Laporan magang

Untuk memenuhi sebagian persyaratan gelar

Sarjana Mikrobiologi

Disampaikan oleh

Muhammad Attique (Reg No 15-F-AWKUM-GCM-BS-M BIO-07)

Adnan Ali Shah (Reg No 15-F-AWKUM-GCM-BS-M BIO- 30)

Departemen Mikrobiologi

Universitas Abdul Wali Khan Mardan

Pakistan, 2019
 Tanggal _____________

PERSETUJUAN AKHIR
Disertifikasi bahwa kami membaca laporan enternship oleh Mr Muhammad Attique (Reg No 15-
F-AWKUM-GCM-BS-MBIO-07) dan Mr Adnan Ali Shah (Reg No 15-F-AWKUM-GCM-BS-
MBIO -30) dan kami menilai bahwa proyek ini memiliki standar yang cukup untuk menjamin
penerimaannya oleh Universitas Abdul Wali Khan Mardan untuk penghargaan Gelar BS (Hons)
dalam Mikrobiologi.

Panitia Pengesahan Tesis

Pengawas
Tuan Tahir Husain
Pengajar
Departemen Mikrobiologi
Universitas Abdul Wali Khan Mardan ____________________

Pemeriksa Eksternal
Pak Fazal Jalil
Pengajar
Departemen Bioteknologi
Universitas Abdul Wali Khan Mardan ____________________

Ketua Departemen Mikrobiologi

Dr Hazir Rahman
Profesor Madya
Universitas Abdul Wali Khan Mardan ____________________
 Berdedikasi
Untuk kami
Orang Tua Penyayang:
Jiwa kebaikan kita
 DAFTAR ISI
Ucapan Terima
Kasih……………………………………………………………………………………………………………………………………………… 7
Perkenalan:…………………………………………………………..…………………….……………………………………… ………………...8
Sejarah MMC……………………………………………….……………………………………………………….………………. ..............9
Flebotomi……………………………………………………………….…………….……………… ………………………………………..10
Mikrobiologi…………………
……………………………………………………………………………………………………………………………….16
Media umum dalam penggunaan
rutin……………………………………………………………………………………………………………………… 17
Persiapan dan sterilisasi media kultur……………………………………………………….…………………..………………17
Pewarnaan
gram………………………………………………………………………………………………………………………... ..............19
Pewarnaan Zn………………………………………………………………………………………………………………………………………
………….….22
Hematologi………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..……24
CBC ………………………………………………………………………………………………………………………………………… ……….....
……....25
ESR……………………………………………………………………………………………………………………………….……
……………………….26
Tes sabit………………………………………………………………………………………………………………………………………
………………27
Serologi………………………………………………………………………………………………………………………………..………
………………...29
Pengelompokan darah………………………………………………………………………………………………………………..
………………… ………...30
Pertandingan silang……………………………………………………………………………………………………………….………………
……………….31
HBsAG……………………………………………………………………………………………………………………… ………….
………………………………..….33
DBD……………………………………………………………………………………………………………………………………………… …………..
…..34
NKT………………………………………………………………………………………………………………………………..………
………………………..35
H. pylori………………………………………………………………………………………………………………………………………
………………….36
Brucella………………………………………………………………………………………………………..…………………………… …….
…………...37
Tes kehamilan……………………………………………………………………………………………………………………………… ……..38
Patologi kimia………………………………………………………………………………………………………………………………………. …
40
Analisis urin lengkap……………………………………………………………………………………………………………………….…. 41
Tes glukosa……………………………………………………………………………………………………………………………………… ……….
…….51
Asam urat………………………………………………………………………………..…………………………………………
………………………52
ALT……………………………………………………………………………………………………………………………………………
………………………..52
AST …………………………………………………………………………………………………………………………………………
……………………….54
Patologi molekuler………………………………………………………………………………………………………………..…………..……
……55 Ekstraksi DNA dengan metode
chelex……………………………………………………………………………………………………….…56 PCR
………………………………………………………………………………………………………………………….……………… ………..
………….56
Elektroforesis gel
agarosa……………………………………………………………………………………………………………………………….57
 DAFTAR GAMBAR
Gambar 1:
Flebotomi................................................... ............................................................... ..............................13

Gambar 2 komponen
darah ............................................... ............................................................... ..............13

Gambar 3 Tabung pengumpul

darah ............................................... ............................................................... .............16

Gambar 4 Rumus standar untuk

budidaya ............................................... ..............................................19

Gambar 5
Autoklaf ...................................................... ............................................................... ...................................
..20

Gambar 6 autoklaf dengan pengaturan

suhu ............................................... ..............................................20

Gambar 7 Persiapan
media .............................................. ............................................................... .................21

Gambar 8
sterilisasi ............................................... ............................................................... .....................21

Gambar 10
sterilisasi ...................................................... ............................................................... ....................22

Gambar 11 Pewarnaan
Gram .............................................. ............................................................... ................24

Gambar 12 Hasil pewarnaan

gram................................................... ............................................................... .........24

Gambar 13 Pewarnaan
Zn .............................................. ............................................................... .....................25

Gambar 14 Kit pewarnaan Zn

TB................................................ ............................................................... .................25

Gambar 15 Slide pewarnaan

Zn ............................................... ............................................................... ...........26

Gambar 16 hematologi
analyzer .............................................. ............................................................... ......28

Gambar 17 ESR dengan metode Westergren .......................................... ..............................................31

Gambar 18 Prosedur pertandingan
silang ............................................... ............................................................... ..36

Gambar 19 Alat tes

HBsAG................................................... ............................................................... .................37

Gambar 20 Sampel pengambilan sampel urine untuk pemeriksaan fisik dan

lainnya…................................................46

Gambar 21: Botol strip urin dengan bagan

berlabel ............................................... ..............................47

Gambar 22: Urin strip dengan hasil negatif dan positif........................................ ......................49

Gambar 23 Sel darah merah dalam urine di bawah 40x

objektif .......................................... .....................................................…51

Gambar 24 WBC terlihat pada sampel urin di bawah 40x tujuan….................................. .............51

Gambar 25 Gel
elektroforesis................................................... ............................................................... .........59
 SINGKATAN
ZN Zeil Neilson

CBC Gambar darah lengkap

HB Hemoglobin

TLC Jumlah leukosit total

TRBC Jumlah sel darah merah

PCV Volume sel paket

HCT Hematokrit

KIA Hemoglobin corpuskular rata-rata

MCHC Rata-rata konsentrasi hemoglobin korpuskular

ESR Laju sedimentasi eritrosit

HBSAG Antigen permukaan hepatitis B

NKT virus hepatitis C

H.PYLORI helicobacter pylori

ALT transferase alanin amino

AST Asparte amino transferase

PCR Reaksi berantai polimerase

HCG Gonadotropin korionik manusia

 UCAPAN TERIMA KASIH
Segala puji bagi ALLAH, Yang Maha Pengasih dan Penyayang, yang menciptakan alam
semesta dan segala isinya dan memberi manusia kemampuan untuk berpikir dan mencari. Yang
memerintahkan manusia untuk mencari dan belajar. Kewajiban kami yang paling rendah hati dan
terdalam adalah karena kehormatan dan penghargaan yang besar kepada Nabi Suci Hazrat
Muhammad (SAW), yang merupakan obor bimbingan dan pengetahuan bagi umat manusia
secara keseluruhan.
Apa yang bisa kami lakukan untuk mengungkapkan rasa terima kasih dan penghargaan
kami yang menyenangkan kepada guru dan pembimbing kami yang manis , Bapak Tahir
Hussain, Dosen Departemen Mikrobiologi, Universitas Abdul Wali Khan Mardan, atas
pengawasan, saran, dan bimbingannya sejak awal magang ini sebagai serta memberi kami
pengalaman luar biasa sepanjang pekerjaan di atas segalanya dan yang paling dibutuhkan, dia
memberi kami dorongan dan dukungan yang tak tergoyahkan dalam berbagai cara. Dia oasis ide
dan hasrat yang konstan dalam sains, yang secara luar biasa menginspirasi dan memperkaya
pertumbuhan kita sebagai mahasiswa, peneliti, dan ilmuwan yang diinginkan. Kami berhutang
budi padanya lebih dari yang dia tahu.
Kami berterima kasih dengan segala cara yang mungkin dan berharap untuk menjaga
kolaborasi kami di masa depan. Kami sangat berterima kasih kepada semua staf Departemen
Mikrobiologi Universitas Abdul Wali Khan Mardan, terutama kepada Dr. Muhsin Jamal , Dr.
Hazir Rahman, Ms. Kanwal Mazhar, Dr. Ziaur Rahman, Mr. Sagheer Ahmad dan Ibu
Aliya Khalid atas kebaikan dan dukungan morilnya selama kami belajar.
Kami ingin mengucapkan terima kasih kepada semua anggota staf MMC, untuk fasilitasi
penelitian, pengalaman klinis dan pendekatan sistematis.
Kami sangat berterima kasih kepada Zakir Ullah, Mansoor Ahmad, Haseeb Khan, Basit Ali khan
dan Muhammad Junaid, Terima kasih atas persahabatan dan kenangannya. Akhir kata, ucapan
terima kasih kami yang terdalam kami sampaikan kepada Ayah tercinta dan terutama kepada Ibu
kami juga kepada Paman dan Kakak kami atas kasih sayang, dukungan dan doa yang tiada henti
untuk keberhasilan kami sepanjang perjalanan hidup. Kepada mereka yang secara tidak langsung
berkontribusi dalam penelitian ini, kebaikan Anda sangat berarti bagi kami. Terima kasih
banyak.
Muhammad Attique dan Adnan Ali Shah
 PERKENALAN
Magang adalah bagian integral dari program kedokteran laboratorium dan dirancang untuk
memberi siswa kesempatan untuk mengintegrasikan dan menerapkan pengetahuan dan
keterampilan teknis yang diperoleh sebelumnya dalam pengaturan klinis yang sebenarnya. Di
bawah bimbingan para profesional laboratorium medis yang berpengalaman dan personel
laboratorium dan profesional kesehatan yang berkualifikasi lainnya, siswa belajar lebih banyak
tentang prosedur uji diagnostik, metode kontrol kualitas, dan instrumentasi di laboratorium
klinik. Mereka juga mendapatkan pemahaman tentang peran dan fungsi para profesional
laboratorium medis.

