Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

PENELITIAN FITTERAPI
fitother. Res.25: 59–66 (2011)
Diterbitkan online 8 Juli 2010 di Perpustakaan Online Wiley
(wileyonlinelibrary.com)DOI: 10.1002/ptr.3220

Penindasan Respon Peradangan Saluran Nafas

yang Diinduksi Ovalbumin pada Model Asma
Tikus olehMimosa pudicaEkstrak

Eun Ju Yang,1,2Ji-Sook Lee,3Chi-Young Yun,3Yong Suk Ryang,2Jong-Bae Kim2†* dan

In Sik Kim1†*
1Departemen Ilmu Laboratorium Biomedis, Fakultas Kedokteran, Universitas Eulji dan Pusat Penelitian Ilmu Kedokteran
Universitas Eulji, Daejeon 301-746, Republik Korea
2Departemen Ilmu Laboratorium Biomedis, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan, Universitas Yonsei, Wonju 220-701, Republik Korea

3Departemen Biologi, Sekolah Tinggi Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Daejeon, Daejeon 300-716, Republik Korea

Asma adalah penyakit inflamasi saluran napas. Mekanisme patogenik asma meliputi infiltrasi leukosit dan
pelepasan sitokin.Mimosa pudica(Mp) telah digunakan secara tradisional untuk pengobatan insomnia, diare dan
penyakit inflamasi. Meskipun ekstrak Mp memiliki berbagai khasiat terapeutik, efek ekstrak ini terhadap asma
belum dilaporkan. Penelitian ini menyelidiki efek supresi ekstrak Mp terhadap respon asma keduanyasecara in
vitroDansecara alami. Ekstrak Mp diperoleh dari tanaman utuh yang dikeringkan dan dijadikan bubukM.pudica
menggunakan etanol 80%. Tikus BALB/c digunakan untuk model tikus asma yang diinduksi oleh ovalbumin.
Ekstrak Mp secara signifikan menghambat migrasi sel HMC-1 yang disebabkan oleh faktor sel induk dan memblokir
pelepasan monosit chemotactic protein-1 (MCP-1) dan interleukin-6 (IL-6) dalam sel EoL-1. Leukositosis, eosinofilia
dan hipersekresi lendir pada paru-paru penderita asma ditekan secara signifikan oleh ekstrak Mp. Pelepasan IgE
spesifik ovalbumin pada cairan lavage bronkoalveolar dan serum juga menurun. Pengobatan ekstrak Mp tidak
menghasilkan sitotoksisitas hati. Ekstrak Mp memiliki sifat penghambatan asma dan dapat digunakan sebagai
agen terapi ampuh untuk peradangan paru-paru alergi. Hak Cipta © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.

Kata Kunci: Mimosa pudica; asma; efek antiasma; eosinofilia; IgE.

Berbagai jenis sel, termasuk sel mast, eosinofil dan

PERKENALAN
Ekstrak berbagai tumbuhan telah dilaporkan sebagai
bahan terapi yang ampuh. Diantara mereka,Mimosa
pudica (Mp), tumbuhan tahunan atau tahunan yang
dikenal sebagai tumbuhan sensitif, termasuk dalam
Mimosaceaekeluarga.M.pudica telah digunakan secara
tradisional sebagai obat insomnia, gastroenteritis dan
peradangan di banyak negara; Namun, efek pasti ekstrak
Mp pada penyakit alergi seperti asma belum diteliti (Ngo
Bumdkk., 2004; Amalraj dan Ignacimuthu, 2002).
Penyakit alergi seperti asma, dermatitis atopik, dan
rinitis atopik dimediasi oleh alergen lingkungan yang
umum (Holgate dan Polosa, 2008;Asherdkk., 2006).
Selain itu, asma merupakan penyakit inflamasi
saluran napas dan prevalensinya meningkat setiap
tahunnya (Braman, 2006). Penyakit ini ditandai
dengan infiltrasi leukosit yang berlebihan, terutama
eosinofil, ke dalam saluran napas, hiperresponsif
bronkus, dan hipersekresi mukus (Busse dan
Rosenwasser, 2003; DjukanoviCdkk., 1990).
* Korespondensi ke: Dr In Sik Kim, Departemen Ilmu Laboratorium
Biomedis, Fakultas Kedokteran, Universitas Eulji, 143-5, Yeuongdu-dong,
Jung-gu, Daejeon, 301-746, Republik Korea. Email: orientree@eulji. ac.kr
dan Dr. Jong-Bae Kim, Profesor, Departemen Ilmu Laboratorium
Biomedis, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan, Universitas Yonsei, Wonju
220-701, Republik Korea
Email: kimjb@yonsei.ac.kr
† Penulis memberikan kontribusi yang sama.
limfosit T helper 2 (Th2), terlibat dalam patogenesis
asma. Pada asma, sel mast bermigrasi ke tempat
inflamasi dan kemudian diaktifkan oleh IgE, yang
diproduksi oleh sel plasma teraktivasi (Romagnani,
2000). Sel mast yang teraktivasi mensekresi berbagai
mediator proinflamasi seperti histamin, sitokin dan
prostaglandin, yang menginduksi eosinofilia dan
produksi lendir di jaringan paru-paru (Bisset dan Schmid-
Grendelmeier, 2005). Eosinofil diinfiltrasi ke dalam
saluran udara dan bertindak sebagai sel efektor primer
melalui pelepasan protein granula spesifik dan spesies
oksigen reaktif (Elsner dan Kapp, 1999). IL-5 dilepaskan
oleh limfosit Th2. IL-5 mendorong proliferasi dan aktivasi
eosinofil dan meningkatkan infiltrasi eosinofil ke saluran
udara (Palmqvistdkk., 2007). Selain IL-5, modulasi sitokin
lain juga terkait erat dengan perkembangan asma. IL-6,
suatu sitokin pro-inflamasi yang diproduksi oleh limfosit
T, makrofag dan eosinofil, merangsang pertumbuhan
dan diferensiasi berbagai jenis sel pada asma (Hirano,
1998; Lucey, 1996).MCP-1 dan IL-8 dikenal sebagai
kemotaktik. faktor monosit dan neutrofil, masing-
masing. Selain itu, mereka mengatur proliferasi, aktivasi
dan kelangsungan hidup eosinofil pada penyakit alergi
(Shakoorydkk., 2004).
Penelitian ini menguji efek ekstrak Mp pada migrasi
dan pelepasan sitokin sel inflamasisecara in vitro.
Sebagai tambahansecara alamipenelitian, efek
antiasma dari ekstrak Mp pada infiltrasi leukosit dan
sekresi lendir ke saluran udara, dan ekspresi sitokin
Th2 dan IgE ditentukan pada model tikus asma.

