Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jurnal Metode Virologi189 (2013) 204–208

Daftar isi tersedia diSciVerse ScienceDirect

Jurnal Metode Virologi

beranda Anda:www. itu semua . com/ l oc makan / jvir ome t

Modifikasi uji netralisasi virus antibodi fluoresen—Penghapusan efek sitotoksik

untuk mendeteksi antibodi penawar virus rabies
Tomislav BedekovićA,∗, Nina LemoA, Ivana LojkićA, Željko MihaljevićA, Andreja JungicA, Željko
CvetnićA, Željko ČačA, Peter HostnikB
AInstitut Kedokteran Hewan Kroasia, Savska cesta 143, 10000 Zagreb, Kroasia
BUniversitas Ljubljana, Fakultas Kedokteran Hewan, Gerbičeva 60, 1115 Ljubljana, Slovenia

abstrak

Riwayat artikel: Tes netralisasi virus digunakan untuk kuantisasi antibodi spesifik dalam sampel serum. Namun, keberhasilan tes
Diterima 8 Mei 2012 tergantung pada kualitas sampel. Dalam kasus sampel berkualitas buruk, efek sitotoksik dapat diamati dan hasil tes
Diterima dalam bentuk revisi 25 Januari 2013 dapat dikompromikan. Selain itu, efek sitotoksik membatasi penggunaan zat yang berbeda, seperti ekstrak otot
Diterima 30 Januari 2013
atau cairan dari rongga toraks (cairan toraks), sebagai sampel untuk mendeteksi antibodi penawar virus rabies
Tersedia online 10 Februari 2013
dalam tindak lanjut kampanye vaksinasi oral rubah. Untuk menghilangkan efek sitotoksik, tes netralisasi virus
antibodi fluoresen yang dimodifikasi (mFAVN) dikembangkan dan dievaluasi. Dalam uji mFAVN, inokula dihilangkan
Kata kunci:
setelah 1 jam dan efek sitotoksik dicegah. Menurut hasil yang didapat, spesifisitas uji mFAVN dibandingkan uji FAVN
Efek sitotoksik
Eliminasi
adalah 88,8% dan sensitivitasnya 94,4%. Validitas diagnostik tes ini adalah 0,99 (CI = 0,98–1,00). Untuk mengevaluasi
mFAVN kemungkinan penggunaan ekstrak otot dan cairan toraks sebagai sampel untuk uji netralisasi virus, 102 serum,
Rabies ekstrak otot, dan sampel cairan toraks yang berasal dari anjing diuji dengan uji mFAVN. Korelasi antara sera dan
Ekstrak otot ekstrak otot adalah 87,9% (r =0,88,p <0,001). Korelasi antara serum dan cairan toraks adalah 94,2% (r =0,94,p <
Cairan dari rongga dada 0,001). Temuan ini menunjukkan bahwa ekstrak otot dan cairan toraks dapat digunakan sebagai sampel untuk
mendeteksi antibodi penawar virus rabies dalam tindak lanjut kampanye vaksinasi oral. Untuk mengevaluasi tingkat
penghilangan efek sitotoksik, 102 sampel serum, ekstrak otot, dan cairan toraks yang berasal dari anjing juga diuji
secara paralel menggunakan uji mFAVN dan FAVN. Dalam tes mFAVN, tidak ada contoh efek sitotoksik yang diamati
dalam sel. Pada uji FAVN, dua serum (1,9%), 35 ekstrak otot (34,3%) dan 56 sampel cairan toraks (54,9%)
menunjukkan efek sitotoksik. Hasil penelitian ini sangat menyarankan bahwa efek sitotoksik dapat dihilangkan
sepenuhnya dari tes deteksi antibodi penawar virus rabies yang digunakan dalam tindak lanjut kampanye vaksinasi
oral dan sampel berkualitas sangat buruk,

© 2013 Elsevier BV Semua hak dilindungi undang-undang.

