Subscribe to DeepL Pro to translate larger documents.

Visit www.DeepL.com/pro for more information.

Vol. 10(15), hal. 202-208, 17 April, 2016

DOI: 10.5897/JMPR2016.6052
Nomor Artikel: B8613E558108 ISSN
1996-0875
Hak Cipta © 2016
Jurnal Penelitian Tanaman Obat
Penulis memiliki hak cipta atas artikel ini
http://www.academicjournals.org/JMPR

Makalah Penelitian Panjang Penuh

Identifikasi alkaloid biji kakao Indonesia (Theobroma

cacao L.) dan pengaruhnya terhadap kekerasan
email gigi
Rina Permatasari1 *, Dewi Fatma Suniarti2 , Ellyza Herda3 dan Zainal Alim Mas'ud4
1
Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Indonesia, Jalan Salemba Raya No 4 Jakarta Pusat 10430, Indonesia.
2
Departemen Biologi Oral, Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Indonesia, Jalan Salemba Raya No 4 Jakarta Pusat 10430,
Indonesia.
3
Departemen Ilmu Kedokteran Gigi, Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Indonesia, Jalan Salemba Raya No 4 Jakarta Pusat
10430, Indonesia.
4
Departemen Kimia, Institut Pertanian Bogor, Jalan Pajajaran Bogor 16144, Indonesia.
Diterima 19 Januari 2015; Diterima 21 Maret 2016

Karies gigi masih menjadi masalah kesehatan gigi yang utama di Indonesia, dan tindakan pencegahan
perlu dilakukan untuk mengatasinya. Enamel merupakan lapisan terluar gigi yang penting untuk
melindungi gigi dari karies. Hingga saat ini, fluoride dikenal sebagai salah satu bahan penguat yang
efektif mencegah email dari karies gigi, namun efek samping fluorosis masih menjadi perdebatan
karena dosis yang menyebabkannya tidak dapat diukur. Oleh karena itu, pengembangan bahan penguat
alternatif yang relatif aman dalam upaya pencegahan karies email gigi masih diperlukan. Theobromine,
salah satu dari tiga jenis alkaloid yang terkandung dalam kakao (Theobroma cacao L.) telah dilaporkan
dapat mencegah karies dengan cara meningkatkan resistensi jaringan email gigi. Dua jenis klon lokal
biji kakao Indonesia, Sulawesi 1 (S1) dan Sulawesi 2 (S2), dianalisis karakteristik alkaloidnya dengan
menggunakan HPLC, dan pengaruhnya terhadap kekerasan email gigi ditentukan dengan menggunakan
mesin penguji kekerasan Vickers. Perbedaan nilai angka kekerasan Vickers (VHN) email gigi dianalisis
menggunakan ANOVA satu arah (p<0,05). Konsentrasi dan waktu perendaman yang optimal diperoleh
dengan membandingkan tiga jenis konsentrasi larutan Theobomine (0,1%, 0,05%, dan 0,01%) dan tiga
jenis waktu perendaman (1 jam, 30 menit, dan 15 menit). Nilai VHN tertinggi terdapat pada kelompok
teobromin tunggal 0,1% - 1 jam (p = 0,000). Nilai VHN kelompok campuran alkaloid S1 - 1 jam
menunjukkan perbedaan yang bermakna dengan kelompok buffer (kontrol negatif) (p = 0,028) dan tidak
berbeda bermakna dengan kelompok teobromin tunggal 0,05% - 1 jam (p = 1,000), 0,1% - 30 menit (p =
1,000), 0,1% - 15 menit (p = 1,000) dan kelompok teobromin tunggal 0,01% - 1 jam (p = 0685).
Kandungan alkaloid Sulawesi 1 dengan rasio campuran alkaloid theobromine : teofilin: Kafein, 6 : 1 : 1,
mempengaruhi kekerasan email gigi.

Kata-kata kunci: Alkaloid, biji kakao, karies gigi, email gigi, kekerasan.