Diterima 05 Maret 2010

Direvisi 18 April 2010
Hak Cipta © 2010 John Wiley & Sons, Ltd. Diterima 20 April 2010
60 EJ YANGDAN AL.
BAHAN DAN METODE
Bahan.Serum janin sapi (FBS), medium Dulbecco yang
dimodifikasi (IMDM) milik Iscove, dan medium Roswell
Park Memorial Institute (RPMI) 1640 dibeli dari Life
Technologies Inc. Deksametason, 2-merkaptoetanol,
fibronektin, ovalbumin ayam, dan aluminium
hidroksida diperoleh dari Sigma-Aldrich Korea (Seoul,
Korea). Faktor sel induk manusia rekombinan
diperoleh dari Peprotech (Rocky Hills, NJ). Ekstrak
tungau debu rumah,D.pteronissinus, dipasok oleh
DrTai-SoonYong (Sekolah Tinggi Kedokteran
Universitas Yonsei, Seoul, Korea). Kit proliferasi sel
dibeli dari Roche (Penzberg, Jerman). Kit AST dan ALT
diperoleh dari Shinyang (Seoul, Korea). OptEIA Set
Human MCP-1, Human IL-6, Human IL-8, Mouse IL-5
dan Mouse IgE diperoleh dari BD Biosciences (San
Diego, CA). Hematoxylin, eosin dan larutan asam-
Schiff periodik dibeli dari Sigma-Aldrich Korea.
Persiapan ekstrak Mp.Seluruh tanaman dariMimosa
pudicadikumpulkan dan ekstrak standar (ekstrak Mp)
disimpan di Herbarium Departemen Pengembangan
Farmasi Herbal, Institut Pengobatan Oriental Korea,
Daejeon, Korea, dan Divisi Ilmu Hayati, Universitas
Daejeon (TUT), Korea. Seluruh tanaman Mp yang
dikeringkan dan dijadikan bubuk (100 g) diekstraksi
dengan etanol 80% (3×0,5 L) selama 2 hari pada suhu
kamar. Ekstrak cair gabungan dipekatkan pada
tekanan rendah.
Budaya sel.Garis sel mast manusia sel HMC-1 diberikan
oleh Dr Butterfield (Rochester, MN), dan dikultur dalam
IMDM yang dilengkapi dengan 10% FBS yang dilemahkan
dengan panas, penisilin (100 U/mL), streptomisin (100 g/mL)
dan 2 -merkaptoetanol (0,05 mM).Garis sel leukemia
eosinofilik manusia Sel EoL-1 diperoleh dari Riken Cell Bank
(Tsukuba, Jepang) dan dipelihara dalam medium RPMI 1640
yang dilengkapi dengan 10% serum janin sapi, penisilin (100
U/mL) dan streptomisin (100 μg/mL) . Sel-sel ini diinkubasi
pada suhu 37 ° C dalam 5% CO2. Untuk menentukan efek
penghambatan ekstrak Mp pada pelepasan sitokin yang
diinduksi tungau debu rumah (HDM) dalam sel EoL-1,
supernatan sel dikumpulkan dan disimpan pada suhu −70 °
C hingga analisis sitokin.
uji MTT.Uji MTT dilakukan untuk menentukan
viabilitas sel menggunakan kit proliferasi sel. Sel
HMC-1 dan sel EoL-1 pada konsentrasi 5×104
sel / 100 μL dimasukkan ke dalam pelat 96 sumur. Setelah
pengobatan dengan ekstrak Mp, pelat diinkubasi selama 24 jam
pada suhu 37°C dalam CO2inkubator. Pada akhir periode, 10 μL
larutan MTT ditambahkan ke masing-masing sumur, dan
kemudian pelat diinkubasi pada suhu 37°C selama 4 jam dalam
CO2inkubator. Kemudian, 100 μL larutan pelarut ditambahkan
ke setiap sumur. Setelah inkubasi 24 jam, absorbansi pada 550
nm diukur menggunakan pembaca ELISA (Bio-Tek Instruments,
Winooski, VT).
Uji kemotaksis.Migrasi sel HMC-1 dilakukan menggunakan
ruang mikro 48-sumur dan membran bebas
polivinilpirolidon dengan ukuran pori 8 μm (Neuroprobe,
Gaithersburg, MD). Membran telah dilapisi sebelumnya
dengan RPMI 1640 yang mengandung fibronection
Hak Cipta © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.
(100 μg/mL), semalaman pada suhu 4°C. Sumur di ruang
bawah diisi dengan 28 μL buffer saja atau dengan buffer
yang mengandung faktor sel induk (SCF), dan membran
ditempatkan di atas sumur bawah. Sumur di ruang atas
diisi dengan 50 μL sel HMC-1 (5×106sel/mL) dalam IMDM
yang mengandung 1% albumin serum sapi dan 30 mM
HEPE. Setelah ruang diinkubasi selama 5 jam pada suhu
37°C, membran dihilangkan, dan sel-sel yang menempel
pada permukaan atasnya dibersihkan dengan
penghapus membran. Membran difiksasi dan diwarnai
dengan Diff-Quick (Baxter, McGaw Park, IL). Sel-sel dalam
dua bidang yang dipilih secara acak per sumur dihitung.
Pengukuran sitokin, aspartate aminotransferase (AST) dan alanine
aminotransferase (ALT).Untuk menentukan konsentrasi sitokin dalam
supernatan sel EoL-1, dilakukan sandwich ELISA menggunakan OptEIA Set
Human MCP-1, IL-6, dan IL-8, sesuai dengan instruksi pabrik. Dalam cairan
bronchoalveolar lavage (BAL) atau serum tikus, konsentrasi IL-5, IgE dan IgE
spesifik ovalbumin diukur menggunakan OptEIA Set Mouse IL-5 dan IgE, sesuai
dengan instruksi pabrik. Untuk pengukuran sitokin dan IgE spesifik ovalbumin,
pelat dilapisi dengan sitokin (0,2–2 μg/mL) atau ovalbumin (100 μg/mL) dan
diinkubasi semalaman pada suhu 4°C. Sumur yang dilapisi dicuci tiga kali dan
