MAKALAH FARMAKOGNOSI ANALITIK

Identifikasi, Isolasi dan Aktivitas Antioksidan dari pheophytin

dari Green Tea (Camellia sinensis (L.) Kuntze)

Oleh:

Mutya Anugrah Angelia

N11115343

Fakultas Farmasi
Universitas Hasanuddin
Makassar
2016
 BAB I

PENDAHULUAN

I.1. Latar Belakang

Produksi teh dunia yang telah diproses melebihi 3 juta ton pada
tahun 2002. Dua jenis spesies teh, jenis cina, Camellia sinensis dan jenis
Assam, C. assamica aslinya berasal dari Barat Daya Cina , Myanmar, dan
Timur Laut India (Assam), tetapi rentang asli dikaburkan oleh sejarah
budidaya dan pengenalan oleh manusia. Teh adalah tanaman yang dapat
tumbuh di negara-negara yang berbeda di seluruh dunia. Teh hijau
merupakan salah satu jenis teh yang paling bermanfaat untuk kesehatan
seperti antikarsinogenik, antibakteri, antitumor, antivirus dan antioksidan.

Pada oksidasi katekin, selain karena tertutup oleh hasil oksidasi

katekin, klorofil tidak tampak karena mengalami pembongkaran menjadi
feofitin yang berwarna hitam. Perubahan warna ini disebabkan adanya
inaktivasi enzim yang diaman terjadi pemanasa senyawa klorofil dalam
lingkungan basah dan dalam suasana asam. Selain dari khasiat yang
telah umum diketahui, ternyata teh hijau memiliki kandungan feofitin yang
merupakan turunan warna dari klorofil yang memiliki kemampuan sebagai
antioksidan dan karoten yang memiliki mekanisme
fotoproteksi.kemampuannya sebagai antioksidan dapat memperlambat
terjadinya penuaan dini yang disebabkan senyawa-senyawa polutan
berbahaya yang terdapat di lingkungan. Sementara kemampuan
fotoproteksi yaitu menangkal radiasi sinar UV penyebab kerusakan sel.
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

II.1 Uraian Tanaman

Tanaman teh (Camellia sinensis) adalah salah satu tanaman perdu

yang berdaun hijau (evergreen shrub) yang dapat tumbuh dengan tinggi 6
– 9 m. Di perkebunan-perkebunan, tanaman teh dipertahankan dengan
ketinggian hingga 1 m dengan pemangkasan secara berkala. Hal ini
dilakukan untuk memudahkan pemetikan daun agar diperoleh tunas-tunas
daun teh yang cukup banyak. Pada umumnya tanaman teh tumbuh di
daerah yang beriklim tropis dengan ketinggian antara 200 s/d 2000 m dpl
dengan suhu cuaca antara 14°C – 25°C.

Varietas tanaman teh yang banyak dikenal ialah varietas Assamica

yang berasal dari Assam dan varietas Sinensis yang berasal dari Cina.
Yang membedakan kedua varietas ini adalah varietas assamica daunnya
agak besar dengan ujung runcing, sedangkan varietas sinensis daunnya
lebih kecil dan ujungnya tumpul.

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyte

Sub divisi : Angiospermae

Class : Dicotyledoneae

Ordo : Guttiferales

Famili : Tehaceae

Genus : Camelia

Spesies : Camellia sinensis

 Pada umumnya, tanaman teh berakar dangkal, sangat peka
terhadap keadaan fisik tanah sehingga cukup sulit untuk menembus
lapisan tanah. Pertumbuhan akar ke arah lateral dan penyebarannya
dibatasi oleh perdu yang ada di dekatnya. Perakaran utama berkembang
pada lapisan tanah atas sedalam 0-25 cm, dimana tempat utama
berakumulasinya unsur-unsur hara. Batang tanaman teh berdiri tegak,
berkayu, bercabang-cabang, ujung ranting dan daun muda berbulu halus.
Daun teh merupakan daun tunggal yang bertangkai pendek dan letaknya
berseling. Tiap helaian daun kaku seperti kulit tipis, bentuknya elips
memanjang, ujung, dan pangkal runcing. Bentuk tepi daun teh bergerigi
halus, pertulangan menyirip dengan panjang daun 6-18 cm dan lebar
adalah 2-6 cm. Bunga teh terletak di ketiak daun, tunggal atau beberapa
bunga bergabung menjadi satu. Perkembangan bunga mengikuti fase
pertumbuhan daun. Bunga teh termasuk kedalam bunga sempurna
dengan garis tengah 3-4 cm. Warna bunga putih cerah dengan kepala sari
berwarna kuning dan baunya harum.