1. Perkenalan
Tes netralisasi virus adalah satu-satunya metode yang
memungkinkan kuantisasi antibodi spesifik. Namun, dalam beberapa
sampel, efek sitotoksik pada sel dapat diamati, dan efek ini dapat
mengganggu keandalan hasil uji netralisasi virus (Klik et al., 2003). Hal
ini terjadi terutama ketika serum rubah berkualitas sangat rendah
digunakan untuk mendeteksi antibodi penawar virus rabies dalam
tindak lanjut kampanye vaksinasi oral rubah. Untuk menghilangkan
efek sitotoksik pada sel, pre-treatment (heat inaktivasi, sentrifugasi)
dan pengenceran serum dilakukan secara rutin. Namun, seringkali ini
tidak cukup untuk dihilangkan
∗Penulis yang sesuai. Tel.: +385 16123679; faks: +385 16123670.
Alamat email:bedekovic@veinst.hr (T. Bedeković).
sepenuhnya efek sitotoksik pada sel, terutama pada pengenceran yang
lebih rendah. Alasan utama efek sitotoksik pada sel biasanya adalah
waktu yang dibutuhkan antara menembak hewan dan pengambilan
sampel, sehingga menghasilkan sampel berkualitas rendah. Saat ini,
dua tes netralisasi virus, tes penghambatan fokus fluoresensi cepat
(RFFIT) (Smith et al., 1973) dan tes netralisasi virus fluoresensi (FAVN) (
Cliquet et al., 1998), digunakan untuk mengevaluasi imunogenisitas
vaksin rabies manusia dan hewan dan keduanya merupakan tes yang
terdaftar di OIE (OI, 2011). Sebagai alternatif untuk uji netralisasi virus,
uji imunosorben terkait enzim tidak langsung (ELISA) yang terdaftar di
OIE (Platelia Rabies II – Biorad, Marnes-La-Coquette, Prancis) dapat
digunakan (Klik et al., 2003). Baru-baru ini, ELISA pemblokiran baru
(BioPro, Praha, Republik Ceko) dikembangkan (Wasniewski dan Cliquet,
2012). ELISA pemblokiran baru ini belum distandarisasi dan dievaluasi
oleh Laboratorium Referensi UE untuk rabies. Pemantauan kampanye
vaksinasi oral umumnya dilakukan dengan pemeriksaan serum