kemudian diblokir selama 1 jam pada suhu kamar. Sampel ditambahkan ke
dalam piring dan diinkubasi selama 2 jam pada suhu kamar. Antibodi
pendeteksi berlabel horseradish-peroxidase ditambahkan ke setiap sumur dan
diinkubasi selama 1 jam pada suhu kamar. Setelah pelat dicuci tujuh kali,
larutan substrat ditambahkan dan diinkubasi selama waktu yang sesuai pada
suhu kamar di tempat gelap. Akhirnya, larutan penghenti ditambahkan ke
masing-masing sumur dan serapan masing-masing sumur diukur dengan
pembaca ELISA, BIO-TEK ELx808. Semua pengujian dilakukan dalam rangkap
tiga. Konsentrasi masing-masing protein dihitung dari kurva standar.
Konsentrasi AST dan ALT dalam serum tikus diukur dengan alat uji AST dan
ALT, sesuai dengan instruksi pabrik. larutan stop ditambahkan ke setiap sumur
dan penyerapan setiap sumur diukur dengan pembaca ELISA, BIO-TEK ELx808.
Semua pengujian dilakukan dalam rangkap tiga. Konsentrasi masing-masing
protein dihitung dari kurva standar. Konsentrasi AST dan ALT dalam serum
tikus diukur dengan alat uji AST dan ALT, sesuai dengan instruksi pabrik.
larutan stop ditambahkan ke setiap sumur dan penyerapan setiap sumur
diukur dengan pembaca ELISA, BIO-TEK ELx808. Semua pengujian dilakukan
dalam rangkap tiga. Konsentrasi masing-masing protein dihitung dari kurva
standar. Konsentrasi AST dan ALT dalam serum tikus diukur dengan alat uji
AST dan ALT, sesuai dengan instruksi pabrik.
Induksi asma pada tikus BALB/c dan pemberian obat.
Tikus BALB / c betina berumur enam minggu dibeli dari
Daehan Biolink Co. Ltd (Seoul, Korea) dan dipelihara di
ruangan ber-AC pada suhu kamar (sekitar 22±1°C) dan
kelembapan sekitar 55±10%. Tikus dibagi menjadi enam
kelompok (N=10), dan peradangan saluran napas tikus pada
lima kelompok diinduksi oleh ovalbumin (Grade III)
menggunakan metode yang dijelaskan oleh Yukdkk.(2007).
Secara singkat, setiap tikus diimunisasi dengan injeksi
intraperitoneal (ip) 20 μg ovalbumin dengan 1 mg
aluminium hidroksida pada hari ke 1 dan hari ke 14. Tikus
yang mengalami tantangan ovalbumin dipaparkan pada
inhalasi dengan larutan ovalbumin 5% yang disemprotkan
menggunakan nebulizer ultrasonik (ME -U12, Omrom,
Tokyo, Jepang) selama 1 jam per hari dari hari ke 21 hingga
hari ke 27 setelah sensitisasi kedua. Tiga kelompok tikus
yang diinduksi asma diobati secara terpisah dengan injeksi
oral 50 mg/kg, 125 mg/kg dan 250 mg/kg ekstrak Mp
dengan cara yang tergantung pada dosis, atau 3 mg/kg
deksametason antara hari ke 14 dan hari. 27. Kelompok
normal disensitisasi dan ditantang dengan PBS tanpa
ovalbumin dan pengobatan obat.
fitother. Res.25: 59–66 (2011)
 MIMOSA PUDICAEKSTRAK MENGHAMBAT RESPON INFLAMASI saluran pernafasan
Pengumpulan cairan BAL.Pada hari ke 14 setelah
sensitisasi kedua, tikus dibunuh dan cairan BAL
dikumpulkan dengan cara lavage paru-paru melalui trakea
dengan 1 mL PBS. Setelah tiga kali lavage, sekitar 700 μL
cairan BAL diperoleh, yang disentrifugasi pada suhu 400×G
selama 5 menit pada suhu 4°C. Sel-sel dalam cairan BAL
diresuspensi dalam PBS untuk jumlah sel total dan jumlah
diferensial. Jumlah sel total diukur menggunakan
hemositometer Neubauer. Sel-sel yang tersuspensi
disitospin dan diwarnai dengan larutan pewarnaan Wright
untuk penghitungan diferensial. Sel-sel dibedakan
berdasarkan morfologi leukosit umum dan kemampuan
pewarnaan, dan dibagi menjadi neutrofil, eosinofil, limfosit
dan makrofag alveolar. Persentase setiap sel ditentukan
oleh penghitungan 300 sel per slide sitospin. Supernatan
disimpan pada suhu −70 ° C sampai analisis sitokin dan IgE.
Analisis histologis peradangan saluran napas.Jaringan
paru-paru dikeluarkan dari tikus dan difiksasi dengan
larutan formaldehida netral 10% selama 24 jam pada suhu
kamar. Jaringan yang difiksasi ditanamkan dalam parafin,
dan kemudian dipotong menjadi bagian berukuran 5 μm
menggunakan mikrotom (Leica, Nussloch, Jerman). Bagian-
bagian tersebut ditempatkan pada slide kaca,
dideparafininasi dan direhidrasi. Untuk memeriksa infiltrasi
sel inflamasi ke dalam jaringan ikat peribronkial, jaringan
diwarnai dengan hematoksilin dan eosin. Pewarnaan asam-
Schiff periodik dilakukan untuk evaluasi produksi lendir di
jaringan paru-paru. Untuk memperkirakan tingkat
keparahan infiltrasi leukosit, dilakukan penghitungan sel
peribronkial berdasarkan sistem penilaian lima poin, seperti
yang dijelaskan sebelumnya (Duandkk., 2004). Sistem
