitel vagina.
Kami berhasil mengembangkan nanopartikel sub-100 nm yang terdiri dari PLGA, polimer biodegradable
yang disetujui FDA untuk menghasilkan kombinasi raltegravir dan efavirenz (RAL-EFV-NPs). Pluronic F127
digunakan sebagai penstabil untuk pengembangan RAL-EFV-NP. Baru-baru ini, Yang et al., (2011)
menunjukkan penetrasi cepat nanopartikel polistiren berlapis Pluronic F127 melalui lendir serviks.
Karena kami menggunakan Pluronic F127 untuk membuat RAL-EFV-NP, RAL-EFV-NP dianggap memiliki
kemampuan menembus lendir dan penelitian terbaru yang diterbitkan oleh Hanes dan rekan kerja
membuktikan asumsi kami (Ensign et al., 2012). RAL-EFV-NP buatan menunjukkan efisiensi jebakan
yang berbeda untuk raltegravir dan efavirenz. Perbedaan ini disebabkan oleh perbedaan sifat
fisikokimianya.

Raltegravir merupakan obat hidrofilik dengan nilai log P negatif pada pH 7,4 (Moss et al., 2012)
sedangkan efavirenz merupakan obat lipofilik dengan nilai log P positif (Tanaka et al., 2008). Selama
emulsifikasi fase organik dari proses fabrikasi nanopartikel, sejumlah raltegravir akan berpartisi menjadi fase
air karena sifat hidrofilisitasnya, sementara efavirenz akan berada terutama dalam fase organik karena
lipofilisitasnya yang lebih tinggi sehingga mengakibatkan peningkatan hubungan dengan PLGA hidrofobik
dibandingkan dengan raltegravir. .

Osmolaritas merupakan kriteria penting untuk keberhasilan pengembangan formulasi vagina.

Gel tenofovir 1% yang digunakan dalam uji coba CAPRISA-004 bersifat hiperosmolar (3111 mOsm/kg)
dan mengakibatkan pengelupasan epitel eksplan terpolarisasi (Dezzutti et al., 2012). Gel vagina sebaiknya
memiliki osmolaritas kurang dari 1000 mOsm/kg untuk mencegah iritasi mukosa dan kerusakan
lapisan epitel vagina (Friend 2010). Penelitian kami menunjukkan bahwa NP RAL-EFV memiliki osmolaritas
kurang dari 500 mOsm dan cenderung dapat ditoleransi dengan baik dibandingkan dengan gel tenofovir
1%.

Eksperimen sitotoksisitas jangka panjang dirancang untuk menentukan apakah salah satu komponen
yang digunakan untuk pembuatan gel yang mengandung RAL-EFV-NP beracun bagi sel HeLa. Kami
membandingkan RAL-EFV-NP (pada konsentrasi RAL dan EFV 5 µg/mL) dan gel kosong untuk mengontrol
sel tanpa pengobatan apa pun. Pemilihan konsentrasi obat untuk percobaan sitotoksisitas didasarkan pada
studi pendahuluan yang memastikan bahwa konsentrasi ini benar-benar tidak beracun bagi sel
HeLa (data tidak ditampilkan). Gel yang mengandung RAL-EFV-NP tidak menunjukkan toksisitas jangka
panjang terhadap sel HeLa selama periode waktu 14 hari.
Sel HeLa tumbuh melebihi sumur setelah waktu 10 hari. Uji MTT tercatat pada batas maksimum deteksi
pada waktu-waktu ini dan dilanjutkan hingga akhir percobaan 14 hari. Penelitian ini juga memastikan
bahwa RAL-EFV-NPs tidak mempengaruhi viabilitas sel HeLa selama
secara in vitro studi pelepasan sel.

Perlu dicatat bahwa percobaan konsentrasi-respons yang dilakukan dalam penyelidikan ini
diadaptasi untuk menetapkan potensi larutan RAL-EFV-NP dan RAL-EFV untuk pengobatan profilaksis.
Sel TZM-bl diobati dengan larutan RAL-EFV-NPs dan RAL-EFV semalaman, media dihilangkan, sel dicuci,
media dicuci.