0166-0934/$ – lihat materi depan© 2013 Elsevier BV Semua hak dilindungi undang-
undang. http://dx.doi.org/10.1016/j.jviromet.2013.01.022
 T. Bedeković dkk. / Jurnal Metode Virologi189 (2013) 204–208
spesies target untuk menetralkan antibodi (Cliquet et al., 1998). Deteksi
antibodi penawar virus rabies dalam tindak lanjut kampanye vaksinasi
oral rubah umumnya dilakukan dengan menggunakan berbagai
modifikasi dari tes RFFIT dan ELISA asli (Cliquet et al., 1998). ELISA
sangat cocok untuk kasus serum berkualitas buruk (Cliquet et al., 1998).
Menurut studi standardisasi dan validasi, ELISA berpotensi
menggantikan uji netralisasi virus (Klik et al., 2003) tetapi, kesepakatan
antara uji ELISA dan netralisasi virus buruk (Knoop et al., 2010).
Bagaimanapun, tujuan dari kedua tes adalah untuk menunjukkan
kekebalan, yang berarti adanya antibodi spesifik virus rabies pada
hewan yang divaksinasi rabies baik dalam skema perjalanan hewan
peliharaan atau kampanye vaksinasi oral tindak lanjut. Pengumpulan
darah non-hemolitik dimungkinkan jika diperoleh segera setelah rubah
ditembak, tetapi jenis pengumpulan sampel ini tidak mungkin diatur
dengan pemburu sukarela dan seringkali serum tidak dapat
dikumpulkan sampai nanti karena penyimpanan bangkai yang tidak
tepat dan kondisi suhu eksternal. Dalam kasus ini, cairan dari rongga
dada dan perut atau ekstrak otot dapat digunakan sebagai pengganti.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk memodifikasi tes netralisasi
virus untuk menghilangkan efek sitotoksik pada sel yang digunakan
untuk mendeteksi antibodi penawar dalam studi lanjutan untuk
kampanye vaksinasi oral rubah. Untuk mendapatkan hasil yang paling
relevan dan karena kemudahan pengambilan sampel, anjing digunakan
sebagai hewan model. Tujuan lainnya adalah untuk mengevaluasi
kemungkinan penggunaan cairan dari rongga toraks dan ekstrak otot
sebagai sampel untuk mendeteksi antibodi spesifik terhadap rabies.
Modifikasi tes FAVN (mFAVN) dikembangkan dan dievaluasi
dibandingkan dengan tes FAVN. Dalam prosedur uji mFAVN, langkah
tambahan dimasukkan. Inokula dihilangkan setelah 1 jam inkubasi dan
efek sitotoksik pada sel dihilangkan. Untuk membuktikan bahwa
eliminasi sel efek sitotoksik berhasil,
2. Bahan dan metode
2.1. Sampel
Studi ini disetujui oleh komite etik Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Zagreb; nomor: 251-61-01/139-11-72. Sampel dari 102
anjing domestik dikumpulkan. Anjing-anjing itu disuntik mati karena
cedera, sakit, atau usia tua. Untuk mendapatkan sampel serum
sebelum eutanasia dari masing-masing anjing dilakukan pengambilan
darah dengan sistem vacutainer. Setelah eutanasia, bangkai masing-
masing anjing diangkut ke Institut Kedokteran Hewan Kroasia. Untuk
mensimulasikan kondisi lapangan dan kualitas sampel selama
kampanye vaksinasi oral, karkas ditempatkan pada suhu sekitar selama
tiga sampai lima hari. Setelah itu, cairan dari rongga dada dan
sepotongM. femoralis (sekitar 5 cm×7 cm) diambil dari masing-masing
anjing.
Sampel darah yang terkumpul dan sampel cairan dari rongga toraks
disentrifugasi pada 220×Gselama 10 menit dan sera yang dipisahkan
disimpan pada suhu -20◦C sampai pengujian. Otot-otot dalam labu steril
dibekukan selama empat hari dan kemudian ditempatkan pada suhu 4◦C
selama 3-5 hari. Dari setiap bagian otot, sampel sekitar 200-300 -l dari