penilaiannya adalah sebagai berikut: 0, tidak ada sel; 1,
beberapa sel; 2, cincin sel sedalam 1 lapisan sel; 3, cincin sel
sedalam 2–4 lapisan sel; 4, cincin sel dengan kedalaman
lebih dari 4 lapisan sel. Tingkat produksi lendir sel goblet
dievaluasi menggunakan sistem penilaian lima poin, seperti
yang dijelaskan sebelumnya (Kupermandkk., 2002). Sistem
penilaiannya adalah sebagai berikut: 0, tidak ada sel piala; 1,
lebih rendah dari 25%; 2, 25–50%; 3, 50–75%; 4, lebih tinggi
dari 75%. Penilaian leukosit dan sel goblet diperiksa di tiga
bidang independen paru-paru dari masing-masing tikus.
Analisis statistik.Data dinyatakan sebagai mean±
SEM. Signifikansi statistik dari setiap perbedaan
dilakukan dengan ANOVA satu arah, diikuti oleh LSD
dan Turki. Hasil dari uji kemotaksis diuji
menggunakan StudentT-tes. Paket perangkat lunak
statistik SPSS (Versi 10.0, Chicago, IL) digunakan
untuk analisis statistik. Nilai signifikan didefinisikan
sebagaiP<0,05.
HASIL
Ekstrak Mp menghambat migrasi sel HMC-1 sebagai respons
terhadap SCF
Sebelum menguji efek ekstrak Mp pada sel HMC-1 dan sel
EoL-1, penelitian ini menyelidiki apakah ekstrak Mp memiliki
efek sitotoksik. Tingkat kelangsungan hidup sel HMC-1 dan sel
EoL-1 tidak berubah setelah pengobatan dengan Mp ekstrak
selama 24 jam dengan cara yang tergantung dosis (Gbr. 1A).
Hasil ini menunjukkan bahwa ekstrak Mp tidak memiliki efek
sitotoksik pada sel tersebut. Karena migrasi sel adalah a
Hak Cipta © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.
61
langkah penting dalam respons alergi, penelitian ini pertama-
tama menguji efek penghambatan ekstrak Mp pada migrasi sel.
Penelitian kami sebelumnya melaporkan kegunaan kemotaksis
sel HMC-1 yang diinduksi oleh SCF (Kimdkk., 2007). Setelah
pretreatment dengan ekstrak Mp selama 1 jam, migrasi sel
sebagai respons terhadap SCF menurun secara signifikan
(Gambar 1B). Hasil ini menunjukkan bahwa ekstrak Mp
menghambat migrasi sel HMC-1.
Ekstrak Mp menurunkan pelepasan MCP-1 dan IL-6
akibat HDM pada sel EoL-1
Untuk menyelidiki mekanisme penghambatan lain dari
ekstrak Mp dalam respon alergi, pelepasan sitokin dari
garis sel leukemia eosinofilik manusia, sel EoL-1, yang
dianggap sebagai eosinofil manusia, diperiksa. HDM juga
bertindak sebagai alergen umum pada pasien asma dan
meningkatkan kadar sitokin dari berbagai sel (Leedkk.,
2009; Arlian dan Platts-Mills, 2001). Untuk menentukan
tingkat sitokin yang berhubungan dengan asma, sel
EoL-1 diberi perlakuan awal dengan ekstrak Mp selama 1
jam dengan cara yang bergantung pada dosis, dan
kemudian diobati dengan 1 μg/mL HDM selama 24 jam.
MCP-1, IL-6 dan IL-8 dievaluasi dengan ELISA. Ekstrak Mp
secara signifikan menghambat peningkatan kadar MCP-1
dan IL-6 oleh HDM (P<0,01) (Gbr. 1C). Meskipun efek
penghambatan ekstrak Mp terhadap ekspresi IL-8 tidak
signifikan secara statistik, namun efek
penghambatannya lemah oleh ekstrak Mp.
Deksametason digunakan sebagai kontrol positif karena
efek penghambatannya terhadap respon alergi. Hasil
tersebut menunjukkan bahwa ekstrak Mp menekan
produksi mediator inflamasi pada eosinofilsecara in vitro.
Ekstrak Mp mempunyai efek penghambatan terhadap infiltrasi total
leukosit ke dalam saluran pernafasan
Untuk identifikasi kemungkinan efek anti alergi
dengan ekstrak Mpsecara alami, asma diinduksi pada
tikus BALB/c menggunakan ovalbumin. Jumlah total
leukosit dievaluasi dalam cairan BAL tikus. Total
leukosit pada tikus yang diinduksi asma meningkat
secara nyata dibandingkan dengan tikus normal dan
leukositosis dihambat dengan pengobatan dengan
ekstrak Mp (Gambar 2A). Deksametason digunakan
sebagai kontrol positif untuk efek penghambatannya
pada asma. Penelitian ini juga menentukan apakah
efek penghambatan ekstrak Mp pada leukositosis
disebabkan oleh aktivitas sitotoksiknya. Pergantian
ALT dan AST dalam serum diukur dengan metode
Reitman-Frankel menggunakan alat uji ALT dan AST.
Kadar ALT dan AST tidak diubah dengan pemberian
ekstrak Mp pada setiap dosis (Gambar 2B). Ekstrak Mp
tidak mempengaruhi berat badan atau berat paru-
paru tikus (data tidak ditampilkan).
Ekstrak Mp mengubah komponen seluler dalam peradangan
saluran napas
Pada peradangan saluran napas tikus penderita asma, perubahan
komponen seluler, terutama eosinofil, merupakan hal yang penting
dalam perkembangan atau pengobatan penyakit tersebut.
fitother. Res.25: 59–66 (2011)
62 EJ YANGDAN AL.