Magang memberikan pengalaman belajar terapan di mana siswa harus:

1. Dapatkan dan praktikkan keterampilan laboratorium klinis.

2. Latih keterampilan dalam pemecahan masalah.

3. Melakukan prosedur kontrol kualitas.

4. Beradaptasi dan mempelajari prosedur baru.

5. Mengoperasikan berbagai instrumen laboratorium.

6. Memahami tanggung jawab dan fungsi para profesional laboratorium medis

7. Laporkan hasil yang akurat dan tepat.

8. Pelajari bagaimana menghubungkan hasil tes dengan diagnosis klinis pasien.

Program magang dilakukan di laboratorium rumah sakit yang berafiliasi dengan program ini, di
mana siswa belajar dengan berpartisipasi dalam beban kerja seorang teknolog/spesialis/konsultan
pengawas.
SEJARAH KOMPLEKS MEDIS MARDAN
Kompleks Medis Mardan adalah rumah sakit pendidikan perawatan tersier dengan 520 tempat
tidur yang terfasilitasi dengan baik yang merupakan fasilitas perawatan kesehatan terbesar di
KPK. Ini memiliki semua spesialisasi yang diperlukan dengan diagnostik canggih (pemindai CT,
MRI) dan layanan pendukung. Didirikan pada tahun 1997, awalnya adalah rumah sakit dengan
420 tempat tidur. Belakangan setelah Bacha Khan Medical College (BKMC) didirikan,
Kompleks Medis Mardan dinyatakan sebagai rumah sakit pendidikan dan kekuatan tempat tidur
ditingkatkan menjadi 520. Kompleks medis Mardan telah dirancang dan dibangun menggunakan
teknologi medis paling canggih. Infrastruktur rumah sakit dan lingkungan yang tenang kondusif
untuk pemulihan yang lebih cepat, kesehatan yang lebih baik, dan bantuan .

DEPARTEMEN MMC:
1. Patologi kimia
2. Hematologi
3. Histopatologi
4. Imunologi
5. Mikrobiologi
6. Ilmu pengetahuan virus
PROSES MENGELUARKAN DARAH
1.PHLEBOTOMI
Pengumpulan sampel darah disebut phlebotomy dan orang yang mengumpulkan darah dari
pasien dengan teknik disebut phlebotomist. Dalam pengambilan sampel MMC dilakukan di
bagian penerima tamu. Phlebotomists mengumpulkan spesimen darah dari pasien. Spesimen
diambil oleh phlebotomist di central accessioning area untuk diproses, login ke komputer dan
diberi nomor spesimen dan kemudian didistribusikan ke departemen untuk pengujian.

Gambar 1: Flebotomi

JENIS SAMPEL
1. Cairan aseptik
2. Air ketuban
3. Serum
4. Plasma
5. Air seni
6. CSF
PROSEDUR:

A: Sebelum memulai proses mengeluarkan darah untuk tujuan pengambilan sampel darah

1. Memeriksa formulir persetujuan yang telah ditandatangani, diberi tanggal, perintah

dokter yang ditandatangani, dan formulir kriteria inklusi/eksklusi yang telah diisi.
2. Seperti KTP pasien, nama, tanggal lahir.
3. Jelaskan prosedur kepada pasien.
4. Gunakan pembersih tangan untuk membebaskan tangan dari segala jenis kontaminasi.
5. Persiapan perlengkapan prosedur belajar dilakukan.
B: Mempersiapkan perlengkapan prosedur belajar:

1. Memeriksa integritas peralatan.

2. Jarum suntik.

3. Set kupu-kupu, lubang terbesar cocok untuk pembuluh darah pasien

4. Pemegang vacutainer
5. Tabung vacutainer berlabel per protokol
6. Penyeka alkohol
7. Sarung tangan bersih
8. Turniket

C. INITIASI FLEBOTOMI:
1. Kaji kondisi vena pasien dengan palpasi berkonsentrasi pada vena anti-cubital
a) Tourniquet terpasang di tempat IV yang diinginkan.
b) Ikat tourniquet sedemikian rupa untuk memungkinkan pelepasan dengan satu
tangan..
2. Persiapan tempat penyisipan:

a) Membersihkan kulit dengan cara membersihkan dengan swab alkohol

menggunakan teknik aseptik dimulai dari tengah lokasi yang diusulkan
dan dengan gerakan melingkar menjauhi lokasi selama 30 detik.
b) Jangan menyentuh area yang telah disiapkan dengan jari Anda. Jika
penilaian ulang vena yang teraba perlu dilakukan, persiapkan ulang
kulit sebelum venipuncture.

3. Jangkar vena dengan memegang lengan pasien dan letakkan ibu jari di bawah tempat
tusukan vena.

4. Minta pasien untuk mengepalkan tangan agar vena lebih menonjol.

5. Masukkan vena dengan cepat pada sudut 30 derajat atau kurang, dan terus
masukkan jarum sepanjang vena pada sudut masuk yang paling mudah.

6. Setelah cukup darah terkumpul, lepaskan tourniquet sebelum menarik jarum.

7. Tarik jarum dengan hati-hati dan berikan tekanan lembut ke lokasi dengan kain
 kasa bersih atau bola kapas kering.

Gambar 3 Tabung pengumpul darah

1.1. Spesimen berikut tidak dapat diuji:

 Label tidak lengkap (nama, umur, jenis kelamin, tanggal, waktu pengambilan).

 Spesimen darah mengalami hemolisis.

 Darah antikoagulan menjadi bekuan karena kurangnya pencampuran setelah

pengumpulan.

 Spesimen dikirim ke laboratorium di luar waktu yang ditentukan setelah pengambilan.

 Spesimen tidak disimpan dengan baik sampai waktu pengujian.

 Spesimen yang dikumpulkan dalam antikoagulan memiliki rasio antikoagulan darah

yang tidak tepat.
MIKROBIOLOGI
2.1MEDIA UMUM DALAM PENGGUNAAN RUTIN
I. CLED Agar (Cysteine Lactose Electrolyte Deficient): adalah media pelapisan
diferensial non-selektif untuk pertumbuhan dan pencacahan mikroorganisme saluran
kemih.
II. Persiapan: 36,0g media disuspensikan dalam satu liter air suling, dipanaskan
o
perlahan dan sering diaduk. Rebus selama satu menit dan disterilkan pada suhu 121
C selama 15 menit dan dituangkan ke dalam cawan petri. Pelat dibalik saat
dipadatkan untuk tujuan penyimpanan dan untuk menghindari kelembapan

III. MacConkey Agar. Paling sering digunakan untuk enterobacteriaceae. Ini

mengandung agar, pepton, natrium klorida, garam empedu, laktosa dan merah netral.
Ini adalah media selektif:
IV. Selektif: karena garam empedu tidak menghambat pertumbuhan enterobacteriaceae
tetapi menghambat pertumbuhan banyak bakteri lainnya.
V. Indikator: Bakteri B yang memfermentasi laktosa berwarna merah muda karena
produksi asam. Asam mengubah indikator netral menjadi merah muda. Bakteri ini
disebut 'fermentor laktosa', misalnya Escherichia coll. Koloni tidak berwarna
menunjukkan bahwa laktosa tidak terfermentasi, yaitu bakteri bukan peragi laktosa,
misalnya Salmonella, Shigella.

a. Persiapan : 50g Agar disuspensikan dan diukur ke dalam satu liter air murni
dan dicampur secara menyeluruh dan dipanaskan dengan pengadukan yang
sering, kemudian direbus selama satu menit untuk melarutkan bubuk
sepenuhnya. Agar tersebut diautoklaf pada suhu 121 OC selama 15 menit.

