Subscribe to DeepL Pro to translate larger documents.
Visit www.DeepL.com/pro for more information.
molekul
Artikel
Karakterisasi Fitokimia Akar Chamomile (Matricaria
recutita L.) dan Evaluasi Potensi Antioksidan dan
Antibakterinya
Lilo K. Mailänder 1,2 , Peter Lorenz
dan Dietmar R. Kammerer 1,*,†
Kutipan: Mailänder, L.K.; Lorenz, P.;
Bitterling, H.; Stintzing, F.C.; Daniels,
R.; Kammerer, D.R. Karakterisasi
Fitokimia Akar Kamomil (Matricaria
recutita L.) dan Evaluasi Potensi
Antioksidan dan Antibakterinya.
Molecules 2022, 27, 8508.
https://doi.org/
10.3390/molecules27238508
Penyunting Akademis: Simona
Fabroni, Krystian Marszałek dan
Aldo Todaro
Diterima: 7 Oktober 2022
Diterima: 24 November 2022
Diterbitkan: 3 Desember 2022
Catatan Penerbit: MDPI tetap netral
t e r h a d a p klaim yurisdiksi dalam
peta yang dipublikasikan dan afiliasi
kelembagaan.
Hak Cipta: © 2022 oleh penulis.
Pemegang lisensi MDPI, Basel,
Swiss. Artikel ini adalah artikel akses
terbuka yang didistribusikan di
bawah syarat dan ketentuan lisensi
Creative Commons Atribusi (CC
BY) (https://
creativecommons.org/licenses/by/
4.0/).
1
, Hannes Bitterling 1, Florian C. Stintzing 1,†
, Rolf Daniels 2,†
Abstrak: Matricaria recutita L., chamomile Jerman, adalah salah satu tanaman obat yang paling banyak
digunakan, yang kemanjurannya telah terbukti dalam berbagai penelitian. Namun, sejauh ini hanya
sedikit yang tertarik dengan akarnya, karena sebagian besar bagian tanaman di atas tanah
digunakan untuk tujuan pengobatan. Untuk memperluas pengetahuan tentang akar chamomile,
karakterisasi fitokimia yang mendalam dilakukan bersama dengan skrining bioaktivitas ekstrak
akar yang sesuai. Sementara konstituen yang mudah menguap seperti chamomillol dan polin
terdeteksi menggunakan GC-MS, analisis HPLC-MSn mengungkapkan adanya empat glikosida
kumarin, lebih dari sepuluh ester asam fenolat, dan lima gliseroglikolipid. Selanjutnya, aktivitas
antioksidan dari ekstrak dievaluasi. Ekstrak polar menunjukkan nilai IC50 berkisar antara 13 hingga
57 µg/mL dalam uji pemulungan radikal DPPH, yang berada dalam kisaran yang sama seperti
yang dilaporkan untuk ekstrak bunga chamomile. Selain itu, potensi pembersihan radikal
superoksida dan efek antibakteri ringan terhadap S. aureus dan B. subtilis juga ditunjukkan. Selain
itu, untuk menilai variasi antar spesies pada akar chamomile, ekstrak M. recutita dibandingkan
dengan
M. discoidea DC. Menariknya, yang terakhir ini mengungkapkan aktivitas antioksidan yang lebih
kuat. Hasil yang dipresentasikan bertujuan untuk memvalorisasi akar chamomile, yang
sebelumnya dibuang sebagai produk sampingan dari produksi bunga chamomile, sebagai sumber
fitokimia bioaktif yang berkelanjutan.
1. Pendahuluan
Matricaria recutita L., juga dikenal sebagai chamomile Jerman, adalah tanaman tahunan
yang termasuk dalam keluarga Asteraceae (Compositae). Tanaman ini memiliki bunga
berwarna kuning-putih, daunnya bersegi dua hingga tiga, dan dapat dibedakan dari
spesies terkait dengan kepala bunganya yang berongga. Berasal dari Eropa Selatan dan
Timur, chamomile sekarang tersebar luas dari Eropa ke India, hingga ke Amerika serta di
Australia dan Selandia Baru [1,2]. Chamomile adalah salah satu tanaman obat yang
paling penting
[3] dengan jumlah produksi 7000-8000 ton per tahun [2]. Untuk alasan ini, profil
metabolit sekunder dari bagian udara, terutama bunga, beserta aktivitas antioksidan,
antimikroba, dan farmakologisnya telah dipelajari secara ekstensif secara in vitro dan in
vivo dan tetap menjadi topik penelitian saat ini [4,5]. Infus chamomile adalah salah satu
teh herbal dengan bahan tunggal yang paling banyak dikonsumsi [6] dan, menurut
monografi European Medicines Agency, digunakan untuk pengobatan gangguan
pencernaan, mulut, tenggorokan, dan kulit, luka ringan, atau masuk angin [7]. Efek
telah terbukti menunjukkan efek kardioprotektif, neuroprotektif, antispasmodik, dan
antitumor [5]. Minyak bunga esensial berwarna biru tua mengandung chamazulene, yang
berasal dari matrikin lakton seskuiterpen selama penyulingan. Selain itu, seskuiterpenoid
seperti farnesene, α-bisabolol dan oksidanya serta turunan asetilena seperti poliena telah
terdeteksi dalam minyak atsiri. Ini memiliki aktivitas spasmolitik, anti-inflamasi dan
antiseperti dan sering digunakan untuk tujuan kosmetik [1]. Bergantung pada rasio α-
bisabolol dan oksida bisabolol A dan B dalam minyak bunga esensial, kultivar
chamomile ditugaskan ke kemotipe yang berbeda [9].
Selain M. recutita, spesies Matricaria lainnya kadang-kadang digunakan dalam pengobatan
tradisional. Misalnya, bunga M. discoidea (gulma nanas) memiliki bau kamomil yang
kuat, tetapi tidak memiliki kelopak bunga berwarna putih. Bagian udara dari spesies ini
mengandung sekitar 10% polifenol, antara lain turunan asam hidroksisinamat, dan
kumarin herniarin dan umbellifer- satu [10]. β-Farnesene, geranyl-isovalerat dan (Z)-
spiroether adalah komponen utama minyak atsiri M. discoidea [11]. Cantrell et al.
menunjukkan aktivitas pengusir serangga yang kuat [12]. M. aurea (chamomile emas)
adalah spesies lain yang digunakan untuk tujuan pengobatan, yang ekstraknya
menunjukkan aktivitas antioksidan, menghambat pertumbuhan Bacillus subtilis dan
Staphylococcus aureus, dan bahkan menunjukkan aktivitas antiproliferasi pada sel
kanker [13]. Terakhir, M. pubescens (chamomile berbulu), yang digunakan dalam
pengobatan tradisional Aljazair, mengandung flavonoid yang mirip dengan M. recutita.
Ini menunjukkan efek perlindungan terhadap dosis toksik ringan dari sinar UV-A pada
fibroblas 3T3 [14].
Pada abad ke-1 Masehi, Dioscorides merekomendasikan tidak hanya ramuan bunga
chamomile, tetapi juga ramuan dan akarnya sebagai tonik dan untuk mengobati
gangguan saluran kemih, yaitu peradangan, kejang, bisul. Aplikasi topikal termasuk
pengobatan luka dan luka bakar. Selain itu, Dioscorides meresepkan supositoria
chamomile untuk melawan demam berulang [15,16]. Saat ini, ekstrak fermentasi
encer yang dibuat dari akar chamomile masih digunakan dalam pengobatan
komplementer. Indikasinya mirip dengan preparat bunga, yaitu pengobatan kram,
masalah pencernaan dan empedu, perut kembung, kram menstruasi, masalah tumbuh
gigi, dan gangguan tidur pada anak kecil [17].
Karena penggunaannya yang terbatas, hanya sedikit penelitian tentang akar
chamomile yang telah dilaporkan. Investigasi awal menunjukkan bahwa mereka
mengandung 0,04-0,09% minyak atsiri, yang terlokalisasi dalam sel minyak di korteks
akar [16,18,19]. Minyak kuning pucat ini sebagian besar diperoleh dengan distilasi uap
dalam alat tipe Clevenger. Ini mengandung hingga 45% β-farnesene dan berbagai
seskuiterpen lainnya, tetapi tidak mengandung bisabolol dan chamazulene [19,20].
Kandungan chamomillol dalam minyak akar esensial meningkat dari tahap pertumbuhan
awal hingga akhir pembungaan, meskipun kandungan chamomillaester dan spiroether menurun
[18]. Dalam ekstrak akar chamomile encer, turunan asam sinamat dan benzoat seperti
asam klorogenat, kafeat, ferulat, protokatekuat, vanilat, dan asam syringic terdeteksi oleh HPLC-
MS dalam konsentrasi
1,5-20,4 µg-g -1 berat kering [21]. Investigasi lebih lanjut terhadap akar chamomile telah difokuskan
pada
tentang dampak faktor stres abiotik dari perspektif pertanian. Sebagai contoh,
kekurangan nitrogen meningkatkan pertumbuhan akar dan akumulasi fenolik total karena
menekan kandungan protein terlarut [22]. Chamomile adalah akumulator logam berat
yang dikenal. Meskipun akumulasi tembaga menyebabkan stres oksidatif dan
menyebabkan peningkatan konsentrasi malondialdehida di akar [23,24], kamomil toleran
terhadap konsentrasi kadmium yang tinggi [25]. Investigasi lebih lanjut terhadap akar
chamomile, terutama karakterisasi fitokimia yang komprehensif dan evaluasi profil
bioaktivitasnya, belum dilakukan. Oleh karena itu, penelitian ini difokuskan pada
skrining GC-MS dan HPLC-DAD-MSn yang luas terhadap metabolit sekunder dalam ekstrak akar
M. recutita dan M. discoidea yang bersifat polar dan semi polar. Selanjutnya, potensi
antioksidan serta aktivitas antibakteri terhadap bakteri Gram positif B. subtilis dan S.
aureus dinilai.