A B
120 Kontrol 120
Mp 0,1
100 Mp 1 100
**
80 Mp 10 80
% kelangsungan hidup

% migrasi sel
60 60
40 40
20 20
0 0
sel HMC-1 sel EoL-1 - Mp 10

C
120 120 **
100 ** 100
MCP-1 (pg/mL)

IL-6 (pg/mL)
80 ** 80
60 60 ** ** **
**
40 40
20 20
0 0
- HDM Mp 0,1 Mp 1 Mp 10 Dex - HDM Mp 0,1 Mp 1 Mp 10 Dex

50
**
40
IL-8 (pg/mL)

30 **

20

10

0
- HDM Mp 0,1 Mp 1 Mp 10 Dex

Gambar 1.Efek penghambatan ekstrak Mp terhadap respon inflamasi pada sel HMC-1 dan sel EoL-1 tanpa sitotoksisitas. (A) Sel HMC-1 dan sel EoL-1
diunggulkan ke dalam piring 96 sumur pada suhu 5×104sel/sumur, dan diberi ekstrak Mp pada konsentrasi 0,1 μg/mL (Mp 0,1), 1 μg/mL (Mp 1) atau 10
μg/mL (Mp 10) selama 24 jam. Tingkat kelangsungan hidup diukur dengan melakukan uji MTT, seperti yang dijelaskan di bagian Metode. Data dinyatakan
sebagai rasio relatif terhadap penyerapan sel yang tidak diberi perlakuan, yang ditetapkan sebesar 100%. (B) Sel HMC-1 dipra-inkubasi dengan tidak
adanya atau adanya 10 μg/mL ekstrak Mp selama 24 jam. Tingkat migrasi ditentukan dengan melakukan uji kemotaksis, seperti yang dijelaskan di bagian
Metode. (C) Sel EoL-1 diunggulkan ke dalam piring 24 sumur pada jam 1×106sel/mL, dan diberi perlakuan awal tanpa adanya atau adanya 0,1 μg/mL (Mp
0,1), 1 μg/mL (Mp 1) atau 10 μg/mL (Mp 10) ekstrak Mp, atau dengan 1 μg/ mL deksametason (Dex) selama 1 jam. Sel-sel diperlakukan dengan 10 μg / mL
HDM selama 24 jam, dan supernatan dikumpulkan. MCP-1, IL-6 dan IL-8 dalam supernatan dianalisis dengan ELISA, seperti yang dijelaskan di bagian
Metode. Semua data dinyatakan sebagai mean±SEM dari tiga percobaan independen. **P<0,01 dianggap sebagai perbedaan yang signifikan antara
kelompok yang tidak diobati dan kelompok yang diobati dengan HDM atau antara kelompok yang diobati dengan HDM dan kelompok yang diobati
dengan Mp.

asma. Untuk menentukan jumlah eosinofil dalam Ekstrak Mp mengurangi perubahan histopatologis jaringan
cairan BAL, sel diwarnai dengan pewarnaan Wright, paru-paru pada asma
dan jumlah diferensial leukosit ditentukan. Ekstrak Mp
secara signifikan mengurangi jumlah eosinofil dan Jaringan paru-paru diwarnai dengan pewarnaan hematoxylin,
meningkatkan laju makrofag alveolar dibandingkan eosin dan periodik acid-Schiff untuk menganalisis efek ekstrak
dengan kontrol asma (Gambar 3A dan 3B). Efek Mp terhadap perubahan patologis jaringan paru-paru penderita
penghambatan ekstrak Mp terhadap eosinofilia asma. Jaringan paru penderita asma menunjukkan infiltrasi
terlihat jelas. Untuk menguji apakah penurunan leukosit peribronkial yang padat dan hipersekresi mukus akibat
eosinofil oleh ekstrak Mp berhubungan dengan IL-5, hiperplasia sel goblet di dalam bronkus, dibandingkan dengan
suatu stimulator eosinofil yang kuat, kadar IL-5 diukur jaringan normal (Gambar 4). Ekstrak Mp tentu saja menekan
dalam cairan BAL. Ekstrak Mp secara nyata peningkatan infiltrasi leukosit (Gambar 4A) dan hipersekresi
menurunkan peningkatan ekspresi IL-5 dalam cairan mukus. (Gbr. 4B) dengan cara yang bergantung pada dosis. Skor
BAL tikus asma (Gambar 3C). Hasil ini menunjukkan peradangan dan lendir menunjukkan efek penghambatan yang
bahwa efek penghambatan ekstrak Mp pada signifikan secara statistik dari ekstrak Mp pada peradangan
eosinofilia berhubungan dengan regulasi pelepasan saluran napas (Gambar 4C). Data ini menunjukkan bahwa
IL-5. ekstrak Mp memblokir

Hak Cipta © 2010 John Wiley & Sons, Ltd. fitother. Res.25: 59–66 (2011)
 MIMOSA PUDICAEKSTRAK MENGHAMBAT RESPON INFLAMASI saluran pernafasan 63

A A
50 ** Normal
80
Kontrol
** 40

s (104/mL)
MP 50mg
Jumlah sel (104/mL)

Mp 125 mg
60 Mp 250mg
30
* Dex
40 * 20

10 **
20 **
0
Neutrofil Eosinofil Limfosit Alveolar
0 makrofag
Normal Kontrol 50mg 125mg 250mg Dex

ekstrak Mp B
100 Normal
**
B 80
** Kontrol
MP 50mg
150 Mp 125 mg
60 Mp 250mg
Dex
40
100
AST (IU/L)

20

0
50
Neutrofil Eosinofil Limfosit Alveolar
makrofag

0 C
Normal Kontrol 50mg 125mg 250mg Dex *
150

ekstrak Mp *
** **
IL-5 (pg/mL)