PENDAHULUAN

Karies gigi masih menjadi masalah utama dalam bidang kesehatan gigi dan mulut di Indonesia. Persentase karies
gigi mencapai 72,1%, di mana 46,5% di antaranya adalah
karies gigi
karies gigi aktif dan belum dirawat (Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, 2008). Persentase yang tinggi tersebut
menunjukkan pentingnya pencegaha

yang dapat menjadi alternatif yang lebih baik dan terjangkau
daripada tindakan rehabilitatif dalam menangani karies gigi di
Indonesia.
Penyebab karies gigi adalah bakteri yang ganas, karbohidrat
yang dapat difermentasi, kualitas air liur, dan kekuatan email
gigi terhadap asam serta waktu. Enamel gigi adalah lapisan
terluar gigi yang melindungi mahkota gigi dari keausan akibat
pengunyahan dan sangat penting dalam melindungi gigi dari
asam. Ketahanan enamel terhadap asam dipengaruhi oleh
komposisi kimiawi enamel gigi, yang berbeda pada setiap
individu, dan faktor-faktor lain yang dapat mempengaruhi
struktur gigi. Proses kerusakan gigi dimulai dengan
demineralisasi email yang dipicu oleh peningkatan kadar asam
dari plak bakteri (Fejerskov dan Kidd, 2008). Enamel adalah
satu-satunya jaringan gigi yang tidak memiliki kemampuan
untuk beregenerasi atau menyembuhkan dirinya sendiri setelah
terbentuk sempurna. Hal ini menekankan pentingnya mencegah
demineralisasi email (Robinson et al., 1998).
Demineralisasi email tidak terjadi tanpa henti karena secara
fisiologis, proses remineralisasi akan mengikuti. Sumber
mineral utama untuk proses remineralisasi email secara alami
adalah kalsium dan fosfat dari air liur dalam kondisi jenuh
(Cury dan Tenuta, 2009). Penelitian mengenai remineralisasi
email telah dilakukan selama kurang lebih 100 tahun dan telah
disarankan sebagai perawatan non-invasif untuk lesi karies gigi
fase awal (Reynolds, 2008).
Dalam 50 tahun terakhir, fluor telah diklaim efektif dalam
mencegah proses karies melalui penghambatan demineralisasi
dan meningkatkan remineralisasi dengan membentuk
fluorapatit dan kalsium fluorida serta menghambat kerja enzim
bakteri melalui aktivitas antimikroba (Kirkham dkk., 1994;
Torgay dkk., 1994; Pearce dkk., 1995; Cury dan Tenuta, 2009).
Namun, dosis fluoridasi yang aman dan bahaya fluorosis masih
diperdebatkan. Penelitian oleh National Health and Medical
Research Center di Melbourne dan The International Society
for Fluoride Research menyimpulkan bahwa penelitian lebih
lanjut perlu dilakukan terhadap penggunaan fluoride dalam
proses fluoridasi (National Health and Medical Research
Center di Melbourne, 1999; The International Society for
Fluoride Research, 2000). Konsensus terbaru menyatakan
bahwa fluoride tidak lagi digunakan secara sistemik melainkan
digunakan secara lokal melalui aplikasi langsung pada gigi
(Cury dan Tenuta, 2008). Selain fluoride, saat ini ada tiga
bahan lain untuk remineralisasi, yaitu kalsium fosfat amorf
yang distabilkan dengan kasein fosfopeptida (CPP- ACP),
kalsium fosfat amorf yang tidak distabilkan (ACP), dan kaca
bioaktif yang mengandung kalsium natrium fosfosilikat. Ketiga
bahan ini mengandalkan kalsium
*Penulis korespondensi. E-mail: rinapermatasari@gmail.com.
Penulis setuju bahwa artikel ini tetap memiliki akses terbuka secara permanen di bawah ketentuan Lisensi Atribusi Creative
Commons 4.0 Lisensi Internasional
Permatasari et al. 203
dan fosfat untuk meningkatkan kemampuan remineralisasi air
liur ketika terjadi demineralisasi email. Namun, belum ada
bukti klinis yang cukup untuk mendukung mekanisme ini
(Cury dan Tenuta, 2009).
Penelitian mengenai pengembangan bahan alami yang
memiliki efek anti karies dan relatif aman serta terjangkau
untuk digunakan masih terus dilakukan hingga saat ini. Biji
kakao (Theobrema cacao L.) mengandung metabolit