2. Hasil dan Pembahasan

2.1. Metabolit Sekunder pada Akar M. recutita pada Berbagai Tahap Perkembangan
residu kental, yang dilarutkan dalam kloroform pada konsentrasi 5 mg / mL untuk
analisis langsung, atau diderivatisasi untuk mendapatkan trimetilsilil ester. Profil
senyawa metabolit sekunder yang mudah menguap identik dalam minyak akar esensial
dan ekstrak DCM. Sebagian besar konstituen yang mudah menguap ditetapkan oleh
analisis GC-MS melalui waktu retensi dan data MS, yang dibandingkan dengan basis
data NIST (National Institute of Standards and Technology, faktor kecocokan> 800).
Kromatogram tipikal bersama dengan senyawa yang ditugaskan ditampilkan pada
Gambar 1 dengan data spektrum massa yang sesuai ditampilkan pada Tabel 1. Gambar 2
mengilustrasikan struktur perwakilan khas dari ekstrak tersebut.

Tabel 1. Senyawa volatil dalam ekstrak DCM akar M. recutita yang ditetapkan berdasarkan
karakteristik GC-MS. Puncak dasar ditampilkan dalam huruf tebal.

tR
MW
Tidak. Senyawa (menit) m/z (M+ Int. %)
(g/mol)
1 Berkheyaradulene 17.9 204 204 (15%), 189, 162, 147, 134, 119
2 β-Farnesene 19.2 204 204 (10%), 161, 133, 120, 107, 93, 79, 69, 55
3 Î ± -Farnesene 20.8 204 204 (1%), 161, 119, 107, 93, 79, 69, 55
4 Neryl-isovalerat 23.6 238 238 (1%), 136, 121, 107, 93, 85, 69, 57
5 Chamomillol 25.1 222 222 (10%), 204, 179, 161, 119, 105, 81
6 Tidak 30.7 220 220 (100%), 190, 178, 136
teridentifikasi
7 cis-Spiroether 31.6 200 200 (100%), 170, 157, 128, 115,76
8 trans-Spiroether 31.8 200 200 (100%), 170, 157, 128, 115,76
9Asam palmitat * 34.9 328 328 (20%), 313, 145, 161, 117, 73, 55
10 Chamomillaester I 35.6 228 228 (20%), 168, 153, 141, 128, 115, 91, 77
11 Chamomillaester II 37.2 228 228 (25%), 168, 152, 141, 128, 115, 91, 77
12Asam linoleat * 38.7 352 352 (10%), 337, 262, 220, 129, 81, 73, 67
13Asam linolenat * 38.8 350 350 (10%), 335, 157, 129, 108, 95, 73, 55
* Trimetilsilil ester.

Seskuiterpen berkheyaradulene (senyawa 1), β-farnesene (2) dan α-farnesene

(3) terdeteksi selain neryl-isovalerat (4) dan jejak terpen lainnya. Terpenoid lazim
ditemukan dalam kerajaan tanaman, di mana mereka berfungsi sebagai hormon tanaman
dan molekul pemberi sinyal. Sebagai contoh, mereka sering dilepaskan pada saat
kerusakan jaringan tanaman untuk menginduksi mekanisme pertahanan. Komposisi dan
konsentrasi terpenoid dapat bervariasi secara substansial tergantung pada tahap
pertumbuhan [26]. Jumlah farnesene yang tinggi mungkin disebabkan oleh pemanenan
dini [4]. Memang, kami menemukan bahwa konsentrasi farnesene dalam ekstrak DCM
menurun sekitar setengahnya dari bulan Maret hingga Juni. Chamomillol (5)
diidentifikasi berdasarkan perbandingan pola fragmentasinya dengan yang dipublikasikan
oleh Reichling dkk. [18], yang menunjukkan peningkatan kandungan alkohol
akar dari tahap pertumbuhan awal hingga akhir pembungaan. Oleh karena itu, kami
mendeteksi senyawa ini pada akar yang dipanen pada bulan Mei dan Juni, tepat sebelum
dan selama pembungaan, tetapi tidak pada bulan Maret dan April. Senyawa 6 secara
sementara ditetapkan sebagai oksida seskuiterpen. Namun, pola fragmentasinya tidak
sesuai dengan pola caryophyllene oksida, yang sebelumnya telah diidentifikasi pada akar
chamomile [18]. Lebih lanjut, dua isomer spiroether dapat dibedakan berdasarkan waktu
retensinya. Kedua senyawa tersebut ditetapkan berdasarkan fakta bahwa isomer cis (7)
lebih melimpah daripada isomer trans (8) [18,27]. Selain itu, ester trimetilsilil dari
palmitat (9), linoleat (12) dan asam linolenat (13) diidentifikasi setelah derivatisasi
senyawa ekstrak dengan N, O-bis (trimetilsilil) - trifluoroasetamida (BSTFA). Senyawa
10 dan 11 menunjukkan ion M+ pada m/z 228, yang tidak dapat dikarakterisasi lebih
lanjut. Berdasarkan massa molekul dan pola fragmentasi mereka, kedua zat ini
ditugaskan untuk chamomillaester I dan II, yang sebelumnya telah dijelaskan dalam akar
Matricaria [18,28]. Meskipun Das d k k . melaporkan terjadinya bisabolol dan oksidanya dalam
minyak akar esensial [19], senyawa-senyawa tersebut tidak terdeteksi baik dalam
penyelidikan kami maupun dalam penyelidikan Reichling dkk. [18].