ekstrak otot dikumpulkan, disentrifugasi pada 220×Gselama 10 menit dan
disimpan pada suhu -20◦C sebelum dianalisis. Pada hari pengujian, semua
sampel diberi perlakuan panas pada suhu 56◦C selama 30 menit dan
disentrifugasi (220×G) sekali lagi.
2.2. Serum referensi
Setiap tes (mFAVN dan FAVN) termasuk kontrol positif dan negatif.
Standar yang digunakan adalah sera positif OIE yang berasal dari anjing
dengan aktivitas 6 IU (ANSES, Malzeville, Prancis).
205
Ampul dilarutkan dengan 0,5 ml air distilat dan dipindahkan ke
tabung steril. Suspensi diencerkan dengan 1/12 (titrasi 0,5 IU/ml),
dibagi menjadi alikuot 500 -l dan disimpan pada −20◦C. Serum negatif
OIE yang berasal dari anjing (ANSES, Malzeville, Prancis) dimasukkan
dalam setiap tes sebagai kontrol negatif.
Untuk mengevaluasi keakuratan uji mFAVN, titer yang diketahui dari
serum rujukan positif dititrasi dalam tiga uji independen. Pengenceran
serum positif OIE (6 IU/ml) disiapkan untuk mendapatkan titer 0,6, 0,3
dan 0,15 IU/ml.
2.3. Pembentukan peta kendali
Sebelum pengujian, diagram kontrol untuk serum referensi dan
untuk virus rabies galur CVS 11 (ATCC VR 959) dibuat. Sera referensi
dan titrasi balik pengenceran kerja virus dititrasi dalam 20 percobaan
independen. Hasilnya, dinyatakan sebagai logaritma desimal (D50),
ditandai dan standar deviasi untuk serum referensi dihitung. Nilai yang
diizinkan untuk virus adalah 30–300 TCID50/50 -l. Nilai ini diambil dari
prosedur yang dijelaskan untuk uji FAVN dalam manual OIE untuk
hewan darat (OI, 2011). Tes mFAVN dan FAVN dianggap valid hanya jika
titer virus kontrol danD50dari sampel serum negatif dan positif tidak
berbeda secara signifikan (dalam satu standar deviasi) dari rata-rata
nilai dari grafik kontrol.
2.4. Tes FAVN yang dimodifikasi (mFAVN)
Tes FAVN yang dimodifikasi dilakukan pada pelat kultur jaringan mikro
96-sumur (Nunc, Roskilde, Denmark) menggunakan sel BHK21-13s (ATCC
CCl-10) dan strain virus rabies CVS 11. Untuk menyiapkan stok virus, sel-sel
yang tersuspensi diinfeksi dengan 0,5 ml virus dalam labu 25 ml (Nunc) yang
mengandung DMEM (PAA, Pasching, Austria) ditambah dengan 10% heat
inactivated fetal calf serum (PAA). Labu diinkubasi pada 37◦C selama 48 jam
dan kemudian dibekukan. Setelah pencairan, suspensi disentrifugasi (300×
G).Labu 75 ml (Nunc) dengan sel tersuspensi kemudian diinfeksi dengan 8
ml supernatan dari labu 25 ml dan diinkubasi pada suhu 37◦C selama 72 jam.
Setelah itu, labu dibekukan dan dicairkan dan suspensi disentrifugasi pada
suhu 300×G selama 10 menit, dibagikan dalam 1 ml alikuot dan disimpan
dalam nitrogen cair. Virus dititrasi seperti yang dijelaskan di bawah ini dan
pengenceran kerja disiapkan untuk mendapatkan 50–300 TCID50/50 -l.
Untuk setiap tes, dua pelat 96-sumur (Nunc) digunakan. Di setiap sumur
pelat pertama, 100 -l suspensi sel (diencerkan dalam media pertumbuhan
hingga konsentrasi 106sel/ml) ditambahkan. Piring dengan sel diinkubasi
selama 3 jam pada 37◦C dalam inkubator yang dilembabkan dengan 5% CO2.
Secara paralel, pada pelat kedua, pengenceran dua kali berturut-turut
(hingga 1/256) sampel (serum rujukan, serum, cairan dari rongga toraks dan
ekstrak otot) dilakukan dalam DMEM (PAA) dalam volume 100 -l. Untuk titrasi
balik virus, 50 -l virus ditambahkan dalam empat sumur yang berdekatan
dan pengenceran serial empat kali lipat (hingga 1/65.536) dalam DMEM
