Subscribe to DeepL Pro to translate larger documents.

Visit www.DeepL.com/pro for more information.

Vol. 10(15), hal. 202-208, 17 April, 2016

DOI: 10.5897/JMPR2016.6052
Nomor Artikel: B8613E558108 ISSN
1996-0875 Jurnal Penelitian Tanaman Obat
Hak Cipta © 2016
Penulis memiliki hak cipta atas artikel ini
http://www.academicjournals.org/JMPR

Makalah Penelitian Panjang Penuh

Identifikasi alkaloid biji kakao Indonesia (Theobroma

cacao L.) dan pengaruhnya terhadap kekerasan email
gigi
Rina Permatasari1 *, Dewi Fatma Suniarti2 , Ellyza Herda3 dan Zainal Alim Mas'ud4
1Fakultas
Kedokteran Gigi, Universitas Indonesia, Jalan Salemba Raya No 4 Jakarta Pusat 10430, Indonesia.
2Departemen Biologi Oral, Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Indonesia, Jalan Salemba Raya No 4 Jakarta Pusat
10430, Indonesia.
3Departemen Ilmu Kedokteran Gigi, Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Indonesia, Jalan Salemba Raya No 4

Jakarta Pusat 10430, Indonesia.

4Departemen Kimia, Institut Pertanian Bogor, Jalan Pajajaran Bogor 16144, Indonesia.

Diterima 19 Januari 2015; Diterima 21 Maret 2016

Karies gigi masih menjadi masalah kesehatan gigi yang utama di Indonesia, dan tindakan pencegahan
perlu dilakukan untuk mengatasinya. Enamel merupakan lapisan terluar gigi yang penting untuk
melindungi gigi dari karies. Hingga saat ini, fluoride dikenal sebagai salah satu bahan penguat yang
efektif mencegah email dari karies gigi, namun efek samping fluorosis masih menjadi perdebatan
karena dosis yang menyebabkannya tidak dapat diukur. Oleh karena itu, pengembangan bahan penguat
alternatif yang relatif aman dalam upaya pencegahan karies email gigi masih diperlukan. Theobromine,
salah satu dari tiga jenis alkaloid yang terkandung dalam kakao (Theobroma cacao L.) telah dilaporkan
dapat mencegah karies dengan cara meningkatkan resistensi jaringan email gigi. Dua jenis klon lokal
biji kakao Indonesia, Sulawesi 1 (S1) dan Sulawesi 2 (S2), dianalisis karakteristik alkaloidnya dengan
menggunakan HPLC, dan pengaruhnya terhadap kekerasan email gigi ditentukan dengan menggunakan
mesin penguji kekerasan Vickers. Perbedaan nilai angka kekerasan Vickers (VHN) email gigi dianalisis
menggunakan ANOVA satu arah (p<0,05). Konsentrasi dan waktu perendaman yang optimal diperoleh
dengan membandingkan tiga jenis konsentrasi larutan Theobomine (0,1%, 0,05%, dan 0,01%) dan tiga
jenis waktu perendaman (1 jam, 30 menit, dan 15 menit). Nilai VHN tertinggi terdapat pada kelompok
teobromin tunggal 0,1% - 1 jam (p = 0,000). Nilai VHN kelompok campuran alkaloid S1 - 1 jam
menunjukkan perbedaan yang bermakna dengan kelompok buffer (kontrol negatif) (p = 0,028) dan tidak
berbeda bermakna dengan kelompok teobromin tunggal 0,05% - 1 jam (p = 1,000), 0,1% - 30 menit (p =
1,000), 0,1% - 15 menit (p = 1,000) dan kelompok teobromin tunggal 0,01% - 1 jam (p = 0685).
Kandungan alkaloid Sulawesi 1 dengan rasio campuran alkaloid theobromine : teofilin: Kafein, 6 : 1 : 1,
mempengaruhi kekerasan email gigi.

Kata-kata kunci: Alkaloid, biji kakao, karies gigi, email gigi, kekerasan.

PENDAHULUAN

Karies gigi masih menjadi masalah utama dalam bidang kesehatan gigi dan mulut di Indonesia. Persentase karies
gigi mencapai 72,1%, di mana 46,5% di antaranya adalah
karies gigi karies gigi aktif dan belum dirawat (Departemen
Kesehatan Republik Indonesia, 2008). Persentase yang
tinggi tersebut menunjukkan pentingnya pencegahan