Hasil ekstraksi EtOAc dan n-BuOH masing-masing adalah 0,05% dan 0,12% (m/m).
Untuk analisis HPLC-DAD-MSn, ekstrak tanaman dilarutkan dalam air murni atau metanol.
Metabolit individu dikarakterisasi berdasarkan waktu retensi, spektrum UV, dan perilaku
fragmentasi dibandingkan dengan data literatur atau standar analitik. Kromatogram
puncak dasar dan UV dari ekstrak EtOAc dan BuOH yang representatif (panen bulan
Maret) diilustrasikan pada Gambar 3 dan penetapan puncak ditampilkan pada Tabel 2.
 Tabel 2.
Lanjutan.
EtOAc BuOH tR
Data Spektrometri Massa (m/z) c
Ekstra Ekstra (menit) Zat UV Maxima (nm) b Referensi
MS1 MS2 MS3
k k
(A) a (C) a
45, 46 78.0 Fosfogliserida 242, 250, 324 431 171, 153 97, 79 [52]
78.4 isomer
47 82.1 Fosfogliserida 314 433, 399 171, 153 79 [52]
48 82.5 Asam linolenat <200, 242 311, 277 259, 233, 205 191, 179 [35,54]
49 84.2 Asam linoleat <200 279 261 243 [35,54]
50 85.7 Dihidroksi-linolenat 226 325, 281 183 [35], tentatif
asam
a
Untuk pelabelan puncak, lihat Gambar 3; b Intensitas UV dan BPC dapat berbeda karena perbedaan kemampuan
ionisasi analit, konsentrasi, koefisien kepunahan molar, dll.; c angka yang dicetak tebal: ion terfragmentasi lebih
lanjut dalam percobaan CID; d tidak terdeteksi; * dimer adalah artefak yang dihasilkan selama ionisasi.

Sejumlah senyawa dengan pola fragmentasi dan spektrum UV yang serupa

dielusi dalam rentang waktu retensi 15-21 menit. Berdasarkan kehilangan netral sebesar 162 Da
yang menghasilkan spesies ion [M-H-heksosil] pada langkah fragmentasi pertama dan
rasio massa terhadap muatan aglikon yang sesuai, empat glikosida kumarin, yaitu
aesculin (senyawa 12, tR 15.6 menit, m/z 339), scopolin (14, tR 18.4 menit, m/z 399),
fraxin (16, tR 19.7 menit, m/z 369), dan isofraksidin-7-glukosida (18, tR 20.6 menit, m/z
383) telah ditetapkan (Gambar 4). Identitas aesculin dan fraxin diverifikasi dengan
menggunakan standar referensi analitik. Senyawa 11 dan 17 menunjukkan kehilangan
80 Da (sulfat atau fosfat) pada disosiasi yang diinduksi tumbukan (CID). Karena
coumarin sulfat telah dijelaskan sebelumnya pada spesies Pelargonium [55] dan
terbentuk dalam metabolisme coumarin [56], kedua zat tersebut secara sementara
ditetapkan sebagai fraxin dan fraxetin sulfat. Selain itu, kehilangan netral 208 Da
untuk senyawa 13 dan 20 mengindikasikan adanya turunan fraxetin lebih lanjut. Namun,
ini tidak dapat diidentifikasi lebih dekat. Kumarin herniarin, umbelliferone, esculetin,
scopoletin dan daphnetin, bersama dengan beberapa glikosida mereka, sebelumnya
telah terdeteksi pada bunga chamomile [57,58]. Sepengetahuan kami, kumarin secara
umum belum pernah terdeteksi pada akar chamomile sejauh ini, dan juga fraxidin dan
fraxetin pada M. recutita dijelaskan di sini untuk pertama kalinya. Hal ini sangat
menarik, karena dalam kerajaan tumbuhan, kumarin berperan dalam penyerapan zat
besi dan bioaktivitas yang dilaporkan dalam penelitian in vitro antara lain
antimikroba dan antikoagulan [59].
Lebih lanjut, sejumlah asam caffeoylquinic (CQA) dikarakterisasi dalam ekstrak EtOAc
dan BuOH. Ini menunjukkan karakteristik bioaktivitas yang menarik, seperti sifat
antiflogistik dan penghambat enzim [60]. Ion molekul pada m/z 353 dengan sinyal kuat
pada m/z 191 dalam percobaan MS2 (senyawa 10, 15, 19) menunjukkan adanya asam klorogenat 3,
4 dan 5-O, masing-masing. Untuk senyawa 21 dan 26-30, fragmentasi ion [M-H] - pada m / z 515
menghasilkan ion anak pada m / z 353 ([M-H-162] -, kehilangan gugus kafeil). Bersama
dengan UV maxima pada 218 dan 322 nm, senyawa-senyawa tersebut ditugaskan ke
isomer yang berbeda dari asam dicaffeoylquinic (diCQA). Isomer konstitusional
dibedakan berdasarkan intensitas ion fragmen MS2 dan MS3 menurut Clifford dkk. [44].
Terjadinya mono- dan diCQA pada akar chamomile telah dilaporkan sebelumnya [60].
Penurunan kandungan diCQA ditemukan sebagai perbedaan utama antara tanaman dari
berbagai tahap pertumbuhan dari bulan Maret (sebelum tunas batang) hingga Juni (tahap
pembungaan). Seperti yang disimpulkan dari intensitas sinyal kromatogram UV, 1,4-,
1,3- dan 1,5-diCQA menurun sekitar 30%, isomer 4,5 bahkan sebesar 80% (data tidak
ditampilkan).
Dalam rentang waktu retensi 59 hingga 70 menit, beberapa ester dari asam
caffeic, ferulic, sinapic dan p-coumaric dikarakterisasi berdasarkan pola
hidroksisinamat diketahui berfungsi sebagai pertahanan terhadap herbivora dan
mikroorganisme, untuk perlindungan dari radiasi UV-B serta respon terhadap kerusakan
mekanis [26]. Flavonoid seperti apigenin dan glukosidanya telah dideskripsikan sebagai
polifenol bioaktif dalam ekstrak dan rebusan bunga chamomile [8]. Namun, mereka
tidak terdeteksi dalam akar chamomile.
Pada bagian terakhir dari kromatogram ekstrak EtOAc, sejumlah gliserogliserida
dan fosfolipid yang mengandung gugus asam linoleat dan linolenat terelusi. Menariknya,
ketika asam linoleat diglikosil monogliserida (38) terfragmentasi, gugus asam lemak
dilepaskan sebagai kehilangan netral dan kepala kutub terfragmentasi lebih lanjut
(Gambar 5). Sebaliknya, untuk asam linolenat dan asam linoleat monoglikosil
monogliserida (39-41, 43), asam lemak berfungsi sebagai puncak basa pada percobaan
MS2
dan terfragmentasi lebih lanjut, meskipun kepala kutub juga terdeteksi dalam
spektrum MS2. Perwakilan serupa dari kelas senyawa ini telah dijelaskan pada spesies
Asteraceae lainnya. Sebagai contoh, glikoglikolipid telah diekstraksi dari dandelion
(Taraxacum mongolicum L.) [53] dan gliserofosfolipid dari daun selada merah (Lactuca
sativa L. var. crispa) dan akar sunchoke (Helianthus tuberosus L.) [36].