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 7

diganti dengan media baru dan sel terinfeksi HIV setelah 24 jam. Dengan demikian, sel akan
terinfeksi HIV-1 hanya jika pengobatan tidak mampu mempertahankan konsentrasi
efektif. RAL-EFV-NP lebih aktif dibandingkan dengan solusi RAL-EFV. EC90 yang lebih rendah
pada formulasi nanopartikel mungkin disebabkan oleh kemampuan nanopartikel untuk
mengangkut dan mempertahankan konsentrasi raltegravir dan efavirenz yang lebih tinggi di dalam sel.

Perbedaan konsentrasi raltegravir dan efavirenz intraseluler kemungkinan disebabkan oleh

perbedaan waktu paruh dan profil metabolismenya. Raltegravir memiliki waktu paruh 7–12 jam
(Iwamoto et al., 2008) sedangkan efavirenz memiliki waktu paruh 40–55 jam (Bumpus et al., 2006).
Raltegravir dimetabolisme oleh glukuronosiltransferase uridin difosfat (UGT1A1, UGT1A3
dan UGT1A9) yang dimediasi glukuronidasi (Kassahun et al., 2007). Efavirenz terutama
dimetabolisme oleh hidroksilasi yang dimediasi sitokrom P450 (CYP2B6) (Bumpus et al., 2006).
Telah dilaporkan bahwa sel HeLa mengekspresikan UGT1A1 dan UGT1A9 (Nakamura et al.,
2008) sedangkan isoform sitokrom P450 seperti CYP3A4 tidak terdapat dalam sel HeLa
(Rodríguez-Antona et al., 2003). Tidak adanya mRNA CYP2B6 pada epitel serviks juga telah
dilaporkan (Farin et al., 1995). Mengingat hal ini, dapat diasumsikan bahwa sel HeLa dapat dengan
mudah memetabolisme raltegravir yang dilepaskan dari nanopartikel sedangkan efavirenz
mungkin tidak mengalami metabolisme intraseluler. Hal ini mungkin menjelaskan perbedaan
pelepasan raltegravir dan efavirenz secara intraseluler. Kami fokus pada tingkat obat intraseluler
karena ini adalah tempat obat dan replikasi HIV. Namun, tingkat obat ekstraseluler juga berada
di atas EC90 untuk virus tersebut.

Pengembangan sarana yang sesuai untuk memungkinkan persalinan RAL-EFV-NP

pervaginam merupakan aspek penting untuk penerjemahan dari bangku ke tempat tidur. Dalam
penyelidikan ini, kami fokus pada pengembangan gel termosensitif untuk persalinan RAL-EFV-
NPs melalui vagina. Namun, penting untuk mengembangkan gel termosensitif yang dapat tetap
cair bahkan di negara sub-tropis dan tropis atau di zona IV seperti yang diklasifikasikan oleh
pedoman ICH dimana suhu rata-rata biasanya lebih besar dari 30°C. Pada saat yang sama,
suhu termogelasi tidak boleh terlalu dekat dengan 37°C karena suhu tubuh juga menunjukkan
variasi. Dengan demikian, titik termogelasi optimal gel ditetapkan antara 30–33°C untuk penyelidikan ini.
Pluronic F127 (20%) dan Pluronic F68 (1%) menunjukkan termogelasi optimal dalam
penyelidikan kami dan RAL-EFV-NP tidak menunjukkan tanda-tanda agregasi setelah
dimasukkan ke dalam gel.

Akhirnya, percobaan transwell dilakukan untuk mengevaluasi transfer nanopartikel dari

gel termosensitif ke lingkungan dan serapan seluler.
Menariknya, nanopartikel diambil oleh sel HeLa dalam waktu 30 menit yang menunjukkan
pelepasan nanopartikel dari gel dan penyerapan cepat nanopartikel yang dilepaskan oleh sel HeLa.

5. Kesimpulan

Kombinasi nanopartikel PLGA antiretroviral yang mengandung raltegravir dan efavirenz berhasil
dikembangkan dan dimasukkan ke dalam gel termosensitif yang cocok untuk persalinan
pervaginam. Pelepasan raltegravir dan efavirenz intraseluler yang berkelanjutan dari nanopartikel
menunjukkan bahwa nanopartikel gel yang dikembangkan memiliki potensi untuk profilaksis pra
paparan vagina jangka panjang untuk pencegahan penularan HIV heteroseksual.

Materi tambahan
Lihat versi Web di PubMed Central untuk materi tambahan.