sekunder berupa alkaloid purin turunan Xanthine seperti
theobromine, kafein dan teofilin. Selama beberapa tahun
hingga saat ini, theobromine telah dieksplorasi untuk
menemukan manfaatnya bagi kesehatan gigi. Sadeghpour
melaporkan bahwa theobromine dalam bubuk cokelat memiliki
efek antikariogenik yang lebih baik daripada fluoride dalam
mengurangi kelarutan email (Sadeghpour, 2007). Kargul dkk.
menyatakan bahwa kekerasan email berhubungan dengan
pertukaran mineral pada permukaan email dan bahwa
Thebromine 200mg/l memiliki efek positif terhadap
remineralisasi email (Kargul dkk., 2010). Hasil ini didukung
oleh penelitian yang dilakukan oleh Grace dkk., yang
menyatakan bahwa theobromine merupakan bahan yang dapat
mencegah potensi karies gigi karena kemampuannya dalam
meningkatkan kekerasan email (Grace dkk., 2012). Lebih lanjut
Kargul et al. menyatakan bahwa melalui penelitian in vitro,
efektivitas theobromine terhadap kekerasan email dan proses
remineralisasi setara dengan gel Acidulated Phosphate Fluoride
(APF) dan Casein Phosphopeptide Stabilized Amorphous
Calcium Phosphate (CCP-ACP) (Kargul et al., 2012).
Indonesia merupakan salah satu produsen biji kakao
terbesar di dunia. Provinsi Sulawesi Tengah merupakan salah
satu daerah penghasil biji kakao terbesar di Indonesia dalam 10
tahun terakhir (Komisi Pengawas Persaingan Usaha, 2009).
Pulau Sulawesi saat ini memiliki klon kakao lokal yang unggul,
yaitu Sulawesi 1 dan Sulawesi 2. Kedua klon ini telah
menunjukkan kualitas adaptasi yang baik terhadap kondisi
agroklimat Sulawesi dan telah dibudidayakan secara luas di
daerah- daerah sentra produksi kakao di Pulau Sulawesi (Pusat
Penelitian Kopi dan Kakao Indonesia, 2007). Kualitas biji
kakao dipengaruhi oleh dua senyawa penting yang dihasilkan
dari metabolit sekunder yang terkandung di dalam biji kakao,
yaitu polifenol dan alkaloid (Bravo, 1998; Wollgast dan
Anklam, 2000). Dengan ketersediaan biji kakao yang melimpah
di Indonesia, penting untuk memanfaatkan manfaatnya secara
luas di bidang kedokteran, khususnya kesehatan gigi.
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui karakteristik
kandungan alkaloid dan manfaat klon biji kakao dari Indonesia,
Sulawesi 1 dan Sulawesi 2, terhadap kekerasan email gigi.
Sebagai bagian dari program
204 J. Med. Penelitian
Tanaman.
Gambar 1. Spesimen email gigi yang siap digunakan.
pengembangan penelitian lintas disiplin ilmu terutama biologi
mulut, kimia, dan ilmu material, penelitian ini menetapkan
khasiat dan mekanisme kerja ekstrak alkaloid biji kakao
terhadap email gigi, sehingga diperoleh dasar ilmiah
penggunaan ekstrak alkaloid biji kakao Indonesia untuk
penelitian in vivo dan uji klinis, apabila di masa depan ekstrak
tersebut diaplikasikan dalam bidang kedokteran gigi sebagai
bahan alternatif pencegah karies gigi. Dengan adanya
penelitian ini diharapkan biji kakao dapat dimanfaatkan sebagai
tanaman obat untuk meningkatkan kesehatan gigi dan
khususnya dalam mencegah karies gigi.
BAHAN DAN METODE
Efek alkaloid biji kakao dievaluasi melalui uji in vitro. Penelitian
eksperimental laboratorium in vitro ini terdiri dari uji fitokimia untuk
mendapatkan ekstrak kasar alkaloid serta mengidentifikasi kandungan
alkaloid. Selanjutnya dilakukan simulasi larutan ekstrak alkaloid dari dua
klon biji kakao asal Indonesia, yaitu Sulawesi 1 (S1) dan Sulawesi 2 (S2)
yang berasal dari Sulawesi Tengah. Efek alkaloid biji kakao dievaluasi
berdasarkan kekerasan email gigi.
Koleksi biji kakao
Biji kakao tersebut diambil dari kebun percobaan Sidondo di Palu,
Sulawesi Tengah, antara bulan September hingga November 2013. Kepala
kebun percobaan Sidondo memastikan jenisnya, di mana nomor spesimen
KW162 diidentifikasi sebagai klon Sulawesi 1 (S1) dan nomor spesimen