2.2. Perbandingan Fitokimia dari Berbagai Varietas Chamomile

Berdasarkan komposisi kimia dari minyak bunga esensial, varietas chamomile
diklasifikasikan ke dalam kemotipe yang berbeda [9]. Dalam penelitian ini, dua kultivar
M. recutita yang berbeda dan satu kultivar M. discoidea dibandingkan. Untuk
menentukan kemotipe dari sampel yang diteliti, minyak bunga esensial diperoleh dengan
distilasi uap air dan dianalisis dengan GC-MS. Minyak bunga esensial biru tua dari M.
recutita yang ditanam di Bad Boll mengandung jumlah yang sama dari bisabolol oksida
A dan B. Oleh karena itu, tanaman tersebut diidentifikasi sebagai kemotipe D menurut
Schilcher dkk. [9]. Sebaliknya, α-bisabolol adalah senyawa utama dalam minyak bunga
esensial dari kultivar chamomile dari Sulzemoos, yang menunjukkan kemotipe C [9].
Menariknya, minyak bunga esensial dari gulma nanas (M. discoidea) tidak memiliki
warna biru dan dengan demikian chamazulene, tetapi juga bisabolol dan oksidanya.
Sebaliknya, terpene β-pinene, β-cubebene dan tr-nerolidol terdeteksi. Namun, hubungan
dengan spesies Matricaria lainnya terlihat jelas dari keberadaan metabolit utamanya β-
farnesene dan cis-spiroether.
Berlawanan dengan minyak bunga esensial, metabolit sekunder yang mudah
menguap identik dalam ekstrak akar DCM dari ketiga varietas ini. Chamomillaesters I
dan II (Gambar 2) diidentifikasi dalam semua sampel bersama dengan β-farnesene,
oksida seskuiterpen yang tidak teridentifikasi (Tabel 1), cis- dan trans-spiroeter dan
asam lemak bebas palmitat, linoleat, dan linolenat. Selain itu, penyaringan HPLC-DAD-MSn dari ekstrak
akar dengan polaritas yang meningkat mengungkapkan hal yang serupa
sidik jari dari tiga varietas yang diteliti, kecuali untuk coumarin dan asam caffeoylquinic,
di mana perbedaannya sangat jelas. Gambar 6 menampilkan bagian yang sesuai dari jejak
UV HPLC dari akar yang dipanen pada tahap pembungaan (Mei / Juni). Meskipun pada
saat panen ini sebagian besar asam 1,3-dicaffeoylquinic hadir dalam ekstrak BuOH dari
kedua kultivar M. recutita, ekstrak M. discoidea juga mengandung isomer 1,4 dan 4,5
dalam jumlah yang hampir sama seperti yang disimpulkan dari intensitas sinyal yang
direkam pada 320 nm. Sebaliknya, kandungan isofraxidin-7-heksosida paling rendah
pada M. discoidea.

2.3. Potensi Antioksidan dari Ekstrak Akar Chamomile

2.3.1. Uji DPPH
Uji pembersihan radikal DPPH sangat umum dilakukan untuk menentukan aktivitas
antioksidan dari ekstrak tanaman secara in vitro, meskipun hasil yang dipublikasikan
dalam literatur dapat bervariasi karena kurangnya standarisasi dan akses ke teknik
ekstraksi, pelarut, dan bahan kimia yang berbeda [61]. Pengujian ini telah dilakukan
dalam larutan metanol atau pada pelat KLT dengan menggunakan berbagai ekstrak
chamomile [36,62,63]. Nilai IC50 sebesar 6,8 ± 0,01 µg/mL dan 8,5 ± 0,7 µg/mL untuk
dua zat referensi trolox dan asam klorogenat, masing-masing (Gambar 7). Ekstrak DCM
dari varietas chamomile yang diteliti menunjukkan nilai IC 50 tertinggi sebesar 279-290
µg/mL dan, dengan demikian, memiliki aktivitas antioksidan yang paling lemah.
Ekstrak M. discoidea EtOAc dan BuOH memiliki aktivitas penangkap DPPH terkuat
dengan nilai IC50 sebesar
12,7 ± 3,8 dan 13,8 ± 0,4 µg/mL, masing-masing.
Ekstrak pelarut yang berbeda dari bagian tanaman chamomile telah dievaluasi
sehubungan dengan potensi pembersihan DPPH dalam sejumlah besar penelitian. Nilai
IC50 dari minyak atsiri dan ekstrak metanol daun M. recutita dilaporkan masing-masing sebesar
4,18 µg / mL dan 1,83 µg / mL [64]. Al-Dabbagh dan rekan-rekannya menentukan nilai
IC50 sebesar 26,7 µg / mL untuk ekstrak bunga chamomile hidroetanol [65]. Ekstrak air subkritis
dari bunga chamomile menunjukkan nilai IC 50 sebesar 10-45 µg/mL, tergantung pada
suhu ekstraksi [66]. Dengan demikian, nilai IC 50 yang ditentukan dalam penelitian kami
untuk ekstrak EtOAc dan BuOH berada dalam kisaran yang sama dengan bunga.
Umumnya, infus dan decoctions, yaitu larutan berair, memiliki aktivitas antioksidan yang
lebih tinggi daripada ekstrak metanol [45] dan nilai IC50 menurun dengan meningkatnya
polaritas pelarut yang digunakan [62]. Oleh karena itu, dalam penelitian ini, ekstrak
dengan polaritas yang semakin tinggi menunjukkan nilai IC 50 yang lebih rendah, yang
mengindikasikan sifat antioksidan yang lebih kuat.
 Asam fenolik dan flavonoid telah diidentifikasi sebagai kontributor utama aktivitas
antioksidan dari berbagai ekstrak chamomile [6]. Efek pembersihan radikal dari ekstrak
etil asetat dan butanol mungkin disebabkan oleh kumarin dan turunan mono dan diCQA
yang melimpah yang diidentifikasi oleh HPLC-DAD-MSn. Efek yang lebih kuat dari ekstrak M.
discoidea mungkin disebabkan oleh fakta bahwa mereka mengandung asam 1,4- dan 4,5-
dicaffeoylquinic dalam jumlah yang lebih tinggi daripada kultivar M. recutita (Gambar
6), dan 4,5-isomer telah terbukti memiliki aktivitas pemulungan DPPH terkuat di antara
isomer diCQA [67]. Namun, perbandingan langsung antara zat referensi dengan ekstrak
tanaman, yang merupakan campuran kompleks dari berbagai metabolit, tetap menantang,
karena efek sinergis, aditif, atau antagonis juga dapat mempengaruhi nilai pembacaan
akhir.