(PAA) dalam volume 200 -l dibuat.
Di setiap sumur dengan serum kontrol dan sampel yang diuji, 50 -l
virus ditambahkan pada setiap pengenceran kerja. Pelat dengan
campuran sel dan virus/serum diinkubasi selama 1 jam pada suhu 37◦C.
Setelah inkubasi (3 jam untuk sel dan 1 jam untuk campuran virus/
serum), media dari sel dihilangkan secara hati-hati dengan pipet
elektronik multisaluran. Menggunakan pipet elektronik multisaluran,
100 -l campuran virus-serum, kontrol virus dan kontrol serum referensi
dari pelat kedua dipindahkan ke masing-masing sumur di pelat dengan
sel. Pelat kedua terbuang dalam disinfektan virucidal dan dibuang.
Pelat dengan sel kemudian diinkubasi selama 1 jam pada suhu 37◦C.
Setelah inkubasi, supernatan dihilangkan dengan hati-hati dengan
pipet elektronik multichannel dan 100 -l DMEM (PAA) ditambah dengan
10% heat inactivated fetal calf serum (PAA) dan 1% antibiotik (Zell
Shield, Minerva Biolab, Berlin, Jerman ) dulu
206 T. Bedeković dkk. / Jurnal Metode Virologi189 (2013) 204–208
Tabel 1
Hasil uji mFAVN dan FAVN.
mFAVN
Serum Ekstrak otot
Positif 72 60
Negatif 30 42
Sitotoksik 0 0
Nilai cut-off dari kepositifan adalah≥0,5 UI/ml.
ditambahkan pada masing-masing sumur. Piring diinkubasi selama 20
jam pada 37◦C. Setelah 20 jam, pelat difiksasi dengan aseton dan
konjugat anti-rabies FITC (Fujirebio Diagnostics, Malvern, USA)
ditambahkan di setiap sumur seperti yang dijelaskan olehKlik et al.
(1998). Hasil dinilai menggunakan mikroskop fluoresensi (Olympus,
Jepang) pada 100×pembesaran. Luas total masing-masing sumur
diperiksa. Untuk sampel dan sera kontrol, sumur dianggap positif jika
fluoresensi tidak teramati. Sumur dianggap negatif jika fluoresensi
diamati. Untuk sumur titrasi virus, sumur dianggap positif jika
fluoresensi diamati. Titik akhir 50% kandungan antibodi sampel uji dan
titrasi virus dihitung menurut metode Spearman-Karber (Spearman,
1908; Karber, 1931). Titer sampel dinyatakan dalam satuan
internasional per mililiter (IU/ml) menurut prosedur OIE (OI, 2011).
Validitas setiap tes kemudian dinilai menurut peta kendali seperti yang
dijelaskan olehKlik et al. (1998).
2.5. Tes FAVN
Tes dilakukan sesuai denganKlik et al. (1998), kecuali pengenceran
uji sampel dan serum kontrol dibuat hingga 1/6561. Validitas setiap tes
kemudian dinilai menurut peta kendali seperti yang dijelaskan olehKlik
et al. (1998).
2.6. Analisis statistik
Korelasi antara kadar antibodi (IU/ml) yang diperoleh mFAVN dan uji
FAVN ditentukan dengan analisis korelasi. Nilai kappa, yang digunakan
di sini sebagai ukuran kesepakatan di luar tingkat peluang antara dua
tes diagnostik, dan pengukuran area kinerja tes di bawah kurva ROC
dihitung menggunakan STATA 10 (Stata Press, College station, Texas,
USA). Hasil tes positif dan negatif yang sebenarnya ditentukan oleh tes
FAVN.
3. Hasil
3.1. Grafik kontrol
Rata-rata dihitung dariD50data serum kontrol positif OIE dan serum
kontrol negatif OIE diperoleh dengan uji mFAVN adalah 1,095 (n =20,
SD = 0,07) dan 0,15 (n =20, SD = 0), masing-masing. Rata-rata dihitung
dariD50data serum kontrol positif OIE dan serum kontrol negatif OIE
diperoleh dengan uji FAVN adalah 1,166 (n =20, SD = 0,09) dan 0,24 (n =
20, SD = 0), masing-masing. Untuk serum negatif referensi OIE,
fluoresensi diamati pada pengenceran log pertama (0,30 untuk mFAVN
dan 0,48 untuk uji FAVN), jadi hanya mungkin untuk menetapkan