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 8

Ucapan Terima Kasih

Reagen berikut diperoleh melalui Program Reagen Penelitian dan Referensi AIDS, Divisi
AIDS, NIAID, NIH: garis sel H9 dari Dr. Robert Gallo, sel TZM-bl dari Drs. John Kappes, Xiaoyun Wu, dan
Tranzyme, Inc. Para penulis mengucapkan terima kasih kepada Dr. Han Chen dari Fasilitas Penelitian Inti Mikroskopi di
University of Nebraska-Lincoln, atas bantuannya dalam SEM.

Pengungkapan Keuangan:

Pekerjaan ini didukung oleh hibah Institut Kesehatan Nasional 1R56AI095115-01 dan Clinical Translational
Science Award dari Creighton University (kepada CJD), 5RO1AI080348 (kepada MB), hibah dari National
Institut Ilmu Kedokteran Umum (8 P30 GM103509-03), hibah NIHINBRE dan Universitas Creighton
Presiden Hibah (kepada AS).

Glosarium
RAL Raltegravir
EFV Efavirenz
hal partikel nano
NMP N-metilpirolidon
DMSO Dimetilsulfoksida
RAL-EFV-NP Raltegravir + efavirenz memuat nanopartikel PLGA
Solusi RAL-EFV Larutan Raltegravir + efavirenz dibuat dengan DMSO dan air
PLN Poli-laktida-ko-glikolida
ICH Konferensi Internasional tentang Harmonisasi Teknis
Persyaratan Pendaftaran Obat untuk Keperluan Manusia

Referensi
1. Abdool Karim Q, Abdool Karim SS, Frohlich JA, Grobler AC, Baxter C, Mansoor LE, Kharsany
AB, Sibeko S, Mlisana KP, Omar Z, Gengiah TN, Maarschalk S, Arulappan N, Miotshwa M,
Morris L, Taylor D. Efektivitas dan keamanan gel tenofovir, mikrobisida antiretroviral, untuk
pencegahan infeksi HIV pada wanita. Sains. 2010; 329:1168–1174. [PubMed: 20643915]
2. Abdool Karim SS, Baxter C. Ikhtisar mikrobisida untuk pencegahan pada manusia
virus imunodefisiensi. Praktik Terbaik. Res. Klinik. Kebidanan. Ginekol. 2012; 26:427–439. [PubMed:
22386823]
3. Adams JL, Kashuba AD. Formulasi, farmakokinetik dan farmakodinamik topikal
mikrobisida. Praktik Terbaik. Res. Klinik. Kebidanan. Ginekol. 2012; 26:451–462. [PubMed: 22306523]
4. Aka-Any-Grah A, Bouchemal K, Koffi A, Agnely F, Zhang M, Djabourov M, Ponchel G.
Formulasi hidrogel vagina mukoadhesif yang tidak sensitif terhadap pengenceran dengan cairan vagina. euro. J.
farmasi. Biofarmasi. 2010; 76:296–303. [PubMed: 20656027]
5. Apostolova N, Gomez-Sucerquia LJ, Moran A, Alvarez A, Blas-Garcia A, Esplugues JV. Ditingkatkan
stres oksidatif dan peningkatan massa mitokondria selama apoptosis yang diinduksi efavirenz pada manusia
sel hati. Sdr. J. Farmakol. 2010; 160:2069–2084. [PubMed: 20649602]
6. Baloglu E, Karavana SY, Senyigit ZA, Hilmioglu-Polat S, Metin DY, Zekioglu O, Guneri T, Jones
DS. Formulasi gel econazole nitrate in-situ: persiapan dan evaluasi in-vitro dan in-vivo. J.
farmasi. Farmakol. 2011; 63:1274–1282. [PubMed: 21899542]
7. Bumpus NN, Kent UM, Hollenberg PF. Metabolisme efavirenz dan 8-hydroxyefavirenz sebesar P450
2B6 menyebabkan inaktivasi melalui dua mekanisme berbeda. J. Farmakol. Contoh. Ada. 2006; 318:345–351.
[PubMed: 16611850]
8. Clavel C, Peytavin G, Tubiana R, Soulié C, Crenn-Hebert C, Heard I, Bissuel F, Ichou H, Ferreira
C, Katlama C, Marcelin AG, Mandelbrot L. Raltegravir konsentrasi di saluran genital HIV-1-

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 9

perempuan yang terinfeksi diobati dengan rejimen yang mengandung raltegravir (studi DIVA 01). Antimikroba. Agen
Kemoterapi.. 2011; 55:3018–3021. [PubMed: 21444705]