VI. Agar Cokelat : Dibuat dengan memanaskan agar darah. Ini digunakan untuk kultur
meningococcus, pneumococcus, gonococcus, dan Haemophilus.

VII. Persiapan: 2 liter air suling ditambahkan ke 144g bubuk agar. Autoklaf dilakukan
OC OC
pada suhu 121 selama 15 menit dan didinginkan hingga 45 kemudian
ditambahkan 5% darah yang telah didefribrinasi. Dipanaskan perlahan dan merata
hingga 65 o C, didinginkan hingga 45 o C dan dituangkan ke piring

VI. Agar Darah: Paling sering digunakan. Untuk pembuatan agar darah, 5-10% darah
 domba yang telah didefribrinasi dicampur dengan agar-agar cair pada suhu 45-50°C.
Darah berfungsi sebagai bahan pengayaan dan juga bertindak sebagai indikator.
Bakteri ketika tumbuh dalam agar darah menghasilkan hemolisis di sekitar koloni
mereka yang tumbuh. Beberapa bakteri tidak menghasilkan hemolisis. Jenis
perubahan:
a) Hemolisis beta , Terdapat zona bening di sekitar koloni bakteri yang mengalami
hemolisis sempurna, misalnya Streptococcus pyogenes adalah Streptococcus beta
hemolitik.
b) Hemolisis alfa , Ketika ada perubahan warna kehijauan di sekitar koloni bakteri
karena pembentukan biliverdin, misalnya Streptococcus Viridans.
c) Gamma hemolisis , atau, Tanpa hemolisis. Tidak ada perubahan pada media di
dekat koloni bakteri.
2.2 PERSIAPAN DAN STERILISASI MEDIA KULTUR:
Media kultur tersedia secara komersial sebagai bubuk; mereka hanya membutuhkan
penambahan air. Media nutrisi adalah persiapan tujuan umum untuk membiakkan
mikroorganisme yang tidak rewel nutrisi.

Gambar 4 Rumus standar untuk budidaya

Agar yang disiapkan memiliki komposisi yang sama. PH akhir kedua media adalah 7,4.
AUTOCLAVING

Gambar 5 Autoklaf

Autoklaf adalah proses yang menggunakan panas dan tekanan lembab sehingga semua bagian
bahan yang akan disterilkan mencapai suhu 121 derajat Celcius selama 15 menit. Autoclave pada
dasarnya adalah panci presto besar; sebuah ruang yang dapat ditutup terhadap udara di
sekitarnya.
 Gambar 6 autoklaf dengan pengaturan suhu

Objektif:
Untuk menyiapkan agar nutrisi steril untuk membiakkan mikroorganisme.

BAHAN DAN REAGEN:

Agar nutrisi komersial, Neraca, Air suling, botol Scott, Gelas ukur, Forceps, Botol universal

PROSEDUR
1. Kaldu (dengan agar) bubuk secukupnya ditimbang ke dalam botol Scott dan
dilarutkan dengan air suling. Mereka tercampur dengan baik.

Gambar 7 Persiapan media

2. Botol-botol ditutup kembali secara longgar dan disisihkan untuk sterilisasi.

 3. Gambar 8 sterilisasi
4. Semua media disterilkan pada suhu 121 derajat celcius selama 15 menit.

5. Setelah autoklaf, media dikeluarkan. Persiapan kaldu dibiarkan dingin dan tutup
setiap botol dikencangkan.

2.3 PEWARNAAN GRAM:

Ini adalah teknik pewarnaan diferensial mikrobiologis yang paling penting dan banyak
digunakan. Ini dikembangkan oleh Dr. Christian Gram pada tahun 1884, dan membedakan
bakteri menurut karakter Gram mereka (Gram positif atau Gram negatif). Selain itu pewarnaan
ini juga membantu untuk menentukan morfologi, ukuran, dan susunan sel.
Prinsip
Bakteri diwarnai dengan pewarna primer Crystal Violet dan difiksasi dengan mordan, bakteri
tertentu mampu mempertahankan violet kristal dan sebagian lagi dicuci dengan alkohol. Dinding
sel bakteri gram positif memiliki lapisan kompleks protein-gula yang tebal yang dikenal sebagai
peptidoglikan. . Tindakan dekolorizer menyebabkan dinding sel mengalami dehidrasi,
menyebabkan pori-pori di dinding sel menyusut dan mencegah noda keluar dari sel. Jadi etanol
tidak dapat menghilangkan kompleks Crystal Violet-Iodine yang terikat pada lapisan tebal
peptidoglikan bakteri gram positif dan menghasilkan tampilan sel biru atau ungu.
Dalam kasus bakteri gram negatif, dinding sel juga mengambil kompleks CV-Iodine tetapi
karena lapisan tipis peptidoglikan dan lapisan luar tebal yang terbentuk dari lipid, kompleks CV-
Iodine tersapu. Ketika mereka terkena alkohol, penghilang warna melarutkan lipid di dinding sel,
yang memungkinkan kompleks kristal violet-iodine untuk keluar dari sel. Kemudian ketika
diwarnai lagi dengan safranin, mereka mengambil noda dan tampak berwarna merah.
PERSIAPAN BUMBU
1. Ambil slide kering.
2. Sterilkan ose inokulasi pada nyala pembakar Bunsen.
3. Pindahkan biakan (atau spesimen) dengan loop steril dan buat apusan di tengahnya.
4. Keringkan noda di udara.
5. olesan kering melalui api sedemikian rupa sehingga sisi olesan menghadap ke atas.
PROSEDUR
1. Tempatkan slide di atas batang pewarnaan.
2. Tutup apusan dengan noda CV dan biarkan selama 1 menit.
3. Cuci dengan air keran.
4. Oleskan larutan yodium Gram pada smera dan biarkan selama 1 menit.
5. Cuci slide lagi dengan aliran air ledeng.
6. Banjir slide dengan zat penghilang warna lalu tunggu selama 20-30 detik. Ini juga dapat
dilakukan dengan menambahkan setetes demi setetes ke slide sampai zat penghilang warna yang
mengalir dari slide menjadi jernih.
7. Cuci kaca objek dengan mengalirkan air keran dan tiriskan seluruhnya.
8. Noda dengan safranin dan tunggu selama 30 detik sampai 1 menit.
9. Cuci slide dengan aliran air ledeng tidak langsung sampai tidak ada warna yang muncul di
limbah dan kemudian keringkan dengan kertas penyerap.
10. Amati slide di bawah mikroskop (minyak imersi 100x) menggunakan mikroskop medan

terang.

Gambar 10 Pewarnaan Gram

HASIL

Hasil pewarnaan gram stain adalah sebagai berikut:

• Gram Positif : Tampak ungu tua

• Gram Negatif : Tampak pucat hingga merah tua

• Ragi : Tampak ungu tua

 • Sel epitel : Tampak merah pucat

Gambar 11 Hasil pewarnaan gram

PEMERIKSAAN Sputum DENGAN PEWARNAAN ZN:

PRINSIP
Prosedur ini digunakan untuk menodai mycobacterium tuberculosis dan mycobacterium leprae.
Bakteri ini juga disebut basil tahan asam. Mereka diwarnai dengan karbol fuschin, yang
merupakan pewarna merah. Mereka mempertahankan pewarna saat diberi asam, yang
disebabkan oleh adanya asam mikolat di dinding selnya.