yang dapat menjadi alternatif yang lebih baik dan
terjangkau daripada tindakan rehabilitatif dalam
menangani karies gigi di Indonesia.
Penyebab karies gigi adalah bakteri yang ganas,
karbohidrat yang dapat difermentasi, kualitas air liur, dan
kekuatan email gigi terhadap asam serta waktu. Enamel
gigi adalah lapisan terluar gigi yang melindungi mahkota
gigi dari keausan akibat pengunyahan dan sangat
penting dalam melindungi gigi dari asam. Ketahanan
enamel terhadap asam dipengaruhi oleh komposisi
kimiawi enamel gigi, yang berbeda pada setiap individu,
dan faktor-faktor lain yang dapat mempengaruhi struktur
gigi. Proses kerusakan gigi dimulai dengan
demineralisasi email yang dipicu oleh peningkatan kadar
asam dari plak bakteri (Fejerskov dan Kidd, 2008).
Enamel adalah satu-satunya jaringan gigi yang tidak
memiliki kemampuan untuk beregenerasi atau
menyembuhkan dirinya sendiri setelah terbentuk
sempurna. Hal ini menekankan pentingnya mencegah
demineralisasi email (Robinson et al., 1998).
Demineralisasi email tidak terjadi tanpa henti karena
secara fisiologis, proses remineralisasi akan mengikuti.
Sumber mineral utama untuk proses remineralisasi email
secara alami adalah kalsium dan fosfat dari air liur dalam
kondisi jenuh (Cury dan Tenuta, 2009). Penelitian
mengenai remineralisasi email telah dilakukan selama
kurang lebih 100 tahun dan telah disarankan sebagai
perawatan non-invasif untuk lesi karies gigi fase awal
(Reynolds, 2008).
Dalam 50 tahun terakhir, fluor telah diklaim efektif
dalam mencegah proses karies melalui penghambatan
demineralisasi dan meningkatkan remineralisasi dengan
membentuk fluorapatit dan kalsium fluorida serta
menghambat kerja enzim bakteri melalui aktivitas
antimikroba (Kirkham dkk., 1994; Torgay dkk., 1994;
Pearce dkk., 1995; Cury dan Tenuta, 2009). Namun,
dosis fluoridasi yang aman dan bahaya fluorosis masih
diperdebatkan. Penelitian oleh National Health and
Medical Research Center di Melbourne dan The
International Society for Fluoride Research
menyimpulkan bahwa penelitian lebih lanjut perlu
dilakukan terhadap penggunaan fluoride dalam proses
fluoridasi (National Health and Medical Research Center
di Melbourne, 1999; The International Society for Fluoride
Research, 2000). Konsensus terbaru menyatakan bahwa
fluoride tidak lagi digunakan secara sistemik melainkan
digunakan secara lokal melalui aplikasi langsung pada
gigi (Cury dan Tenuta, 2008). Selain fluoride, saat ini ada
tiga bahan lain untuk remineralisasi, yaitu kalsium fosfat
amorf yang distabilkan dengan kasein fosfopeptida (CPP-
ACP), kalsium fosfat amorf yang tidak distabilkan (ACP),
dan kaca bioaktif yang mengandung kalsium natrium
fosfosilikat. Ketiga bahan ini mengandalkan kalsium
*Penulis korespondensi. E-mail: rinapermatasari@gmail.com.
Penulis setuju bahwa artikel ini tetap memiliki akses terbuka secara permanen di bawah ketentuan Lisensi Atribusi Creative
Commons 4.0 Lisensi Internasional
Permatasari et al. 203
dan fosfat untuk meningkatkan kemampuan
remineralisasi air liur ketika terjadi demineralisasi email.
Namun, belum ada bukti klinis yang cukup untuk
mendukung mekanisme ini (Cury dan Tenuta, 2009).
Penelitian mengenai pengembangan bahan alami
yang memiliki efek anti karies dan relatif aman serta
terjangkau untuk digunakan masih terus dilakukan hingga
saat ini. Biji kakao (Theobrema cacao L.) mengandung
metabolit sekunder berupa alkaloid purin turunan
Xanthine seperti theobromine, kafein dan teofilin. Selama
beberapa tahun hingga saat ini, theobromine telah
dieksplorasi untuk menemukan manfaatnya bagi
kesehatan gigi. Sadeghpour melaporkan bahwa