KW163 diidentifikasi sebagai klon Sulawesi 2 (S2). Biji kakao diekstraksi
dari buah kakao yang sudah matang, kemudian empulur yang menempel
pada biji dibuang. Biji kakao dikeringkan di bawah sinar matahari selama
6 sampai 7 hari. Setelah kering, cangkang yang menempel pada biji kakao
dibuang. Biji kakao kemudian digiling dengan menggunakan penggiling
kering (Phillips HR-2071).
Persiapan dan analisis ekstrak kasar
Biji kakao S1 dan S2 dihilangkan lemaknya dengan metode ekstraksi
sohxlet menggunakan alat refluks dan Chiller (Eyela CA- 1111). Tahap
selanjutnya adalah ekstraksi alkaloid dengan menggunakan metode dari
Association of Analytical communities (AOAC) 2006. Setelah itu,
identifikasi komponen-komponen ekstrak alkaloid kasar dilakukan secara
kuantitatif menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
(Shimadzu LC-6), kolom C18, detektor UV, metanol: CH 3 COOH :
aquadest = 20 : 1 : 79 (Horwitz dan Latimer, 2006). Hasil analisis
dinyatakan dalam bentuk jenis dan persentase rasio alami alkaloid
golongan campuran theobromine, teofilin, dan kafein yang terkandung
dalam biji kakao S1 dan S2.
Persiapan larutan penyangga
Pembuatan larutan buffer karbonat (pH 10, 0,1 M) dilakukan dengan
mencampurkan natrium bikarbonat (NaHCO3 ) dengan natrium karbonat
(NA2 CO3 ) (Merck) dalam 100 ml aquadest. pH diatur dengan
menambahkan natrium hidroksida NaOH (0,1 M) ke dalam larutan hingga
mencapai pH 10. pH diukur dengan pH meter (DKK-TOA HM 20J).
Persiapan sampel enamel gigi
Gigi premolar manusia bebas karies yang baru saja diekstraksi dipotong
menggunakan cakram karborundum dengan kecepatan rendah, untuk
mendapatkan bagian mahkota gigi. Setiap mahkota gigi kemudian
dipotong dari arah koronal ke apikal, tepat di tengah- tengah sisi mesial
dan distal hingga diperoleh dua permukaan email, yaitu permukaan bukal
dan lingual. Semua mahkota gigi dibersihkan dengan menggunakan 2,5%
Sodium hipoklorit (NaOCI) dan diikuti dengan alkohol 70% menggunakan
alat pembersih ultrasonik (Cole-Palmer 8891), kemudian direndam dalam
larutan garam hingga waktu percobaan.
Mahkota yang sudah jadi ditempatkan di dalam resin epoksi. Stiker
ditempelkan pada permukaan email yang paling rata, diletakkan di atas
bantalan kaca, dan kemudian cetakan cincin ditempatkan sebagai alat
cetak. Resin epoksi cair yang dicampur dengan katalis segera dituangkan
ke dalam cetakan cincin. Setelah mengeras, stiker dan cetakan cincin
dilepas dari resin, lalu permukaan enamel yang tidak tertutup resin siap
diasah dan dipoles dengan mesin gerinda dan poles (Steuers laboPol-21)
dengan menggunakan kertas amplas 2000 grit, pasta poles (DiaPro), dan
kain poles. Pengasahan dan pemolesan tidak boleh lebih dari 0,5 mm dari
ketebalan permukaan email. Setelah pemolesan selesai, diperoleh 30
permukaan enamel yang cukup lebar, rata, dan siap untuk dianalisis
(Gambar 1).
Perendaman sampel enamel gigi dalam larutan alkaloid
Serbuk alkaloid diukur menggunakan timbangan analitik (Satorus BS
124S) dan kemudian diencerkan dalam larutan penyangga dengan bantuan
alat ultrasonik (Power sonic 510) selama 10 hingga 60 menit pada suhu
antara 30 dan 37°C, hingga diperoleh konsentrasi 0,01, 0,05, dan 0, 1%
dalam konsentrasi theobromine tunggal atau campuran yang sesuai dengan
rasio alami larutan alkaloid yang terkandung dalam biji kakao S1 dan S2.
Delapan macam larutan yang diperoleh, yaitu larutan Buffer (B
- 0); teobromin tunggal 1000 mg/L (T - 0,1%), 500 mg/L (T -
0,05%) dan 100 mg / L (T - 0,01%); teofilin tunggal 1000 mg / L (TF
- 0,1%); kafein tunggal 1000 mg / L (C - 0,1%); Alkaloid campuran
dengan rasio alami S1 (T: TF: C = 6: 1: 1) dan rasio alami S2 (T: TF: C =
4: 1: 1).
Selanjutnya, spesimen enamel gigi dibagi secara acak
 Permatasari et al. 205