2.3.2. Uji Superoksida

Radikal superoksida O2 - termasuk dalam spesies oksigen reaktif (ROS) dan
dihasilkan di dalam sel oleh sistem transfer elektron mitokondria, NADPH oksidase dan xantin
oksidase. Akibatnya, antioksidan dan enzim pembersih radikal, yang melindungi sel dari
stres oksidatif, sangat penting untuk mencegah efek buruk seperti peningkatan penuaan
dan penyakit Alzheimer [68]. Berbeda dengan uji DPPH, uji superoksida dilakukan
dalam kondisi fisiologis. Hal ini memungkinkan pemahaman yang lebih baik tentang
efek antioksidan dari ekstrak akar chamomile secara in vivo. Meskipun aktivitas
antioksidan yang kuat telah ditentukan untuk asam caffeoylquinic secara umum [69],
asam klorogenat sebagai senyawa murni tidak menunjukkan efek apa pun dalam
pengujian ini. Karena trolox juga tidak berpengaruh, asam galat digunakan sebagai zat
referensi. Selain itu, aesculin, salah satu kumarin yang terdeteksi dalam ekstrak, diuji
sebagai zat referensi kedua. Karena kelarutan ekstrak DCM dan EtOAc yang tidak
mencukupi dalam larutan penyangga, yang menyebabkan kekeruhan, hanya ekstrak
BuOH yang diselidiki. Penghambatan relatif pembentukan formazan oleh sampel yang
berbeda ditampilkan pada Gambar 8. Jumlah formazan paling sedikit terbentuk pada
sampel yang mengandung 5-30 µg / mL asam galat, sehingga absorbansi tetap rendah
dan penghambatan relatif paling tinggi. Hal ini menunjukkan bahwa di antara semua
sampel, asam galat memiliki aktivitas pembersihan superoksida terkuat. Hal ini sesuai
dengan temuan Furuno dkk., bahwa gugus pirogalol sangat berkontribusi terhadap
aktivitas pembersihan radikal superoksida [70]. Sebagai perbandingan, ekstrak BuOH
menunjukkan aktivitas pembersihan superoksida yang moderat. Mirip dengan uji DPPH,
M. discoidea memberikan efek antioksidan yang paling menonjol di antara sampel
chamomile yang diteliti. Sampel M. recutita yang berbeda menunjukkan hasil yang
serupa, terlepas dari asal atau tanggal panen. Aesculin sebagai standar referensi
menunjukkan penghambatan terendah dan, dengan demikian, efek pembersihan
superoksida yang sangat lemah. Ekstrak yang dipelajari adalah campuran kompleks yang
Efek antioksidan mungkin disebabkan oleh jumlah komponen individualnya seperti
asam galat dan asam fenolik lainnya, kumarin, dan metabolit lebih lanjut.

Aktivitas pembersihan superoksida dari chamomile belum dinilai secara luas. Hanya
Cvetanovic dkk. yang menentukan nilai IC 50 antara 30 dan 100 µg/mL dalam studi
resonansi spin elektron (ESR) [71]. Efek antioksidan fisiologis dari minyak atsiri dan
ekstrak bunga chamomile telah diselidiki dalam berbagai penelitian. Sebagai contoh,
Sebai et al. menguji dampak rebusan bunga chamomile terhadap stres oksidatif pada
tikus. Para penulis menunjukkan, bahwa rebusan chamomile melindungi hewan dari
diare yang diinduksi minyak jarak dan akumulasi cairan usus tetapi juga mencegah
penurunan aktivitas enzim antioksidan seperti katalase dan superoksida dismutase [72].
Oleh karena itu, pemberian rebusan bunga chamomile melindungi enzim-enzim ini dari
cedera yang diinduksi etanol dan mencegah lipoperoksidasi di hati [73]. Efeknya
dikaitkan dengan senyawa fenolik, yang juga terjadi pada akar chamomile.
Sifat antioksidan tidak hanya diinginkan dalam aplikasi pengobatan, tetapi juga di
sektor kosmetik dan makanan. Banyak produk yang sedikit atau lebih diproses
membutuhkan penambahan bahan penstabil, pewarna atau pengawet [74]. Namun, ada
kesadaran yang berkembang untuk formulasi alami tanpa bahan tambahan sintetis. Oleh
karena itu, ekstrak tumbuhan, misalnya minyak esensial rosemary, semakin banyak
dimasukkan sebagai senyawa antioksidan alami dalam matriks makanan dan kosmetik
yang berbeda [75,76]. Dalam kasus chamomile Jerman, penelitian kembali difokuskan
pada ekstrak atau minyak esensial dari bunga atau bagian tanaman di atas tanah,
misalnya, untuk meningkatkan stabilitas produk susu tanpa mengubah nilai gizinya [77].
Berdasarkan penelitian ini, ekstrak akar dengan aktivitas antioksidan yang sebanding
dengan aktivitas antioksidan yang kuat juga harus dipertimbangkan di masa depan.

2.4. Potensi Antibakteri dari Akar Chamomile

Karena meningkatnya resistensi terhadap antibiotik konvensional, penggunaan
produk alami sebagai suplemen atau substitusi menjadi topik penelitian yang
menjanjikan [26,62]. Untuk evaluasi pertama dari aktivitas antibakteri potensial dari
ekstrak akar M. recutita yang berbeda, percobaan difusi cakram dilakukan. Semua
sampel menghambat pertumbuhan strain bakteri Gram positif B. subtilis dan S. aureus
dalam jumlah ≥ 0,8 mg per disk, seperti yang ditunjukkan pada Tabel 3. Efek antibakteri
sebanding untuk kedua strain yang rentan. Kecuali untuk M. recutita yang ditumbuhkan
 dalam ekstrak Bad Boll, DCM dan EtOAc menunjukkan penghambatan yang lebih kuat
daripada ekstrak BuOH. Hal ini tidak mengherankan karena efek antibakteri dari banyak
minyak atsiri telah dijelaskan [78] dan konstituen utama dari minyak atsiri, misalnya
terpenoid, juga terdapat dalam ekstrak nonpolar. Menariknya, ekstrak akar DCM dan
EtOAc dari M. discoidea menunjukkan efek terkuat, tetapi ekstrak BuOH yang sesuai
sama sekali tidak aktif. Efek penghambatan tidak dapat dideteksi terhadap strain bakteri
Gram negatif P. aeruginosa dan
E. coli maupun terhadap C. albicans (data tidak ditampilkan).