Gambar 12 Pewarnaan Zn
REAGEN:
• Carbol fuschin (pewarna dasar)

• 20% asam sulfat (penghilang warna)

• Methylene blue (counter stain) atau Malachite green

 Gambar 13 Kit pewarnaan Zn TB

PROSEDUR
1. Sebarkan dahak secara merata di atas area tengah slide menggunakan gerakan rotasi terus
menerus. Ukuran smear yang disarankan adalah sekitar 20 mm x 10 mm.
2. Tempatkan slide pada pengering dengan permukaan yang diolesi ke atas, dan keringkan
selama sekitar 30 menit.
3. Panas memperbaiki smear kering.
4. Tutupi apusan dengan pewarna carbol fuchsin.
5. Panaskan smear sampai uap mulai naik (yaitu sekitar 60 derajat Celcius). Jangan terlalu
panas (mendidih atau kering). Tambahkan pewarna tambahan jika perlu. Biarkan noda
yang dipanaskan tetap berada di slide selama 5 menit.
6. Cuci noda dengan air bersih.
7. Tutup apusan dengan alkohol asam 3% v/v selama 2-5 menit (atau asam sulfat 20%) atau
sampai apusan cukup terdekolorisasi .
8. Cuci bersih dengan air bersih
9. Tutupi noda dengan pewarna hijau perunggu selama 1-2 menit
10. Cuci noda dengan air bersih
11. Seka bagian belakang kaca objek hingga bersih, dan tempatkan di rak pengeringan untuk
 apusan hingga kering udara Periksa apusan secara mikroskopis, dengan menggunakan
lensa objektif 100x perendaman minyak (10X lensa mata dengan perbesaran total 1000X)
dan pindai apusan secara sistematis .

HASIL DAN INTERPRETASI:

BASILI CEPAT ASAM: Ini adalah batang Merah, lurus atau melengkung, terjadi
sendiri-sendiri atau dalam kelompok kecil.
SEL : Tampak Hijau (hijau perunggu) atau Biru (biru metilen)
LATAR BELAKANG : Muncul sebagai Hijau (hijau perunggu) atau Biru (biru metilen).

Gambar 14 Slide pewarnaan Zn

HEMATOLOGI
2.1 HITUNG DARAH LENGKAP (KBC):
Dengan hematology analyzer TLC, trombosit, retik, DLC, TRBC, MCV, MCH, MPS dan
MCHC dilakukan. Semua tes ini secara kolektif disebut hitung darah lengkap atau gambaran
lengkap. Tes ini dilakukan dengan seluruh darah yang tidak menggumpal. Tes CP dilakukan oleh
hematology analyzer yang secara otomatis menyedot darah dan menampilkan hasilnya dalam
waktu satu menit di layar komputer.

Hitung darah lengkap disebut juga gambaran lengkap. Di laboratorium MMC CP dilakukan pada
hematology analyzer. Penganalisis hematologi adalah alat yang menghitung semua sel yang ada
dalam darah. Itu juga menghitung jumlah leukosit diferensial. Ini menghitung semua sel dalam
darah dalam satu menit dengan rentang Referensi dan hasilnya ditampilkan di sistem komputer.

Gambar 15 penganalisa hematologi

Laporan CP telah terkomputerisasi. Dalam CP tes berikut dilakukan
Tabel 1 Laporan KBK
Tes Rentang referensi

Hb Pria: 14 - 18 g/dl
Betina: 11 - 16 g/dl

RBC 4,0 - 6,0 juta/cmm

HCT Pria: 42 - 50 %
Perempuan: 37 - 57 %

MCV 76 - 96 Lt

KIA 27 - 32 hal

MCHC 30 - 35 g/dl

WBC 4000 - 11000 /cm

Neutrofil 40 - 75 %

Limfosit 20 - 45 %

Eosinofil 1-4%

Monosit 2-6%

Basofil 0-1%

Trombosit 150.000 - 400.000 /cmm

2.2 UJI MANUAL DI LAB HEMATOLOGI. TINGKAT SEDIMENTASI ERITHROSIT (ESR):

Tingkat sedimentasi eritrosit (ESR) adalah tes hematologi umum untuk mendeteksi peradangan
nonspesifik yang disebabkan oleh infeksi, atau kanker dan penyakit autoimun tertentu.

Prinsip:

Darah antikoagulan dibiarkan berdiri dalam tabung kaca vertikal, tidak terganggu untuk beberapa
saat, sel darah merah keluar dari plasma. Tingkat di mana mereka mengendap diukur sebagai
jumlah milimeter plasma bening yang ada di bagian atas kolom setelah satu jam (mm/jam).
Mekanisme ini melibatkan tiga tahap:

I. Agregasi: Ini adalah fase pertama di mana penumpukan sel darah merah terjadi.
Fenomena ini dikenal sebagai formasi Rouleaux. Dibutuhkan 10-15 menit.
II. Sedimentasi: Ini adalah fase kedua di mana jatuhnya sel darah merah yang sebenarnya
terjadi dengan kecepatan konstan. Ini terjadi dalam 30-40 menit 1 jam.
III. Pengepakan: Ini adalah fase terakhir dan juga dikenal sebagai fase stasioner. Dalam hal
ini, ada tingkat jatuh yang lebih lambat selama pengepakan sel darah merah yang
terendapkan dalam kolom terjadi karena kepadatan yang berlebihan. Itu terjadi dalam 10
menit terakhir dalam 1 jam.
METODE WESTERGREN
Tabung Westregren memiliki dua ujung terbuka. Panjangnya 30cm dan diameter 2,5mm. Ini berisi sekitar
2 ml darah.

PERSYARATAN
• Darah antikoagulan (0,4 ml larutan trisodium sitrat 3,13% + 1,6 ml darah)

• tabung Westergren

• stan Westergren
• Bola karet (pengisap)
PROSEDUR
1. Campur darah antikoagulan.
2. Tarik darah ke dalam tabung hingga tanda 0.
3. Seka darah dari dasar tabung dengan kapas.
 4. Atur tabung tegak lurus di dudukan.
5. Biarkan tabung tidak terganggu selama 1 jam.
6. Baca hasilnya pada akhir 1 jam.
NILAI NORMAL
• Untuk laki-laki : 0-10 mm/jam
• Untuk betina : 0-15 mm/jam

Gambar 16 ESR dengan metode Westergren

2.2 UJI SICKLING:
Ini adalah tes darah yang digunakan untuk menentukan apakah Anda memiliki penyakit sel sabit
atau sifat sel sabit. Penyakit sel sabit (SCD) adalah sekelompok kelainan sel darah merah yang
diturunkan. Orang yang memiliki penyakit ini memiliki sel darah merah dengan bentuk yang
tidak normal. Alih-alih terlihat seperti donat seperti sel darah merah normal, mereka berbentuk
seperti bulan sabit.

PRINSIP:
Natrium meta-bi-sulfat mengurangi ketegangan oksigen yang menginduksi sel sabit yang khas.

PERSYARATAN:

• Slip penutup
• Lilin
 • Mikroskop
• Slide kaca
• Natrium meta-bi-sulfat

• Air sulingan

Pengumpulan dan persiapan spesimen:

1. Sampel darah segar dapat dikumpulkan dari tusukan jari.

2. Gunakan darah lengkap antikoagulan, sel kemasan, segmen bank darah yang
mengandung darah lengkap atau sel kemasan dengan larutan aditif. Jangan
pernah menggunakan darah beku.
3. Sampel darah yang disimpan pada suhu 1° hingga 10° C hingga 45 hari dapat digunakan
untuk pengujian.

Prosedur:

1. 0,2 gram natrium meta-bi-sulfat larut dalam 10 ml air distal.

2. 5 tetes larutan ini dan 1 tetes darah lalu campurkan dengan baik.
3. Teteskan campuran ini pada slide kaca, letakkan slip penutup pada tetesan sedemikian
rupa untuk menghindari pembentukan gelembung
4. Tutupi tepinya dengan campuran lilin/vaseline. Diamkan pada suhu kamar selama 1
hingga 4 jam.
5. Periksa di bawah mikroskop.
PENAFSIRAN
1. Pada sampel positif, sel darah merah khas berbentuk sabit akan muncul (Gbr. 2.4).
o
Kadang-kadang preparat mungkin perlu didiamkan hingga 24 C. Dalam hal ini, taruh
slide dalam cawan Petri yang lembab.
2. Hasil negatif palsu dapat diperoleh jika meta-bi-sulfit telah memburuk atau jika kaca
penutup tidak disegel dengan benar.
3. Tes positif tidak membedakan sifat sel sabit dari penyakit sel sabit. Penting untuk
memeriksa preparat dengan hati-hati dan khususnya di dekat tepi kaca penutup.
SEROLOGI
3.1 PENGELOMPOKAN DARAH
Prinsip:
Ini adalah reaksi antigen-antibodi. Terutama ada 3 jenis antisera untuk ABO dan 1 antisera untuk
Rh D. Ini adalah antibodi spesifik, tipe IgM. Jika satu jenis antisera dicampur dengan sel darah
merah memberikan aglutinasi berarti antigen yang sesuai ada di permukaan sel darah merah.
Dengan anti-A memberikan aglutinasi dengan sel darah merah berarti golongannya adalah A.
Bila aglutinasi memberikan campuran RBC anti-B maka golongan B. Tidak ada reaksi pada A
atau B disebut sebagai O. Jika reaksi positif pada kedua A & B golongan AB .Rh sel positif akan
beraglutinasi dengan antiserum anti-D. Biasanya, tes tabung dilakukan di bank darah. Tes
terbalik juga dilakukan untuk mengkonfirmasi kelompok ABO.
Persyaratan:
• Antisera A
• Antiserum B
• Antiserum C
• Tabung reaksi
• Slide
Pengelompokan ke depan