theobromine dalam bubuk cokelat memiliki efek
antikariogenik yang lebih baik daripada fluoride dalam
mengurangi kelarutan email (Sadeghpour, 2007). Kargul
dkk. menyatakan bahwa kekerasan email berhubungan
dengan pertukaran mineral pada permukaan email dan
bahwa Thebromine 200mg/l memiliki efek positif terhadap
remineralisasi email (Kargul dkk., 2010). Hasil ini
didukung oleh penelitian yang dilakukan oleh Grace dkk.,
yang menyatakan bahwa theobromine merupakan bahan
yang dapat mencegah potensi karies gigi karena
kemampuannya dalam meningkatkan kekerasan email
(Grace dkk., 2012). Lebih lanjut Kargul et al. menyatakan
bahwa melalui penelitian in vitro, efektivitas theobromine
terhadap kekerasan email dan proses remineralisasi
setara dengan gel Acidulated Phosphate Fluoride (APF)
dan Casein Phosphopeptide Stabilized Amorphous
Calcium Phosphate (CCP-ACP) (Kargul et al., 2012).
Indonesia merupakan salah satu produsen biji kakao
terbesar di dunia. Provinsi Sulawesi Tengah merupakan
salah satu daerah penghasil biji kakao terbesar di
Indonesia dalam 10 tahun terakhir (Komisi Pengawas
Persaingan Usaha, 2009). Pulau Sulawesi saat ini
memiliki klon kakao lokal yang unggul, yaitu Sulawesi 1
dan Sulawesi 2. Kedua klon ini telah menunjukkan
kualitas adaptasi yang baik terhadap kondisi agroklimat
Sulawesi dan telah dibudidayakan secara luas di daerah-
daerah sentra produksi kakao di Pulau Sulawesi (Pusat
Penelitian Kopi dan Kakao Indonesia, 2007). Kualitas biji
kakao dipengaruhi oleh dua senyawa penting yang
dihasilkan dari metabolit sekunder yang terkandung di
dalam biji kakao, yaitu polifenol dan alkaloid (Bravo,
1998; Wollgast dan Anklam, 2000). Dengan ketersediaan
biji kakao yang melimpah di Indonesia, penting untuk
memanfaatkan manfaatnya secara luas di bidang
kedokteran, khususnya kesehatan gigi.
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui karakteristik
kandungan alkaloid dan manfaat klon biji kakao dari
Indonesia, Sulawesi 1 dan Sulawesi 2, terhadap
kekerasan email gigi. Sebagai bagian dari program
204 J. Med. Penelitian
Tanaman.
Gambar 1. Spesimen email gigi yang siap digunakan.
pengembangan penelitian lintas disiplin ilmu terutama
biologi mulut, kimia, dan ilmu material, penelitian ini
menetapkan khasiat dan mekanisme kerja ekstrak
alkaloid biji kakao terhadap email gigi, sehingga diperoleh
dasar ilmiah penggunaan ekstrak alkaloid biji kakao
Indonesia untuk penelitian in vivo dan uji klinis, apabila di
masa depan ekstrak tersebut diaplikasikan dalam bidang
kedokteran gigi sebagai bahan alternatif pencegah karies
gigi. Dengan adanya penelitian ini diharapkan biji kakao
dapat dimanfaatkan sebagai tanaman obat untuk
meningkatkan kesehatan gigi dan khususnya dalam
mencegah karies gigi.
BAHAN DAN METODE
Efek alkaloid biji kakao dievaluasi melalui uji in vitro. Penelitian
eksperimental laboratorium in vitro ini terdiri dari uji fitokimia untuk
mendapatkan ekstrak kasar alkaloid serta mengidentifikasi
kandungan alkaloid. Selanjutnya dilakukan simulasi larutan ekstrak
alkaloid dari dua klon biji kakao asal Indonesia, yaitu Sulawesi 1
(S1) dan Sulawesi 2 (S2) yang berasal dari Sulawesi Tengah. Efek
alkaloid biji kakao dievaluasi berdasarkan kekerasan email gigi.
Koleksi biji kakao
Biji kakao tersebut diambil dari kebun percobaan Sidondo di Palu,
Sulawesi Tengah, antara bulan September hingga November 2013.
Kepala kebun percobaan Sidondo memastikan jenisnya, di mana
nomor spesimen KW162 diidentifikasi sebagai klon Sulawesi 1 (S1)
dan nomor spesimen KW163 diidentifikasi sebagai klon Sulawesi 2
(S2). Biji kakao diekstraksi dari buah kakao yang sudah matang,