9. Destache CJ, Belgum T, Goede M, Shibata A, Belshan MA. Pelepasan antiretroviral dari nanopartikel poli(DL laktida-ko-
glikolida) pada tikus. J. Antimikroba. ibu kemoterapi. 2010; 65:2183–2187.
[PubMed: 20729545]

10. Destache CJ, Belgum T, Shibata A, Christensen K, Sharma A, Dash A. Kombinasi obat antiretroviral dalam nanopartikel
PLGA untuk HIV-1. Infeksi BMC. Dis. 2009; 9:198. [PubMed: 20003214]

11. Dezzutti CS, Rohan LC, Wang L, Uranker K, Shetler C, Cost M, Lynam JD, Teman D.
Gel tenofovir yang diformulasi ulang untuk digunakan sebagai mikrobisida kompartemen ganda. J. Antimikroba. ibu kemoterapi.
2012 Sedang dicetak.

12. Ensign LM, Tang BC, Wang YY, Tse TA, Hoen T, Cone R, Hanes J. Penetrasi Lendir
nanopartikel untuk pemberian obat melalui vagina melindungi terhadap virus herpes simpleks. Sains. Terjemahan.
medis. 2012; 4:138ra79.

13. Farin FM, Bigler LG, Oda D, McDougall JK, Omiecinski CJ. Ekspresi sitokrom P450 dan hidrolase epoksida mikrosomal
dalam sel epitel serviks dan mulut yang diabadikan oleh gen human papillomavirus tipe 16 E6/E7. Karsinogenesis.
1995; 16:1670. [PubMed: 7614706]

14. Fletcher P, Harman S, Azijn H, Armanasco N, Manlow P, Perumal D, de Bethune MP, Nuttall J, Romano J, Shattock R.
Penghambatan infeksi human immunodeficiency virus tipe 1 oleh kandidat mikrobisida dapivirine, pembalikan
nonnukleosida penghambat transkriptase. Antimikroba.
Agen Kemoterapi. 2009; 53:487–495. [PubMed: 19029331]

15. Teman DR. Pengembangan farmasi produk obat mikrobisida. farmasi. Dev. Teknologi.
2010; 15:562–581. [PubMed: 20017601]

16. García-Lerma JG, Paxton L, Kilmarx PH, Heneine W. Profilaksis pra pajanan oral untuk HIV
pencegahan. Tren Ilmu Farmakol. 2010; 31:74–81. [PubMed: 19963288]

17. Iwamoto M, Kassahun K, Troyer MD, Hanley WD, Lu P, Rhoton A, Petry AS, Ghosh K, Mangin E, DeNoia EP, Wenning LA,
Stone JA, Gottesdiener KM, Wagner JA. Kurangnya efek farmakokinetik raltegravir pada midazolam: korelasi in vitro/in
vivo. J.Klin. Farmakol. 2008; 48:209– 214. [PubMed: 18077730]

18. Kassahun K, McIntosh I, Cui D, Hreniuk D, Merschman S, Lasseter K, Azrolan N, Iwamoto M, Wagner JA, Wenning LA.
Metabolisme dan disposisi raltegravir (MK-0518) pada manusia, obat anti-AIDS yang menargetkan enzim integrase
human immunodeficiency virus 1. Metab Obat.
Dispos. 2007; 35:1657–1663. [PubMed: 17591678]

19. Kelly CG, Shattock RJ. Mikrobisida khusus dalam pencegahan infeksi HIV. J.Magang. medis.
2011; 270:509–519. [PubMed: 21917029]

20. Kiser PF, Mahalingam A, Fabian J, Smith E, Damian FR, Peters JJ, Katz DF, Elgendy H, Clark
Bpk, Teman DR. Desain gel vagina mikrobisida kombinasi tenofovir-UC781. J.Pharm. Sains.
2012; 101:1852–1864. [PubMed: 22359356]

21. Maggiolo F. Efavirenz: pengalaman klinis selama satu dekade dalam pengobatan HIV. J. Antimikroba.
ibu kemoterapi. 2009; 64:910–928. [PubMed: 19767318]

22. Maurin MB, Rowe SM, Blom K, Pierce SAYA. Kinetika dan mekanisme hidrolisis efavirenz.
farmasi. Res. 2002; 19:517–521. [PubMed: 12033389]