Tabel 3. Zona hambat rata-rata dalam mm terhadap strain bakteri Gram-positif B. subtilis dan
S. aureus (n = 3).

S. aureus B. subtilis
Ekstrak 0,8 mg / Disk 1,6 mg / Disk 3,2 mg / Disk 0,8 mg / Disk 1,6 mg / Disk 3,2 mg / Disk
M. recutita Bad Boll
DCM 8±0 9±0 9±2 6±0 7±0 8±0
EtOAc 8±0 7±1 9±1 - 8±1 10 ± 1
BuOH 7±0 8±1 10 ± 1 7±1 8±0 9±1
M. recutita Sulzemoos
DCM 7±1 9±1 10 ± 1 8±0 9±0 9±1
BuOH - 8±1 9±1 - 7±0 8±1
M. discoidea
DCM 9±1 10 ± 1 11 ± 1 9±2 9±2 9±1
EtOAc 7±0 9±1 10 ± 0 8±0 9±0 10 ± 0
BuOH - - - - - -

Efek antibakteri dari berbagai kelas senyawa didasarkan pada mekanisme yang
berbeda. Konstituen minyak atsiri seperti terpen dapat melewati atau berinteraksi dengan
membran sel bakteri, yang dapat menyebabkan gangguan atau kebocoran. Di dalam sel,
stres oksidatif dan gangguan metabolisme protein dan mitokondria dapat terjadi, antara
lain [79]. Asam sinamat dan klorogenat juga diketahui mengganggu membran sel bakteri,
sehingga meningkatkan fluiditas dan permeabilitasnya [80]. Selain itu, beberapa kumarin
telah dilaporkan menghambat DNA gyrase, yang biasanya menyebabkan superkoil
negatif pada DNA [81].
Meskipun potensi antimikroba bunga chamomile telah dipelajari secara ekstensif,
informasi tentang akarnya masih langka. Potensi antibakteri akar chamomile telah
dideskripsikan terhadap Pseudomonas syringae pv. maculicola. Efeknya dapat dikaitkan
dengan keberadaan spiroethers dan kumarin, tetapi belum dipelajari lebih lanjut [82].
Sebaliknya, akar dari anggota keluarga Asteraceae lainnya telah d i k a j i secara lebih rinci.
Misalnya, akar dandelion (Taraxacum officinale L.) menghambat S. aureus dan
Pertumbuhan B. cereus, mungkin karena adanya asam hidroksilinoleat dan
hidroksilinolenat, vanilin dan koniferaldehida [83]. Efek penghambatan ekstrak akar
tansy (Tanacetum vulgare L.) terhadap B. subtilis dan dua patogen tanaman dapat
dikaitkan dengan senyawa poliasetilen yang berbeda [63].
Ekstrak bunga chamomile lipofilik yang diperoleh dengan ekstraksi CO superkritis 2
menghambat pertumbuhan berbagai jamur yang ditularkan melalui tanaman sebesar 80-
100% [84]. Roby dkk. membandingkan potensi antibakteri dari ekstrak bunga chamomile
yang berbeda. Konsisten dengan semua penelitian lain, ekstrak lebih efektif melawan
Gram-positif daripada bakteri Gram-negatif. Jumlah yang sangat rendah yaitu 7,5-20 µg
per disk menghambat pertumbuhan berbagai strain bakteri dan C. albicans [62].
Konsentrasi yang lebih tinggi digunakan oleh Abdoul-Latif et al: 300 µg ekstrak metanol
daun atau 10 µL minyak atsiri per disk menghambat pertumbuhan berbagai strain bakteri
Gram positif dan Gram negatif, dengan minyak atsiri menunjukkan efek yang lebih kuat
[64]. Menariknya, bisabolol oksida secara negatif mempengaruhi aktivitas antibakteri [4],
yang menunjukkan bahwa aktivitas tersebut sangat bergantung pada profil senyawa dari
masing-masing sampel. Jadi, untuk penggunaan yang tepat, kemotipe minyak bunga
esensial juga
karena musim panen dan prosedur ekstraksi harus dipilih dengan hati-hati [85]. Hasil
yang disajikan menunjukkan bahwa, selain bunga dan daun chamomile, akarnya juga
memiliki potensi yang menjanjikan sehubungan dengan sifat antibakterinya. Dengan
demikian, penggunaan akar chamomile untuk persiapan produk fitomedisin berkontribusi
pada budidaya dan penggunaan tanaman obat yang penting ini secara berkelanjutan,
meskipun penelitian lebih lanjut diperlukan, misalnya, untuk menentukan konsentrasi
penghambatan minimal dari masing-masing ekstrak, yang memungkinkan penilaian
mendalam terhadap potensi antibakteri.

3. Bahan dan Metode

3.1. Bahan Kimia dan Reagen
Aseton, asetonitril, n-butanol (BuOH), diklorometana (DCM), dimetilsulfoksida (DMSO),
kloroform, etanol, etil asetat (EtOAc), metanol (MeOH), dan toluena dibeli dari
Chemsolute (Th. Geyer GmbH & Co., KG, Renningen, Jerman). Ni- trotetrazolium biru
klorida (NBT), asam galat monohidrat dan TRIS hidroklorida diperoleh dari Carl Roth
GmbH & Co, KG (Karlsruhe, Jerman). N, O-Bis (trimetilsilil) - trifluoroasetamida (BSTFA), 2,2-
difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH), hipoksantin, triptofan, dan xantin oksidase (XOD, kelas III
dari susu sapi) berasal dari Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA), dan asam format dari
Fluka (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA). Trolox dibeli dari Cayman Chemical
Company (Ann Arbor, MI, AS), dan asam klorogenat hemihidrat dari Alfa Aesar
(Karlsruhe, Jerman). Standar analitik fraksin dan aesculin diperoleh dari PhytoLab
GmbH & Co, KG (Vestenbergsgreuth, Jerman). N,N-Dimethylformamide (DMF),
natrium sulfat, Tryptic Soy Agar (TSA) dan Sabouraud Dextrose Agar (SDA) broth dan agar
plate berasal dari Merck KGaA (Darmstadt, Jerman). Garam natrium ampisilin dan
gentamisin berasal dari Sigma-Aldrich Chemie GmbH (Steinheim, Jerman).