bahwaD50lebih rendah dari 0,30 dan 0,48 (maksimumD50dapat menjadi
0,15 untuk uji mFAVN dan 0,24 untuk uji FAVN).
3.2. uji mFAVN
Untuk menetapkan spesifisitas dan sensitivitas uji mFAVN, 102
sampel serum dari anjing diuji secara paralel dengan uji mFAVN dan
FAVN. Hasil ringkasan dicatat dalamTabel 1. Itu
FAVN
Cairan toraks Serum Ekstrak otot Cairan toraks
70 68 50 45
32 32 17 1
0 2 35 56
nilai ambang batas untuk positif adalah 0,5 IU/ml, yang dilaporkan
sebagai tingkat antibodi pelindung minimum sebelumnya (Aubert, 1992
). Spesifisitas tes adalah 88,8% dan sensitivitas 94,4%. Validitas
diagnosis tes mFAVN dibandingkan dengan tes FAVN adalah 99% (
Gambar 1A). Korelasi antara nilai IU/ml antibodi rabies dari serum yang
diuji dengan uji mFAVN dan dengan uji FAVN disajikan padaGambar 1B.
Ketepatan tes dinilai dengan CV antara-lari dan ditemukan 6,97% (n =
10, rata-rata 1,11, SD = 0,07). Akurasi dievaluasi dengan titrasi dalam
tiga tes independen seperti yang dijelaskan sebelumnya olehKlik et al.
(1998). Korelasi antara eksperimen dan nilai yang diharapkan disajikan
dalamMeja 2.
Korelasi antara titer antibodi spesifik rabies (IU/ml) dan validitas
diagnostik uji mFAVN dari sampel serum, cairan toraks, dan ekstrak
otot ditunjukkan pada Gambar. 2 dan 3.
4. Diskusi
Untuk pengendalian rabies, tes netralisasi virus digunakan untuk
mendeteksi antibodi dalam skema perjalanan hewan peliharaan dan dalam
tindak lanjut kampanye vaksinasi oral. Saat ini, dua tes netralisasi virus
terdaftar di OIE: tes RFFIT dan FAVN (OI, 2011). Sebagai alternatif untuk uji
netralisasi virus, ELISA terdaftar OIE dilakukan (OI, 2011). Hemolisis, efek
sitotoksik, dan pencairan beku dapat memengaruhi kinerja tes berdasarkan
deteksi antibodi, seperti ELISA (Neumann dan Bonistalli, 2009). Tujuan dari
penelitian ini adalah untuk mengembangkan dan mengevaluasi tes
netralisasi virus yang dimodifikasi yang sepenuhnya menghilangkan efek
sitotoksik pada sel. Bersamaan dengan tujuan tersebut kami mengevaluasi
kemungkinan penggunaan ekstrak otot dan cairan toraks sebagai sampel
dalam tindak lanjut kampanye vaksinasi oral. Untuk mencapai itu, tes FAVN
yang dimodifikasi dikembangkan dan dievaluasi dibandingkan dengan tes
FAVN standar. Karena kesulitan pengambilan sampel dari rubah, anjing
digunakan sebagai model hewan. Pengujian dilakukan pada pelat 96 sumur
dan prinsip pembacaan yang sama digunakan seperti pada pengujian FAVN.
Modifikasi terpenting yang telah kami perkenalkan adalah inkubasi sel dan
campuran sera/virus pada saat yang sama di dua pelat terpisah. Dalam
prosedur ini, titik kritisnya adalah kemampuan sel untuk tetap melekat pada
pelat selama manipulasi. Untuk mencapainya, kami menggunakan pipet
multisaluran elektronik. Setelah penghilangan isi dari sumur, sel-sel terlepas
pada tingkat yang lebih rendah, tetapi kehilangan sel ini tampaknya tidak
mengubah hasil pengujian. Namun, setelah tambahan 20 jam inkubasi,
seluruh permukaan sumur ditutup dengan sel, karena kami menggunakan
kepadatan sel yang sangat tinggi (106/ml). Untuk mempotensiasi kontak
virus yang lebih baik dengan sel, pertumbuhan
Meja 2
Korelasi antara titer yang diharapkan dan eksperimental (IU/ml) serum rujukan positif.
Titer yang diharapkan (IU/ml) Titer eksperimental (IU/ml)
dalam tiga titrasi independen
0,6 0,7; 0,7; 0,7
0,3 0,39; 0,25; 0,39
0,15 0,17; 0,6; 0,17
 207