Tabel 1. Analisis HPLC ekstrak alkaloid biji kakao S1 dan S2 dalam bentuk rasio alamiahnya.

Sampel Konsentrasi sampel (% b/b)

Theobromine Teofilin Kafein
S1 1.35 (6) 0.13 (1) 0.21 (1)
S2 1.17 (4) 0.37 (4) 0.27 (4)

Tabel 2. Nilai kekerasan email gigi (VHN) setelah semua spesimen direndam dalam larutan uji coba beberapa dosis sesuai
dengan durasi perendaman, n = 3.

Sampel n Rata-rata ± SD Min-Max p

Penyangga - 0 - 1 jam 3 370.33 ± 8.622 361 - 378
T - 0,1% - 1 jam 3 541.33 ± 31.005 510 - 572
T - 0,1% - 30 menit 3 435.00 ± 28.618 417 - 468
T - 0,1% - 15 menit 3 431.00 ± 24.249 405 - 453
T - 0,05% - 1 jam 3 431.00 ± 12.124 417 - 438
0.000
T - 0,01% - 1 jam 3 401.33 ± 11.240 389 - 411
C - 0,1% - 1 jam 3 388.00 ± 22.716 372 - 414
TF - 0,1% - 1 jam 3 350.33 ± 23.116 336 - 377
S1 - 1 jam 3 434.67 ± 18.475 424 - 456
S2 - 1 jam 3 390.33 ± 18.475 369 - 401