kemudian empulur yang menempel pada biji dibuang. Biji kakao
dikeringkan di bawah sinar matahari selama 6 sampai 7 hari.
Setelah kering, cangkang yang menempel pada biji kakao dibuang.
Biji kakao kemudian digiling dengan menggunakan penggiling
kering (Phillips HR-2071).
Persiapan dan analisis ekstrak kasar
Biji kakao S1 dan S2 dihilangkan lemaknya dengan metode
ekstraksi sohxlet menggunakan alat refluks dan Chiller (Eyela CA-
1111). Tahap selanjutnya adalah ekstraksi alkaloid dengan
menggunakan metode dari Association of Analytical communities
(AOAC) 2006. Setelah itu, identifikasi komponen-komponen ekstrak
alkaloid kasar dilakukan secara kuantitatif menggunakan
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) (Shimadzu LC-6), kolom
C18, detektor UV, metanol: CH3 COOH : aquadest = 20 : 1 : 79
(Horwitz dan Latimer, 2006). Hasil analisis dinyatakan dalam
bentuk jenis dan persentase rasio alami alkaloid golongan
campuran theobromine, teofilin, dan kafein yang terkandung dalam
biji kakao S1 dan S2.
Persiapan larutan penyangga
Pembuatan larutan buffer karbonat (pH 10, 0,1 M) dilakukan
dengan mencampurkan natrium bikarbonat (NaHCO3 ) dengan
natrium karbonat (NA2 CO3 ) (Merck) dalam 100 ml aquadest. pH
diatur dengan menambahkan natrium hidroksida NaOH (0,1 M) ke
dalam larutan hingga mencapai pH 10. pH diukur dengan pH meter
(DKK-TOA HM 20J).
Persiapan sampel enamel gigi
Gigi premolar manusia bebas karies yang baru saja diekstraksi
dipotong menggunakan cakram karborundum dengan kecepatan
rendah, untuk mendapatkan bagian mahkota gigi. Setiap mahkota
gigi kemudian dipotong dari arah koronal ke apikal, tepat di tengah-
tengah sisi mesial dan distal hingga diperoleh dua permukaan
email, yaitu permukaan bukal dan lingual. Semua mahkota gigi
dibersihkan dengan menggunakan 2,5% Sodium hipoklorit (NaOCI)
dan diikuti dengan alkohol 70% menggunakan alat pembersih
ultrasonik (Cole-Palmer 8891), kemudian direndam dalam larutan
garam hingga waktu percobaan.
Mahkota yang sudah jadi ditempatkan di dalam resin epoksi.
Stiker ditempelkan pada permukaan email yang paling rata,
diletakkan di atas bantalan kaca, dan kemudian cetakan cincin
ditempatkan sebagai alat cetak. Resin epoksi cair yang dicampur
dengan katalis segera dituangkan ke dalam cetakan cincin. Setelah
mengeras, stiker dan cetakan cincin dilepas dari resin, lalu
permukaan enamel yang tidak tertutup resin siap diasah dan
dipoles dengan mesin gerinda dan poles (Steuers laboPol-21)
dengan menggunakan kertas amplas 2000 grit, pasta poles
(DiaPro), dan kain poles. Pengasahan dan pemolesan tidak boleh
lebih dari 0,5 mm dari ketebalan permukaan email. Setelah
pemolesan selesai, diperoleh 30 permukaan enamel yang cukup
lebar, rata, dan siap untuk dianalisis (Gambar 1).
Perendaman sampel enamel gigi dalam larutan alkaloid
Serbuk alkaloid diukur menggunakan timbangan analitik (Satorus
BS 124S) dan kemudian diencerkan dalam larutan penyangga
dengan bantuan alat ultrasonik (Power sonic 510) selama 10
hingga 60 menit pada suhu antara 30 dan 37°C, hingga diperoleh
konsentrasi 0,01, 0,05, dan 0, 1% dalam konsentrasi theobromine
tunggal atau campuran yang sesuai dengan rasio alami larutan
alkaloid yang terkandung dalam biji kakao S1 dan S2.
Delapan macam larutan yang diperoleh, yaitu larutan Buffer (B
- 0); teobromin tunggal 1000 mg/L (T - 0,1%), 500 mg/L (T -
0,05%) dan 100 mg / L (T - 0,01%); teofilin tunggal 1000 mg / L (TF
- 0,1%); kafein tunggal 1000 mg / L (C - 0,1%); Alkaloid campuran
dengan rasio alami S1 (T: TF: C = 6: 1: 1) dan rasio alami S2 (T:
TF: C = 4: 1: 1).
Selanjutnya, spesimen enamel gigi dibagi secara acak
 Permatasari et al. 205