100
150
50

100
ALT (IU/L)

0
Normal Kontrol 50mg 125mg 250mg Dex
50 ekstrak Mp

0 Gambar 3.Modul ekstrak Mp komponen seluler dalam cairan BAL. (A

Normal Kontrol 50mg 125mg
ekstrak Mp
Gambar 2.Pengurangan rekrutmen sel inflamasi ke dalam cairan
BAL dengan ekstrak Mp. Kelompok tikus dengan asma yang
diinduksi OVA dibagi menjadi lima kelompok: kelompok yang tidak
diobati (Kontrol), tiga kelompok yang diobati dengan Mp (50 mg/kg,
125 mg/kg dan 250 mg/kg), dan kelompok yang diobati dengan
deksametason (Dex ). Kelompok kontrol negatif (Normal)
disensitisasi dan diobati dengan PBS tanpa pemberian obat. Sel-sel
yang diperoleh kembali dalam cairan BAL digunakan untuk jumlah
sel total (A). Perubahan kadar AST dan ALT dalam serum diukur,
seperti dijelaskan pada bagian Metode (B). Data disajikan dalam
kaitannya dengan kelompok normal yang ditetapkan 100%. Semua
hasil dinyatakan sebagai mean±SEM dari sepuluh percobaan
independen. *P<0,05 dan **P<0,01 menunjukkan perbedaan yang
signifikan secara statistik antara kelompok normal dan kelompok
kontrol asma, atau antara kelompok kontrol asma dan kelompok
yang diobati dengan obat.
250mg Dex dan B) Sel-sel yang diperoleh kembali dari cairan BAL digunakan
untuk penghitungan diferensial setelah pewarnaan Wright.
Penghitungan diferensial dilakukan, seperti yang dijelaskan pada
bagian Metode. (C) Supernatan dikumpulkan dari cairan BAL setelah
sentrifugasi. Kadar IL-5 dianalisis dengan ELISA. Hasilnya dinyatakan
sebagai mean±SEM dari sepuluh percobaan independen. *P<0,05
dan **P<0,01 menunjukkan perbedaan yang signifikan secara
statistik antara kelompok normal dan kelompok kontrol asma, atau
antara kelompok kontrol asma dan kelompok yang diobati dengan
obat.
IgE spesifik dalam serum dan cairan BAL meningkat
secara nyata pada kontrol asma dibandingkan dengan
kelompok normal (Gambar 5). IgE spesifik ovalbumin
ditekan oleh ekstrak Mp dengan cara yang tergantung
pada dosis.

perkembangan peradangan patologis pada jaringan paru- DISKUSI

paru pada asma, dan hasil ini sesuai dengan data yang
ditunjukkan pada Gambar 3.
Ekstrak Mp menekan pelepasan IgE spesifik
ovalbumin dalam serum dan cairan BAL
Karena IgE dikaitkan dengan berbagai sel inflamasi
dalam patogenesis respons alergi, kadar IgE total dan
IgE spesifik ovalbumin diperiksa dalam serum dan
cairan BAL. IgE total dan ovalbumin-
Asma merupakan suatu penyakit inflamasi pada saluran
pernafasan yang ditandai dengan infiltrasi berbagai sel
inflamasi, obstruksi saluran pernafasan yang bersifat
reversibel dan hiperresponsif bronkus (Busse dan
Rosenwasser, 2003). Ketika prevalensi asma meningkat di
seluruh dunia, kita perlu mengembangkan obat terapeutik
yang efektif untuk asma. Mp milikMimosaceaekeluarga dan
telah digunakan secara tradisional sebagai agen terapi
berbagai penyakit (Ngo Bumdkk., 2004; Amalraj dan
Ignacimuthu, 2002). Namun, efek ekstrak Mp aktif

Hak Cipta © 2010 John Wiley & Sons, Ltd. fitother. Res.25: 59–66 (2011)
64 EJ YANGDAN AL.

A
Induksi asma

Normal Kontrol MP 50mg Mp 125 mg Mp 250mg Dex

B
Induksi asma

Normal Kontrol MP 50mg Mp 125 mg Mp 250mg Dex

C
5 5

4 4
Skor peradangan

** **
Skor lendir

3 * 3
** ** ** **
2 2

1 1

0 0
Normal Kontrol 50mg 125mg 250mg Dex Kontrol Biasa 50mg 125mg 250mg Dex
ekstrak Mp ekstrak Mp

Gambar 4.Penurunan perubahan patologis pada jaringan paru tikus asma dengan ekstrak Mp. (A) Infiltrasi sel di jaringan paru-paru
dikonfirmasi dengan pewarnaan hematoksilin dan eosin. (B) Untuk mengidentifikasi hipersekresi lendir di jaringan paru-paru, dilakukan
pewarnaan asam-Schiff secara berkala. (C) Skor infiltrasi sel dan produksi lendir di jaringan paru-paru dihitung, seperti dijelaskan di bagian
Metode. Pembesaran×200.

asma belum banyak diketahui. Penelitian ini menyelidiki
kemungkinan penggunaan ekstrak Mp sebagai agen
antiasma menggunakan garis sel inflamasi manusia dan
model tikus asma yang diinduksi ovalbumin. Ekstrak Mp
pertama disiapkan dan kemudian efek
penghambatannya ditunjukkan pada respon asma.
Singkatnya, ekstrak Mp memblokir migrasi sel HMC-1
sebagai respons terhadap SCF dan menekan pelepasan
MCP-1, IL-6 dan IL-8 dari sel EoL-1. Dalamsecara alami
Uji, ekstrak Mp menghambat leukositosis, eosinofilia dan
hipersekresi lendir ke saluran napas tikus penderita
asma. Selain itu, kadar IgE spesifik ovalbumin dalam
serum dan cairan BAL dikurangi dengan ekstrak Mp.
Mp terdiri dari mimosin (alkaloid), asam amino bebas,
sitosterol, tanin, glikosida flavonoid atau sejenisnya (Kokane
dkk., 2009; Ngo Bumdkk., 2004). Dalam penelitian lain,
mimosine terbukti memiliki efek antiinflamasi.
efek tory pada faktor nekrosis tumor (TNF) -α dan
produksi IL-6 pada peradangan kronis (Frydasdkk.,
2003). Mimosine juga menghambat transkripsi dan
translasi MCP-1 pada sel inflamasi tikus yang
terinfeksi parasit (Contidkk., 2002). Senyawa lain dari
M.pudica, glikosida flavonoid, juga diisolasi dari
Kembang sepatu mutabilisL, dan senyawa ini
menunjukkan efek pencegahan alergi (Iwaokadkk.,
2009). Senyawa flavonoid alami yang berasal dari
tumbuhan telah dilaporkan menekan produksi nitric
oxide synthase dan sitokin yang disebabkan oleh
respon inflamasi (Choidkk., 2008; Comaladadkk.,
2005). Data ini menunjukkan bahwa efek
penghambatan ekstrak Mp pada asma mungkin
disebabkan oleh berbagai senyawa antiinflamasi.
Seperti yang ditunjukkan dalam penelitian kami, jumlah sel
inflamasi, khususnya eosinofil, di jaringan paru-paru meningkat
pada tikus penderita asma, yang mengalami penurunan sebesar