23. McCormack S, Ramjee G, Kamali A, Rees H, Crook AM, Gafos M, Jentsch U, Pool R,
Chisembele M, Kapiga S, Mutemwa R, Vallely A, Palanee T, Sookrajh Y, Lacey CJ, Darbyshire J, Grosskurth H, Profy A,
Nunn A, Hayes R, Weber J. PRO2000 gel vagina untuk pencegahan infeksi HIV-1 ( Program Pengembangan Mikrobisida
301): uji coba kelompok paralel fase 3, acak, tersamar ganda. Lanset. 2010; 376:1329–1337. [PubMed: 20851460]

24. Moss DM, Siccardi M, Murphy M, Piperakis MM, Khoo SH, Back DJ, Owen A. Divalent Metals dan pH Alter Raltegravir
Disposition In Vitro. Antimikroba. Agen Kemoterapi. 2012; 56:3020– 3026. [PubMed: 22450971]

25. Munier CM, Andersen CR, Kelleher AD. Vaksin HIV: kemajuan hingga saat ini. Narkoba. 2011; 71:387– 414. [PubMed:
21395355]

26. Nakamura A, Nakajima M, Yamanaka H, Fujiwara R, Yokoi T. Ekspresi mRNA UGT1A dan UGT2B dalam jaringan
normal manusia dan berbagai garis sel. Metab Obat. Dispos. 2008; 36:1461–1464. [PubMed: 18480185]

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 10

27. Notari S, Tommasi C, Nicastri E, Bellagamba R, Tempestili M, Pucillo LP, Narciso P, Ascenzi P.
Penentuan maraviroc dan raltegravir secara bersamaan dalam plasma manusia dengan HPLC-UV. Kehidupan
IUBMB. 2009; 61:470–475. [PubMed: 19319971]
28. Harga CF, Tyssen D, Sonza S, Davie A, Evans S, Lewis GR, Xia S, Spelman T, Hodsman P,
Moench TR, Humberstone A, Paull JR, Tachedjian G. SPL7013 Gel (VivaGel®) mempertahankan aktivitas
penghambatan HIV-1 dan HSV-2 yang kuat setelah pemberian melalui vagina pada manusia. PLoS Satu.
2011; 6:e24095. [PubMed: 21935377]
29. Rodríguez-Antona C, Bort R, Jover R, Tindberg N, Ingelman-Sundberg M, Gómez-Lechón MJ, Castell JV.
Regulasi transkripsional ekspresi basal CYP3A4 manusia oleh penambah CCAAT yang mengikat protein alfa
dan gamma faktor nuklir-3 hepatosit. mol. Farmakol. 2003; 63:1180– 1189. [PubMed: 12695546]

30. Roy S, Gourde P, Piret J, Désormeaux A, Lamontagne J, Haineault C, Omar RF, Bergeron MG.
Formulasi gel termoreversibel yang mengandung sodium lauryl sulfate atau n-Lauroylsarcosine sebagai
mikrobisida topikal yang potensial melawan penyakit menular seksual. Antimikroba. Agen Kemoterapi.
2001; 45:1671–1681. [PubMed: 11353610]
31. Ruel-Gariépy E, Leroux JC. Hidrogel pembentuk in situ - tinjauan sistem yang sensitif terhadap suhu.
Biofarmasi Eur J Pharm. 2004; 58:409–426. [PubMed: 15296964]
32. Shibata A, McMullen E, Pham A, Belshan M, Sanford B, Zhou Y, Goede M, Date AA, Destache CJ. Kombinasi
nanopartikel antiretroviral untuk pengobatan HIV-1. Retrovirus Manusia AIDS 2012. 2012 Dikirim.