Tabel 1. Analisis HPLC ekstrak alkaloid biji kakao S1 dan S2 dalam bentuk rasio
alamiahnya.

Konsentrasi sampel (% b/b)

Sampel
Theobromine Teofilin Kafein
S1 1.35 (6) 0.13 (1) 0.21 (1)
S2 1.17 (4) 0.37 (4) 0.27 (4)

Tabel 2. Nilai kekerasan email gigi (VHN) setelah semua spesimen direndam dalam larutan uji coba beberapa
dosis sesuai dengan durasi perendaman, n = 3.

Sampel n Rata-rata ± SD Min-Max p

Penyangga - 0 - 1 jam 3 370.33 ± 8.622 361 - 378
T - 0,1% - 1 jam 3 541.33 ± 31.005 510 - 572
T - 0,1% - 30 menit 3 435.00 ± 28.618 417 - 468
T - 0,1% - 15 menit 3 431.00 ± 24.249 405 - 453
T - 0,05% - 1 jam 3 431.00 ± 12.124 417 - 438
0.000
T - 0,01% - 1 jam 3 401.33 ± 11.240 389 - 411
C - 0,1% - 1 jam 3 388.00 ± 22.716 372 - 414
TF - 0,1% - 1 jam 3 350.33 ± 23.116 336 - 377
S1 - 1 jam 3 434.67 ± 18.475 424 - 456
S2 - 1 jam 3 390.33 ± 18.475 369 - 401

menjadi 10 kelompok, yaitu B - 0 - 1 jam (Kontrol), T - 0,1% - 1 jam,
T - 0,1
- 30 menit, T - 0,1% - 15 menit, T - 0,05% - 1 jam, T - 0,01% - 1 jam,
TF -
0,1% 1 jam, C - 0,1% - 1 jam, S1 - 1 jam dan S2 - 1 jam. Setiap
kelompok terdiri dari tiga spesimen. Semua spesimen kemudian
direndam dalam larutan bahan percobaan sesuai dengan durasi
perendaman.
Uji kekerasan enamel gigi
Uji kekerasan dilakukan dengan menggunakan indentor Vickers
(Shimadzu HMV2) dengan beban 100 g selama 10 detik dengan
tiga lekukan p a d a setiap spesimen. Hasil pengujian dinyatakan
dalam VHN (Vickers Hardness Number).
HASIL
Hasil identifikasi komponen dalam ekstrak alkaloid kasar
menggunakan HPLC secara kuantitatif dapat dilihat pada
Tabel 1. Proporsi perbandingan alami (% b/b) dari
kelompok campuran alkaloid theobromine, teofilin, dan
kafein yang terkandung dalam biji kakao S1 adalah 6 : 1 :
1, dan pada biji kakao S2 adalah 4 : 1 : 1.
Hasil uji kekerasan email gigi dapat dilihat pada Tabel
2. Normalitas data yang diuji dengan One-Sample
Kolmogorov Smirrnov menunjukkan bahwa semua data
yang diperoleh berdistribusi normal (p=0,362, p>0,05),
dan data dari uji homogenitas menggunakan one way
ANOVA menunjukkan bahwa semua data homogen
(p=0,399, p>0,05). Selanjutnya, analisis statistik dengan
uji one-way ANOVA menunjukkan bahwa terdapat
perbedaan yang signifikan antara dan di dalam kelompok
penelitian (p=0,000, p<0,05).
Dari uji post hoc dengan Tuckey HSD, perbedaan antar
kelompok terlihat jelas. Ada perbedaan yang signifikan
antara kelompok T - 0,1% - 1 jam (dengan nilai VHN
tertinggi) dengan kelompok eksperimen lainnya (p =
0,000). Ada perbedaan yang signifikan antara kelompok
Buffer - 1 jam (nilai VHN terendah) dan kelompok T -
0.1% - 1 jam (p = 0.000), T - 0.1% - 30 menit (p = 0.027),
S1 - 1 jam
(p = 0,028), T - 0,05% - 1 jam (p = 0,046) dan T - 0,1% - 15
menit (p=0,046). Meskipun nilai VHN kelompok S1 - 1
jam berbeda secara signifikan dengan T - 0.1% - 1 jam (p
= 0.000), namun tidak berbeda secara signifikan dengan
T - 0.05% - 1 jam (p = 1.000), T - 0.1% - 30 menit (p =
1.000), dan T - 0.1% - 15 menit (p = 1.000).
Selain theobromine, dua alkaloid tunggal lainnya, yaitu
kafein dan teofilin yang terkandung dalam C - 0,1% - 1
jam dan TF - 0,1% - 1 jam, ternyata memiliki nilai VHN
yang tidak berbeda secara signifikan dengan kelompok
Buffer - 1 jam (p = 0,990) dan (p = 0,977). Kelompok T -
0,01% - 1 jam (p=0,741) merupakan satu-satunya
kelompok teobromin tunggal yang memiliki nilai VHN
yang sama dengan kelompok Buffer - 1 jam.
DISKUSI
Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi kandungan
alkaloid dari biji kakao Indonesia (T. cacao L.) dan
pengaruhnya terhadap kekerasan email gigi melalui
tindakan in vitro. Tren melakukan intervensi minimal telah
menjadi topik yang banyak dibahas dalam bidang
kedokteran gigi. Mencegah
206 J. Med. Penelitian
Tanaman.