• Metode tabung
• Metode ubin
• Metode slide

Prosedur:

1. Tempatkan satu tetes antisera A antisera B dan antisera D pada tiga slide yang berbeda.
2. Dan 1 tetes darah dan campurkan dengan lidi steril.
3. Amati adanya aglutinasi.
PENAFSIRAN
MENGETIK ABO
Jika sel darah Anda tetap bersatu saat dicampur dengan:
• Serum anti-A, Anda memiliki golongan darah A
• Serum anti-B, Anda memiliki golongan darah B
• Baik serum anti-A maupun anti-B, Anda memiliki golongan darah AB
 • Jika sel darah Anda tidak saling menempel ketika anti-A dan anti-B ditambahkan, Anda
memiliki golongan darah O.

Pengetikan RH:
• Jika sel darah Anda saling menempel saat dicampur dengan serum anti-Rh, Anda
memiliki golongan darah Rh positif.
• Jika darah Anda tidak menggumpal saat dicampur dengan serum anti-Rh, Anda memiliki
tipe darah Rh negatif.
• Pencocokan Silang dilakukan sebelum transfusi darah untuk menentukan apakah darah
donor kompatibel (atau tidak kompatibel) dengan darah penerima. Kompatibilitas
ditentukan melalui pencocokan sistem golongan darah yang berbeda, yang paling penting
adalah sistem ABO dan Rh.
Prosedur

1. Siapkan sampel darah donor dan resipien.

2. Untuk Major Crossmatch kami mengambil sel darah merah Donor dan serum atau plasma
penerima
3. Siapkan 3 – 5% suspensi sel darah merah Labeli tabung reaksi. Tambahkan 2 tetes serum
pasien dan 1 tetes suspensi sel donor.
4. Campurkan kedua tabung dan inkubasi pada suhu 37°C selama 45 menit.
5. Tambahkan 2 tetes AHG (Antihuman globulin) dan campurkan.
6. Centrifuge tabung selama 1 menit pada 1500 rpm
7. Baca dengan mikroskop dan dengan mata telanjang dan catat hasilnya.

PENAFSIRAN:
• Aglutinasi = tidak kompatibel
• Tanpa Aglutinasi = kompatibel
 Gambar 17 prosedur pertandingan silang

3.3 HBsAG:
PRINSIP:
Ini adalah immunoassay aliran lateral kualitatif untuk mendeteksi HBsAG dalam serum atau
plasma. Membran dilapisi dengan antibodi anti-HBsAG pada daerah garis tes. Selama pengujian
spesimen serum atau plasma bereaksi dengan partikel yang dilapisi dengan antibodi anti-
HBsAG. Campuran bermigrasi ke atas pada membran secara kromatografi dengan aksi kapiler
untuk bereaksi dengan antibodi anti-HBsAG pada membran dan menghasilkan garis berwarna.
Kehadiran garis berwarna ini di wilayah uji menunjukkan hasil positif sedangkan
ketidakhadirannya menunjukkan hasil negatif. Untuk berfungsi sebagai kontrol prosedural, garis
berwarna akan selalu muncul di wilayah garis kontrol yang menunjukkan bahwa volume
spesimen yang tepat telah ditambahkan dan wicking membran telah terjadi.

Gambar 18 Alat tes HBsAG

INTERPRETASI TES:
• Pita warna muncul di bagian kiri jendela hasil untuk menunjukkan bahwa tes berfungsi
dengan baik. Band ini adalah band kontrol.
• Bagian kanan hasil ditunjukkan hasil tes. Ketika pita warna lain muncul di bagian kanan
jendela hasil, pita itu adalah pita uji.
• Hasil negatif: Hanya terdapat satu pita ungu.
• Hasil positif: Adanya dua band.
• Hasil tidak valid: Setelah melakukan pengujian, tidak ada pita warna ungu yang terlihat
di dalam jendela hasil, hasilnya dianggap tidak valid.
 Hasil ( seperti yang ditunjukkan pada gambar)

Gambar 24: Hasil HBsAG

3.4 DBD
Prinsip:
Rapid test adalah immunoassay kromatografi aliran lateral. Tes ini dapat digunakan dengan
serum dan menggunakan penggunaan protein pengikat antibodi yang terkonjugasi ke partikel
emas koloid dan kombinasi unik antigen Dengue yang diimobilisasi pada membran. Setelah
sampel ditambahkan ke kaset uji, campuran melewati kompleks pengikat/emas antibodi, yang
kemudian mengikat imunoglobulin dalam sampel. Saat kompleks ini melewati antigen yang
tidak bergerak pada membran, jika ada antibodi terhadap Dengue (IgG atau IgM), antigen
menangkapnya secara bergantian. Ini menghasilkan pita merah muda/ungu di zona T (Uji) strip
uji. Kompleks yang tersisa terus bermigrasi ke area kontrol di strip uji dan menghasilkan pita
merah muda/ungu di area C. Pita kontrol ini menunjukkan bahwa pengujian telah dilakukan
dengan benar.

Prosedur:

1. Bawa kantong yang disegel ke suhu kamar, buka kantong. Setelah dibuka, perangkat
harus segera digunakan.
2. Keluarkan dua tetes (50 µl) spesimen serum ke dalam sumur sampel 'S'.
3. Pada akhir lima belas menit baca hasilnya.

Penafsiran:
 1. Jika hanya C band yang ada dan G dan M band tidak ada maka hasilnya dianggap negatif.
2. Jika pita M hadir maka IgM paradengue hadir dalam spesimen dan uji IgM positif.
3. Jika pita G hadir maka IgG paradengue hadir dalam spesimen dan uji IgG positif.
4. Hasil yang tidak valid terlihat ketika pita C tidak ada dan tidak ada pita lain yang
dihasilkan.

Gambar 25: Hasil tes demam berdarah

3.5 NKT:
Prinsip:
Itu adalah tes kualitatif untuk mendeteksi HCV dalam serum. Membran dilapisi dengan antigen
anti-HCV pada daerah garis uji. Selama pengujian serum bereaksi dengan partikel yang dilapisi
dengan antigen anti-HCV. Adanya garis berwarna pada daerah uji menunjukkan hasil positif,
sedangkan tidak adanya garis berwarna menunjukkan hasil negatif.
• Pengencer Assay
• Penitis
• Stopwatch
• serum pasien
• Perangkat HCV
Prosedur:

1. Dengan menggunakan penetes plastik untuk sampel, masukkan 1 tetes (10µl) serum atau
plasma ke wadah sampel berbentuk lingkaran pada kartu uji (bertanda “S”), sesuai
dengan gambar.
2. Tambahkan 2 tetes Pengencer Sampel ke sumur pengencer (bertanda "D"), setelah
spesimen ditambahkan, dari botol pengencer ujung penetes.
3. Catat hasil tes pada 15 menit.

INTERPRETASI UJI:
 • Pita warna muncul di sisi kiri jendela hasil untuk menunjukkan bahwa tes berfungsi
dengan baik. Band ini adalah band kontrol.
• Bagian kanan hasil ditunjukkan hasil tes. Ketika pita warna lain muncul di bagian kanan
jendela hasil, pita itu adalah pita uji
• Hasil negatif : Hanya terdapat satu pita ungu.
• Hasil positif : Adanya dua band.
• Hasil tidak valid: Setelah melakukan tes dan tidak ada pita warna ungu yang terlihat di
dalam jendela hasil, hasilnya dianggap tidak valid.