Komposisi Kimia Daun Teh

Kandungan senyawa kimia dalam daun teh dapat digolongkan menjadi 4

kelompok besar yaitu:

1. Golongan fenol 3. Golongan aromatis

2. Golongan bukan fenol 4. Enzim

1. Golongan Fenol

1.) Katekin

Katekin adalah senyawa metabolit sekunder yang secara alami

dihasilkan oleh tumbuhan dan termasuk dalam golongan flavonoid.
Senyawa ini memiliki aktivitas antioksidan berkat gugus femol yang
dimilikinya.
 Senyawa katekin merupakan senyawa yang paling penting pada
daunt eh yang menyehatkan tubu. Hasil penelitian University of Kansas
(2007) yang dipresentasikan di American Chemical Society, menyatakan
bahwa katekin dalam teh hijau berkemampuan 100 kali lebih efektif untuk
menetralisir radikal bebas daripada vitamin C dan 25 kali lebih ampuh dari
vitamin E.

2.) Flavanol

Flavanol merupakan satu di antara sekian banyak antioksidan

alami yang terdapat dalam tanaman pangan dan mempunyai kemampuan
mengikat logam. Senyawa flavanol dalam teh kurang disebut sebagai
penentu kualitas, tetapi diketahui mempunyai aktivitasyang dapat
menguatkan dinding pembuluh darah kapiler dan memacu pengumpulan
vitamin C. flavanol pada daunt eh meliputi senyawa kaemferol, kuarsetin,
dan mirisetin dengan kandungan 3-4% dari berat kering.

2. Golongan Bukan Fenol

1.) Karbohidrat

Daun teh mengandung karbohidrat meliputi sukrosa, glukosa dan

fruktosa. Keseluruhan karbohidrat yang terkandung dalamteh adalah 3-5%
dari berat kering daun.

2.) Pektin

Pectin terutama terdiri dari pectin dan asam oekaktat, dengan

kandungan antara 4,9-7,6% dari berat kering daun.

3.) Alkaloid

Sifat menyegarkan seduhan teh berasal dari senyawa alkaloid yang

dikandungnya., dengan kisaran 3-4% dari berat kering daun.
4.) Protein dan asam-asam amino

Kandungan protein dalam daun teh dirasakan sangat besar

peranannya dalam proses pembentukan aroma pada teh terutama pada
teh hitam

5.) Zat warna

Kandungan zat warna dalam daun teh sekitar 0,019% dari berat
kering daun.

6.) Asam organik

Kandungan asam organi dalam daun teh sekitar 0,5-2% dari berat
keirng daun.

7.) Resin

Resin merupakan senyawa polimer rantai karbon, dengan

kandungan 3% dari berat daun kering.

8.) Vitamin dan mineral

3. Golongan Aromatis

Substansi aromatis pembentuk aroma teh merupakan senyawa

volatile, baik yang terkandung secara alami pada daun teh maupun yang
terbentuk sebagai hasil reaksi biokimia.

4. Enzim

Enzim yang terkandung dalam daunt eh di antaranya adalah

invertase, amylase, beta-glukosidase, oksimetilase, protease, dan
peroksidase yang berperan sebagai biokatalisator pada setiap reaksi
kimia di dalam tanaman. Selain itu, juga terdapat enzim polifenol oksidase
yang berperan penting dalam proses pengolahan teh yaitu pada proses
pengolahan teh yaitu pada proses oksidase katekin.
 BAB III

METODE PENELITIAN

Bahan utama adalah teh hijau (Camellia sinensis (L.) Kuntze) yang
diperoleh dari perkebunan teh Rumpun Sari Medini, Ltd Boja, Kabupaten
Kendal, Jawa Tengah, Indonesia, dan β-karoten penanda (E-Merck, tidak
ada. 1,02236). bahan kimia yang digunakan adalah aseton, heksana, dietil
eter, metanol, 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH), silika GF254, dan silika
gel 60