demineralisasi enamel gigi adalah tindakan yang paling yang digunakan dalam
penting dalam upaya menghindari karies gigi.
Penelitian mengenai manfaat tanaman kakao juga
menunjukkan adanya kecenderungan masyarakat di
seluruh dunia untuk mengkonsumsi produk makanan
yang lebih aman dan sehat. Dengan slogan "back to
nature", Indonesia sebagai negara yang memiliki sumber
daya alam yang kaya dan keanekaragaman hayati
terbesar kedua di dunia setelah Brazil serta penghasil biji
kakao terbesar ketiga di dunia berpeluang untuk ikut
serta dalam pengembangan tanaman obat, khususnya
pengembangan kakao sebagai tanaman obat yang
sangat bermanfaat. Indonesia kaya akan
keanekaragaman hayati dan senyawa kimia organik hasil
proses metabolisme yang terkandung di dalamnya baik
dalam bentuk metabolit primer seperti protein,
karbohidrat, dan lemak yang digunakan oleh tanaman
untuk tumbuh, maupun dalam bentuk metabolit sekunder
seperti terpenoid, steroid, kumarin, flavonoid, dan
alkaloid. Senyawa metabolit sekunder merupakan
senyawa kimia organik yang umumnya memiliki
kemampuan bioaktivitas dan disintesis oleh suatu
organisme tidak hanya untuk memenuhi kebutuhan
dasarnya tetapi juga untuk mempertahankan
eksistensinya dalam berinteraksi dengan organisme lain
dalam suatu ekosistem. Metabolit sekunder yang
terdapat dalam tanaman obat dapat dimanfaatkan
sebagai bahan yang bermanfaat bagi manusia
(Departemen Pertanian Republik Indonesia, 2007).
Indonesia memiliki berbagai macam tanaman obat
yang mengandung senyawa alkaloid yang bermanfaat,
termasuk yang terkandung dalam dua klon kakao dari
Sulawesi Tengah. Saat ini, Sulawesi memiliki klon kakao
sendiri, yaitu Sulawesi 1 dan Sulawesi 2. Keduanya
merupakan klon kakao lokal dan hibrida hasil persilangan
antara jenis Forastero dan Criollo. Kedua jenis klon
kakao ini telah dikenal dan digunakan oleh para petani
kakao selama lebih dari 30 tahun di Sulawesi Tengah,
Selatan, Tenggara dan Barat. Provinsi Sulawesi Tengah
merupakan salah satu daerah penghasil kakao terbesar
di Indonesia dalam 10 tahun terakhir (Pusat Penelitian
Kopi dan Kakao Indonesia, 2007).
Ketahanan tanaman kakao terhadap hama antara lain
dipengaruhi oleh kandungan metabolit sekunder,
khususnya alkaloid yang terdapat di dalam tanaman
kakao. Theobromine, salah satu senyawa alkaloid dalam
metabolit sekunder yang terkandung dalam biji kakao
selain kafein dan teofilin dilaporkan memiliki kemampuan
untuk menguatkan email gigi meskipun kandungannya
terdapat pada produk olahan cokelat yang telah dicampur
dengan gula sehingga kontradiktif dengan
kemampuannya untuk menguatkan email gigi. Manfaat
bahan alami, seperti halnya cokelat, merupakan topik
yang banyak dibahas dan telah menjadi target dari
banyak penelitian.
Pada penelitian ini, alkaloid diaplikasikan secara
langsung pada enamel gigi premolar yang bebas dari
karies dan diekstraksi untuk keperluan perawatan
ortodontik. Dengan melakukan hal ini, diharapkan
efektivitas senyawa alkaloid dalam memperkuat email
gigi dapat dianalisis. Variasi konsentrasi theobromine
 Permatasari et al. 207
dalam penelitian ini adalah 1000 mg/L (0,1%), 500
mg/L (0,05%), dan 100 mg/L (0,01%) dalam
konsentrat theobromine tunggal dan campuran yang
disesuaikan dengan rasio alami campuran alkaloid
theobromine, teofilin, dan kafein yang terkandung di
dalam biji kakao S1 (6:1:1) dan S2 (4:1:1).
Alkaloid dilarutkan dalam larutan buffer karbonat
dengan pH 10, 0,1 M, dan 100 ml aquadest. Di antara
beberapa jenis buffer, ditemukan bahwa buffer
karbonat dengan pH 10 adalah yang paling efektif
untuk melarutkan alkaloid. Waktu yang dibutuhkan
untuk melarutkan alkaloid adalah antara 30 dan 60
menit. Variasi dosis pada kenyataannya masih dapat
dikalikan antara kisaran 100 hingga 1000 mg/L. Pada
konsentrasi di atas 1000 mg/L, buffer karbonat tidak
dapat lagi melarutkan alkaloid dengan sempurna
(tidak ada endapan). Durasi perendaman yang
berbeda juga masih dapat diperbanyak antara kisaran
15 hingga 60 menit, yang mengarah pada
penggunaan alkaloid sebagai bahan untuk dioleskan
secara topikal oleh para profesional gigi sebagai
tindakan pencegahan karies gigi.
Kekerasan email gigi dapat dianalisis dengan
penguji kekerasan Vickers. Metode ini dipilih karena
sering digunakan untuk menentukan kekerasan email
gigi oleh banyak peneliti. Semakin tinggi nilai VHN
yang dihasilkan, semakin keras email gigi. Dosis dan
lama perendaman juga berpengaruh terhadap
perbedaan nilai VHN. Dosis theobromine tunggal
0,1% (1000 mg/L) dan 0,05% (500 mg/L) dapat
meningkatkan nilai VHN secara signifikan. Tingkat
theobromine 100 mg/L ternyata tidak berdampak pada
kekerasan email gigi. Perendaman email gigi selama
satu jam dapat meningkatkan nilai VHN secara
signifikan dibandingkan dengan perendaman email
gigi selama 30 dan 15 menit. Dosis optimal
theobromine tunggal adalah 0,1% (1000 mg/L) dan
durasi perendaman optimal adalah 1 jam.
Dosis kafein dan teofilin tunggal yang sama dengan
dosis dan durasi optimal teobromin tunggal 0,1%
(1000 mg/L) selama 1 jam tidak dapat meningkatkan
nilai VHN secara signifikan bahkan cenderung
menurunkan nilai VHN. Hal ini terbukti ketika
theobromine dengan dosis dan durasi optimal y a i t u
0,1% (1000 mg/L) selama 1 jam dikombinasikan
dengan kafein dan teofilin pada simulasi rasio alkaloid
alami kedua klon kakao, kemampuannya untuk
meningkatkan nilai VHN cenderung menurun. Pada
rasio yang terkandung dalam biji kakao klon Sulawesi
1, yaitu rasio campuran theobromine : teofilin : kafein
= 6 : 1 : 1 = 75% : 12,5% : 12,5%, kemampuannya
dalam meningkatkan nilai VHN tidak mengalami
penurunan yang signifikan dan cenderung memiliki
nilai VHN yang tidak berbeda nyata dengan
theobromine tunggal 0,05% (500 mg/L) selama 1 jam
dan 0,1% (1000 mg/L) selama 30 dan 15 menit, serta
memiliki perbedaan yang signifikan dengan buffer.
Sementara itu, pada rasio yang terkandung dalam biji
kakao klon Sulawesi 2, yaitu rasio kelompok
campuran theobromine : teofilin : kafein = 4 : 1 : 1 =
66,67%: 16.67%:
208 J. Med. Penelitian
Tanaman.