Gambar 1.(A) Validitas diagnostik mFAV (hal < nilai 0,86

0,001). Validitas diagnostik m (IU/ml) dalam antibodi
sampel serum yang dititrasi dengan th d dalam IU/ml,
menunjukkan korelasi yang baik (n =100,r =0

Gambar 2.(A) Validitas diagnostik tes mFAVN ketika ekstrak otot digunakan sebagai sampel. Kesepakatan diagnostik (cut-off ditetapkan pada 0,5 IU/ml) antara uji mFAVN serum dan
ekstrak otot adalah 85,29%, dengan nilai kappa 0,69 (p <0,001). Validitas diagnostik tes mFAVN ketika ekstrak otot digunakan sebagai sampel dinilai dengan menghitung area di bawah
kurva ROC. Validitas diagnostik adalah 0,99 (CI = 0,97–1,00). (B) Korelasi antara titer antibodi (IU/ml) dalam serum dan ekstrak otot yang dititrasi dengan uji mFAVN. Korelasi antara titer
antibodi (IU/ml) dalam serum dan ekstrak otot yang dititrasi dengan uji mFAVN adalah signifikan (n =102,r =0,88,p <0,001).

medium dikeluarkan dari sel sebelum menambahkan campuran serum/
virus. Namun, langkah terpenting adalah penghilangan campuran sera/
virus dari sel setelah 1 jam inkubasi. Inkubasi yang lebih lama memiliki
efek negatif pada sel dan inkubasi yang lebih pendek berpengaruh
pada jumlah partikel virus yang dapat menempel pada sel. Menurut
hasil kami, 1 jam inkubasi cukup lama bagi virus yang tidak dinetralkan
untuk menempel pada sel tetapi tidak terlalu lama bagi sampel untuk
menghancurkan sel.
validitas tes mFAVN dibandingkan dengan tes FAVN sangat tinggi
(99%). Namun, empat sampel yang positif oleh mFAVN ternyata negatif
oleh uji FAVN. Tiga sampel mFAVN positif (0,99 IU/ml, 0,7 IU/ml, 0,7 IU/
ml) negatif dengan tes FAVN tetapi memiliki titer antibodi sangat dekat
dengan positif (0,39 IU/ml). Satu sampel yang dinyatakan positif mFAVN
(0,7 IU/ml) memiliki titer antibodi yang lebih rendah (0,23 IU/ml). Dua
sampel yang dinyatakan negatif oleh
menyebabkan