Hak Cipta © 2010 John Wiley & Sons, Ltd. fitother. Res.25: 59–66 (2011)
 MIMOSA PUDICAEKSTRAK MENGHAMBAT RESPON INFLAMASI saluran pernafasan 65

A pengobatan dengan ekstrak Mp. Migrasi sel mast oleh

30 kemokin seperti SCF berkontribusi terhadap perkembangan
**
penyakit alergi (Georasdkk., 2005). Sel mast yang bermigrasi
Jumlah IgE (μgram/mL)

diaktifkan oleh IgE melalui reseptor IgE afinitas tinggi

20 (FcεRI), dan kemudian mengeluarkan histamin,
**
prostaglandin dan sitokin, termasuk IL-3, IL-4 dan IL-5
10 (Holgate, 2008). Di antara sitokin-sitokin ini, IL-5 dalam
cairan BAL sangat meningkat pada tikus asma, namun
berkurang dengan ekstrak Mp (Gambar 3C). IL-5 memainkan
0 peran penting dalam pematangan dan perekrutan eosinofil
Normal Kontrol 50mg 125mg 250mg Dex
ke dalam saluran napas (Robinsondkk., 1999). IL-4 dan IL-13
ekstrak Mp sedikit meningkat pada kelompok kontrol dan protein ini
tidak diubah secara signifikan dengan pengobatan Mp (data
3 tidak ditampilkan).
** Eosinofil dikenal sebagai sel efektor pada penyakit alergi
IgE spesifik OVA (μg/mL)

melalui pelepasan sitokin, protein granula sitotoksik, dan

2 superoksida yang merusak jaringan (Palmqvistdkk., 2007).
**
Selain itu, hipersekresi lendir di jaringan paru-paru menurun
1 secara signifikan dengan ekstrak Mp (Gambar 4B).
Hipersekresi lendir meningkat karena hipertrofi sel goblet di
jaringan paru asma, yang berperan dalam obstruksi jalan
0
Normal Kontrol 50mg 125mg 250mg Dex
napas (Woodruff dan Fahy, 2002). Faktor pertumbuhan
seperti faktor pertumbuhan epidermal (EGF) dan
ekstrak Mp transformasi faktor pertumbuhan beta (TGF-β) menginduksi
ekspresi gen dan protein musin, yang menyebabkan
B hipersekresi lendir ke saluran napas (Braddingdkk., 2006).
150 Ekstrak Mp dapat menghambat hipersekresi lendir melalui
** mekanisme kompleks, termasuk modulasi EGF dan TGF-β.
Jumlah IgE (ng/mL)

100 * Kesimpulannya, ekstrak Mp menghambat infiltrasi

sel inflamasi ke tempat inflamasi, dan menurunkan
50 hipersekresi mukus oleh sel goblet. Meskipun
mekanisme regulasi ekstrak Mp pada asma belum
dipahami dengan jelas, penelitian ini menunjukkan
0 bahwa ekstrak Mp mungkin memiliki efek antiasma
Normal Kontrol 50mg 125mg 250mg Dex
terkait dengan regulasi ekspresi IL-5 dan IgE. Studi ini
ekstrak Mp menunjukkan bahwa ekstrak Mp mungkin memiliki
efek supresif pada peradangan saluran napas dan
150
mungkin berguna untuk pengobatan asma.
IgE spesifik OVA (ng/mL)

100 ** Pengakuan
*
* ** Pekerjaan ini didukung oleh program RIC MKE (Kementerian
50 Ekonomi Pengetahuan) di Universitas Daejeon.

0 Konflik kepentingan
Normal Kontrol 50mg 125mg 250mg Dex
Para penulis telah menyatakan bahwa tidak ada konflik kepentingan.
ekstrak Mp

Gambar 5.Penekanan kadar IgE spesifik OVA dalam serum dan

cairan BAL dengan ekstrak Mp. ELISA dilakukan untuk mengevaluasi
IgE total dan IgE spesifik OVA dalam serum (A) dan cairan BAL (B).
Hasilnya disajikan sebagai mean±SEM dari sepuluh percobaan
independen. *P<0,05 dan **P<0,01 menunjukkan perbedaan yang
signifikan secara statistik antara kelompok normal dan kelompok
kontrol asma, atau antara kelompok kontrol asma dan kelompok
yang diobati dengan obat.