Gambar 2. Grafik uji kelarutan larutan alkaloid tunggal dan alkaloid golongan campuran
dalam buffer karbonat dengan pH 10.

16,67%, kemampuannya dalam meningkatkan nilai VHN kepentingan.

menurun secara signifikan, dengan nilai VHN yang tidak
berbeda secara signifikan dengan buffer saja.
Selain pengaruhnya terhadap nilai VHN, ternyata
alkaloid golongan campuran juga berpengaruh terhadap
kecepatan waktu pengenceran alkaloid dalam larutan.
Hal ini dibuktikan dengan hasil identifikasi larutan dengan
menggunakan KCKT dalam waktu 1 jam. Kecepatan
waktu pengenceran alkaloid campuran lebih cepat
dibandingkan dengan alkaloid tunggal theobromine saja
(Gambar 2).

Kesimpulan

Penelitian laboratorium in vitro ini menunjukkan bahwa

kandungan alkaloid pada biji kakao klon Sulawesi 1 dari
Indonesia, dengan rasio alami alkaloid golongan
campuran theobromine, teofilin, dan kafein sebesar 6:1:1,
dapat meningkatkan kekerasan email gigi. Hasil ini
hampir sama dengan efek theobromine tunggal dalam
konsentrasi dan durasi tertentu. Manfaat lain dari alkaloid
golongan campuran dalam biji kakao, yaitu pengaruhnya
terhadap kelarutan dan stabilitas alkaloid dalam larutan
penyangga masih perlu diteliti lebih lanjut. Mekanisme
kerja alkaloid golongan campuran dan teobromin tunggal
dalam meningkatkan kekerasan email gigi, baik di
permukaan maupun di bawah permukaan, masih harus
diteliti lebih lanjut. Tidak kalah pentingnya adalah
melibatkan peran saliva dan penurunan pH akibat asam
sehingga proses demineralisasi dan remineralisasi dapat
disimulasikan s e m i r i p mungkin dengan kondisi klinis
di dalam mulut.