Gambar 26: Perangkat HCV

3.2 H.PYLORI
PRINSIP:
Alat rapid test H.pylori (whole blood serum plasma) mendeteksi antibodi yang spesifik terhadap
helicobacter pylori melalui interpretasi visual perkembangan warna pada strip internal. Antigen
H pylori diimobilisasi pada daerah uji membran. Selama pengujian, spesimen bereaksi dengan
antigen h pylori yang terkonjugasi ke partikel berwarna dan dilapiskan sebelumnya pada
bantalan sampel pengujian. Campuran kemudian bermigrasi melalui membran dengan aksi
kapiler, dan berinteraksi dengan reagen dalam membran. Jika ada cukup antibodi terhadap
helicobacter pylori dalam spesimen, garis berwarna terbentuk di daerah uji membran. Kehadiran
garis berwarna ini menunjukkan hasil tes positif, sedangkan ketidakhadirannya menunjukkan
hasil tes negatif. Munculnya garis berwarna pada wilayah kontrol berfungsi sebagai kontrol
prosedural, yang menunjukkan bahwa volume spesimen yang tepat telah ditambahkan dan telah
terjadi wicking membran.
PERSYARATAN

• Pengencer
• Pipet
• Serum pasien atau darah lengkap
• Perangkat TIK H.pyori

PROSEDUR

1. Lepaskan perangkat uji dari foil; letakkan perangkat di permukaan yang rata.
2. Transfer 10µl (serum atau plasma) 20µl darah utuh ke sumur sampel (S) pada alat uji,
lalu tambahkan 3 tetes pengencer uji dan mulai pengatur waktu.
3. Saat tes mulai bekerja, warna ungu bergerak melintasi jendela tes di tengah perangkat tes.
4. Tafsirkan hasil setelah 10 menit, hasil positif tidak akan berubah setelah ditetapkan dalam
10 menit, namun untuk mencegah hasil yang salah, hasil tidak akan dibaca setelah 10
menit.

INTERPRETASI TES

1. Hasil negatif: Hanya terdapat satu pita ungu.

2. Hasil positif: Adanya dua band.
3. Hasil tidak valid: Setelah melakukan tes dan tidak ada pita warna ungu yang terlihat di
dalam jendela hasil, hasilnya dianggap tidak valid.
3.7 BRUCELLA: (UJI SKRINING SLIDE UNTUK ANTIBODI BRUCELLA)
Brucellosis pertama kali didiagnosis dengan tes serologis oleh Wright dan Smith pada tahun
1897 menggunakan tes aglutinasi tabung sederhana.
PRINSIP:
Suspensi antigen BRUCEL -RB yang halus dan mati dicampur dengan serum pasien. Antibodi
spesifik terhadap antigen Brucella jika terdapat dalam konsentrasi antibodi spesifik terhadap
Brucella.
PERSYARATAN:
• Serum darah)
• Mesin sentrifuse
 • Pipet
• Bupati Brucella Abortus
• Bupati Brucella Melitensis
PROSEDUR:
1. Ambil darah dan sentrifugasi.
2. Sekarang ambil serum 10ul dan tambahkan satu tetes reagen Brucella Abortus dan
Brucella Melitensis di setiap 10ul tetes serum dan campurkan selama sekitar 3 menit.
3. Sekarang periksa sampel dan lihat agregasi sel, yang menunjukkan adanya Brucella.
TES KEHAMILAN
Tes kehamilan adalah tes urin sederhana yang memastikan apakah seorang wanita hamil. Dalam
tes ini kami memeriksa hormon yang disebut human chorionic gonadotropin (HCG). HCG
dilepaskan ketika sel telur yang telah dibuahi menempel pada lapisan rahim.
PRINSIP:
Tes HCG mengikuti prinsip imunokromatografi, sebuah immunoassay dua tempat yang unik
pada sebuah membran. Saat sampel uji mengalir melalui rakitan membran di dalam perangkat
uji, konjugat emas koloid anti-HCG berwarna berikatan dengan HCG dalam sampel. Kompleks
ini bergerak lebih jauh pada membran ke daerah uji di mana ia dilumpuhkan oleh anti-hCG yang
dilapisi pada membran yang mengarah ke pembentukan garis berwarna merah muda yang
menegaskan hasil tes positif. Tidak adanya garis berwarna ini di wilayah uji menunjukkan hasil
uji negatif. Konjugat yang tidak bereaksi dan kompleks yang tidak terikat membentuk garis
merah muda, jika ada yang bergerak lebih jauh pada membran dan berada
kemudian dilumpuhkan oleh antibodi anti-tikus yang dilapisi pada membran di daerah kontrol.
Garis kontrol ini berfungsi untuk memvalidasi hasil pengujian.

PERSYARATAN SPESIMEN:

VOLUME YANG DIPERLUKAN:

Sampel pagi hari adalah yang terbaik karena lebih pekat, urin yang sangat encer harus dihindari.

PENYIMPANAN:
Sampel dapat disimpan dalam wadah, tanpa aditif, didinginkan pada suhu 2--8°C selama
2 hari atau lebih lama dibekukan. Sampel harus dibawa ke suhu kamar dan dicampur
sebelum pengujian.

PROSEDUR:

1. Periksa apakah sampel dan kit berada pada suhu kamar jika sebelumnya telah
didinginkan.
2. Pastikan sampel urin sudah diberi label lengkap dengan identifikasi pasien.
3. Hapus perangkat dari kantong tertutup.
4. Beri label perangkat dengan informasi identifikasi pasien.
5. Tempatkan perangkat pada permukaan rata yang bersih.
6. Dengan menggunakan pipet transfer yang disertakan dengan kantong, pindahkan 3 tetes
penuh urin (100ul) ke wadah sampel (S).
7. Baca hasil tes pada 3 menit setelah menerapkan sampel urin, bukan sebelumnya

PENAFSIRAN:

• Positif Dua garis berwarna muncul, satu di daerah kontrol (C) dan satu di daerah
uji (T). Harap diperhatikan jika garis tes (T) samar ini masih merupakan hasil
positif.
• Negatif Satu garis berwarna muncul di wilayah kontrol (C) dan tidak ada garis
yang muncul di wilayah uji (T).
• Tidak valid Tidak ada garis yang muncul di wilayah kontrol (C). Buang kaset
dan uji ulang, terlepas dari apakah garis muncul di wilayah uji.
PATOLOGI KIMIA
4.1 Urinalisis LENGKAP:
Biasanya, urinalisis lengkap melibatkan pemeriksaan karakteristik fisik urin, analisis kimiawi,
dan pemeriksaan mikroskopis sedimen urin. Urin harus dikumpulkan dalam wadah yang bersih,
disimpan di tempat yang sejuk, dan diuji sesegera mungkin
KARAKTERISTIK FISIK URIN:
Karakteristik fisik urin meliputi pengamatan dan pengukuran warna, kekeruhan, bau, berat jenis,
pH dan volume. Pengamatan visual dari sampel urin dapat memberikan petunjuk penting untuk
bukti patologi.
WARNA:
Warna urin normal biasanya kuning muda sampai kuning. Umumnya semakin besar volume zat
terlarut semakin dalam warnanya. Warna kuning urin disebabkan oleh adanya pigmen kuning,
urochrome. Penyimpangan dari warna normal dapat disebabkan oleh obat-obatan tertentu dan
berbagai sayuran seperti wortel, bit, dan rhubarb.
VOLUME:
Rata-rata urine yang dikeluarkan orang dewasa dalam 24 jam adalah 1200-1500 ml. Pada malam
hari, jumlah urin tidak pernah lebih dari 400 ml.
BAU:
Itu dicatat hanya dalam sampel urin segar. Bau urin adalah buah dengan adanya badan keton.
Di hadapan bakteri tertentu, urin berbau amonik.
KURBIDITAS :
Urine normal berwarna bening atau bening; menjadi keruh saat berdiri. Urin yang keruh
mungkin merupakan bukti fosfat, urat, lendir, bakteri, sel epitel, atau leukosit.

Gambar 19 Pengambilan sampel urin Sampel untuk pemeriksaan fisik dan lainnya.
PEMERIKSAAN KIMIA:
Untuk melakukan pemeriksaan kimia, sebagian besar laboratorium klinis menggunakan te st strip
dengan bantalan uji yang mengandung bahan kimia yang diresapi ke dalamnya. Kami
mencelupkan strip ke dalam urin, reaksi kimia mengubah warna bantalan dalam hitungan detik
hingga menit, dan kami menentukan hasil untuk setiap tes.
Tingkat perubahan warna pada alas uji dapat memberikan perkiraan jumlah zat yang ada.
Sebagai contoh, sedikit perubahan warna pada test pad untuk protein dapat menunjukkan
sejumlah kecil protein yang ada dalam urin sedangkan perubahan warna yang dalam dapat
menunjukkan jumlah yang besar.
Tes kimia yang paling sering dilakukan menggunakan strip tes reagen adalah:
• Gravitasi Spesifik (SG)
• pH
• Protein
• Glukosa
• Keton
• Darah (hemoglobin) dan Myoglobin
• Leukosit Esterase
• Nitrit
• Bilirubin
• Urobilinogen

PH urin:

• Itu biasanya asam (pH 6,0).