III.1. Ekstraksi Pigment

Sepuluh gram sampel membumi dan diekstraksi dengan

menggunakan larutan campuran aseton: metanol (3: 7, v / v). Selama
ekstraksi, kalsium karbonat ditambahkan sebagai bahan penetral dan
natrium askorbat sebagai antioksidan untuk mencegah oksidasi lebih
lanjut. Ekstraksi dilakukan secepat mungkin untuk menghindari oksidasi
lebih lanjut atau enzimatik degradasi. Kemudian, ekstrak disaring dan
residu kembali diekstraksi sampai warna residu menjadi pucat indikator
ekstraksi pigmen lengkap. Ekstrak yang dihasilkan dipartisi dengan dietil
eter. dietil yang Lapisan eter dikeringkan dengan gas nitrogen.

III.2. Kromatografi lapis tipis (TLC)

Komposisi pigmen ekstrak teh mentah hijau dianalisis dengan

GF254 silika gel sebagai fase diam dan heksana: dietil eter: aseton (6: 3:
2, v / v / v) sebagai phase9 mobile. Warna setiap tempat di piring TLC
adalah diamati dan nilai Rf dihitung. kromatografi cair.
III.3. Kinerja tinggi (HPLC)

Analisis HPLC dilakukan dengan Shimadzu HPLC yang dilengkapi dengan

photodiode array (PDA) detektor dan kolom suhu controller (Shimadzu,
Kyoto, Jepang) menggunakan Shim-pack vp-ods kolom C18 (250 × 4,6
mm nomor pembayar) (Shimadzu, Kyoto). Pigmen dielusi dengan sistem
gradien menggunakan kecepatan aliran 1,0 mL per menit pada 25 ºC.
Solusi yang digunakan adalah A: metanol: asetonitril: 0,25 M larutan
piridin (50: 25: 25, v / v), dan B: metanol: asetonitril: aseton (20: 60: 20, v /
v). Pigmen terdeteksi dengan detektor PDA dan dievaluasi 430 nm
wavelength10.

III.4. Pheophytin isolasi dan identifikasi.

pheophytin yang diisolasi dari ekstrak teh mentah hijau dengan

kromatografi kolom dengan silika gel 60 sebagai fase stasioner dan
heksana: dietil eter: aseton (6: 3: 2, v / v / v) sebagai fase gerak.
Kemurnian pheophytin itu dianalisis dengan TLC dan UV-Vis.

III.5. Aktivitas antioksidan.

pheophytin dimurnikan, ekstrak kasar teh hijau, dan β-karoten

penanda dilarutkan dengan aseton dan dibuat dengan beberapa
konsentrasi. aktivitas antioksidan diukur dengan spektrofotometer pada
panjang gelombang 517 nm. Tes dilakukan sesuai dengan metode yang
dilaporkan oleh Panovska et.al11. Persentase aktivitas antioksidan adalah
dihitung dengan rumus:

[DPPH]0 – [DPPH]5
x= ----------------------- × 100%
[DPPH]
 BAB IV

HASIL DAN PEMBHASAN

IV.1. Identifikasi pheophytin menggunakan metode TLC.

Kromatogram TLC ditunjukkan pada Gambar. Pigmen dipisahkan

seperti dapat dilihat dari warna spot mereka. Nilai Rf dari masing-masing
tempat dihitung dan kemudian mereka dibandingkan dengan literatur. Jika
menunjukkan warna kuning dan memiliki nilai Rf. Itu diidentifikasi sebagai
β-karoten. Demikian pula, tempat 2 (warna abu-abu) memiliki Nilai Rf 0,60
dan diidentifikasi sebagai pheophytin. Hasilnya sesuai dengan literatur
yang menyatakan bahwa pheophytin memiliki Rf 0,59-0,60, dan tempat
abu-abu dengan method9 yang sama. Spot 3 diidentifikasi sebagai klorofil
karena itu hijau kekuningan dengan Rf 0,42. Spot 4 adalah jeruk dengan
Rf 0,36 dan diidentifikasi sebagai xantofil. Spot 5 menunjukkan hitam
dengan Rf 0,20 dan bertekad untuk menjadi sebuah pheophorbide.