untuk tes FAVN adalah 94,4% itu

Gambar 3.(A) Validitas diagnostik uji mFAVN ketika cairan toraks digunakan sebagai sampel. Kesepakatan diagnostik (cut-off ditetapkan pada 0,5 IU/ml) antara uji mFAVN serum dan
cairan toraks adalah 95,10%, dengan nilai kappa 0,88 (p <0,001). Validitas diagnostik tes mFAVN cairan toraks dibandingkan dengan sampel sera dinilai dengan menghitung area di
bawah kurva ROC. Validitas adalah 0,99 (CI = 0,98–1,00). (B) Korelasi antara titer antibodi (IU/ml) dalam serum dan cairan toraks yang dititrasi dengan uji mFAVN. Korelasi antara kadar
antibodi (IU/ml) dalam serum dan rongga toraks yang dititrasi dengan uji mFAVN adalah signifikan (n =102,r =0,942,hal >0,001).
208 T. Bedeković dkk. / Jurnal Metode Virologi189 (2013) 204–208

Tabel 3 Bagian negatif dari tes mFAVN adalah biayanya, karena dua pelat dan
Titer sumbang diperoleh untuk 12 sampel ekstrak otot dibandingkan dengan sampel serum,
tiga kali lipat jumlah tip per tes harus digunakan. Namun, dengan uji ini
dititrasi dengan mFAVN.
dimungkinkan untuk sepenuhnya menghilangkan efek sitotoksik
Anjing Sampel serum (IU/ml) Ekstrak otot (IU/ml) seperti yang terlihat pada uji FAVN. Untuk uji FAVN, jumlah sampel
4 0,7 0,25 yang berhasil diuji lebih sedikit dan harga per sampel naik.
5 2 0,35
11 0,99 0,25 5. Kesimpulan
13 0,7 0,17
21 0,99 0,35
25 0,7 0,35 Modifikasi tes netralisasi dikembangkan dan penggunaan ekstrak
27 1.41 0,35 otot dan cairan toraks sebagai sampel dalam tindak lanjut kampanye
43 0,7 0,35 vaksinasi oral dievaluasi. Dengan menggunakan uji mFAVN, efek
49 1.4 0,35
sitotoksik dapat dihilangkan, bahkan pada pengenceran terendah dari
51 0,7 0,25
91 0,99 0,25 sampel berkualitas sangat buruk. Keduanya, ekstrak otot dan cairan
toraks dapat digunakan dengan sukses. Tes yang dimodifikasi ini dapat
diterapkan untuk mendeteksi antibodi spesifik terhadap penyakit lain,
digunakan. Keuntungan dari tes mFAVN dibandingkan dengan tes dan secara signifikan meningkatkan evaluasi laboratorium terhadap
FAVN asli adalah waktu yang dibutuhkan untuk melakukan tes. Tes respons imun terhadap vaksinasi.
mFAVN membutuhkan waktu 24 jam dan tes FAVN membutuhkan
waktu 48 jam. Selain itu, dalam mFAVN, hanya dua sumur per sampel Pengakuan
yang digunakan dibandingkan dengan empat sumur dalam pengujian
FAVN, yang berarti membutuhkan jumlah sampel yang lebih sedikit. Penelitian ini didukung oleh hibah No. 048-0481186-1183 dari
Aspek yang paling berharga dari tes mFAVN adalah tidak ada serum Kementerian Sains, Pendidikan dan Olahraga, Republik Kroasia.
yang menunjukkan efek sitotoksik pada sel dibandingkan dengan dua
sampel dalam tes FAVN. Perbedaan yang lebih besar ditemukan ketika
sampel ekstrak otot dan cairan toraks dibandingkan dalam tes FAVN Referensi
dan mFAVN. Dalam kasus ekstrak otot, 35 sampel menunjukkan efek
sitotoksik pada sel. Dalam kasus cairan toraks, 56 sampel menunjukkan Aubert, MF, 1992. Signifikansi praktis antibodi rabies pada kucing dan anjing. Putaran.
efek sitotoksik pada sel. Berbeda dengan FAVN, ekstrak otot dan cairan Sains. Technol. 3, 735–760.
Cliquet, F., Aubert, M., Sagne, L., 1998. Pengembangan virus antibodi fluoresen
toraks dapat berhasil diuji dengan uji mFAVN. Namun, cairan toraks tes netralisasi (tes FAVN) untuk kuantisasi antibodi penawar rabies. J. Imunol. Metode
menunjukkan korelasi yang lebih baik dengan sampel serum 212, 79–87.
dibandingkan dengan ekstrak otot (94,2% berbanding 87,9%). Dua Cliquet, F., Műller, T., Mutinelli, F., Geronutti, S., Brochier, B., Selhorst, T., Schereffer,
JL, Krafft, N., Burow, J., Schameitat, A., Schlűter, H., Aubert, M., 2003. Standarisasi dan
belas ekstrak otot diuji negatif dibandingkan dengan sampel serum
penetapan tes ELISA rabies di laboratorium Eropa untuk menilai kemanjuran
yang diuji positif (Tabel 3). Nilai serum positif teruji terendah adalah 0,5 kampanye vaksinasi rubah mulut. Vaksin 21, 2986–2993. Kärber, G., 1931. Beitrag zur
IU/ml. Dalam kasus cairan toraks, hanya dua sampel yang diuji negatif kollektiven behandlung pharmakologischer reihenver-
seperti itu. Lengkungan. Exp. Patol. farmakol. 162, 480.
dan memiliki nilai mendekati positif (0,35) bila dibandingkan dengan
Knoop, EV, Freuling, CM, Kliemt, J., Selhorst, T., Conraths, FJ, Műller, T., 2010. Evaluasi-
nilai positif yang diperoleh dengan sampel serum (0,7 IU/ml). Sangat uation rabies komersial ELISA sebagai pengganti tes netralisasi serum sebagai
penting untuk dicatat bahwa dalam semua kasus di mana fluoresensi bagian dari skema perjalanan hewan peliharaan dan kampanye vaksinasi oral rubah.
Berl. Munc. Tieärtl. Wochenschr. 123, 278–285.
terdeteksi pada pengenceran terendah dalam sampel sera, hasil yang
Neumann, EJ, Bonistalli, KN, 2009. Pengaruh pascakoleksi penanganan sampel darah
sama diamati ketika ekstrak otot dan cairan toraks digunakan sebagai padaErysipelothrix rhusiopathiaetiter antibodi. Dokter hewan. J. 180, 325–329.
sampel. Ini menunjukkan bahwa dengan pilihan sampel, cairan toraks OIE (Office Internationale des Epizooties), 2011. Rabies. Dalam: Manual untuk Diag-
harus menjadi sampel pilihan. Juga, ambang kepositifan harus diubah, Tes dan Vaksin nostik untuk Hewan Darat. OIE, Parishttp://www. oie.int/fileadmin/
Home/eng/Health standards/tahm/2.01.13 RABIES.pdf Smith, JS, Yager, PA, Baer,
terutama ketika ekstrak otot diuji. Temuan bahwa ekstrak otot dan GM, 1973. Tes cepat yang dapat direproduksi untuk menentukan
cairan toraks dapat berhasil diuji dengan tes netralisasi virus sangat antibodi penawar rabies. Banteng. Organ Kesehatan Dunia. 5, 902.
penting dalam kampanye vaksinasi oral ketika kualitas sampel sangat Spearman, C., 1908. Metode kasus benar dan salah (rangsangan konstan) dengan
rumus Gauss. Sdr. J. Psikol. 2, 227.
buruk. Artinya setiap sampel dapat diuji dan diperoleh hasil. Hasil ini Wasniewski, M., Cliquet, F., 2012. Evaluasi ELISA untuk deteksi anti rabies
dapat memberikan pandangan yang lebih realistis tentang respons tubuh karnivora domestik. J.Virol. Metode 179, 166–175.
antibodi terhadap vaksinasi.