• Itu diukur dengan strip kertas dengan forceps.
• PH urin normal:, pH = 5,0 hingga 7,0
• pH asam 4,5 hingga 5,5 terjadi pada diabetes melitus, molekul lelah, dll.
• Alkalin pH 7,8 hingga 8,0 terlihat pada ISK.
 Gambar 20: Botol strip urin dengan bagan berlabel
Glukosa:
Glukosa biasanya tidak ada dalam urin. Ketika glukosa hadir, kondisinya disebut glukosuria.
• Glukosa dideteksi dengan metode strip.
• Itu diperiksa perubahan warna campuran.

Tabel 2 interpretasi glukosa

Warna Hasil %
Biru Negatif
Hijau Jejak
Hijau dengan endapan kuning + 0.5%
Kuning hingga hijau tua ++ 1%
Oranye +++ 1.5%
Bata merah ++++ 2%

Protein:
Bantalan uji protein memberikan perkiraan kasar jumlah albumin dalam urin. Albumin
membentuk sekitar 60% dari total protein dalam darah. Biasanya, tidak akan ada protein atau
sedikit protein dalam urin. Ketika protein urin meningkat, seseorang mengalami kondisi yang
disebut proteinuria .
• Protein terdeteksi oleh strip.
• Dengan perubahan warna strip kekeruhan menunjukkan protein (albumin).
Tabel 3 interpretasi protein dalam urin
Keadaan mendung Hasil
Tidak ada mendung Negatif

Sedikit berawan +
Berawan sedang ++

Mendung berat +++ ke atas dinyatakan sebagai ++++

Pigmen empedu:

• Pigmen empedu dideteksi dengan metode dip strip.

• Produksi warna menunjukkan pigmen empedu.
Tabel 4 interpretasi pigmen empedu dalam urin
Tes Warna yang dihasilkan
Tes negatif Warna kuning redup

Positif lemah Warna hijau pucat +

Tes positif Warna hijau tua++

Garam empedu:

• Dengan menghasilkan warna diamati adanya garam empedu.

• Warnanya diubah dengan mencampurkan natrium nitroprusida dalam tabung urin.
• Setelah larut itu garam empedu hadir. menghasilkan warna jika

Gambar 21: Urine strip dengan hasil negatif dan positif

Tes negatif Tidak ada perubahan warna.

Cincin ungu di persimpangan dua lapisan.

Tes positif:

BADAN KETON:

Keton biasanya tidak ditemukan dalam urin. Mereka adalah produk perantara dari metabolisme
lemak . Mereka diproduksi dalam ketidaktersediaan glukosa ke sel-sel tubuh sebagai sumber
energi. Mereka dapat terbentuk ketika seseorang tidak makan cukup karbohidrat (misalnya,
dalam kasus puasa, kelaparan, atau diet tinggi protein) atau ketika tubuh seseorang tidak dapat
menggunakan karbohidrat dengan baik.
 • Itu terdeteksi oleh strip.
Warna yang dihasilkan Hasil
Tidak ada warna Negatif
Berkah +
Merah muda terang ++
Ungu +++

Darah dalam urin :

Tes ini digunakan untuk mendeteksi hemoglobin dalam urin (hemoglobinuria). Hemoglobin
adalah protein yang terlibat dalam transfer oksigen yang ditemukan di dalam sel darah merah
(RBC). Kehadirannya dalam urin menunjukkan adanya darah dalam urin (dikenal sebagai
hematuria ). Darah dalam urin terdeteksi dengan perubahan warna strip.

Tabel 5 interpretasi darah dalam urin

warna yang dihasilkan

Hasil
Kuning Negatif

Warna kuning dengan butiran +

Hijau ++

Hijau tua +++

pemeriksaan mikroskopis
Pemeriksaan mikroskopis dilakukan pada endapan urine – urine yang telah disentrifugasi untuk
mengkonsentrasikan zat-zat yang ada di dalamnya pada dasar tabung dengan kecepatan sekitar
1500 rpm selama 5 menit. Cairan di bagian atas tabung dibuang dan tetesan cairan yang tersisa
diperiksa di bawah mikroskop. Sel, kristal, dan zat lain dihitung dan dilaporkan sebagai jumlah
yang diamati "per medan daya rendah" (LPF) atau "per medan daya tinggi" (HPF). Selain itu,
beberapa entitas, jika ada, diperkirakan sebagai "sedikit", "sedang", atau "banyak", seperti sel
epitel, bakteri, dan kristal. Sel dan zat lain yang mungkin terlihat antara lain sebagai berikut:
• Sel epitel
• Bakteri, Ragi dan Parasit
 • Sel Darah Merah (RBC)
• Sel Darah Putih (WBC)
• Trichomonas
• Pemeran
• Kristal
RBC:
Biasanya, beberapa sel darah merah hadir dalam sedimen urin (0-5 sel darah merah per medan
daya tinggi, HPF). Peningkatan jumlah sel darah merah yang terlihat di bawah mikroskop
menunjukkan adanya darah dalam urin. yang dipandang sebagai
• Disk kecil kekuningan yang lebih gelap di tepi sekitar 8 μ dengan diameter.

Gambar 22 Sel darah merah dalam urin di bawah 40x objektif

sel darah putih :
Jumlah leukosit dalam sedimen urin biasanya rendah (0-5 leukosit per medan daya tinggi, HPF).
Sel darah putih bisa menjadi kontaminan, seperti yang berasal dari cairan vagina. Peningkatan
jumlah leukosit yang terlihat dalam urin di bawah mikroskop dapat mengindikasikan infeksi
peradangan atau di suatu tempat di saluran kemih. Jika juga terlihat dengan bakteri (lihat di
bawah), ini menunjukkan kemungkinan infeksi saluran kemih. yang dipandang sebagai:

• Disk granular yang jelas berada di WBC utuh.

• Bentuk yang kurang granular, menyusut dan terdistorsi berada pada WBC yang
mengalami degenerasi.

• Gumpalan banyak sel yang mengalami degenerasi menjadi nanah.

• Adanya banyak leukosit yang berkelompok berarti infeksi ISK.

 Gambar 23 WBC terlihat pada sampel urin di bawah 40x objektif
Sel epitel
Sel epitel biasanya dilaporkan sebagai "sedikit", "sedang", atau "banyak" yang ada per medan
daya rendah (LPF). Biasanya, pada pria dan wanita, beberapa sel epitel dapat ditemukan dalam
sedimen urin. Pada kondisi saluran kemih seperti infeksi, peradangan, dan keganasan, terjadi
peningkatan jumlah sel epitel

Bakteri, Ragi dan Parasit

Pada orang sehat, saluran kemih steril dan, jika sampel urin dikumpulkan sebagai sampel "cleancatch",
tidak akan ada mikroba yang terlihat pada sedimen urin di bawah mikroskop.

4.1 UJI GLUKOSA METODE GOD PAP

Penentuan konsentrasi glukosa penting dalam diagnosis dan pengobatan gangguan metabolisme
karbohidrat. Nilai yang lebih tinggi atau lebih rendah dari referensi memiliki signifikansi
diagnostik. Kadarnya meningkat pada diabetes melitus, hipertiroidisme, dan hiperaktivitas
kelenjar hipofisis. Penurunan kadar diamati dalam kasus kelebihan produksi insulin oleh
pankreas, dengan tumor pankreas, serta hipofungsi organ yang terlibat dalam sintesis glukosa
dan metabolisme karbohidrat.

PRINSIP:
Untuk menentukan glukosa setelah oksidasi enzimatik oleh oksidase glukosa. Indikator
kolorimetri adalah quinonemine, yang dihasilkan dari 4-aminoantipyrine dan fenol oleh hidrogen
peroksida di bawah aksi katalitik peroksida.

Glukosa + O2 ALLAH Asam Glukonat + H2O2

2H2O2 + Aminoantipyrine + fenol POD Quinoneimine + 4H2

BAHAN SAMPEL:

Serum heparinisasi atau plasma EDTA.

PROSEDUR:

• Ambil 100µl reagen dalam tabung gelas.

• Kemudian, tambahkan 10µl serum dan inkubasi selama 5 menit pada suhu 37C.
• Tabung sampel kemudian dimasukkan ke dalam alat analisa setelah mengatur program
yang diperlukan untuk glukosa. Hasil ditampilkan di layar.