Konflik kepentingan

Para penulis tidak menyatakan adanya konflik

REFERENSI Permatasari et al. 209

Bravo L (1998). Polifenol: Kimia, sumber makanan, metabolisme,

dan signifikansi nutrisi. Nutr. Rev. 56:317-333.
Komisi Pengawas Persaingan Usaha (2009). Kajian Industri dan
Perdagangan Kakao. Jakarta. Tersedia di:
http://www.kppu.go.id/docs/Positioning_Paper/positioning_paper_k
ak ao.pdf
Cury JA, Tenuta LMA (2008). Bagaimana cara mempertahankan
konsentrasi fluoride kariostatik di lingkungan mulut. Adv. Dent. Res.
20(1):13-16.
Cury JA, Tenuta, LMA (2009). Reminera-lisasi enamel:
mengendalikan penyakit karies atau mengobati lesi karies dini?
Braz. Oral Res. 23(1):23-30.
Fejerskov O, Kidd EAM (2008). Karies gigi, penyakit dan
penatalaksanaan klinisnya. Edisi ke-2. Jakarta: EGC.
Munksgaard, Blackwell. 480p.
Grace S, Rina P, Nina W (2012). Efek teobromin pada kekerasan
mikro permukaan email: In Vitro. J. Kedokteran Gigi. Indonesia.
19(2):32-36.
Horwitz W, Latimer GW (2006). Metode Analisis Resmi AOAC
Internasional. AOAC International. 31:17.
Pusat Penelitian Kopi dan Kakao Indonesia (2007). Teknologi Pra-
Panen Kakao. Agric. Res. Dev. News. 29(1):14-16.
Kargul B, Özcan M, Peker S, Nakamoto T, Simmon WB, Falster AU
(2010). Pengaruh theobromine pada kekerasan permukaan
email: Sebuah studi in vitro. Program Pendahuluan untuk Sidang
Umum IADR.
Kargul B, Nakamoto T, Simmon WB, Falster AU (2012). Potensi
remineralisasi theobromine, APF Gel, dan CCP-ACP: Studi
percontohan. Program Pendahuluan untuk Sidang Umum IADR.
Kirkham J, Robinson C, Strong M, Shore RC (1994). Pengaruh
frekuensi dan durasi paparan asam pada perilaku
demineralisasi/remineralisasi email manusia secara in vitro.
Caries Res. 28:9-13.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia (2008). Riset
Kesehatan Dasar (Riskesdas) Indonesia 2007. Jakarta.
Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. Indonesia. Tersedia di: https://www.k4health.org/sites/default/files/laporanNasional%20Ris
Departemen Pertanian Republik Indonesia (2007). Prospek dan
arah pengembangan agribisnis tanaman obat. 2ed. Jakarta. Tersedia di: http://www.litbang.pertanian.go.id/special/publikasi/doc_perkebunan/t anaman
Pusat Penelitian Kesehatan dan Kedokteran Nasional (1999).
Tinjauan fluoridasi air dan asupan fluoride dari suplemen fluoride
yang dapat dikonsumsi. Tersedia di:
210 J. Med. Penelitian
Tanaman.
http://www.ada.org.au/app_cmslib/media/lib/0703/m50958_v1_nhmrc
%20fluoride.pdf
Pearce EIF, Coole GE, Larsen MJ (1995). Distribusi fluorida dalam
email manusia yang karies. J. Dent. Res. 11:1775-1762.
Reynolds EC (2008). Sistem remineralisasi berbasis kalsium fosfat:
bukti ilmiah? Aust. Dent. J. 53(3):268-273.
Robinson C, Brookes SJ, Shore RC, Kirkham J (1998). Matriks email
yang sedang berkembang: sifat dan fungsi. Eur. J. Ilmu Oral.
106(Suppl. 1):282-291.
Sadeghpour A (2007). Analisis jaringan saraf theobromine vs fluoride
pada permukaan email gigi manusia: Sebuah studi kasus
eksperimental dengan implikasi yang kuat untuk produksi lini baru
pasta gigi berbasis non-fluoride yang revolusioner dan alami. Diss.
Abstr Int. 68(7):B150.
Masyarakat Internasional Untuk Penelitian Fluorida (2000). Suplemen
Khusus Abstrak Makalah Yang Akan Dipresentasikan Pada
Konferensi XXIII Szczecin. Poland Fluoride 33(1):S1-S39.
Torgay BY, Ölmez S, Çelik H, Çehreli Z (1994). Evaluasi in vivo efek
pernis fluoride pada kolonisasi bakteri pada enamel gigi
menggunakan pemindaian mikroskop elektron. J Islamic Acad. Sci.
7(1):49-55.
Wollgast J, Anklam E (2000). Tinjauan polifenol Theobroma cacao:
perubahan komposisi selama pembuatan cokelat dan metodologi
untuk identifikasi dan kuantifikasi. Food Res. Int. 33:423-447.