menjadi 10 kelompok, yaitu B - 0 - 1 jam (Kontrol), T - 0,1% - 1 jam, T -

0,1
- 30 menit, T - 0,1% - 15 menit, T - 0,05% - 1 jam, T - 0,01% - 1 jam, TF -
0,1% 1 jam, C - 0,1% - 1 jam, S1 - 1 jam dan S2 - 1 jam. Setiap kelompok
terdiri dari tiga spesimen. Semua spesimen kemudian direndam dalam
larutan bahan percobaan sesuai dengan durasi perendaman.
Uji kekerasan enamel gigi
Uji kekerasan dilakukan dengan menggunakan indentor Vickers
(Shimadzu HMV2) dengan beban 100 g selama 10 detik dengan tiga
lekukan p a d a setiap spesimen. Hasil pengujian dinyatakan dalam VHN
(Vickers Hardness Number).
HASIL
Hasil identifikasi komponen dalam ekstrak alkaloid kasar
menggunakan HPLC secara kuantitatif dapat dilihat pada Tabel
1. Proporsi perbandingan alami (% b/b) dari kelompok
campuran alkaloid theobromine, teofilin, dan kafein yang
terkandung dalam biji kakao S1 adalah 6 : 1 : 1, dan pada biji
kakao S2 adalah 4 : 1 : 1.
Hasil uji kekerasan email gigi dapat dilihat pada Tabel
2. Normalitas data yang diuji dengan One-Sample Kolmogorov
Smirrnov menunjukkan bahwa semua data yang diperoleh
berdistribusi normal (p=0,362, p>0,05), dan data dari uji
homogenitas menggunakan one way ANOVA menunjukkan
bahwa semua data homogen (p=0,399, p>0,05). Selanjutnya,
analisis statistik dengan uji one-way ANOVA menunjukkan
bahwa terdapat perbedaan yang signifikan antara dan di dalam
kelompok penelitian (p=0,000, p<0,05).
Dari uji post hoc dengan Tuckey HSD, perbedaan antar
kelompok terlihat jelas. Ada perbedaan yang signifikan antara
kelompok T - 0,1% - 1 jam (dengan nilai VHN tertinggi)
dengan kelompok eksperimen lainnya (p = 0,000). Ada
perbedaan yang signifikan antara kelompok Buffer - 1 jam
(nilai VHN terendah) dan kelompok T - 0.1% - 1 jam (p =
0.000), T - 0.1% - 30 menit (p = 0.027),
S1 - 1 jam
(p = 0,028), T - 0,05% - 1 jam (p = 0,046) dan T - 0,1% - 15
menit (p=0,046). Meskipun nilai VHN kelompok S1 - 1 jam
berbeda secara signifikan dengan T - 0.1% - 1 jam (p
= 0.000), namun tidak berbeda secara signifikan dengan T -
0.05% - 1 jam (p = 1.000), T - 0.1% - 30 menit (p = 1.000),
dan T - 0.1% - 15 menit (p = 1.000).
Selain theobromine, dua alkaloid tunggal lainnya, yaitu
kafein dan teofilin yang terkandung dalam C - 0,1% - 1 jam dan
TF - 0,1% - 1 jam, ternyata memiliki nilai VHN yang tidak
berbeda secara signifikan dengan kelompok Buffer - 1 jam (p =
0,990) dan (p = 0,977). Kelompok T - 0,01% - 1 jam
(p=0,741) merupakan satu-satunya kelompok teobromin
tunggal yang memiliki nilai VHN yang sama dengan kelompok
Buffer - 1 jam.
DISKUSI
Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi kandungan
alkaloid dari biji kakao Indonesia (T. cacao L.) dan
pengaruhnya terhadap kekerasan email gigi melalui tindakan in
vitro. Tren melakukan intervensi minimal telah menjadi topik
yang banyak dibahas dalam bidang kedokteran gigi. Mencegah
206 J. Med. Penelitian
Tanaman.