ASAM URAT ( TITIK AKHIR):

PRINSIP:

Asam urat dioksidasi menjadi uricase menjadi allantoin dengan pembentukan hidrogen
peroksida. Di hadapan peroksidase (POD), campuran diklorofenol sulfat (DCPS) dan
4aminoantipyrine 4-(AA) dioksidasi oleh hidrogen peroksida untuk membentuk pewarna
quioneimine sebanding dengan konsentrasi asam urat dalam sampel.

BAHAN SAMPEL:
serum bebas hemolisis, EDTA atau plasma heparin dan urin.
PROSEDUR:
• 1000µl monreagen diambil dalam tabung reaksi gelas dan 10µl serum ditambahkan.
• Inkubasi selama 5 menit pada 37C.
• Tabung sampel kemudian dimasukkan ke dalam analyzer setelah mengatur program yang
diperlukan untuk asam urat.
• Hasil ditampilkan di layar.
4.4 UJI AMINOTRANSFERASE ALANIN:
ALT adalah enzim sitoplasma. Ini terutama terlokalisasi di hepatosit. Ini dilepaskan ke dalam darah
selama kerusakan sel. Penentuan aktivitas ALT dalam serum digunakan terutama untuk menilai
kerusakan hati.

PRINSIP
L-alanin + α-ketoglutarat L-glutamat + piruvat (Di hadapan ALT)
Piruvat + NADH + H Laktat + NAD (Di hadapan LDH)
Alanine aminotransferase (ALT) mengkatalisis transfer gugus amino dari L-alanin ke α-
ketoglutarat menghasilkan pembentukan piruvat dan L-glutamat. Laktosa Dehidrogenase (LDH)
mengkatalisis reduksi piruvat dan oksidasi NADH + menjadi NAD secara bersamaan . Laju
penurunan absorbansi yang dihasilkan pada 340 nm berbanding lurus dengan aktivitas ALT.

BAHAN SAMPEL:
Serum non-hemolisis, plasma heparin atau EDTA.
PROSEDUR:
• Ambil reagen 500ul dari sumur reagen, Tempatkan tabung reaksi selama 2 menit pada
suhu 37C.
• Tambahkan 50ul serum yang diambil dari sentrifugasi ke dalam tabung reagen dan
campur dan minum mesin dalam 3-4 detik.
• Catat bacaan dari mesin.
PERSYARATAN:
RENTANG REFERENSI:
Wanita Dewasa; 31U/ML

Pria dewasa; 41 U/L

4.1 UJI AMINOTRANSFERASE ASPARTAT

Aspartate aminotransferase adalah enzim yang ditemukan di hati, tetapi juga ditemukan di sel
darah merah, sel jantung, jaringan otot dan organ lain, ginjal dan pankreas. Ini dapat digunakan
dalam kombinasi dengan enzim lain untuk memantau jalannya berbagai gangguan hati. Ketika
jaringan tubuh atau organ seperti hati atau jantung sakit, AST tambahan dilepaskan ke dalam
aliran darah, menyebabkan kadar enzim meningkat. Oleh karena itu, jumlah AST dan ALT
dalam darah berhubungan langsung dengan tingkat kerusakan jaringan. Setelah kerusakan parah,
kadar AST meningkat 10 hingga 20 kali lipat di atas normal, sedangkan ALT dapat mencapai
kadar yang lebih tinggi (hingga 50 kali lipat dari normal).

PRINSIP:
Aspartat aminotransferase dapat diuji secara spektrofotometri dalam reaksi berpasangan dengan
malat dehidrogenase dengan adanya NADH. Satu unit mengoksidasi satu mikromol NADH per
menit pada 25°C dan pH 7,4 pada kondisi yang ditentukan.

Prosedur:
Sesuaikan spektrofotometer ke 340 nm dan 25°C. Pipet 2,9 ml campuran reagen ke dalam kuvet
dan letakkan di spektrofotometer. Inkubasi selama 3 - 4 menit untuk mencapai kesetimbangan
suhu dan tetapkan laju blanko, jika ada. Pada waktu nol, tambahkan 0,1 ml enzim yang
diencerkan dengan tepat dan catat penurunan dalam A 340 selama 4 - 5 menit. Hitung ΔA
340 /menit dari bagian linier awal kurva.

JARAK NORMAL:

Konsentrasi normal dalam darah adalah dari 5 sampai 40 IU/L untuk AST
BIOLOGI MOLEKUL
5.1 EKSTRAKSI DNA:

PERSYARATAN:
• reagen Chelex
• Tabung ependorf
• Sentrifugal
• Pusaran
• blok pemanas
PROSEDUR
• Buat larutan chelex 5-7%.
• Larutan Aliquot 300uL dalam tabung ependorf 15ml.
• Ambil 300uL darah dan 3mL air suling atau larutan pelisis sel darah merah.
• Centrifuge pada 5000 rpm selama 2 menit.
• Ulangi langkah lisis.
• Tambahkan 300uL 5-7% larutan chelex.
• Vortex selama 15-20 detik.
• Tempatkan tabung di blok pemanas pada suhu 95C selama 20 menit.
• Vortex selama 15-20 detik.
• Centrifuge pada 10.000 rpm selama 2 menit.
• Pindahkan supernatan dalam tabung ependorf dan gunakan sebagai sumber DNA.
PERSIAPAN MASTER MIX UNTUK PCR:
1. Rakit semua komponen reaksi di atas es dan siapkan master mix sesuai tabel berikut
2. Campur reaksi dengan lembut. Kumpulkan semua cairan ke bagian bawah tabung dengan
putaran cepat jika perlu.
3. Tutup tabung PCR dengan benar.
4. Tabung PCR dari es ke mesin PCR dengan balok yang telah dipanaskan terlebih dahulu
hingga 95°C dan memulai daur ulang termo.
5. Produk PCR diperoleh setelah reaksi selesai (sekitar 2 jam).
6. Produk PCR diperoleh setelah reaksi selesai (sekitar 2 jam).
7. Produk PCR siap untuk elektroforesis gel untuk memeriksa pita DNA yang diamplifikasi.

Tabel 6 komponen PCR

 Komponen 25 μl reaksi 50 μl reaksi
Penyangga Reaksi Taq Standar 10X 2,5 mikrol 5 μl
10 mM dNTP 0,5 μl 1 μl
Primer Maju 10 µM 0,5 μl 1 μl
Primer Terbalik 10 µM 0,5 μl 1 μl
Templat DNA Variabel Variabel
Taq DNA Polimerase 0,125 μl 0,25 μl
Air bebas nuklir menjadi 25µl sampai 50µl

Kondisi termosiklus:

Tabel 7 Kondisi Thermocycler

MELANGKAH SUHU WAKTU
Denaturasi Awal 95°C 30 detik
30 Siklus 95°C 15-30 detik
65-68°C 1 menit/kb
Perpanjangan Akhir 65-68°C 5 menit
Memegang 4-10°C

5.1 Elektroforesis gel agarosa

1. Tambahkan loading dye pada sampel DNA (produk PCR) yang akan dipisahkan.
2. Program catu daya ke voltase yang diinginkan (1-5 v/cm antar elektroda).
3. Tambahkan buffer berjalan secukupnya untuk menutupi permukaan gel. Penting untuk
menggunakan buffer berjalan yang sama dengan yang digunakan untuk menyiapkan gel.
4. Pasang ujung kotak gel ke catu daya. Nyalakan catu daya dan verifikasi bahwa kotak gel
dan catu daya berfungsi.
5. Lepaskan tutupnya. Perlahan dan hati-hati masukkan sampel DNA ke dalam gel.
6. Penanda ukuran DNA yang sesuai harus selalu dimuat bersama dengan sampel
eksperimental.
7. Ganti tutup ke kotak gel. Katoda (lead hitam) harus lebih dekat ke sumur daripada anoda
(lead merah). Periksa kembali apakah elektroda dicolokkan ke slot yang benar di catu
daya.
8. Nyalakan daya. Jalankan gel sampai pewarna berpindah ke jarak yang sesuai.
9. Setelah elektroforesis selesai, matikan catu daya dan lepaskan tutup kotak gel.
10. Keluarkan gel dari kotak gel, tiriskan buffer berlebih dari permukaan gel. Tempatkan
baki gel di atas tisu untuk menyerap buffer berjalan ekstra.
11. Paparkan gel ke sinar UV dengan menggunakan sistem dokumentasi gel. Pita DNA harus
muncul sebagai pita fluoresen. Ambil gambar gel.
12. Buang gel dan running buffer dengan benar sesuai peraturan lembaga.

Gambar 24 Elektroforesis gel