3.2. Bahan Tanaman dan Ekstraksi

Akar M. recutita dipanen setiap bulan antara bulan Maret dan Juni 2021 dan pada
bulan Maret 2022 di kebun tanaman obat WALA Heilmittel GmbH (Bad Boll / Erckwälden,
Jerman). Selanjutnya, akar M. discoidea dipanen di tempat yang sama pada bulan Juni
2021. Selain itu, akar dari varietas M. recutita yang kaya bisabolol dipanen di Kistler &
Co, GmbH di Sulzemoos, Jerman, pada bulan Juni 2021. Bahan tanaman dibilas dengan
air ledeng, dikeringkan, dikemas dalam kantong pembeku dan disimpan pada suhu -80 ◦C
hingga penyelidikan. Spesimen voucher disimpan di herbarium Institut Botani,
Universitas Hohenheim (Stuttgart, Jerman). R. Duque-Thüs (M. recutita Bad Boll, nomor
voucher: HOH-022871; M. recutita Sulzemoos, nomor voucher: HOH-022870; M.
discoidea Bad Boll, nomor voucher: HOH-022872).
100 g bahan tanaman segar dicampur dengan aseton/air (500 mL, 60/40, v/v).
Bahan tersebut dicincang selama tiga menit menggunakan Ultra-Turrax (17.000 rpm;
IKA Werke GmbH and Co, KG, Staufen, Jerman). Sebelum dan sesudah
penghancuran, campuran digelembungkan dengan nitrogen selama 15 menit untuk
menghindari degradasi oksidatif dari konstituen tanaman. Bubur disimpan pada suhu
4◦C
semalaman dan kemudian disaring di atas Celite® (Carl Roth GmbH + Co, KG,
Karlsruhe, Jerman).
Residu padat diekstraksi untuk kedua kalinya dengan cara yang sama. Kedua filtrat berwarna
coklat digabungkan dan aseton dihilangkan dengan penguapan
putar. Selanjutnya, ekstrak air yang diperoleh diekstraksi secara berturut-turut dengan
masing- masing 3 × 100 mL diklorometana, etil asetat, dan n-butanol, menggunakan corong
pemisah. Ekstrak diklorometana dan etil asetat dikeringkan di atas natrium sulfat
anhidrat dan disaring di atas kaca frit (Por. 3, ROBU® Glasfilter-Geräte GmbH, Hattert,
Jerman). Pelarut kemudian dibuang dalam vakum untuk mendapatkan ekstrak
kering untuk penyelidikan lebih lanjut. Ekstraksi dilakukan secara rangkap untuk
ketiga spesies
chamomile.
Selain itu, 50 g akar atau bunga chamomile, batang dan daun dalam 200 mL air
disuling dalam alat tipe Clevenger selama empat jam. Minyak atsiri terperangkap dalam
n-heksana/etil asetat 3/1 (v/v) dan dikeringkan di atas natrium sulfat anhidrat.
3.3. Analisis GC-MS dari Konstituen yang Mudah Menguap
Ekstrak kasar yang diperoleh dengan ekstraksi pelarut dilarutkan dalam kloroform
pada konsentrasi 5 mg/mL untuk analisis langsung. Minyak atsiri dalam n-heksana/etil
asetat, yang diperoleh kembali setelah distilasi seperti yang dijelaskan di atas, langsung
diinjeksikan ke dalam GC. Untuk mendapatkan turunan trimetilsilil dari masing-masing
senyawa, ekstrak kasar (3-5 mg) dilarutkan dalam DMF (500 µL) dan ditambahkan 200
µL BSTFA. Larutan dipanaskan hingga 105 ◦C selama 15 menit dan selanjutnya
dianalisis melalui GC/MS.
Analisis GC/MS dilakukan dengan kromatografi gas PerkinElmer Clarus 500
(PerkinElmer, Inc., Shelton, CT, USA) dengan injeksi terpisah (rasio pemisahan 30:1, volume
injeksi 1,0 μL) yang dipasangkan dengan spektrometer massa kuadrupol tunggal yang
beroperasi dalam mode ionisasi elektron (EI) pada 70 eV. Kolom kapiler Zebron ZB-5MS (60
m x 0,25 mm i.d., ketebalan film 0,25 µm, 5% fenilpolisiloksan dan lapisan
dimetilpolisiloksan 95%; Phenomenex, Torrance, USA) digunakan sebagai fase diam,
helium berfungsi sebagai gas pembawa dengan laju alir 1 mL/menit. Suhu injektor adalah
250 ◦C, program suhu oven kolom adalah 100-320 ◦C, menerapkan gradien linier 4 ◦C/menit
dan waktu penahanan akhir 30 menit. Data diperoleh dan diproses menggunakan
perangkat lunak TurboMass (v.5.4.2, PerkinElmer, Inc., Waltham, MA, USA).

3.4. Analisis RP-HPLC-DAD-ESI-MSn

Analisis kromatografi cair kinerja tinggi dilakukan pada sistem HPLC Agilent 1200
(Agilent Technologies, Inc., Palo Alto, CA, USA) yang dilengkapi dengan pompa bi-
nary, degasser vakum mikro, autosampler, kompartemen kolom termostatik, dan detektor
array dioda UV/VIS (DAD). Kolom fase terbalik Kinetex® C18 (ukuran partikel 2,6 µm,
150 mm × 2,1 mm i.d., Phenomenex Ltd., Aschaffenburg, Jerman) dan kolom awal dari
bahan yang sama digunakan untuk pemisahan kromatografi pada suhu 25◦C dan laju alir
0,21 mL/menit. Fase gerak terdiri dari 0,1% asam format dalam air (eluen A) dan
asetonitril (eluen B). Volume injeksi setiap sampel adalah 10 µL. Gradiennya adalah sebagai
berikut: 0-8 menit, 0-10% B; 8-20 menit, 10% B; 20-51 menit, 10-23% B; 51-70 menit,
23-60% B; 70-80 menit, 60-100% B; 80-85 menit, 100% B; 85-90 menit, 100-0% B; 90-100 menit,
0% B.
Sistem LC digabungkan dengan spektrometer massa perangkap ion HCTultra
(Bruker Daltonik GmbH, Bremen, Jerman) dengan sumber ESI. Semua ekstrak dianalisis
dalam mode ionisasi negatif menggunakan tegangan kapiler 4000 V, aliran gas kering
(N2 ) 9,00 L/menit dengan suhu kapiler 365 ◦C dan tekanan nebulizer 35 psi. Spektrum
massa pemindaian penuh (rentang massa m/z 50-1000) dari eluen HPLC direkam selama
pemisahan kromatografi yang menghasilkan ion [M-H]. Data MSn diperoleh dalam mode
MS/MS otomatis dengan disosiasi yang diinduksi tumbukan (CID). Instrumen
dikendalikan oleh ChemStation untuk sistem LC 3D (Rev. B01.03 SR1 (204)) dan perangkat
lunak EsquireControl (V7.1).
Sampel dilarutkan dalam air (ekstrak BuOH) atau metanol (semua ekstrak lainnya)
hingga mencapai konsentrasi 5 mg/mL.