Research result Literature

Spot colour Rf Identification Spot colour Rf
Yellow 0.96 β-carotene Yellow 0.9 – 1.009
Grey 0.60 Pheophytin a Grey 0.59 – 0.659
Yellowish green 0.42 Chlorophyll b Yellowish green 0.39 – 0.429
Orange 0.36 Xanthophyll Orange 0.25 – 0.289
Black 0.20 Pheophorbide a Black 0.17 – 0.209

IV.2. Identifikasi pheophytin oleh HPLC yang dilengkapi dengan detektor

PDA

Selanjutnya, HPLC dilakukan karena lebih sensitif, selektif, dan

speedy12. Penggunaan detektor PDA adalah metode yang mudah untuk
mengidentifikasi dan memperoleh sifat spektral dari pigmen melalui pos-
analisis.

IV. 3. Isolasi pheophytin dengan kromatografi kolom

Band abu-abu sesuai dengan pheophytin sebuah itu difraksinasi.

Band ini kemudian diidentifikasi dengan TLC dan UV-Vis
spektrofotometer. pheophytin The tes kemurnian dilakukan oleh TLC
untuk melihat berapa banyak bintik-bintik yang dihasilkan, sebagai
sejumlah titik di kromatogram akan menginformasikan jumlah senyawa.
Satu tempat abu-abu ditemukan di TLC dari pheophytin, tapi tidak ada
band pigmen lainnya terlihat. tempat memiliki nilai Rf dan warna abu-abu
dan itu diidentifikasi sebagai pheophytin sebuah sesuai dengan literatur
menggunakan method9 yang sama. Selanjutnya, pola spektrum dan
panjang gelombang maksimum dari pheophytin terisolasi yang ditentukan
dengan spektrofotometer UV-Vis.

IV. 4. Uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH

Metode DPPH sering digunakan karena bekerja tidak hanya lebih

cepat, selektif, sensitif dan stabil, tetapi juga mudah digunakan. Nilai IC50
yang diukur menunjukkan konsentrasi yang bekerja secara efektif untuk
menghambat aktivitas radikal bebas pada 50%. Jika IC50 kecil dari
senyawa tersebut memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi. Jika
menunjukkan bahwa ekstrak pigmen mentah memiliki nilai yang lebih
rendah dari konsentrasi IC50 dibandingkan dengan terisolasi pheophytin
dan β-karoten. Nilai ini berarti bahwa aktivitas antioksidan dari ekstrak
pigmen mentah dua kali lebih tinggi dari aktivitas β-karoten. Hasil ini telah
diperkirakan pada alasan bahwa ekstrak pigmen mentah terkandung
campuran pheophytin dan β-karoten, serta senyawa lain yang bisa bekerja
secara sinergis sebagai antioksidan.
 KESIMPULAN

Analisis TLC dari pigmen dari ekstrak kasar teh hijau menunjukkan
lima tempat; mereka beta-karoten, pheophytin sebuah, klorofil b, xantofil,
dan pheophorbide a. Analisis dengan HPLC menunjukkan bahwa ada 14
puncak, yang terdiri dari 10 puncak klorofil dan turunannya, dan empat
puncak karotenoid. Aktivitas antioksidan dari pheophytin sebuah telah
(573 ± 0,23) mg · L-1 dan sama dengan penanda β-karoten dari (550 ±
0,26) mg · L-1. Teh hijau ekstrak kasar memiliki Aktivitas antioksidan IC50
= (259 ± 0,21) mg · L-1 yang dua kali lebih tinggi dari aktivitas β-karoten.
 PUSTAKA

Ghani, Muhammad A. 2002. Dasar-dasar Budidaya Teh. Buku Pintar

Mandor. Penebar Swaadaya: Jakarta.

Setyamidjaja, D. 2000. Teh Budi Daya dan Pengolahan Paca Panen.

Kanisius: Yogyakarta.

Anonim.[http://darsatop.lecture.ub.ac.id/2015/04/tanaman-teh-camellia-
sinensis/]. Diakses pada 7 November 2016 pukul 22.03 WITA.

Anonim.[perkebunan.litbang.pertanian.go.id/wp.../perkebunan_warta-
vol19No3-2013-4.pdf]. Diakses pada 7 November 2016 pukul 22.46 WITA.

Kusmita, L.
2015.[www.sciencedirect.com/science/article/.../S187661961500034].
Diakses pada 7 November 2016 pukul 23.19 WITA.