demineralisasi enamel gigi adalah tindakan yang paling penting yang digunakan dalam
dalam upaya menghindari karies gigi.
Penelitian mengenai manfaat tanaman kakao juga
menunjukkan adanya kecenderungan masyarakat di seluruh
dunia untuk mengkonsumsi produk makanan yang lebih aman
dan sehat. Dengan slogan "back to nature", Indonesia sebagai
negara yang memiliki sumber daya alam yang kaya dan
keanekaragaman hayati terbesar kedua di dunia setelah Brazil
serta penghasil biji kakao terbesar ketiga di dunia berpeluang
untuk ikut serta dalam pengembangan tanaman obat,
khususnya pengembangan kakao sebagai tanaman obat yang
sangat bermanfaat. Indonesia kaya akan keanekaragaman
hayati dan senyawa kimia organik hasil proses metabolisme
yang terkandung di dalamnya baik dalam bentuk metabolit
primer seperti protein, karbohidrat, dan lemak yang digunakan
oleh tanaman untuk tumbuh, maupun dalam bentuk metabolit
sekunder seperti terpenoid, steroid, kumarin, flavonoid, dan
alkaloid. Senyawa metabolit sekunder merupakan senyawa
kimia organik yang umumnya memiliki kemampuan
bioaktivitas dan disintesis oleh suatu organisme tidak hanya
untuk memenuhi kebutuhan dasarnya tetapi juga untuk
mempertahankan eksistensinya dalam berinteraksi dengan
organisme lain dalam suatu ekosistem. Metabolit sekunder
yang terdapat dalam tanaman obat dapat dimanfaatkan sebagai
bahan yang bermanfaat bagi manusia (Departemen Pertanian
Republik Indonesia, 2007).
Indonesia memiliki berbagai macam tanaman obat yang
mengandung senyawa alkaloid yang bermanfaat, termasuk
yang terkandung dalam dua klon kakao dari Sulawesi Tengah.
Saat ini, Sulawesi memiliki klon kakao sendiri, yaitu Sulawesi
1 dan Sulawesi 2. Keduanya merupakan klon kakao lokal dan
hibrida hasil persilangan antara jenis Forastero dan Criollo.
Kedua jenis klon kakao ini telah dikenal dan digunakan oleh
para petani kakao selama lebih dari 30 tahun di Sulawesi
Tengah, Selatan, Tenggara dan Barat. Provinsi Sulawesi
Tengah merupakan salah satu daerah penghasil kakao terbesar
di Indonesia dalam 10 tahun terakhir (Pusat Penelitian Kopi
dan Kakao Indonesia, 2007).
Ketahanan tanaman kakao terhadap hama antara lain
dipengaruhi oleh kandungan metabolit sekunder, khususnya
alkaloid yang terdapat di dalam tanaman kakao. Theobromine,
salah satu senyawa alkaloid dalam metabolit sekunder yang
terkandung dalam biji kakao selain kafein dan teofilin
dilaporkan memiliki kemampuan untuk menguatkan email gigi
meskipun kandungannya terdapat pada produk olahan cokelat
yang telah dicampur dengan gula sehingga kontradiktif dengan
kemampuannya untuk menguatkan email gigi. Manfaat bahan
alami, seperti halnya cokelat, merupakan topik yang banyak
dibahas dan telah menjadi target dari banyak penelitian.
Pada penelitian ini, alkaloid diaplikasikan secara langsung
pada enamel gigi premolar yang bebas dari karies dan
diekstraksi untuk keperluan perawatan ortodontik. Dengan
melakukan hal ini, diharapkan efektivitas senyawa alkaloid
dalam memperkuat email gigi dapat dianalisis. Variasi
konsentrasi theobromine
dalam penelitian ini adalah 1000 mg/L (0,1%), 500 Permatasari et al. 207
mg/L (0,05%), dan 100 mg/L (0,01%) dalam konsentrat
theobromine tunggal dan campuran yang disesuaikan
dengan rasio alami campuran alkaloid theobromine, teofilin,
dan kafein yang terkandung di dalam biji kakao S1 (6:1:1)
dan S2 (4:1:1).
Alkaloid dilarutkan dalam larutan buffer karbonat dengan
pH 10, 0,1 M, dan 100 ml aquadest. Di antara beberapa
jenis buffer, ditemukan bahwa buffer karbonat dengan pH
10 adalah yang paling efektif untuk melarutkan alkaloid.
Waktu yang dibutuhkan untuk melarutkan alkaloid adalah
antara 30 dan 60 menit. Variasi dosis pada kenyataannya
masih dapat dikalikan antara kisaran 100 hingga 1000
mg/L. Pada konsentrasi di atas 1000 mg/L, buffer karbonat
tidak dapat lagi melarutkan alkaloid dengan sempurna
(tidak ada endapan). Durasi perendaman yang berbeda juga
masih dapat diperbanyak antara kisaran
15 hingga 60 menit, yang mengarah pada penggunaan
alkaloid sebagai bahan untuk dioleskan secara topikal oleh
para profesional gigi sebagai tindakan pencegahan karies
gigi.
Kekerasan email gigi dapat dianalisis dengan penguji
kekerasan Vickers. Metode ini dipilih karena sering
digunakan untuk menentukan kekerasan email gigi oleh
banyak peneliti. Semakin tinggi nilai VHN yang dihasilkan,
semakin keras email gigi. Dosis dan lama perendaman juga
berpengaruh terhadap perbedaan nilai VHN. Dosis
theobromine tunggal 0,1% (1000 mg/L) dan 0,05% (500
mg/L) dapat meningkatkan nilai VHN secara signifikan.
Tingkat theobromine 100 mg/L ternyata tidak berdampak
pada kekerasan email gigi. Perendaman email gigi selama
satu jam dapat meningkatkan nilai VHN secara signifikan
dibandingkan dengan perendaman email gigi selama 30 dan
15 menit. Dosis optimal theobromine tunggal adalah 0,1%
(1000 mg/L) dan durasi perendaman optimal adalah 1 jam.
Dosis kafein dan teofilin tunggal yang sama dengan dosis
dan durasi optimal teobromin tunggal 0,1% (1000 mg/L)
selama 1 jam tidak dapat meningkatkan nilai VHN secara
signifikan bahkan cenderung menurunkan nilai VHN. Hal
ini terbukti ketika theobromine dengan dosis dan durasi
optimal y a i t u 0,1% (1000 mg/L) selama 1 jam
dikombinasikan dengan kafein dan teofilin pada simulasi
rasio alkaloid alami kedua klon kakao, kemampuannya
untuk meningkatkan nilai VHN cenderung menurun. Pada
rasio yang terkandung dalam biji kakao klon Sulawesi 1,
yaitu rasio campuran theobromine : teofilin : kafein
= 6 : 1 : 1 = 75% : 12,5% : 12,5%, kemampuannya dalam
meningkatkan nilai VHN tidak mengalami penurunan yang
signifikan dan cenderung memiliki nilai VHN yang tidak
berbeda nyata dengan theobromine tunggal 0,05% (500
mg/L) selama 1 jam
dan 0,1% (1000 mg/L) selama 30 dan 15 menit, serta
memiliki perbedaan yang signifikan dengan buffer.
Sementara itu, pada rasio yang terkandung dalam biji kakao
klon Sulawesi 2, yaitu rasio kelompok campuran
theobromine : teofilin : kafein = 4 : 1 : 1 = 66,67%: 16.67%:
208 J. Med. Penelitian
Tanaman.