3.5. Uji 2,2- Difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH)

Uji pembersihan radikal bebas DPPH didasarkan pada kemampuan komponen
antioksidan untuk mengurangi radikal DPPH buatan yang stabil, seiring dengan
perubahan warna dari ungu tua menjadi kuning dan, dengan demikian, penurunan kuat
dalam absorbansi pada 516 nm. Konsentrasi penghambatan setengah maksimal (IC 50 )
adalah jumlah sampel yang dibutuhkan untuk mengurangi kandungan DPPH awal
sebesar 50% dan merupakan indikasi potensi antioksidan dari senyawa individu atau
ekstrak tanaman kompleks. Untuk pengujian, DPPH dilarutkan dalam metanol pada
konsentrasi 100 mM. Ekstrak tanaman dilarutkan pada konsentrasi 1-4 mg / mL dalam metanol
dan diencerkan hingga lima konsentrasi yang sesuai. Kemudian, 200 µL larutan uji atau
larutan referensi atau metanol sebagai sampel blanko ditambahkan ke dalam 1800 µL
larutan DPPH. Sampel diinkubasi pada suhu 38 ◦C selama 30 menit dan kemudian
dianalisis pada 516 nm menggunakan spektrofotometer (Lambda 2, Perkin Elmer Ltd.,
Waltham, MA, USA) seperti yang telah dilaporkan sebelumnya [86]. Trolox digunakan
sebagai senyawa referensi yang menyiapkan larutan pada lima konsentrasi berbeda
mulai dari 3-100 mM. Nilai absorbansi untuk setiap sampel diplot terhadap konsentrasi,
dan nilai IC50 dihitung dari rumus garis tren linier pada 50% dari nilai absorbansi
maksimum. Analisis dilakukan dalam rangkap tiga.

3.6. Uji Superoksida

Kemampuan ekstrak BuOH untuk membersihkan radikal superoksida O 2 - diselidiki
dengan menggunakan versi modifikasi dari prosedur yang dijelaskan oleh Lorenz
dkk. [87]. Superoksida dihasilkan secara enzimatik menggunakan sistem hipoksantin /
xantin oksidase (XOD) dan dianalisis dengan reduksi NBT untuk membentuk produk
formazan biru. Produk yang terakhir ini dideteksi menggunakan spektrofotometer
(Lambda 2, Perkin Elmer Ltd., Waltham, MA, USA). 50 mM buffer TRIS pada pH
7,4 yang mengandung 539 µM hipoksantin dan 111 µM NBT digunakan sebagai
pelarut. Ekstrak akar BuOH padat dilarutkan dalam DMSO dan diencerkan hingga
tiga konsentrasi berbeda dalam kisaran 1-9 mg/mL. Selanjutnya, 1960 µL larutan buffer
dicampur dengan 20 µL larutan sampel dan 20 µL larutan enzim (3,4 U/mL). Sampel
diinkubasi pada suhu
37 ◦C selama 7 menit setelah penambahan enzim dan segera dianalisis secara
spektrofotometri pada 560 nm terhadap kontrol blanko yang tidak mengandung enzim.
Asam galat dan aesculin digunakan sebagai senyawa referensi. Analisis dilakukan dalam
rangkap tiga. Persentase penghambatan pembentukan formazan dihitung dengan
menggunakan persamaan berikut:

3.7. Uji Antimikroba

Uji difusi cakram dilakukan untuk mengevaluasi aktivitas antimikroba dari ekstrak
akar chamomile yang berbeda terhadap empat strain bakteri yang umum. Di antaranya,
strain Gram-negatif, yaitu Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 dan Escherichia coli ATCC
8739, dan strain Gram-positif, yaitu Staphylococcus aureus ATCC 6538 dan Bacillus safensis
ATCC 6633 telah diuji (Leibniz Institute, DSMZ-German Collection of Microorganisms and Cell
Cultures GmbH, Braunschweig, Jerman). Selain itu, satu strain jamur (Candida albicans
strain ATCC 10231) juga diuji. Bahan sel diambil dari kultur murni dan diinkubasi dalam 4
mL kaldu TSA (bakteri) atau kaldu SDA (C. albicans) pada suhu 37 ◦C selama 24 jam. Unit
pembentuk koloni ditentukan dengan pengenceran serial hingga 106-108 (B. safensis, E.
coli, C. albicans) dan 109 (S. aureus, P. aeruginosa). Oleh karena itu, yang terakhir diencerkan
dengan kaldu TSA (1:10, v:v) sebelum digunakan. Ekstrak tanaman disuspensikan dalam
MeOH dengan konsentrasi 80 mg/mL. Disk uji antimikroba steril (Oxoid™ blanko, Thermo
Fisher Diagnostics GmbH, Waltham, MA, USA) diisi dengan suspensi 10-40 µL (0,8-3,2 mg
ekstrak kering) dan dikeringkan. MeOH murni (10 µL) berfungsi sebagai kontrol negatif, dan
antibiotik gentamisin (0,5 mM, 1,0 mM, 1,5 mM; 10 µL) dan ampisilin (0,1 mM, 10 µL)
digunakan sebagai kontrol positif untuk S. aureus,
E. coli, P. aeruginosa dan B. safensis. Selanjutnya, 100 µL bakteri
Suspensi disebarkan pada lempeng agar TSA dan dibiarkan mengering sebentar. Pelat
agar SDA digunakan untuk C. albicans. Disk dengan kontrol negatif dan positif serta tiga
konsentrasi ekstrak ditempatkan pada setiap piring. Zona hambat (diameter dalam
milimeter termasuk cakram uji) diukur setelah inkubasi pada suhu 37◦C selama 20 jam.
Pengujian dilakukan dalam rangkap tiga untuk semua sampel.

4. Kesimpulan
Dalam penelitian ini, akar dari dua aksesi Matricaria recutita dan satu aksesi M.
discoidea diselidiki untuk mengetahui komposisi metabolit sekunder dan karakteristik
bioaktivitasnya. Menariknya, meskipun konstituen yang mudah menguap dalam minyak
bunga esensial sangat bervariasi di antara ketiga varietas, semua akar mengandung
konstituen utama yang serupa. Antara lain, β-farnesene, chamomillol, spiroether dan
chamomillaester terdeteksi oleh GC-MS. Selain itu, analisis HPLC-DAD-MSn mengungkapkan
adanya glikosida kumarin
aesculin, scopolin, fraxin dan isofraxidin-7-heksosida bersama dengan turunan kumarin lainnya,
asam kafeoilkuinat, fosfo dan gliseroglikolipid di dalam akar.
Ekstrak akar EtOAc dan BuOH menunjukkan aktivitas penangkap radikal DPPH
yang mirip dengan bunga chamomile. Dengan demikian, ekstrak kutub tengah dapat
dimasukkan ke dalam emulsi atau produk kosmetik berbasis minyak untuk meningkatkan
stabilitas dan sifat antioksidannya. Ekstrak BuOH juga memiliki efek pembersihan pada
radikal superoksida (O2 -) ketika dievaluasi dalam kondisi fisiologis dalam larutan buffer
pada pH 7,4. Hal ini dapat menunjukkan potensi antioksidan dari ekstrak secara in vivo.
Selain itu, aktivitas antibakteri moderat ekstrak akar chamomile terhadap strain bakteri Gram-
positif S. aureus dan
B. subtilis diamati. Akar chamomile adalah produk sampingan dari teh chamomile dan
produksi minyak atsiri. Penggunaannya dalam sediaan fitofarmaka atau kosmetik
berkontribusi pada produksi pertanian yang lebih berkelanjutan. Namun, kemanjuran
sediaan tersebut harus dievaluasi dalam penelitian lebih lanjut.