33. Skoler-Karpoff S, Ramjee G, Ahmed K, Altini L, Plagianos MG, Friedland B, Govender S, De

Kock A, Cassim N, Palanee T, Dozier G, Maguire R, Lahteenmaki P. Khasiat Carraguard untuk pencegahan
infeksi HIV pada wanita di Afrika Selatan: uji coba terkontrol plasebo secara acak, tersamar ganda.
Lanset. 2008; 372:1977–1987. [PubMed: 19059048]
34. Tanaka R, Hanabusa H, Kinai E, Hasegawa N, Negishi M, Kato S. Tingkat efavirenz intraseluler dalam sel
mononuklear darah tepi dari individu yang terinfeksi human immunodeficiency virus.
Antimikroba. Agen Kemoterapi. 2008; 52:782–785. [PubMed: 18070970]
35. Warner L, Ghanem KG, Newman DR, Macaluso M, Sullivan PS, Erbelding EJ. Sunat pada pria dan risiko infeksi
HIV di antara pria heteroseksual Afrika-Amerika yang mengunjungi klinik penyakit menular seksual di Baltimore.
J.Inf. Dis. 2009; 199:59–65. [PubMed: 19086815]
36. Woodrow KA, Cu Y, Booth CJ, Saucier-Sawyer JK, Wood MJ, Saltzman WM. Pembungkaman gen intravaginal
menggunakan nanopartikel polimer biodegradable yang sarat dengan RNA kecil yang mengganggu.
Nat. Materi. 2009; 8:526–533. [PubMed: 19404239]
37. Yang M, Lai SK, Wang YY, Zhong W, Happe C, Zhang M, Fu J, Hanes J. Dapat terurai secara hayati
nanopartikel seluruhnya terdiri dari bahan aman yang dengan cepat menembus lendir manusia. Angew.
kimia. Int. Ed. Bahasa Inggris. 2011; 50:2597–2600. [PubMed: 21370345]

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 11

Highlight

• Nanopartikel PLGA (NPs) berukuran <100 nm dengan enkapsulasi yang baik

raltegravir dan efavirenz.

• Gel dibuat dengan membiarkan gel menjadi cair pada suhu kamar dan padat pada suhu kamar
suhu tubuh.

• Gel kosong dan nanopartikel raltegravir+efavirenz tidak menyebabkan sitotoksisitas

selama 14 hari ke sel HeLa.

• Efavirenz memiliki tingkat intraseluler selama 14 hari dan raltegravir memiliki tingkat 6 hari
hari dengan HPLC.

• NP yang mengandung neon berpindah dari gel dalam waktu 30 menit dan
difagositosis oleh sel HeLa.

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 12

Gambar 1.
Gambar SEM dari raltegravir + efavirenz memuat nanopartikel PLGA.

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 13

Gambar 2.
Sitotoksisitas jangka panjang dari RAL-EFV-NPs atau gel kosong yang diinkubasi dengan sel HeLa selama 14 tahun
secara
hari (n=3; in vitro
data dinyatakan sebagai mean ± SEM). Data mewakili persen viabilitas sel
dibandingkan dengan sel HeLa tanpa pengobatan apapun.

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 14

Gambar 3.
Kurva dosis-respons untuk larutan RAL-EFV dan RAL-EFV-NP. Solusi RAL-EFV dan
RAL-EFV-NP diinkubasi dengan sel TZM-bl indikator HIV-1 pada konsentrasi berbeda
dimulai dengan konsentrasi RAL + EFV 10 µg/ml (n=9; data dinyatakan sebagai rata-rata ± SEM).

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 15

Gambar 4.
Konsentrasi RAL dan EFV intra-seluler (sel HeLa) dan media yang dilepaskan dari RAL
EFV-NP selama periode 14 hari (n=6; data disajikan sebagai rata-rata ± SEM).

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

 Machine Translated by Google
$watermark-
teks$waterm
teks$wat
teks Tanggal dkk. Halaman 16

Gambar 5.
Transfer nanopartikel PLGA berlabel Rhodamin 6G dari gel termosensitif melalui
membran transwell dan penyerapan oleh sel HeLa. Pencitraan fluoresensi sel HeLa setelahnya
A)15 menit dan B) 30 menit inkubasi dengan nanopartikel fluoresen yang mengandung gel di dalamnya
transwell.

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.

$watermar
teks$water
Machine Translated by Google
teks$w
te Tanggal dkk. Halaman 17

Tabel 1
Komposisi gel termosensitif yang dimuat RAL-EFV-NP

Komponen Kuantitas

Pluronik F127 2 g (20% b/v)

Pluronik F68 0,1 g (1% b/v)
DMSO 0,15 ml (1,5%v/v)

N-metil pirolidon 0,1 ml (1% b/v)

RAL-EFV-NPs dalam buffer sitrat pH 4,5 10ml

Buffer sitrat pH 4,5 dibuat dengan melarutkan asam sitrat (42 mg) dan trisodium sitrat dehidrasi (59 mg) dalam 1000 ml air ultra murni.
RAL-EFV-NP disiapkan dalam buffer sitrat pH 4,5 untuk pembuatan gel termosensitif.

Antivirus Res . Naskah penulis; tersedia di PMC 2013 01 Desember.