Hak Cipta © 2010 John Wiley & Sons, Ltd. fitother. Res.25: 59–66 (2011)
66 EJ YANGDAN AL.
REFERENSI
Amalraj T, Ignacimuthu S. 2002. Efek hiperglikemik daun
dariMimosa pudicaAir terjun.Fitoterapia73: 351–352. Arlian
LG, Platts-Mills TA. 2001. Biologi tungau debu dan
remediasi alergen tungau pada penyakit alergi. J Alergi Klinik
Imunol107: S406–S413.
Asher MI, Montefort S, Björksten Bdkk.2006. Waktu sedunia
tren prevalensi gejala asma, rhinokonjungtivitis alergi, dan
eksim pada masa kanak-kanak: ISAAC Fase Satu dan Tiga
mengulangi survei lintas sektor multinegara. Lanset368: 733–
743.
Bisset LR, Schmid-Grendelmeier P. 2005. Kemokin dan mereka
reseptor dalam patogenesis asma alergi: kemajuan dan
perspektif.Opini Curr Pulm Med11: 35–42. Bradding P, Dinding
AF, Holgate ST. 2006. Peran tiang kapal
sel dalam patofisiologi asma.J Alergi Klinik Imunol117: 1277–
1284.
Braman SS. 2006. Beban asma global.Dada130:
4S–12S.
Busse WW, Rosenwasser LJ. 2003. Mekanisme asma.
J Alergi Klinik Imunol111: S799–S804.
Choi HJ, Eun JS, Park YRdkk.2008. Ikarisoside A menghambat
sintase oksida nitrat yang dapat diinduksi dalam sel RAW 264,7
yang distimulasi lipopolisakarida melalui p38 kinase dan jalur
pensinyalan faktor-kappaB nuklir.Farmakol Eur J601: 171–178.
Comalada M, Camuesco D, Sierra Sdkk.2005.secara alamikuersitrin
efek anti-inflamasi melibatkan pelepasan quercetin, yang
menghambat peradangan melalui penurunan regulasi jalur NF-
κB.Eur J Imunol35: 584–592.
Conti P, Frydas S, Reale Mdkk.2002. Penghambatan MCP-1 dan
Transkripsi dan translasi MIP-2 oleh mimosine pada jaringan
otot yang terinfeksi parasitTrichinella spiralis.Biokimia Sel
Mol229: 129–137.
Djukanovi R, Roche WR, Wilson JWdkk.1990. Peradangan mukosa-
kawin pada asma.Am Rev Respir Dis142: 434–457. Duan W,
Chan JH, Wong CH, Leung BP, Wong WS. 2004. Anti-
efek inflamasi dari inhibitor protein kinase teraktivasi mitogen
U0126 pada model tikus asma.J Imunol172: 7053–7059.
Elsner J, Kapp A. 1999. Regulasi dan modulasi eosinofil
fungsi efektor.Alergi54: 15–26.
Frydas S, Papazahariadou M, Papaioannou Ndkk.2003. Efek
dari senyawa L-mimosin dalam ansecara alamimodel
pembentukan granuloma kronis yang disebabkan oleh kalium
permanganat (KMnO4).Farmakol Imunopatol Int J16: 99–104.
Georas SN, Guo J, De Fanis U, Casolaro V. 2005. Sel T-helper
regulasi tipe-2 pada penyakit alergi.Eur Respira J26: 1119–1137.
Hak Cipta © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.
Hirano T. 1998. Interleukin 6 dan reseptornya: sepuluh tahun kemudian.Int
Pendeta Imunol16: 249–284.
Holgate ST. 2008. Patogenesis asma.Alergi Clin Exp38:
872–897.
Holgate ST, Polosa R. 2008. Strategi pengobatan untuk alergi dan
asma.Nat Rev Imunol8: 218–230.
Iwaoka E, Oku H, Takahashi Y, Ishiguro K. 2009. Pencegahan alergi
efek positif dariKembang sepatu mutabilis'versicolor' dan glikosida
flavonoid pencegah alergi baru.Biol Farmasi Banteng32: 509–512.
Kim IS, Kim JH, Kim JS, Yun CY, Kim DH, Lee JS. 2007. Itu
efek penghambatan dariHouttuynia kordataekstrak pada migrasi
sel HMC-1 yang diinduksi faktor sel induk.J Etnofarmakol 112: 90–
95.
Kokane DD, Lebih Banyak RY, Kale MB, Nehete MN, Mehendale PC,
Gadgoli CH. 2009. Evaluasi aktivitas penyembuhan luka akar
Mimosa pudica.J Etnofarmakol124: 311–315. Kuperman DA,
Huang X, Koth LLdkk.2002. Dampak langsung dari
interleukin-13 pada sel epitel menyebabkan hiperreaktivitas saluran
napas dan produksi lendir berlebih pada asma.Nat Med8: 885–889.
Lee JS, Kim IS, Suhr KB, Yun CY. 2009. Sekresi MCP-1,
IL-8 dan IL-6 meningkat karena tungau debu rumah,
Dermatophagoides pteronissinusdalam sel EoL-1 eosinofilik
manusia.Sistem Sel Hewan13: 391–397.
Lucey DR. 1996. Disregulasi sitokin tipe 1 dan tipe 2 pada
penyakit menular, neoplastik, dan inflamasi pada manusia.
Klinik Mikrobiol Rev9: 532–562.
Ngo gelandangan E, Dawack DL, Schmutz Mdkk.2004. Antikonvulsan
aktivitas dariMimosa pudicarebusan.Fitoterapia75: 309–314.
Palmqvist C, Wardlaw AJ, Bradding P. 2007. Kemokin dan
reseptor mereka sebagai target potensial untuk pengobatan
asma.Br J Farmakol151: 725–736.
Robinson DS, Utara J, Zeibecoglou Kdkk.1999. Eosinofil
perkembangan dan sumsum tulang dan eosinofil jaringan pada
asma atopik.Imunol Alergi Int Arch118: 98–100. Romagnani S.
2000. Peran limfosit dalam penyakit alergi.
J Alergi Klinik Imunol105: 399–408.
Shakoory B, Fitzgerald SM, Lee SA, Chi DS, Krishnaswamy G.
2004. Peran sitokin yang diturunkan dari sel mast manusia
dalam biologi eosinofil.J Interferon Sitokin Res24: 271–281.
Woodruff PG, Fahy JV. 2002. Renovasi saluran napas pada asma.
Semin Respira Crit Care Med23: 361–367.
Yuk JE, Woo JS, Yun CYdkk.2007. Pengaruh laktosa-β-sitos-
terol dan β-sitosterol pada peradangan paru yang diinduksi
ovalbumin pada tikus yang peka secara aktif.Imunofarmakol Int7:
1517–1527.
fitother. Res.25: 59–66 (2011)