Gambar 2. Grafik uji kelarutan larutan alkaloid tunggal dan alkaloid golongan campuran dalam
buffer karbonat dengan pH 10.

16,67%, kemampuannya dalam meningkatkan nilai VHN kepentingan.

menurun secara signifikan, dengan nilai VHN yang tidak
berbeda secara signifikan dengan buffer saja.
Selain pengaruhnya terhadap nilai VHN, ternyata alkaloid
golongan campuran juga berpengaruh terhadap kecepatan
waktu pengenceran alkaloid dalam larutan. Hal ini dibuktikan
dengan hasil identifikasi larutan dengan menggunakan KCKT
dalam waktu 1 jam. Kecepatan waktu pengenceran alkaloid
campuran lebih cepat dibandingkan dengan alkaloid tunggal
theobromine saja (Gambar 2).

Kesimpulan

Penelitian laboratorium in vitro ini menunjukkan bahwa

kandungan alkaloid pada biji kakao klon Sulawesi 1 dari
Indonesia, dengan rasio alami alkaloid golongan campuran
theobromine, teofilin, dan kafein sebesar 6:1:1, dapat
meningkatkan kekerasan email gigi. Hasil ini hampir sama
dengan efek theobromine tunggal dalam konsentrasi dan durasi
tertentu. Manfaat lain dari alkaloid golongan campuran dalam
biji kakao, yaitu pengaruhnya terhadap kelarutan dan stabilitas
alkaloid dalam larutan penyangga masih perlu diteliti lebih
lanjut. Mekanisme kerja alkaloid golongan campuran dan
teobromin tunggal dalam meningkatkan kekerasan email gigi,
baik di permukaan maupun di bawah permukaan, masih harus
diteliti lebih lanjut. Tidak kalah pentingnya adalah melibatkan
peran saliva dan penurunan pH akibat asam sehingga proses
demineralisasi dan remineralisasi dapat disimulasikan s e m i r
i p mungkin dengan kondisi klinis di dalam mulut.

Konflik kepentingan

Para penulis tidak menyatakan adanya konflik